本发明涉及渔业养殖技术领域，进一步涉及饲料的改良及功能性饲料的开发，具体涉及山女鳟饲养用中药组合物及使用方法。
背景技术：
山女鳟(Oncorhynchus masou masou)，隶属于鲑形目、鲑科、大麻哈鱼属，是日本樱鳟(马苏大麻哈鱼)的遗传型陆封种，其肉质细嫩，品味鲜爽，我国于1996年引入黑龙江水产研究所渤海冷水鱼试验站进行养殖。
我国水产养殖规模化和集约化不断提高，导致养殖病害日益严重，成为制约水产养殖业健康可持续发展的主要瓶颈。传统方法是采用抗生素和化学药物来控制水产动物疾病，但随之出现的渔药滥用和误用现象，一方面导致环境的污染和恶化；另一方面，还造成耐药病原体的产生、水产动物免疫功能和抗病力下降、水产品中药物残留超标等问题，对人类的健康和安全造成直接威胁。具体到山女鳟这一冷水性鱼类的养殖来说，也必然面临这些问题。因此，研发出健康、安全、高效的饲料添加剂，减少抗生素和化学药物的使用，已成为健康养殖亟需解决的问题。
以中草药为代表的天然药物具有无污染、无抗药性、副作用低等优势，有望成为鱼类疾病防治的理想替代品。然而，由于中草药对具体病原普遍不具有直接杀灭作用，因此在用药方法层面更应当侧重对鱼类免疫能力的调节作用，这就涉及到对山女鳟这一具体物种的免疫特性研究，由于生物体免疫机制复杂且多样，再加之中草药种类繁多、协同作用复杂，因此很难在现有技术中获得中草药用药的策略指引。具体来看，尽管现有技术中有研究者尝试开发以天然植物为主要成分的鱼类药物，但一方面缺乏针对山女鳟这一具体品种的免疫调节剂，而且，在免疫促进效果、尤其是非特异性免疫促进效果方面仍有待提升。
技术实现要素：
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供山女鳟饲养用中药组合物及使用方法，以解决现有技术中缺乏一种能有效促进山女鳟抗氧化及非特异性免疫能力的天然药物组合物的技术问题。
本发明要解决的另一技术问题是确定上述组合物用于山女鳟饲养的用药策略。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种山女鳟饲养用中药组合物，包括以下重量份的成分：大黄1～3份，黄芪3～7份，连翘12～16份，黄苓2～4份，丹皮1～3份，酢浆草8～14份，桉叶2～4份，白萆薢0.8～1.8份，碧桃干1.2～1.6份，蚕沙0.2～0.4份。
作为优选，该组合物还包括0.4～0.8重量份的草血竭。
作为优选，该组合物还包括1～3重量份的川木通。
作为优选，该组合物还包括6～10重量份的川芎。
作为优选，该组合物还包括2～4重量份的熟地黄。
作为优选，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄2份，黄芪5份，连翘14份，黄苓3份，丹皮2份，酢浆草11份，桉叶3份，白萆薢1.3份，碧桃干1.4份，蚕沙0.3份。
作为优选，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄2份，黄芪5份，连翘14份，黄苓3份，丹皮2份，酢浆草11份，桉叶3份，白萆薢1.3份，碧桃干1.4份，蚕沙0.3份，草血竭0.6份，川木通2份，川芎8份，熟地黄3份。
同时，本发明提供了应用上述中药组合物饲养山女鳟的方法，该方法是将所述中药组合物以0.5％(w/w)的比例添加至鱼饲料中，混匀，而后投喂山女鳟，持续7～28d。
作为优选，所述持续时间为7d。
作为优选，利用以上方法饲养山女鳟后，分别在投喂后的0、7、14、21、28d取实验鱼的肝脏组织，分别测定其中MDA、T-SOD、CAT、T-AOC、AKP、ACP、NO和LSZ及组织中蛋白含量。
作为优选，测定以上指标前对肝脏组织做如下处理：将肝脏组织装入封口塑料袋后置于-80℃冰箱中保存备用，组织测定前解冻，准确称取待测组织的重量，按1:9的比例加入9倍体积的生理盐水，用高通量组织研磨器进行匀浆处理，待组织研磨完毕后置于4℃、2500r/min离心机中离心10min，取上清液进行相关指标的测定。
