本发明涉及医药领域，具体的说，本发明涉及一种治疗乳腺增生的药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
乳腺增生是妇女常见的乳腺疾病。本病的命名学很混乱，又名小叶增生、乳腺结构不良症、纤维囊性病等。以往曾称为慢性囊性乳腺炎，实际上本病无炎症性改变，因而不宜应用。本病的特点是乳腺组成成分的增生，在结构、数量及组织形态上表现出异常，故称为囊性增生病或乳腺结构不良症。其发病之高、范围之广、周期之近、痛苦之大，严重影响了广大妇女的工作和学习，降低了生活的质量。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种治疗乳腺增生的药物组合物。
本发明的目的还在于提供该治疗乳腺增生的药物组合物的制备方法。
本发明的目的还在于提供该药物组合物的应用。
为了实现本发明的目的，本发明提供一种治疗乳腺增生的药物组合物，该药物组合物包含下式结构：
优选地，所述药物组合物还可以包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述药学上可接受的载体或赋形剂可以包括但并不限于：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。
本发明还提供一种治疗乳腺增生的药物组合物的制备方法，该方法包括下列步骤：
步骤a：0℃下，向2-氯-4-氨基吡啶的浓硫酸中分批加入硝酸钾，加完继续0℃反应1小时，反应完毕，将反应液倒入碎冰中，加入浓氨水调ph到3，搅拌15分钟，过滤，收集固体，将固体加入到浓硫酸，加热至80℃反应5小时，冷却，将反应液倒入碎冰中，加入浓氨水调ph到3，搅拌15分钟，过滤，收集固体，经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-20％洗脱，得到产物2-氯-3-硝基-4-氨基吡啶；
步骤b：室温下，向2-氯-3-硝基-4-氨基吡啶的无水乙醇中加入苄氨，加完加热回流反应60分钟，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水中，搅拌15分钟，过滤，收集固体，水洗，干燥得到褐色固体产物n2-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺；
步骤c：室温下，向n2-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺的冰醋酸中分批加入还原铁粉，加完加热至80℃反应2小时，反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷梯度2-10％洗脱，得到产物n2-苄基吡啶-2,3,4-三胺；
步骤d：0℃下，向n2-苄基吡啶-2,3,4-三胺的原甲酸三乙酯溶液中加入浓盐酸，加完加热至40℃搅拌反应2小时，反应完毕，减压浓缩，余物加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度10-20％洗脱，得到棕色固体产物n-苄基-3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺；
步骤e：室温下，向n-苄基-3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺的甲醇中分批10％pd/c，50℃下常压氢化反应5小时，反应完毕，冷却，过滤，滤液浓缩得到产物3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺；
步骤f：室温下，向3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺的正丁醇中滴加50％氯乙醛水溶液，加完加热至120℃下反应5小时，反应完毕，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，余物经硅胶柱进行色谱纯化得到白色固体产物1h-二咪唑并[1,2-a:4',5'-c]吡啶。
本发明还提供化合物在制备治疗乳腺增生的药物中的用途，所述化合物的结构式为：
本发明药物能够减轻乳腺组织增生病变，对于乳腺增生患者具有显著的治疗作用，且疗效稳定，治愈率高，复发率低。
具体实施方式
下面借助乳腺增生模型来具体说明本发明药物的疗效。
实验例1药物1h-二咪唑并[1,2-a:4',5'-c]吡啶的制备
步骤a：2-氯-3-硝基-4-氨基吡啶
0℃下，向2-氯-4-氨基吡啶(10.00g，0.078mol)的浓硫酸(80ml)中分批加入硝酸钾(7.86g，0.0784mol)，加完继续0℃反应1小时，反应完毕，将反应液倒入碎冰中，加入浓氨水调ph到3，搅拌15分钟，过滤，收集固体。将固体加入到浓硫酸(80ml)，加热至80℃反应5小时，冷却，将反应液倒入碎冰中，加入浓氨水调ph到3，搅拌15分钟，过滤，收集固体，经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-20％)洗脱，得到产物(6.00g,44％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ6.83(d,1h),7.37(s,2h),7.91(d,1h)。
步骤b：n2-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺
室温下，向2-氯-3-硝基-4-氨基吡啶(6.00g，0.035mol)的无水乙醇(50ml)中加入苄氨(3.7g，0.035mol)，加完加热回流反应60分钟。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水中，搅拌15分钟，过滤，收集固体，水洗，干燥得到褐色固体产物(8.0g，95％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.69(d,2h),6.12(d,1h),7.20-7.36(m,5h),7.62(d,1h),8.3(br,2h),9.21(m,1h)。
步骤c：n2-苄基吡啶-2,3,4-三胺
