本发明涉及新的他克莫司局部的药物组合物，并涉及用于制备所述组合物的方法。发明背景他克莫司可用于于非免疫受损的因潜在危险而不宜使用传统疗法、或对传统疗法反应不充分、或无法耐受传统疗法的中到重度特应性皮炎患者的治疗，可作为短期或间歇性长期治疗。需要确定可以改善有效性、生物利用度、稳定性和/或患者的接受性的组合物以及这些组合物的应用。这些目的通过提供如本文所述的组合物、通过提供如本文所述的用于疾病、特别是用于治疗皮肤病学的疾病的所述组合物、以及通过提供如本文所述的制备组合物的方法而得到实现。本发明另外的方面在说明书和独立权利要求中被公开，优选的实施方案在说明书和从属权利要求中被公开。技术实现要素：他克莫司在有关局部的施用和局部盖伦组合物方面呈现出高度特殊的困难，尤其包括特定的稳定性问题。他克莫司在水中和含水缓冲液中显示出很差的溶解性，并在亲脂性赋形剂中显示出低溶解性。在极性有机溶剂中观察到良好的溶解性。他克莫司在亲水环境(例如水和极性有机溶剂/共溶剂)中具有降解的倾向，并且在水的存在下会被水解。对于上述疾病的治疗和预防，为了在皮肤上获得高浓度的他克莫司，特定的穿透(penetration)和渗透(permeation)特性是具有优势的，同时限制通过皮肤的渗透并因此降低全身暴露。这些特殊的要求使非传统的剂型的开发成为必需的。根据本发明，已经发现，可以得到具有适合的穿透和渗透特性的他克莫司的稳定的药物组合物。因此，发生潜在的不良副作用和/或储存时活性剂降解的风险减小，并可以降低治疗的总体成本。本说明书中使用的术语具有下列含义：本文所用的“活性剂”意指他克莫司。“活性剂”的目的还在于代表无定形和结晶的形式，例如多晶型物。“活性剂”的目的还在于代表其溶剂化物、其药学上可接受的盐及其混合物。“活性剂”的目的还在于代表显示出特定的固态特性的材料，例如“活性剂”的特定晶形和/或研磨形式，例如微粉化形式。本文所用的“溶剂化物”意指化合物的晶形，其另外含有一种或多种类型的化学计量定义的量的溶剂分子，例如醋酸乙酯、乙腈、水、醋酸异丙酯。优选地，溶剂化物在晶体点阵中含有一种类型的溶剂分子。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指活性剂的无毒的酸或碱土金属盐。这些盐可以在化合物最后的分离和纯化期间原位制备，或者通过分别单独将碱或酸基团与适合的有机或无机酸或碱反应制备。代表性的盐包括但不限于：醋酸盐、已二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、环戊烷基丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑姆酸盐、果胶酯酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐以及十一酸盐。而且，碱性含氮基团可以用如下的物质季铵化，如烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲基、二乙基、二丁基和二戊基酯，长链卤化物例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等等。由此得到水或油可溶性或可分散的产物。碱加成盐可以在化合物最后的分离和纯化期间原位制备，或者独立地通过将羧酸基团与适合的碱反应而制备，例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，或者氨、或者有机伯、仲、叔胺。药学上可接受的盐包括但不限于，基于碱金属和碱土金属的阳离子(例如钠、锂、钾、钙、镁、铝等等)的盐、以及无毒的铵、季铵和胺阳离子(包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等等)的盐。其它可用于形成碱加成盐的代表性的有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、吡啶、甲基吡啶、三乙醇胺等等，以及碱性氨基酸例如精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸。本文所用的“局部的药物组合物”在本领域是已知的(例如见《中国药典》2015年版)，并在本发明的上下文中特别指混悬类型的组合物。所述组合物包含i)活性剂和ii)基质。