作为优选，所述鱼饲料是商品名为艾乐牌的市售鱼饲料。
在以上技术方案中，所述大黄、黄芪、连翘、黄苓、丹皮、酢浆草、桉叶、白萆薢、碧桃干、蚕沙、草血竭、川木通、川芎、熟地黄等成分均为天然药物，其各自的限定意义应当以天然药物领域的一般技术认知作为解释。
本发明所述的组合物可以是将配方量的成分分别粉碎后混合所得的混合物，其粉碎方式可以依照本领域公知常识实施，包括但不限于通过药用粉碎机、均质机等装置实施。
本发明提供了一种山女鳟饲养用中药组合物及使用方法，该技术方案首先考察了大量天然药物对山女鳟的生长促进作用，并基于实验手段对各单方和复方进行效果验证，意外获得了一种对山女鳟抗氧化能力、非特异性免疫能力具有确切促进作用的组合物，该组合物以连翘、酢浆草和黄芪为主要成分，同时添加特定量的大黄、黄苓、丹皮、桉叶、白萆薢、碧桃干、蚕沙等，全面改善山女鳟体质，提升其抗病能力同时不会产生药物累积问题。
在此基础上，本发明研究了该药物组合物的最佳用药方式，实验结果表明，以0.5％的添加量与常规饲料混配，采用一般投喂方式持续饲喂7d时山女鳟肝脏中T-SOD、AKP、NO、LSZ显著提高，免疫促进作用达到最佳水平。基于以上有益的发现，本发明确定了该药物组合物的使用方法，为其商品化应用奠定了良好的基础。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。
除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种山女鳟饲养用中药组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄2份，黄芪5份，连翘14份，黄苓3份，丹皮2份，酢浆草11份，桉叶3份，白萆薢1.3份，碧桃干1.4份，蚕沙0.3份，草血竭0.6份，川木通2份，川芎8份，熟地黄3份。
同时，本实施例提供了应用上述中药组合物饲养山女鳟的方法，该方法是将所述中药组合物以0.5％(w/w)的比例添加至鱼饲料中，混匀，而后投喂山女鳟，持续7d。其中，所述鱼饲料为商品名为“艾乐牌”的市售鱼饲料。
实施例2
一种山女鳟饲养用中药组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄2份，黄芪5份，连翘14份，黄苓3份，丹皮2份，酢浆草11份，桉叶3份，白萆薢1.3份，碧桃干1.4份，蚕沙0.3份。
实施例3
一种山女鳟饲养用中药组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄1份，黄芪3份，连翘12份，黄苓2份，丹皮1份，酢浆草8份，桉叶2份，白萆薢0.8份，碧桃干1.2份，蚕沙0.2份，草血竭0.4份，川木通1份，川芎6份，熟地黄2份。
实施例4
一种山女鳟饲养用中药组合物，该组合物由以下重量份的成分组成：大黄3份，黄芪7份，连翘16份，黄苓4份，丹皮3份，酢浆草14份，桉叶4份，白萆薢1.8份，碧桃干1.6份，蚕沙0.4份，草血竭0.8份，川木通3份，川芎10份，熟地黄4份。
实施例5
本实施例用于考察以上实施例1中药组合物及其使用方法的效果。
1、试验材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验鱼
试验鱼取自天津市丰沛水产养殖有限公司，2016年5月21日开始从公司基地取样，平均体重为山女鳟26.81±4.96g。
1.1.2试验仪器与设备
电子分析天平：Sartorius，BS210S型(精确度：万分之一)；
电热恒温鼓风干燥箱(YH-2S，天津市中环实验电炉有限公司)；
紫外分光光度计：Thermo Spectronic UVmini-1240型；
电热恒温水浴锅(DK-98-ⅡA，天津市泰斯特仪器有限公司)；
低温高速离心机：eppendorf 5804R型；
双频数控超声波清洗器：KQ3200VDE型；
优普超纯水制造系统(UPR-I-10T，四川优普超纯科技有限公司)；
高通量组织研磨器(SCIENTZ-192，宁波新芝生物科技股份有限公司)；