室温下，向n2-苄基-3-硝基吡啶-2,4-二胺(8.00g，0.033mol)的冰醋酸(80ml)中分批加入还原铁粉(5.49g，0.098mol)，加完加热至80℃反应2小时。反应完毕，冷却，减压浓缩，余物倒入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化,用甲醇/二氯甲烷梯度(2-10％)洗脱，得到产物(6.50g,93％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.60(d,2h),5.65(br,2h),5.98(d,1h),6.03(d,1h),6.20(br,2h),7.18-7.34(m,6h)。
步骤d：n-苄基-3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
0℃下，向n2-苄基吡啶-2,3,4-三胺(6.50g,0.030mol)的原甲酸三乙酯(80ml)溶液中加入浓盐酸(1ml)，加完加热至40℃搅拌反应2小时。反应完毕，减压浓缩，余物加入饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/石油醚梯度(10-20％)洗脱，得到棕色固体产物(5.40g,79％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ4.71(d,2h),6.74(d,1h),7.30-7.36(m,6h),7.68(d,1h),8.10(s,1h),12.0(br,1h)。
步骤e：3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
室温下，向n-苄基-3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(5.40g，0.024mol)的甲醇(50ml)中分批10％pd/c(0.25g)，50℃下常压氢化反应5小时。反应完毕，冷却，过滤，滤液浓缩得到产物(3.20g,99％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ5.98(br,2h),6.74(d,1h),7.61(d,1h),8.07(s,1h)。
步骤f：1h-二咪唑并[1,2-a:4',5'-c]吡啶
室温下，向3h-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(3.20g，0.024mol)的正丁醇(50ml)中滴加50％氯乙醛水溶液(4.50g，0.029mol)。加完加热至120℃下反应5小时。反应完毕，减压浓缩，余物加水，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。余物经硅胶柱进行色谱纯化得到白色固体产物(2.00g,53％)。
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ6.82(d,1h),7.22(d,1h),7.32(d,1h),7.38(d,1h),8.10(s,1h)，10.5(br,1h)。
实验例2本发明药物治疗乳腺增生的效果
乳腺增生模型建立
参照文献(余望贻，姜海斌，孟琼，等.乳腺增生病动物模型的实验研究.中国实验动物学报2004：12(4)：235-238.)将雌性日本大耳白兔随机分为本发明药物高、中、低剂量组、乳癖消组、模型组、正常对照组，每组15只。前5组采用肌肉注射己烯雌酚0.2mg/(kg·d)，连续25天，之后肌肉注射黄体酮1mg/(kg·d)，连续5天，建立乳腺增生模型。正常对照组兔肌肉注射等量生理盐水，连续30天。
给药方式
造模完成后，每组取造模成功兔子10只作为最终治疗数量。本发明药物高、中、低剂量组按20、10、5mg/kg灌胃实施例1药物，每天2次；乳癖消组按20mg/kg灌胃，每天2次；模型组、正常对照组以20ml/kg蒸馏水灌胃，每天2次。各组连续灌胃3个月。
取材及检测方法
在给药前、给药3个月后及停药3个月后，分3次以利多卡因作局部麻醉，顺序切取第1至3对乳房。(1)每对乳房分别用10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，he染色，光镜下观察乳腺小叶腺泡数目、导管腺上皮细胞层数、结缔组织和毛细血管数量，结缔组织和毛细血管数量用占整个乳房组织的百分数表示。每个乳房取3张切片，每张切片取10个视野，计算平均值。(2)2.5％戊二醛固定，epon812包埋，超薄切片，醋酸双氧油和柠檬酸铅染色，电镜下观察乳腺上皮细胞胞质内线粒体、高尔基体、粗面内质网总数，每个乳房取3张切片，计算平均值。(3)在切取乳房的同时心脏采血，放射免疫法检测血清雌激素(e2)和孕激素(p)水平。
统计学方法用spss11.0软件进行统计学处理，所有数据均以
各组乳腺组织的形态学变化比较
各组光镜镜检结果比较
正常对照组乳腺组织镜检始终无增生性病变。模型组镜检均有典型乳腺增生，表现为乳腺小叶腺泡数目、导管腺上皮细胞层数、结缔组织和毛细血管数量显著增加。给药后本发明药物高、中剂量组乳腺增生的3个指标(乳腺小叶腺泡数、导管腺上皮细胞层数、结缔组织和毛细血管数量)较给药前及模型组均明显减少，差异有显著性(p＜0.05，与正常对照组比较差异无显著性(p>0.05，乳腺组织基本趋于正常；本发明药物低剂量、乳癖消组镜检均有乳腺增生。本发明药物高、中剂量组停药3个月后上述3个指标与给药3个月时比较无明显改变(p>0.05)。
各组电镜镜检结果比较
正常对照组腺上皮呈单层立方形，排列规整，基底膜均匀。模型组腺细胞呈复层、鳞状排列，细胞极性消失，可见乳头状突起；胞质内线粒体数量增多，并有丰富的高尔基体及粗面内质网，细胞核周可见丰富的糖元颗粒；肌上皮细胞核周可见大量微丝结构。高、中剂量组给药后腺上皮呈单层高柱状排列，核上移，导管腺腔紧缩；与给药前及模型组比较，线粒体、高尔基体及粗面内质网总数显著减少(p＜0.05)；部分增生细胞凋亡。本发明药物高、中剂量组停药3个月后继续保持治疗后效果，细胞器总数与给药3个月后比较差异无显著性(p>0.05)。本发明药物低剂量、乳癖消组治疗效果不显著。
各组血清性激素水平比较
给药前各组血清e2含量均显著高于正常对照组，p含量均显著低于正常对照组(p＜0.01)。给药3个月后，本发明药物高、中剂量组，乳癖消组e2含量均明显低于模型组，p含量均明显高于模型组(p＜0.01，与正常对照组比较差异无显著性(p>0.05)。停药3个月后本发明药物高、中剂量组及乳癖消组血清e2、p含量表现平稳，无反弹，与给药3个月后比较差异无显著性(p>0.05)。低剂量组e2、p含量均无显著变化。