所述基质(也称为“基础(base)”)含有药学上可接受的赋形剂并适合于局部应用。另外，本发明的组合物可以制备为半固体，包括凝胶剂、贴剂(patch)、泡沫剂、酊剂、溶液剂、(唇)膏或喷雾剂；混悬类型的它们中的每一种。因此，本发明的组合物的粘度可以在非常广的范围内变化；通常，它们是半固体或液体，优选半固体。混悬类型的组合物的特征在于，所述活性剂混悬于基质中；优选以“疏水软膏剂”的形式。如本文所用，术语“个体”指动物。通常，动物是哺乳动物。个体还指例如灵长类动(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等等。在一些实施方案中，个体是灵长类。在另外的实施方案中，个体是人类。如本文所用，术语“抑制”指一种给定的状态、症状、或障碍、或疾病的降低或遏抑，或者生物活性或过程的基线活性的显著减少。如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗”指在一个实施方案中，改善所述疾病或障碍(即，减缓或阻止或降低所述疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”指减轻或改善至少一种物理参数(physicalparameter)，包括那些患者可能无法识别的参数。在又一个实施方案中，“治疗″指调节所述疾病或障碍，其是身体上的(例如，稳定一种可识别的症状)，生理学上的(例如，稳定一种物理参数)，或者两者都有。在又一个实施方案中，“治疗”指预防或延缓疾病或障碍的开始或发展或进展。如本文所用，如果个体将在生物学上、医学上或在生活质量方面从治疗中受益，那么所述个体“需要”所述治疗。如本文所用，除非在本文另有指明或者在上下文中明显是矛盾的，在本发明的上下文中(尤其是在权利要求书的上下文中)使用的单数形式的术语以及类似的术语解释为既涵盖单数的也涵盖复数。在整个本说明书和所附的权利要求书中，除非上下文另有要求外，词语“包含”、“包括”、以及词语“含有”应被理解是指包括所述的整整数或步骤、或者整数或步骤的组在内，而不排除任何其它的整数或步骤、或者整数或步骤的组。还应当理解，本说明书和权利要求书所提供/公开的本发明的各种实施方案、优选项和范围，可以与其它详述的特征组合，以提供另外的实施方案。一方面，本发明提供了局部的药物组合物，其包含他克莫司、疏水性基质和稠度剂。通常，其为混悬类型的组合物。所述活性剂在亲水环境(例如水和极性有机溶剂/共溶剂)中具有降解的倾向，并且在水的存在下会被水解。已经发现，包含他克莫司、疏水性基质和稠度剂的局部的药物组合物使得活性剂被制备为稳定的组合物，并使其具有适合的穿透和渗透特性；尤其是考虑到这一事实，即所述活性剂被混悬在基质中，因此只有一小部分分子是被溶解并可用于穿透。通过使用稠度剂，有可能将把皮肤上的活性剂水平增加到药学上有利的水平而不存在皮肤刺激。然而，通过皮肤渗透的活性剂非常低，导致没有全身暴露或者全身暴露非常低，从而最大限度地减少了副作用的风险。另外，这些组合物显示出良好的物理和化学稳定性。本发明的这一方面将在下文中进一步详细解释：对本发明的组合物尤其适合的是微粉化形式的本发明的活性剂(90%的粒子的粒径<20微米)。在本发明的组合物中的活性剂的量可以在很广的范围内变化，其通常以有效量提供。有效量指如下所述的活性剂的量：当对哺乳动物(优选人类)施用时，它足以实现下文文所定义的治疗。活性剂的适合的量可以由技术人员在常规实验中确定；通常它们在0.1–5重量%之间、优选0.5–2.0重量%，例如0.5、0.8或1.0重量%。疏水性基质：根据本发明的这一方面，所述基质含有石蜡(硬的、液状的、轻液的)、植物油、动物脂肪、合成甘油酯、蜡、全氟化碳(perflourcarbons)、部分全氟化碳(semiperflourcarbones)和/或液状聚硅氧烷。通常，所述疏水性基质只能吸收少量的水。优选地，所述疏水性基质含有一种或多种类型的烃；优选至少两种类型的烃。已经发现，所述基质可分散大量的活性剂并产生稳定的组合物。适合的烃在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。适合的烃包括固体和液体烃，其可以是直链和/或支链的。所述烃是用于药物组合物的已知的赋形剂，并且是商购可得的(例如作为单个成分的混合物)。适合的烃包括“矿物油”、“矿脂”、“微晶蜡”。