专利名称：一种用于治疗乳腺增生症的药物组合物及其提取制备方法
技术领域：
本发明涉及医用配制品及提取制备方法，具体地说是一种特别适用于治疗乳腺增生症的药物组合物及提取制备方法。
背景技术：
乳腺增生症是女性常见病和多发病，其本质上是一种生理增生与复旧不全造成的乳腺正常紊乱。乳腺增生主要表现为乳腺间质的良性增生，增生可发生于腺管周围并伴有大小不等的囊肿形成；也可发生在腺管内而表现为上皮的乳头样增生、乳管囊性扩张。该症的临床症状主要为乳房肿块和乳房疼痛。据报道，该症恶变的危险性较正常女性高2-4倍，故积极防治乳腺增生症已引起人们的高度重视。乳腺增生的病因目前尚不十分清楚，但一般医学专家认为其与精神紧张、内分泌失调导致机体黄体素分泌减少、雌激素相对增多有关。中医专家认为肝郁气滞、情志内伤是诱发该症的主要原因。当平素情志抑郁、气滞不舒，气血周流失度，蕴结于乳房胃络，乳络经脉阻塞不通，不通则痛而引起乳房疼痛；肝气横逆犯胃，脾失健运，痰浊内生，气滞血瘀挟痰结聚为核，循经留聚乳中，故乳中结块。目前，临床用于治疗乳腺增生症的药物主要是中成药，如乳康片、乳癖消、天冬素片、小金丹、逍遥丸等等。这些中成药一般是以疏肝理气、活血化淤为主，其组方或偏寒或偏热，临床应用效果尚不十分理想。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的用于治疗乳腺增生症的药物组合物，同时提供一种该药物组合物的提取制备方法，以期为临床提供更多的用药选择。
本发明的目的是这样实现的 本发明组方原则以活血化淤、疏肝理气为主，同时重补肾而温阳，以期所组合的药物性能平和，适于调达疏理之用，同时又无寒热偏颇及耗夺与恋滞之害； 本发明药物组合物是由下述重量份比的原料药制成的 柴胡20～50份，当归20～50份，香附20～50份，川芎20～50份赤芍20～50份，菟丝子26～50份，锁阳26～50份，首乌藤26～50份，皂角刺20～50份，土鳖虫13-26份，淫羊藿20～50份，益母草20～50份，刘寄奴26～50份。
各原料药的优选用量配比为 柴胡20～30份，当归20～30份，香附20～30份，川芎20～30份赤芍20～30份，菟丝子26～36份，锁阳26～36份，首乌藤26～36份，皂角刺20～30份，土鳖虫13-26份，淫羊藿20～30份，益母草20～30份，刘寄奴26～36份。
各原料药更为优选的用量配比为 柴胡20份，当归20份，香附20份，川芎20份赤芍20份，菟丝子26.6份，锁阳26.6份，首乌藤26.6份，皂角刺20份，土鳖虫13.3份，淫羊藿20份，益母草20份，刘寄奴26份。
本发明以柴胡疏肝解郁为君，当归养血柔肝，香附理气解郁，川芎行气活血，三者并为臣药，锁阳助阳益肝，淫羊藿补肾除湿，菟丝子益肾养肝，赤芍凉血祛瘀，土鳖虫逐瘀散结，皂角刺散瘀消肿，益母草活血祛浊，刘寄奴破血消胀，首乌藤养心安神，共为辅佐，柴胡兼充使药。
本发明药物组合物的提取物可加入药学上可接受的辅料，按常规制剂方法，制备成胶囊剂、片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、口服液等剂型。
如可加入β-环糊精、蔗糖、蛋白糖可制成颗粒剂、胶囊剂等。
本发明提供的该药物组合物的提取制备方法为 a、按以下重量配比称取各药物组分 柴胡20～50份，当归20～50份，香附20～50份，川芎20～50份赤芍20～50份，菟丝子26～50份，锁阳26～50份，首乌藤26～50份，皂角刺20～50份，土鳖虫13-26份，淫羊藿20～50份，益母草20～50份，刘寄奴26～50份；将所有药物组分，分别粉碎成粗粉，备用。