漩涡混匀器。
1.1.3试验试剂
本试验所有试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
95％乙醇(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20160611)；
氯化钠(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20160120)；
双蒸水取自天津农学院水产学院优普超纯水制造系统。
1.2试验方法
1.2.1试验鱼样品的提取
采用实施例1所提供的组合物及使用方法投喂山女鳟。分别在投喂后的0、7、14、21、28d采样，每次分别采5尾。山女鳟取样时进行麻醉，测其体重后进行解剖，取其肝脏，剔除脂肪，装入封口塑料袋后置于-80℃冰箱中保存备用。组织测定前解冻，准确称取待测组织的重量，按1:9的比例加入9倍体积的生理盐水，用高通量组织研磨器进行匀浆处理，待组织研磨完毕后置于4℃、2500r/min离心机中离心10min，取上清液进行相关指标的测定。
1.2.2样品的测定
本试验中MDA、T-SOD、CAT、T-AOC、AKP、ACP、NO和LSZ及各组织中蛋白含量均采用南京建成生物工程技术研究所提供的试剂盒进行测定。
1.2.3数据处理与统计分析
所得数据用平均值±标准差(Mean±SD)表示。所有数据均用Excel 2003及SPSS18.0进行分析处理。利用Excel软件制作各指标的标准曲线，并计算出各样品中对应指标的活力含量。利用SPSS软件进行方差分析，P值取0.05水平。
2、实验结果
2.1中药组合物对山女鳟肝脏抗氧化指标的影响
中药组合物对山女鳟肝脏MDA、T-SOD、CAT、T-AOC的影响结果见表1。MDA含量28d时显著高于其他时间段(P<0.05)，其他时间段差异不显著(P>0.05)；T-SOD活力7d时显著高于其他时间段(P<0.05)，其他时间段差异不显著(P>0.05)；CAT活力14d时显著低于0d(P<0.05)，其他时间段差异不显著(P>0.05)；T-AOC活力14、21、28d时显著低于0、7d(P<0.05)，0d、7d之间差异不显著(P>0.05)，14、21、28d之间差异不显著(P>0.05)。
表1中药组合物对山女鳟肝脏抗氧化指标的影响(Mean±SD)
2.2中药组合物对山女鳟肝脏非特异性免疫指标的影响
中药组合物对山女鳟肝脏AKP、ACP、NO、LSZ的影响结果见表2、表3。AKP酶活力7d时显著高于其他时间段(P<0.05)，14d时与0d差异不显著(P>0.05)，21、28d时显著低于0d(P<0.05)，7、14、21、28d之间差异显著P<0.05)，呈下降的趋势；ACP酶活力7d时与0d差异不显著(P>0.05)，其他时间段显著低于0d(P<0.05)；NO浓度7d时显著高于其他时间段(P<0.05)，14、21、28d与0d差异不显著(P>0.05)，14、21、28d之间差异不显著(P>0.05)；LSZ含量7d时显著高于其他时间段(P<0.05)，14d时显著低于0d(P<0.05)，21、28d时与0d差异不显著(P>0.05)。
表2中药组合物对山女鳟肝脏AKP、ACP的影响(Mean±SD)
表3中药组合物对山女鳟肝脏NO、LSZ的影响(Mean±SD)
3、实验结论
结果表明，山女鳟肝脏中，7d时T-SOD、AKP、NO、LSZ显著高于0d(P<0.05)，14d时ACP、LSZ显著低于0d(P<0.05)，21d时T-AOC、AKP、ACP显著低于0d(P<0.05)，28d时MDA显著高于0d(P<0.05)，T-AOC、AKP、ACP显著低于0d(P<0.05)；
投喂中药组合物7d时，山女鳟肝脏中T-SOD、AKP、NO、LSZ显著提高，说明中药组合物配方在7d时对山女鳟抗氧化及非特异性免疫指标有一定的促进用。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。