适合的疏水性基质可以含有至多66重量%的矿物油、优选20–40重量%的矿物油。适合的疏水性基质可以含有至多98重量%的矿脂、优选40-60重量%的矿脂。适合的疏水性基质可以含有至多25重量%的微晶蜡、优选5-20重量%的微晶蜡。适合的疏水性基质可以含有比例为1:1至1:3、优选1:1.5至1:2.0的矿物油和矿脂。另外，适合的疏水性基质可以含有比例为1:0.2至1:1、优选1:0.33至1:0.66的矿物油和微晶蜡。稠度剂：如本发明上下文中所用，改变稠度的物质(也称为稠度改进剂)在本领域是已知的。适当的化合物可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物可配伍。可以理解，可以使用一种或多种这种物质。特别适合的是选自饱和脂肪酸和饱和脂肪酸酯的稠度剂。优选的是饱和的c8–c14脂肪酸、饱和的c8–c12脂肪酸酯；尤其优选的是c8–c10脂肪酸、c8–c10脂肪酸酯。另外，优选直链脂肪酸、直链脂肪酸酯。对于酯而言，优选c1–c3烷基。在这些稠度剂中，特别适合的是癸酸甲酯。在本发明的组合物中的稠度剂的量可以在很广的范围内变化，其通常以有效量提供。稠度剂的适合的量可以由技术人员在常规实验中确定；通常它们是在组合物总量的2.5–20重量%之间、优选2.5–10重量%之间。在一个实施方案中，本发明涉及根据本发明的这一方面的组合物，其不含有另外的赋形剂。因此，所述本发明的组合物只含有活性剂、一种或多种烃和稠度剂(即由其组成或基本由其组成)。例如对于简单的制备而言和/或对于对其它赋形剂具有皮肤刺激增加/过敏性可能性的患者人群，所述组合物被认为是有优势的。在另外的实施方案中，本发明涉及根据本发明的这一方面的组合物，其含有一种或多种另外的赋形剂。这些赋形剂在本领域是已知的，并可以由技术人员很容易地鉴定。适合的赋形剂可以选自抗氧化剂、胶凝剂、ph调节剂/缓冲剂、渗透促进剂、防腐剂、(共)溶剂和稳定剂。这些赋形剂在本领域是已知的、商购可得的并在标准的教科书中可以确认，例如r.c.rowe等人的《药用辅料手册》(handbookofpharmaceuticalexcipients)。所述组合物尤其在适应制备者或患者的需要方面具有优势，并因此改善产品特性(如储存期限或患者依从性)。适合的另外的赋形剂在下文说明：抗氧化剂在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。可以理解，可以使用一种或多种抗氧化剂。已经发现抗氧化剂使本发明的活性剂稳定。优选地，抗氧化剂选自酚衍生物(例如丁羟甲苯(bht)、丁基化羟基苯甲醚(bha))；抗坏血酸衍生物(例如抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯)、生育酚衍生物(例如维生素e、维生素etpgs)，亚硫酸氢盐衍生物(亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠(nametabisulfite))以及硫脲(thiourea)。更优选地，其选自丁羟甲苯(bht)、丁基化羟基苯甲醚(bha)、α生育酚、抗坏血酸或它们的混合物。特别优选地，抗氧化剂是bht。适合的组合物可以含有至多2重量%的抗氧化剂、优选0.005–0.5重量%的抗氧化剂。胶凝剂在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。可以理解，可以使用一种或多种胶凝剂。将胶凝剂包括在本发明的组合物中以调节粘度。适合于亲脂性制剂的胶凝剂例如微粉硅胶(aerosil)、聚乙烯和铝皂。适合的组合物可以含有至多10重量%的胶凝剂、优选0.02至2重量%的胶凝剂。调节ph的物质或提供ph缓冲剂在被领域是已知的。适当的缓冲剂可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。可以理解，可以使用一种或多种所述缓冲剂。适合的组合物可以含有所述缓冲剂，以将本发明的组合物的ph调节在5–8的范围内、优选6–7的范围内，例如6.5。渗透促进剂在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。可以理解，可以使用一种或多种渗透促进剂。如本文所用，术语“渗透促进剂”指当(经外表皮)局部施用到皮肤或粘膜(例如皮肤)的时候增强、即改善活性剂穿透的物质。