一种减肥的药物组合物的制作方法

本发明属于医药技术领域。

背景技术：

随着人们生活的不断改善，营养的摄入量也明显超标，特别是儿童和老人，近年来，中国儿童的体重显著增加，肥胖率不断上升，严重威胁他们的身体健康。肥胖症，又称肥胖病，是一种社会性慢性疾病。肥胖是指一定程度的明显超重与脂肪层过厚，是体内脂肪，尤其是甘油三酯积聚过多而导致的一种状态。由于食物摄入过多或机体代谢的改变而导致体内脂肪积聚过多造成体重过度增长并引起人体病理、生理改变或潜伏。当人体内热量的摄入量高于消耗量，造成体内脂肪堆积过多，导致体重超标、体态臃肿。肥胖评定标准：肥胖度=(实际体重－标准体重)÷标准体重×100％。实际测量体重超过标准体重20％以上，并且脂肪百分比超过30％者称为肥胖。通俗讲肥胖就是体内脂肪堆积过多。

目前已在临床应用和正在研究的各种减肥药主要有中枢性食欲抑制剂、消化吸收阻滞剂、代谢促进剂、肥胖基因产物和其他治疗肥胖的药物，这些减肥药物都或多或少存在些副作用。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种既能减肥，又能减少不良反应的减肥药物组合物。

本发明制成有效成分的重量配比是：虫草素:3'-脱氧肌苷=2:1。

本发明药物组合物在制备减肥药物中的应用。

本发明减肥的药物组合物在制备预防和治疗肥胖相关的心脑血管性疾病的药物中的应用。

本发明减肥的药物组合物在制备预防和治疗肥胖相关的糖耐量异常、糖尿病、脂肪肝、肝硬化、胆石症、胰腺炎、眼底出血、失明、跛行、高尿酸血症的药物的应用。

本发明结合西医药学理论，合理配比，既能有效减肥，又能减少不良反应，质优价廉。

附图说明

图1是荧光显微镜检测脂肪细胞中的脂肪滴；

图2是脂肪滴定量分析。

具体实施方式

本发明制成有效成分的重量配比是：虫草素:3'-脱氧肌苷=2:1。

虫草素即3’-脱氧腺苷（3’-deoxyadenosine），属嘌呤类生物碱，是从蛹虫草（cordycepsmilitaris）中通过化学方法分离得到的核苷类物质，其结构式如通式（ⅰ）所示；3'-脱氧肌苷（3'-deoxyinosine）是虫草素经腺苷脱氨酶脱氨基后的产物，分子式为c10h12n4o4，分子量为252.227，其结构式如通式（ⅱ）所示：

本发明减肥的药物组合物在制备减肥药物中的应用。

本发明减肥的药物组合物在制备预防和治疗肥胖相关的心脑血管性疾病的药物中的应用。

本发明减肥的药物组合物在制备预防和治疗肥胖相关的糖耐量异常、糖尿病、脂肪肝、肝硬化、胆石症、胰腺炎、眼底出血、失明、跛行、高尿酸血症的药物的应用。

以下对本发明做进一步详细描述：

本发明的虫草素和3'-脱氧肌苷组合物具有优秀的减肥作用。

本发明所述的药物组合物包括：虫草素、3'-脱氧肌苷。

虫草素（3’脱氧腺苷，3’-deoxyadenosine）也称为虫草菌素（cordycepin），是从蛹虫草（cordycepsmilitaris）的发酵液中或从冬虫夏草中提取的一种具有多重生物活性的核苷类抗生素。蛹虫草又名北冬虫夏草，与冬虫夏草具有相似的生物活性成分，主要包括虫草素、虫草酸、虫草多糖、麦角甾醇、氨基酸、核苷类物质等，功效与冬虫夏草相似，而且虫草素含量和抗氧化活性高于冬虫夏草，是冬虫夏草的最佳替代品。虫草素的分子式为c10h13n5o3，相对分子量为251，熔点为230~231℃，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿，紫外光下的最大吸收波长为259nm。早在20世纪70年代，虫草素被发现有抗菌、抗病毒、抗炎和免疫调节的作用。而3'-脱氧肌苷（3'-deoxyinosine）是虫草素经腺苷脱氨酶脱氨基后的产物。

因此，本发明的虫草素和3'-脱氧肌苷组合物能够制备预防和治疗肥胖以及肥胖相关的心脑血管性疾病的药物。所述的心脑血管性疾病优选是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死、高血压、动脉粥样硬化、周围血管疾病。