b、取当归、川芎、香附子三味药，加水浸泡后，提取、收集挥发油，药渣及水溶液另器留存，备用； c、在40～45℃恒温条件下，用β-环糊精对挥发油进行包合，搅拌1～1.5小时，2～4℃条件下，冷藏10～12小时，抽滤，包合物用少量的水与石油醚洗涤后，在低于40℃温度条件下，干燥6～8小时，研细，过60～80目筛，备用； d、将b步骤中的药渣加8～10倍量的水，煎煮1～1.5小时，滤过，滤液与b步骤中的水溶液合并，合并液留存备用； e、将柴胡、刘寄奴、锁阳三味药，加8～10倍量的70～75％乙醇回流提取2次，每次1～1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.18～1.22的清膏，备用； f、将e步骤中的药渣与赤芍、淫羊藿、皂角刺、益母草、菟丝子、首乌藤、土鳖虫七味药混匀，加10～12倍量的水，煎煮2次，每次1～1.5小时，滤过，滤液与d步骤中的合并液混合后，减压浓缩至的相对密度为1.02～1.05时，每100ml滤液中加入1％正天成II型天然澄清剂B组分2ml～4ml后，再加入浓度为1％的正天成II型天然澄清剂A组分4ml～6ml，搅匀，60～70℃水浴保温1～1.5小时，2～4℃条件下，静置20～24小时后，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.22～1.28的清膏； g、将e步骤中的清膏与f步骤中的清膏合并、混匀，再加入c步骤中的包合物，混匀后即为原药提取物。
本发明方法针对本发明组方中原药材的特性，分别采用了不同的提取方法。该方法既可有效保持原药材的特有活性，同时又可促使各药物组分配伍后产生良好的协同作用。
发明药物组合物可用于治疗妇女乳腺小叶增生、乳房肿块及乳房胀痛。
本发明药物颗粒剂的用法用量为成人每次服用1包(6.0g)，每天3次。15～30天一个疗程。临床医师也可根据病人的具体情况决定药物的用法用量。
本发明药物组合物具有调节垂体-性腺轴内分泌的功能，可有效调节机体血清雌二醇和黄体生成素的浓度，同时可明显抑制乳腺组织增生，抑制棉球肉芽肿形成，降低毛细血管通透性，改善小鼠微循环，并具有显著的镇痛作用。因而，本发明药物可多靶点控制乳腺增生，对乳腺增生症具有标本兼治的效果。
本发明药物组合物的颗粒剂在临床应用中暂称为“乳痛宁”。
本发明药物组合物的有益效果通过以下试验得到了验证 实验药物 本发明药物组合物的颗粒剂(以下简称乳痛宁)，6.0g/包。阳性对照药乳康片，规格0.359g/片，生产批号20020416，批准文号ZZ4337国药准字ZF20000197号，由安康正大制药有限公司生产。苯甲酸雌二醇注射液，1mg/ml，生产批号01010216，由上海通用药业股份有限公司生产。黄体酮注射液，20mg/1ml，生产批号020701，由上海通用药业股份有限公司生产。
实验动物 Wistar大鼠，新疆医学实验动物供应中心提供，生产证书新疆医动字(1996)16001号。
昆明种小鼠，新疆医学实验动物供应中心提供，生产证书新疆医动字(1996)16001号。
试剂及仪器722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。光学显微镜(Olympus)，日本产。
实验室条件 动物房整体面积120平方米，室温23±2℃，湿度40～60％，有空气净化装置。