可以使用广泛范围的渗透促进剂。适合的渗透促进剂可以例如选自：-醇，例如乙醇、2-丙醇、丙二醇、油醇、亚麻醇；-脂肪酸酯，例如乙酸丁酯、甘油单月桂酸酯、二甘醇油酸酯，-脂肪酸，例如油酸；-皂苷-胺，例如脲、n,n-二乙基-间-甲苯酰胺;-表面活性剂，如brij36t、pluronic(r)f68，-其它，例如萜、二甲基亚砜、1,3-二氧环烷烃(1,3-dioxacyloalkanes,sepa)、月桂氮酮、二甘醇单乙醚、二甲基异丙基已二酸酯(dimethylispropyladipate)、异山梨醇二甲醚(dimethyl-isosorbid)。本发明的组合物中的渗透促进剂的量可以在很广的范围内变化，其通常以有效量提供。更高的穿透还可以导致渗透的增加，例如通过皮肤的渗透增加。优选地，所述活性剂向体循环的的递送没有增强或没有显著增强(没有渗透或没有显著的渗透)。适合量的渗透促进剂可以由技术人员在常规实验中确定；通常它们在组合物总量的2.5–20重量%之间、优选2.5–10重量%之间。防腐剂在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的。可以理解，可以使用一种或多种防腐剂。将防腐剂包括在本发明所述药物组合物中以增加储存期限。优选地，防腐剂选自醇(例如苄醇)、酚和对羟苯甲酸酯。更优选地，防腐剂选自尼泊金酯、醇、双胍、汞盐(mercuricsalts)、咪脲(imidurea)。适合的组合物可以含有至多5重量%、优选0.01至3重量%的防腐剂。共溶剂和溶剂在本领域是已知的并且可以由技术人员选择，以与最终的药物组合物是可配伍的；它表示溶解本发明的活性剂(部分或完全)并且具有高的水溶混性的赋形剂。溶剂是溶解本发明的剂但具有低的水混溶性的赋形剂。因此，根据组合物和存在的其它赋形剂的类型，一种特定的化合物可以用作溶剂或用作共溶剂。可以理解，可以使用一种或多种共溶剂/溶剂。所述活性剂可以包括其它溶剂，例如在纯化中已经使用的溶剂或者其中提到的盐形式的溶剂。本发明的活性剂可以按重量计占本发明的组合物按重量计的大约20%的量存在，例如从大约按重量计0.05%。所述活性剂优选按重量计以组合物的0.5至5%的量存在，更优选按重量计以组合物的0.2至1%的量存在。本发明第二方面涉及制备本文所述的组合物的方法，其包括将本文所述的赋形剂组合以得到疏水性基质的步骤，将这样得到的基质与活性剂组合的步骤。本发明的组合物可以通过本身已知、但还没有应用于本组合物的方法制备，从而它们形成了新的方法。通常，药物组合物的制备是利用标准的药学方法，其包括将活性剂与基质组合的步骤，例如通过混合、溶解和/或冻干。这些步骤还可以包括将所使用的材料加热或冷却。上文所述，所述活性剂根据已知的方法是可获得的；所述基质的单个成分是本身已知的，或者根据已知的方法是可获得的。在一个实施方案中，本发明涉及制备本发明的第一个方面所述的组合物(即混悬类型的组合物)的方法，其包括下列步骤■于30–95℃的温度将所有赋形剂组合，得到熔融物(melt)，■加入活性剂以得到混悬物，优选于30–95℃的温度进行，■将所得到的组合物匀化，■任选冷却所得到的组合物。本发明通过下列实施例来举例说明。实施例1.药物组合物混悬类型的软膏剂通过将下文所示的赋形剂与他克莫司组合而制备。具体而言，将下文所示的所有成分(除了他克莫司以外)组合并在搅拌下加热至80℃，得到熔融物。于该温度将他克莫司加入，并搅拌所得的混合物直到得到完全湿润的他克莫司。然后将混悬物于80℃用ultraturrax仪器于24000rpm处理5min，使之匀化。将得到的组合物缓慢冷却至25℃，得到混悬类型的组合物。表1说明：实施例（1-4）配方中癸酸甲酯等量换成肉豆蔻酸异丙酯（或肉豆蔻酸甲酯或正己酸甲酯或肉豆蔻酸丁酯），其他不变得其对照例（1-4）；表中符号“-”表示没有。表2说明：实施例（5-8）配方中癸酸甲酯等量换成肉豆蔻酸异丙酯（或肉豆蔻酸甲酯或正己酸甲酯或肉豆蔻酸丁酯），其他不变得其对照例（5-8）；表中符号“-”表示没有。2.稳定性测试2a)化学稳定性对上文制备的所述药物组合物进行了化学稳定性测试。于40℃经过6个月的储存后，检测降解产物。于30℃/85%rh经过12个月的储存后，检测到的降解产物。检测到的降解产物少于0.8%。发现所述组合物的化学稳定性非常好。2b)物理稳定性对上文制备的所述药物组合物进行了物理稳定性测试。