每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪细胞，其组织又称脂肪组织，常呈白色，在幼儿期大量增殖，到青春期数量达到巅峰，此后数量一般不再增加。白色脂肪细胞内含有大量富含脂肪的小泡，称为脂质泡，即脂肪滴。脂肪滴（lipiddroplets,lds），富含滑面内质网，是普遍存在的动态细胞器，在所有真核细胞和一些原核细胞中储存和供应脂质，用于能量代谢，膜合成和必需的脂质衍生分子的产生。在哺乳动物中，脂滴在细胞脂质稳态中起重要作用，主要储存用于膜和类固醇激素合成的胆固醇酯，或三酰基甘油，其用作能量底物或信号传导脂质或膜磷脂合成的前体的来源。脂肪滴的生长和消耗可以通过多种途径发生，但最终两种过程都依赖于脂肪滴与水性细胞质内的其他细胞器之间的脂质含量的调节交换。因为脂肪滴不与囊泡运输途径直接相关，所以它们的生物发生所需的中性脂质和磷脂必须在原位产生或通过物理相互作用从其他细胞器产生。由于脂肪滴与流行的人类疾病之间的联系，以及脂肪滴新的和意想不到的功能的发现，在过去十年中，科研工作者们对细胞器细胞生物学的兴趣呈指数增长。而关于主要针对体内脂肪滴的降解达到减肥效果的药物还未见报到。

本发明主要涉及一种药物组合物且其具有高效减肥的效果。其减肥作用的根本机制是：虫草素具有显著的降解白色脂肪细胞中脂肪滴的作用，而3'-脱氧肌苷能显著地加强虫草素的这种作用，虫草素和3'-脱氧肌苷联合使用显著强于单独使用虫草素降解脂肪滴的作用，所以虫草素和3'-脱氧肌苷联合能够达到更好的减肥效果。

根据本发明，所述的药物组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。

在安全性实验中，虫草素和3'-脱氧肌苷分别以5.0g/kg大鼠灌胃给药。给药后连续观察两周，记录受试大鼠行为、活动、体重、摄食量、粪便及死亡等情况，两周后处死进行尸检。大鼠给药后毛色光滑、行为活动、体重增长、摄食、粪便正常，与溶剂对照组比较无明显差异；且两周内无死亡及其它异常情况发生。处死后进行尸检，各主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）经肉眼观察未见异常改变，与溶剂对照组比较无明显差异。说明虫草素和3'-脱氧肌苷都无明显的毒性反应，大鼠最大耐受量为大于6.25g/kg，即虫草素和3'-脱氧肌苷经口给药的ld50大于6.25g/kg。

本发明药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将活性成分与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用药使用的适当施用形式或剂量形式。

本发明的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明的组合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子如下：稀释剂与吸收剂，例如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、投甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸概酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子如下：稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄著胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子如下：如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。

为了将给药单元制成胶囊，将有效成分与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明的组合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、ph调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外，如需要也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明所述的药物组合物中虫草素和3'-脱氧肌苷的最适重量配比为：虫草素:3'-脱氧肌苷=2:1，组合物在治疗肥胖时使用的剂量根据患者的年龄，身体状态和病情而定，推荐的使用剂量按照重量配比效果更好的为2:1，效果较好的为1:1，给药次数为每日一次。

本发明药用组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度,患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数等，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。根据本发明药用组合物中最后的制剂中所含有的实际有效药物数量，加以适当的调整以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的治疗日的。

下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明有任何限制

一、减肥机制试验

实施例1：虫草素和3'-脱氧肌苷在体外与脂肪细胞相互作用的机制研究

1材料

[实验动物]sd大鼠，雄性，体重180～200g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：scxk2015-0001。

[受试品]虫草素（购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶，纯度为99%）。

[饲料]基础饲料，购自南通特洛菲饲料科技有限公司基础饲料配方：20%面粉，10%米粉，20%玉米，20%豆粉，25%麸皮，2%骨粉，2%鱼粉。高脂饲料配方：:83.6%基础饲粮，15%脂肪，1.2%胆固醇，0.2%胆盐。高脂饲料d12494：购自美国researchdiets饲料公司（rodentdietwith60%kcal%fat）。

[药品]虫草素：购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶。3'-脱氧肌苷（购自nescientificnatickinnovationcenter公司，规格25mg/瓶，纯度为99%）。

方法

[建模及观察]对sd大鼠进行给高脂饲料，连续四周，均无限量供给，建成肥胖模型。后处死并提取成熟脂肪细胞，用bodipy对脂肪滴染色，通过imagej软件测量脂肪滴的含量。