药效实施例1本发明药物对大鼠乳腺增生及血清激素的影响 取Wistar雌性大鼠60只，体重153.4±16.8g。依体重均衡，随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组和乳痛宁组(乳痛宁组按照用药量1.0g/kg，2.0g/kg，4.0g/kg又依次分为乳痛宁1组，乳痛宁2组，乳痛宁3组)。每组10只。除空白对照组外，其余各组大鼠均肌内注射苯甲酸雌二醇(E2)0.5mg/kg，每天1次，连续25天。继而改用肌注黄体酮5mg/kg，每天1次，连续5天。空白对照组肌注生理盐水(NS)0.2ml/只，连续30天。肌注E2 10天后，依规定剂量开始给药，空白对照组与模型组仅给等容量NS。灌胃，每天一次，连续30天。末次给药后2h，乙醚浅麻醉，测量第2，3对乳头(或乳房)的高度，颈动脉取血，测定血清E2和LH(黄体生成素)。并切下第2对乳房(完整)，10％福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，用光镜作病理分析。空白对照组、各乳痛宁组与模型组比较，作组间均数t检验。
试验的病理组织学检查结果表明 模型组乳腺的腺泡及导管大量增生，小叶内腺泡密集，大小不等，腺泡腔扩大，导管扩张，导管腺腔内扩大，腺腔内出现大量分泌物。由此说明造模成功。
乳痛宁组尤其大剂量组的大鼠乳腺增生明显减轻和缩小，腺泡和腺小叶明显减少，变为稀疏散在分布。其病理切片与空白对照组的乳腺结构相似。
详见见附图1、2、3、4、5、6。
图1空白对照组病理切片图片。
图2模型组病理切片图片。
图3阳性对照组病理切片图片。
图4乳痛宁1组病理切片图片。
图5乳痛宁2组病理切片图片。
图6乳痛宁3组病理切片图片。
乳痛宁对大鼠乳腺增生的影响详见表1。
表1.乳痛宁对大鼠乳腺增生的影响(n＝10，
) ++P＜0.05，+++P＜0.01与空白对照组比较，**P＜0.05，***P＜0.01与模型组比较。
从表1可以看出，模型组与空白对照组相比具有显著差异，说明造模成功；乳痛宁组与模型组相比具有显著差异，说明乳痛宁三个剂量组均可明显降低两对乳房的高度；乳痛宁组与阳性对照组无显著差异，说明两者在降低乳房高度方面的效果基本相同。
乳痛宁对乳腺增生大鼠血清中雌二醇、黄体生成素的影响详见表2。
表2.乳痛宁对乳腺增生大鼠血清中雌二醇、黄体生成素水平的影响(n＝10，
) +++P＜0.01与空白对照组比较；*P＞0.05，***P＜0.01与模型组比较。
从表2可以看出，模型组与空白对照组相比具有显著差异，说明造模成功；乳痛宁组与模型组相比具有显著差异，说明乳痛宁三个剂量组均可降低降低雌二醇和黄体生成素浓度，特别是中、高剂量组其效果尤为明显；乳痛宁中、高剂量组与阳性对照组具有显著差异，说明乳痛宁在调节垂体-性腺轴内分泌方面的作用优于阳性对照组。
药效实施例2本发明药物对小鼠的镇痛作用的影响(小鼠扭体法) 取昆明种小鼠50只，雌雄兼用，体重20.7±1.5g，分为空白对照组、阳性对照组、乳痛宁组。乳痛宁组按照用药量1.5g/kg，3.0g/kg，6.0g/kg又依次分为乳痛宁1组，乳痛宁2组，乳痛宁3组。灌胃，每天1次，连续3天。末次给药后1.5h，各组鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，并立即记录15min内小鼠扭体次数，进行组间均数t检验。
试验结果详见表3 表3.乳痛宁颗粒对醋酸致小鼠扭体反应的影响 (n＝10，
) ***P＜0.01与空白对照组比较 试验表明在腹腔注射0.6％酸酸致小鼠扭体反应中，使小鼠扭体次数明显减少(P＜0.01)。提示乳痛宁有一定镇痛作用。