于40℃经过6个月的储存后，检测粒度分布。于30℃/85%rh经过12个月的储存后，检测粒度分布。在所述储存条件下显示了适合的粒度分布。发现所述组合物的物理稳定性在加速条件下令人满意。发现所述组合物的物理稳定性非常好。2c)温度循环测试对所述药物组合物进行了温度循环测试。样品在40℃和5℃之间以24小时为间隔循环了2个月。然后对样品的物理特征进行分析。观察到目视和显微外观有没有变化。可以观察到该软膏剂的粘度有很强的增加。2d)冻结和解冻测试对所述药物组合物进行了冻结和解冻测试。样品经过了四个完整的冻融循环(于–20℃储存6天，随后于25℃/70%rh储存1天)的储存。于28天后将样品取出并对样品的物理特征进行分析。观察到目视和显微外观有没有变化，并且该软膏剂的粘度没有变化。2e)使用中的测试对所述药物组合物进行了使用中的测试。将样品放在有白色铝管(10g)(内部有保护漆、没有压印、有膜、配有一个有内置尖的白色螺丝帽)中。每天两次(早晨和傍晚)将大约0.1g软膏剂从10g的管中移出，为期7和14个工作日。每次移出软膏剂后，将管盖紧并于25℃储存，直到下次移出。在为期7天和14天于25°使用期间之后，他克莫司的测试维持不变。3.在家猪(domesticpigs)中的变应性接触性皮炎(acd)/特应性皮炎治疗：为了致敏，将500μl10%的2,4-二硝基氟苯(dnfb，溶解于dmso:丙酮:橄榄油[1:5:3,v/v/v])以分开的体积经外表皮(epicutaneously)应用到两个耳朵的内侧面和根部以及基底部两条腹股沟上。一周后，用15μl1%的dnfb在剃过的背外侧背的12–16个点上引出皮肤过敏反应。测试点(7cm2大小)在背的两侧头尾向排列。在第8天激发后0.5小时和6小时之后，将每个五十微升的制剂样品应用到右侧的2个测试点上。对侧的左侧点单独用介质(安慰剂)类似地处理。在激发24小时后(当炎症达到顶峰时)对测试点进行临床检查。这些变化用从0到4分的量表评分(表3-1)，使得每个指定的点的合并最大得分为12分。表3-1受acd影响的测试点的临床征兆得分得分红斑/强度红斑/范围硬化程度0不存在不存在不存在1几乎看不见小斑点几乎触不到2轻度大斑点轻度的硬化3显著汇合的明显的硬化4严重（或变为青紫色测试点均匀发红测试点明显并凸起的硬化结果总结在表3-2中。表3-2化合物制剂对临床acd得分的抑制结果显示，实施例对皮炎的抑制效果显著高于对照例。4.在猪中进行的混悬类型的体内皮肤穿透/渗透性研究为了确定在体内的条件下经外表皮应用的化合物进入真皮的流量(穿透)，在解剖前8、4、2和1小时对猪的背外侧背上4cm2大小的区域用化合物制剂治疗。在热分离后，将表皮从切除的皮肤中移出，并对来自于去表皮的皮肤的1mm厚的真皮层的6mm的组织钻取物样品进行化合物浓度分析。这个操作使得在真皮中的药物水平得到可信的确定，并使分析物没有被存在于受治疗的皮肤表面或困在浅表角质层的残余未吸收的药物污染的风险。在真皮中得到的药物水平列于表4-1。表4-1体内试验中局部应用后的猪真皮中的药物水平应用软膏剂经过1–8小时后，实施例在皮肤中达到的浓度显著高于对照例。体内试验中进入猪皮肤的角质层的穿透在解剖受治疗的皮肤样品的2小时之前，对家猪的大腿外侧用软膏剂varb(1.0%)进行局部治疗，对侧的部位在0.5小时之前治疗。用纸巾擦拭移除过量的应用材料。用dsquame胶带(直径2.2cm，cuderm)连续移出40层连续的角质层，用气压驱动式柱塞得到均匀的压力。对化合物水平进行分析并用剥离的皮肤区域标准化。在软膏剂应用0.5小时和2小时之后，实施例1角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计3.3μg/m2和6.7μg/cm2，对照例1角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计2.1μg/m2和3.7μg/cm2，实施例显著优于对照例。在软膏剂应用0.5小时和2小时之后，实施例3角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计4.3μg/m2和8.9μg/cm2，对照例3角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计2.3μg/m2和4.3μg/cm2，实施例显著优于对照例。