[数据分析]数据以平均值士标准差表示，数据分析釆取t检验。

结果

结果表明，与模型组比较，经虫草素（给药剂量为50mg/kg）处理后脂肪滴含量显著减少(p=0.0022<0.01)；经3'-脱氧肌苷（给药剂量为50mg/kg）处理后脂肪滴含量减少，但是作用不明显，差异不显著（p=0.0529>0.05）；经虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物（给药剂量为12.5mg/kg＋6.25mg/kg）处理后，脂肪滴含量极显著减少(p=0.0002<0.01)；与虫草素单独处理组和3'-脱氧肌苷单独处理组比较，虫草素和3'-脱氧肌苷组合物具有更为显著的降解脂肪滴的作用（p值分别为：p与虫草素比较=0.008<0.01;p与3'-脱氧肌苷比较=0.0013<0.01）。见附图1和附图2。

结论

虫草素和3'-脱氧肌苷组合物在体外与脂肪细胞相互作用的机制是通过降解脂肪细胞里面的脂肪滴来实现的，并且虫草素和3'-脱氧肌苷组合物降解脂肪滴的效果显著强于虫草素或者3'-脱氧肌苷分别单独降解脂肪滴的效果。

二、药效试验

实施例2：虫草素和3'-脱氧肌苷分别单独给药治疗对肥胖模型大鼠体重变化的影响

1材料与方法

[实验动物]sd大鼠，雄性，体重180～200g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：scxk2015-0001。

[受试品]虫草素（购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶，纯度为99%）。

[饲料]基础饲料，购自南通特洛菲饲料科技有限公司，基础饲料配方：20%面粉，10%米粉，20%玉米，20%豆粉，25%麸皮，2%骨粉，2%鱼粉；高脂饲料配方：83.6%基础饲粮，15%脂肪，1.2%胆固醇，0.2%胆盐；高脂饲料d12494：购自美国researchdiets饲料公司（rodentdiet，60%kcal%fat）。

[药品]虫草素，购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶，纯度为99%；3'-脱氧肌苷：购自nescientificnatickinnovationcenter公司，规格25mg/瓶，纯度为99%。

方法

[分组与给药]大鼠按体重随机分成八组：正常对照组、肥胖模型组、虫草素高剂量组（50mg/kg）、虫草素中剂量组（25mg/kg）、虫草素低剂量组（12.5mg/kg）、3'-脱氧肌苷高剂量组（50mg/kg）、3'-脱氧肌苷中剂量组（25mg/kg）、3'-脱氧肌苷低剂量组（12.5mg/kg），每组10只，无死亡率。正常对照组给予普通饲料，其他各组给高脂饲料，连续四周，均无限量供给。建模成功后，每组大鼠每天均给予200g饲料，空白组给予空白饲料，模型组与给药组给予高脂饲料，各给药组每天灌胃一次，给药容积均为0.5ml/100g体重，连续给药4周。空白组和模型组每天给予等体积生理盐水。

[药效评价]给药4周后，各组大鼠分别称重（g）

[数据分析]数据以平均值士标准差表示，数据分析釆取t检验。

结果

1、与正常对照组大鼠体重（365±3.2g）相比，模型组大鼠体重（468±2.6g）有极显著提高，表明本实验肥胖模型造模成功。

2、给药后，与模型组大鼠体重相比，虫草素（50mg/kg）和虫草素（25mg/kg）给药组大鼠体重显著降低（p<0.05），而最低浓度虫草素（12.5mg/kg）给药组大鼠体重未显著降低（p>0.05），这表明高于一定浓度的虫草素单独给药具有显著减大鼠体重的作用；3个受试浓度3'-脱氧肌苷（12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg）单独给药均无显著减大鼠体重的作用。结果见表2。

结论

虫草素单独灌胃给药对高脂饲料诱导的肥胖大鼠有降低大鼠体重的作用；3'-脱氧肌苷单独灌胃给药对高脂饲料诱导的肥胖大鼠无降低体重的作用。

表2虫草素给药治疗对肥胖大鼠体重变化的影响（mean±sd）

注：1.与空白对照组相比^“*”p<0.05，^“**”p<0.01，^“***”p<0.001；2.与模型组相比^“△”p<0.05，^“△△”p<0.01，^{“△△△”}p<0.001；3.3'-脱氧肌苷与虫草素给药组相比^“#”p<0.05，^“##”p<0.01，^“###”p<0.001。

实施例3：虫草素和3'-脱氧肌苷组合物给药治疗对肥胖模型大鼠体重变化的影响

1材料与方法

[实验动物]sd大鼠，雄性，体重180～200g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：scxk2015-0001。

[受试品]3'-脱氧肌苷（购自nescientificnatickinnovationcenter公司，规格25mg/瓶，纯度为99%）。虫草素（购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶，纯度为99%）

[饲料]基础饲料，购自南通特洛菲饲料科技有限公司。基础饲料配方：20%面粉，10%米粉，20%玉米，20%豆粉，25%麸皮，2%骨粉，2%鱼粉。高脂饲料：由2%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶、87.8%基础鼠料自行配制而成。