药效实施例3本发明药物对大鼠棉球肉芽肿生成的影响 取Wistar大鼠50只，雌雄兼用，体重120-150g，依体重和性别均衡随机分为空白对照组、阳性对照组和乳痛宁组(乳痛宁组按照用药量1.0g/kg，2.0g/kg，4.0g/kg又依次分为乳痛宁1组，乳痛宁2组，乳痛宁3组)。另取棉球20±1mg/个，高压消毒，每个棉球注入氨苄青霉素0.1ml，60℃烘干。各组大鼠乙醚麻醉下，均于左右前肢腋下皮肤消毒切口1cm，塞入棉球一个，缝合。灌胃给药，每天一次，连续7天。末次给药后2h，取出棉球(连周围结缔组织)，70℃干燥，称重，减去原棉球重即为肉芽肿重，计算药物对肉芽肿生成的抑制率。
试验结果详见表4 表4乳痛宁颗粒对大鼠棉球肉芽肿生成的影响(n＝10，
) ***P＜0.01与空白对照组比较。
大鼠棉球肉芽肿试验为慢性炎症模型，检测肉芽和纤维组织增生。
试验结果表明，乳痛宁中、高剂量组(2.0，4.0g/kg)可明显抑制肉芽肿形成(P＜0.01)，抑制率为45.53和48.46％。试验同时表明乳痛宁中、高剂量组在抑制肉芽和纤维组织增生方面的作用优于阳性对照组。
药效实施例4本发明药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 取昆明种小鼠50只，雌雄兼用，体重20.3±0.9g，依体重、性别均衡随机分为空白对照组、乳痛宁组(乳痛宁组按照用药量1.5g/kg，3.0g/kg，6.0g/kg又依次分为乳痛宁1组，乳痛宁2组，乳痛宁3组)。灌胃给药，每天1次，连续7天。末次给药后1.5h，各鼠均尾静脉注入0.5％伊文思蓝NS溶液0.1ml/10g，并立即腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20min后处死小鼠，剪开腹部，用6ml NS分次洗涤腹腔，吸出冲洗液，合并后以NS稀释至10.0ml，3000rpm离心15min，取上清液于590nm测吸收度，比较各组腹腔液的差别，进行组间t检验。
试验结果详见表5。
表5.乳痛宁颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (n＝10，
) **P＜0.05与空白对照组比较。
试验结果表明，乳痛宁组均可使小鼠腹腔毛细血管通透性降低。
药效实施例5本发明药物对小鼠耳廓微循环的影响 取昆明种小鼠50只，体重24.1±1.5g左右，雌雄兼用，每组10只，分为空白对照组，阳性对照药组，乳痛宁组(乳痛宁组按照用药量1.5g/kg，3.0g/kg，6.0g/kg又依次分为乳痛宁1组，乳痛宁2组，乳痛宁3组)。灌胃给药，每天1次，连续3天。末次给药后30min，60min，90min，100倍光镜观察小鼠双耳廓细动脉(A)、细静脉(V)的血管口径、毛细血管开放数量(与1mm横线的交叉数)。小鼠先以20％乌拉坦0.07ml/10g(1.4g/kg)，im麻醉，并以医用橡皮膏轻贴拉去耳廓毛，小鼠腹部向下固定在小鼠观察台上，一侧耳下垫0.5cm厚有机玻璃(耳托)，在耳托和耳廓表面滴少许香柏油，将观察台置于显微镜载物台上，用冷光源。比较用药后(与空白对照组比较)A、V口径与毛细血管开放量的变化。试验结果详见表6、表7。
表6乳痛宁颗粒对小鼠耳廊微循环的影响(n＝10，X±SD) **P＜0.05，***P＜0.01与NS组比较。
表7乳痛宁颗粒对小鼠耳廊毛细血管开放量的影响(n＝10，
) **P＜0.05，***P＜0.01与NS组比较。
试验结果表明，乳痛宁组可有效促进小鼠耳廊微循环动、静脉扩张，增加毛细血管的开放量。
毒理学研究 1.小鼠口服急性毒性测定 预试验时，以最大浓度(80％)，最大灌胃容量(0.4ml/10g)，测不出具体LD50，所以测定其最大耐受量(MTD)80％乳痛宁混悬液灌胃0.4ml/10g，连续2次，间隔4h，观察7天。结果无死亡，亦无任何中毒表现。故小鼠口服MTD为64.0g/kg，相当于成人每日每公斤用量的213倍。提示本制剂无明显毒性。
