相关申请的交叉引用
本申请要求2017年11月1日提交的标题为“对b细胞成熟抗原具有特异性的抗体和嵌合抗原受体(antibodiesandchimericantigenreceptorsspecificforb-cellmaturationantigen)”的美国临时申请号62/580,431、以及2017年12月8日提交的标题为“对b细胞成熟抗原具有特异性的抗体和嵌合抗原受体(antibodiesandchimericantigenreceptorsspecificforb-cellmaturationantigen)”的美国临时申请号62/596,772的优先权,将其内容通过引用以其全文并入。
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在一些方面,本公开文本涉及bcma结合分子,特别涉及抗bcma抗体(包括抗体片段)。本公开文本进一步涉及含有此类抗体的重组受体,包括含有此类抗体的嵌合抗原受体(car)。本公开文本进一步涉及表达此类受体和抗体的基因工程化细胞、以及其在过继细胞疗法中的用途。
背景技术:
b细胞成熟抗原(bcma)是在成熟b淋巴细胞上表达的iii型跨膜蛋白。当bcma与其配体即tnf家族的b细胞激活剂(baff)和增殖诱导配体(april)结合后,促存活细胞信号被传递至b细胞,这已被发现是浆细胞存活所必需的。bcma的表达与若干种疾病有关联,所述疾病包括癌症、自身免疫性障碍和感染性疾病。由于bcma在包括癌症在内的多种疾病和病症中的作用,因此bcma是治疗靶标。可利用各种bcma结合分子(包括抗bcma抗体和含有抗bcma抗体部分的嵌合抗原受体)以及表达此类嵌合抗原受体的细胞。需要改善的bcma结合分子和工程化靶向bcma的细胞。例如,需要用于在过继细胞疗法中使用的具有降低的免疫原性的分子和细胞、以及全人抗体(包括与bcma特异性结合的抗体片段)、和表达此类人抗体的嵌合受体。本文提供满足此类需要的实施方案。
技术实现要素:
本文提供bcma结合分子,其包括:多肽,如抗bcma抗体(包括抗原结合抗体片段,如单结构域抗体(例如,单独的vh区)、单链抗体片段(包括scfv片段));以及含有此类抗体的多肽,包括融合蛋白、受体(例如重组受体,包括嵌合受体,如含有抗体作为抗原识别组分的嵌合抗原受体(car))。在特定的实施方案中,所述抗体是人抗体,如包括scfv在内的人单链抗体片段。
本文提供抗体或其抗原结合片段,包括与bcma(如人bcma)特异性地结合的那些抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,所述抗体含有特定的互补决定区(cdr),包括重链cdr(即cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3)和轻链cdr(即cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3),如本文所述的任何一种。在一些实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变(vh)区。在一些实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包括vh区和轻链可变(vl)区。
在一些实施方案中,本文提供抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含含有选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
在一些方面,本文提供抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含vh区,所述vh区与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%序列同一性,例如与所述vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14(seqidno:355)的cdr-h3,其中x1是a、d、e、g、l、v或w;x2是a、d、g、l、p、q或s;x3是a、d、g、l或y;x4是d、g、p、r、s、v、y或空;x5是d、i、p、s、t、y或空;x6是a、g、i、s、t、v、y或空;x7是a、d、e、f、l、p、s、y或空;x8是p、q、t、y或空;x9是d、g、r、y或空;x10是a、f、y或空;x11是d、f或空;x12是f或空;x13是d、t或y;并且x14是i、l、n、v或y。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含含有选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含含有氨基酸序列x1x2x3mx4(seqidno:353)的重链互补决定区1(cdr-h1),x1是d或s;x2是y或s;x3是a、g、w或y;并且x4是h、q或s;和/或含有氨基酸序列x1ix2x3x4x5x6x7x8x9x10x11yx12x13x14x15x16x17(seqidno:354)的重链互补决定区2(cdr-h2),其中x1是f、g、h、v、w或y;x2是n、r、s或v;x3是p、q、s、v、w或y;x4是k或空;x5是a或空;x6是d、g、n、s或y;x7是g或s;x8是g或s;x9是e、g、n、t或s;x10是i、k或t;x11是e、g、n或y;x12是a或v;x13是a、d或q;x14是k或s;x15是f或v;x16是k或q;并且x17是e或g。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含含有选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列的cdr-h1;和/或含有选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;和/或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。
在一些实施方案中,本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:含有选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列的cdr-h1或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;含有选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或含有选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含选自以下各项的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3:分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和8的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:3、6和11的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:140、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:141、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:141、145和150的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:142、146和151的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:143、147和153的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:144、148和154的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和156的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:3、372和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:3、6和377的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、373和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别含有seqidno:2、5和378的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;或分别含有seqidno:2、374和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。
在一些实施方案中,本文提供包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区的抗体或其抗原结合片段,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%序列同一性。在一些实施方案中,所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4序列分别与在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。在一些实施方案中,所述vh区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:含有选自seqidno:59-63、195-203和434-439中任何一个的氨基酸序列的fr1;含有选自seqidno:64-66和204-209中任何一个的氨基酸序列的fr2;含有选自seqidno:67-69、210-216、441和443中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或含有选自seqidno:70-71、217-220、444和445中任何一个的氨基酸序列的fr4。
在一些任何此类实施方案中,所述vh区包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段不包含轻链可变(vl)区,不包含轻链互补决定区(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3,和/或是仅包含所述vh区的单结构域抗体(sdab)。在一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是仅包含所述vh区的sdab。