[药品]虫草素：购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶。3'-脱氧肌苷（购自nescientificnatickinnovationcenter公司，规格25mg/瓶，纯度为99%）。

方法

[分组与给药]大鼠按体重随机分成五组：正常对照组、模型组、虫草素（12.5mg/kg）＋3'-脱氧肌苷（6.25mg/kg）组、虫草素（6.25mg/kg）＋3'-脱氧肌苷（6.25mg/kg）组、虫草素（6.25mg/kg）＋3'-脱氧肌苷（3.125mg/kg）组，每组10只。正常对照组给予普通饲料，其他各组给高脂饲料，连续四周，均无限量供给。建模成功后，每组大鼠每天均给予200g饲料，空白组给予空白饲料，模型组与给药组给予高脂饲料，各给药组每天灌胃一次，给药容积均为0.5ml/100g体重，连续给药4周。空白组和模型组每天给予等体积生理盐水。

[药效评价]给药4周后，各组大鼠分别称重（g）

[数据分析]数据以平均值士标准差表示，数据分析釆取t检验。

结果

1、与正常对照组大鼠体重相比，模型组大鼠体重有极显著提高，表明本实验肥胖大鼠模型造模成功。

2、给药后，体重检测结果如下：与肥胖模型组大鼠体重比较，虫草素（12.5mg/kg）＋3'-脱氧肌苷（6.25mg/kg）组大鼠体重极显著降低15.3%（p<0.001）；虫草素（6.25mg/kg)＋3'-脱氧肌苷（6.25mg/kg）组大鼠体重极显著降低10.5%（p<0.01）；虫草素（6.25mg/kg）＋3'-脱氧肌苷（3.125mg/kg）组大鼠体重显著降低8.7%（p<0.05）。结果见表3。

结论

虫草素和3'-脱氧肌苷组合物给药治疗可显著降低大鼠体重；如实施例2结果所述，3'-脱氧肌苷单独给药无显著减大鼠体重作用，而由于3'-脱氧肌苷的加入，使得原本单独给药无法减轻大鼠体重的虫草素剂量（给药剂量≦12.5mg/kg）在组合物中呈现出显著的减大鼠体重作用。这些结果说明高于一定浓度的虫草素单独给药具有减肥的作用；3'-脱氧肌苷单独给药减肥效果不显著；而3'-脱氧肌苷具有显著加强虫草素减肥的作用，使得虫草素和3'-脱氧肌苷组合物减肥效果达到最佳。

表3虫草素和3'-脱氧肌苷组合物治疗给药对肥胖高血脂模型大鼠的影响（mean±sd）

注：1.与空白对照组相比^“*”p<0.05，^“**”p<0.01，^“***”p<0.001；2.与模型组相比^“△”p<0.05，^“△△”p<0.01，^{“△△△”}p<0.01。

三、安全性实验

实施例4：虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物急性毒性试验

材料及方法

[实验动物]sd大鼠，体重180～220g，雌雄各半，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：scxk2015-0001。

[受试品]3'-脱氧肌苷（购自nescientificnatickinnovationcenter公司，规格25mg/瓶，纯度为99%)。虫草素（购自sigma-aldrich公司，规格500mg/瓶，纯度为99%）

[试验方法]取sd大鼠40只，体重180～200g，雌雄各半。随机分为2组，每组20只，即虫草素＋3'-脱氧肌苷组和溶剂对照组，禁食（不禁水）12小时后给药。虫草素＋3'-脱氧肌苷组用12.5%的3'-脱氧肌苷一次给小鼠灌胃给药0.5ml/100g，则给药剂量为6.25g/kg；溶剂对照组给等量的蒸馏水。给药后连续观察两周，记录受试大鼠行为、活动、体重、摄食量、粪便及死亡等情况，两周后处死进行尸检。

结果

虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物给药两周后，大鼠毛色光滑、行为活动、体重增长、摄食、粪便正常，与溶剂对照组比较无明显差异；且两周内无死亡及其它异常情况发生。两组（虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物组、溶剂对照组）同时处死后进行尸检，各主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）经肉眼观察未见异常改变，虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物组与溶剂对照组比较无明显差异。结果见表4。

结论

虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物组一次经口给药的最大耐受量试验结果表明：20只大鼠给药后均无明显的毒性反应，两周内亦无死亡。因此，虫草素＋3'-脱氧肌苷组合物一次经口给药的大鼠最大耐受量为大于6.25g/kg，即虫草素＋3'-脱氧肌苷组经口给药的ld50大于6.25g/kg。

表4虫草素＋3'-脱氧肌苷组经口给药大鼠最大耐受量实验结果

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