在软膏剂应用0.5小时和2小时之后，实施例6角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计8.6μg/m2和15.6μg/cm2，对照例6角质层中的化合物水平(40条胶带剥离条带的提取物的总和)分别达到合计5.5μg/m2和9.2μg/cm2，实施例显著优于对照例。5.猴腹部尸体皮肤中的体外皮肤穿透/渗透猴皮肤的制备在实验开始之前，皮肤保存在-20℃大约4个月。解冻的皮肤样品用aesculap切皮刀(aesculapag,tuttlingen,德国)切为500μm的厚度，将其剪切以使之适合扩散区域，并将其装配到扩散franz池(diffusionfranzcells)(franz1975)的供给室和接受室之间。皮肤完整性的测定皮肤的完整性通过对渗透通过皮肤的氚标记的水(3h2o)进行评价而确定；将400μl3h2o(0.1mbq/ml)应用到皮肤表面。经过30分钟的平衡，用棉签把3h2o从皮肤移除；取2ml接受相(下文描述的接受液的组合物)，以测量渗透过皮肤的3h2o的分数。接受相中的放射性强度在液体闪烁系统2500tr(liquidscintillationsystems2500tr)(packardinstr.co.,meriden,ct,usa)中用液体闪烁计数测量。采用外标法进行猝灭校正。用密封的标准品(packardinstr)建立淬灭校正曲线。体外的通过皮肤的皮肤渗透和进入皮肤的穿透的确定将皮肤用作分隔手动静态franz池(大约7.3ml的体积，16mm的内部直径)的供给室和接受室的膜。接受室充满接受液(0.5%的brij78[volpo20]的水溶液)，以模拟人类的生理条件和药物从皮肤的系统性的移除。接受液还另外含有100u/ml1%的青霉素/链霉素混合物，以防止微生物污染。用于扩散的有效皮肤区域和接受室的体积分别在1.78至2.14cm2(平均2.01cm2)的范围内和6.98至7.54ml的范围内。采用34±1℃的循环水浴使池的温度保持恒定。在整个实验期间持续使用磁力搅拌棒，以保证接受的均一性。样品的收集和处理将243-305mg的量的制剂作为单次剂量应用到安装在扩散franz池上的皮肤样品上(对应于采样时间=0h，每个制剂对应3-4个池)。制剂被留在皮肤上48小时。为了避免制剂的蒸发和干燥，将franz池的供给室用含孔的石蜡膜(m)半封闭。对于渗透穿过皮肤的活性剂的测定，在应用之后4、7、20、25.5、28、31、44和48小时，从接受室收集200μl的接受液等分试样。从接受室取出的体积每次都用相同体积的新鲜接受液替换，以保持在整个测定期间总接受液的体积恒定。在治疗期(应用后48h)结束时，将每个皮肤样品表面的残留制剂用棉球棍小心地移除，将应用区域用含水的棉洗涤，并新的卷棉子温柔地干燥。该过程重复三次。然后用市售的粘胶带(scotch550,3m)经21条胶带剥离条带将角质层从皮肤中分离出来。弃去第一条剥离条带以避免来自制剂的潜在污染，并将其余的20条剥离条带放入小瓶中(号码2-6、7-11、12-16、17-21的剥离条带汇集在一起)。剥离的皮肤的治疗区域的活组织标本用1.2cm直径打孔器采集并称重。在分析前将接受液、胶带剥离条带和剥离的皮肤样品冷冻并于-20℃保存。样品中的他克莫司的浓度用经过验证的lc-ms/ms分析确定；定量下限为0.5ng/ml(接受液和剥离条带)或5ng/g(皮肤样品)。表5-1结果(均数±sd[范围],n=1-4)制剂/他克莫司实施例1对照例11%在丙二醇／乙醇7:3(v/v)中在角质层中的浓度：第2-21条剥离条带(ng/cm2)5260±23513440±213577±2248hr后的皮肤中的浓度(ng/cm2)63±3592±874850±2168滞后时闯(lagtime)(hr)13.218.921.8表5-2结果(均数±sd[范围],n=1-4)制剂/他克莫司实施例3对照例31%在丙二醇／乙醇7:3(v/v)中在角质层中的浓度：第2-21条剥离条带(ng/cm2)9647±43686163±3356121±4848hr后的皮肤中的浓度(ng/cm2)43±2368±379832±4219滞后时闯(lagtime)(hr)10.215.920.9结果显示，实施例体外皮肤穿透/渗透效果显著高于对照例。当前第1页12