2.大鼠4个月长期毒性Wistar大鼠120只，雌雄各半。分为对照组，4.0，8.0，12.0g/kg三个剂量给药组(分别加相当于成人每天每公斤体重用量的13.3，26.6，40.0倍)。灌胃给药，每天1次，连续4个月。药后60天，120天和停药后14天进行项目检查进水量、进食量、体重系数、脏器系数、尿生化、外周血像、血生化和病理学组织学检查。结果，给药组与对照组大鼠比较，各项指标无明显异常，未见与药物作用有关的病理变化。认为乳痛宁颗粒在给药剂量内，对大鼠无明显毒性。
综上所述，乳痛宁具有对抗大鼠乳腺增生的作用，可降低大鼠乳房高度和血清雌二醇、黄体生成素浓度，并有镇痛、抑制血管透性和棉球肉芽肿和改善小鼠微循环的作用。其与阳性对照药相比，具有更显著的药效。上述实验为乳痛宁临床治疗的乳腺增生提供了药理依据。
具体实施例方式 制剂实施例1 本发明原药提取物的制备 a、按以下重量配比称取各药物组分柴胡200g，当归200g，香附200g，川芎200g赤芍200g，菟丝子266g，锁阳266g，首乌藤266g，皂角刺200g，土鳖虫133g，淫羊藿200g，益母草200g，刘寄奴266g。将以上十三味，分别粉碎成粗粉(10目)，备用。
b、取当归、川芎、香附子三味，加12倍量水，提取挥发油8小时，收集挥发油，药渣及水溶液另器留存，备用； c、挥发油每1ml用8gβ-环糊精进行包合(45℃恒温搅拌1小时)，4℃冷藏过夜，抽滤，包合物用少量的水与石油醚洗涤，40℃以下干燥6小时，研细，过80目筛备用； d、将b步骤中的药渣加10倍量水煎煮1小时，滤过，滤液与b步骤中的水溶液合并，合并液留存备用。
e、柴胡、刘寄奴、锁阳三味，加10倍量70％乙醇回流提取2次，每次1.0小时，滤过，合并滤液，药渣留存备用，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.18～1.22(60℃)的清膏，另器保存备用； f、e步骤中的药渣与赤芍、淫羊藿、皂角刺、益母草、菟丝子、首乌藤、土鳖虫七味药材混匀，加12倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与d步骤中的合并液合并混合后，减压浓缩至相对密度为1.02～1.05(60℃)时，每100ml滤液中加入1％正天成II型天然澄清剂B组分2ml后，再加入浓度为1％的正天成II型天然澄清剂A组分4ml，搅匀，60～70℃水浴保温1小时，4℃静置24小时后，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.22～1.28(60℃)的清膏。
g、将e步骤中的清膏与f步骤中的清膏合并、混匀，再加入c步骤中的β-环糊精包合物，混匀后即为原药提取物。
其中的正天成II型天然澄清剂A组分、正天成II型天然澄清剂B组分为天津正天成澄清技术有限公司生产的“ZTC 1+1天然澄清剂系列”产品之一，其在市场上均可购得。
制剂实施例2 本发明药物组合物的颗粒剂 将实施例1中所制备的原药提取物，加入蔗糖粉(80目)552g、蛋白糖15g，采用流化喷雾制粒机制成颗粒1000g。
制剂实施例3本发明药物组合物的片剂 以实施例1中所制备的原药提取物为活性成分，按公知片剂制备方法，加入淀粉，糊精、硬酯酸镁等，混合制成颗粒，机器冲压成片。
实施例4～6 可选用公知的制备方法，制成口服液、胶囊及软胶囊等口服制剂，各组分的配比重量如下 以上制剂实施例，只是药物组分的配比与剂型有所不同，但均具有本发明所述效果。
权利要求
1、一种治疗乳腺增生症的药物组合物，其特征在于其是由下述重量份比的原料药组成
柴胡20～50份，当归20～50份，香附20～50份，川芎20～50份，赤芍20～50份，菟丝子26～50份，锁阳26～50份，首乌藤26～50份，皂角刺20～50份，土鳖虫13～26份，淫羊藿20～50份，益母草20～50份，刘寄奴26～50份。
2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于各原料药的用量配比为
柴胡20～30份，当归20～30份，香附20～30份，川芎20～30份 赤芍20～30份，菟丝子26～36份，锁阳26～36份，首乌藤26～36份，皂角刺20～30份，土鳖虫13～26份，淫羊藿20～30份，益母草20～30份，刘寄奴26～36份。
3、一种治疗乳腺增生症的药物组合物的提取制备方法，其特征在于它包括以下步骤
a、按以下重量配比称取各药物组分
柴胡20～50份，当归20～50份，香附20～50份，川芎20～50份 赤芍20～50份，菟丝子26～50份，锁阳26～50份，首乌藤26～50份，皂角刺20～50份，土鳖虫13～26份，淫羊藿20～50份，益母草20～50份，刘寄奴26～50份；将所有药物组分分别粉碎成粗粉，备用；
b、取当归、川芎、香附子三味药，加水浸泡后，提取、收集挥发油，药渣及水溶液另器留存，备用；
c、在40～45℃恒温条件下，用β-环糊精对挥发油进行包合，搅拌1～1.5小时，2～4℃条件下，冷藏10～12小时，抽滤，包合物用少量的水与石油醚洗涤后，在低于40℃温度条件下，干燥6～8小时，研细，过60～80目筛，备用；
d、将b步骤中的药渣加8～10倍量的水，煎煮1～1.5小时，滤过，滤液与b步骤中的水溶液合并，合并液留存备用；
e、将柴胡、刘寄奴、锁阳三味药，加8～10倍量的70～75％乙醇回流提取2次，每次1～1.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.18～1.22的清膏，备用；
f、将e步骤中的药渣与赤芍、淫羊藿、皂角刺、益母草、菟丝子、首乌藤、土鳖虫七味药混匀，加10～12倍量的水，煎煮2次，每次1～1.5小时，滤过，滤液与d步骤中的合并液混合后，减压浓缩至的相对密度为1.02～1.05时，每100ml滤液中加入1％正天成II型天然澄清剂B组分2ml～4ml后，再加入浓度为1％的正天成II型天然澄清剂A组分4ml～6ml，搅匀，60～70℃水浴保温1～1.5小时，2～4℃条件下，静置20～24小时后，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.22～1.28的清膏；
g、将e步骤中的清膏与f步骤中的清膏合并、混匀，再加入c步骤中的包合物，混匀后即为原药提取物。
全文摘要
本发明公开了一种治疗乳腺增生症的药物组合物及其提取制备方法，其药物组合物包括有以下重量份比的药物组分柴胡20～50份，当归20～50份，香附20～50份，川芎20～50份，赤芍20～50份，菟丝子26～50份，锁阳26～50份，首乌藤26～50份，皂角刺20～50份，土鳖虫13－26份，淫羊藿20～50份，益母草20～50份，刘寄奴26～50份；本发明药物具有对抗大鼠乳腺增生的作用，可降低大鼠乳房高度和血清雌二醇、黄体生成素浓度，并有镇痛、抑制血管透性和棉球肉芽肿和改善小鼠微循环的作用。
文档编号A61P15/14GK101024028SQ200710061639
公开日2007年8月29日 申请日期2007年3月29日 优先权日2007年3月29日
发明者李振江 申请人:神威药业有限公司