在含有任何上述vh区序列的任何所述抗体或片段的一些实施方案中,所述抗体或片段进一步含有vl区。在一些此类实施方案中,所述vl区与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%序列同一性,例如与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同一性。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12(seqidno:358)的轻链互补决定区3(cdr-l3),其中x1是a、c、g、h、i、q或s;x2是a、q、s或v;x3是s、w或y;x4是d、f、g、h或y;x5是d、g、m、r、s或t;x6是a、g、h、l、r、s、t或y;x7是l、p、r、s或空;x8是d、g、n、r、s、t或空;x9是a、g、h、l、p或空;x10是f、s或空;x11是l、p、w或y;并且x12是s、t或v。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含含有选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3或在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14x15x16x17(seqidno:356)的轻链互补决定区1(cdr-l1),其中x1是g、k、r、s或t;x2是a、g或s;x3是g、n、s或t;x4是g、k、n、q、r或s;x5是s或空;x6是d、n、v或空;x7是l、v或空;x8是h、s、y或空;x9是s、t或空;x10是s或空;x11是d、g、i、n、s或空;x12是d、e、g、k、i、n或空;x13是f、g、k、n、r、s、y或空;x14是d、k、n、t或空;x15是a、d、g、l、n、s、t或y;x16是l或v;x17是a、h、n、q或s;和/或含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7(seqidno:357)的轻链互补决定区2(cdr-l2),其中x1是a、d、e、n、s、v或w;x2是a、d、n、s或v;x3是a、d、h、i、n或s;x4是d、k、n、q、r或t;x5是l、r或v;x6是a、e、p或q;并且x7是a、d、s或t。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含含有选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;和/或选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1;和/或在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含含有选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;含有选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2;和选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包含vl区,所述vl区包含选自以下各项的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:27、38和48的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:29、40和50的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:31、41和52的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:32、42和53的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:34、44和56的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:35、45和57的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:36、46和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和184的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和185的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和186的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和187的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和189的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:176、181和190的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和192的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:178、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、399和415的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:381、401和417的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:382、402和418的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:383、403和419的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:384、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:385、180和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:386、404和420的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:387、405和422的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:388、406和423的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:388、407和424的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:389、408和425的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:390、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:391、409和426的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:392、40和427的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:394、39和429的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:395、411和430的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:396、412和431的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:396、412和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:397、413和432的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或分别含有seqidno:398、414和433的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区分别包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%序列同一性。在一些实施方案中,所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4序列分别与在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、98%、99%序列同一性。在一些实施方案中,所述vh区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:含有选自seqidno:72-82、221-227、446-459和461-466中任何一个的氨基酸序列的fr1;含有选自seqidno:83-92、228-232、467-477和479-482中任何一个的氨基酸序列的fr2;含有选自seqidno:93-101、233-242、483-495和497-501中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或含有选自seqidno:102-109、243-246、502-506和508中任何一个的氨基酸序列的fr4。
在一些任何此类实施方案中,所述vl区包含选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3序列的氨基酸序列;和/或cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3序列的氨基酸序列。
本文提供抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(vh)区,所述vh区与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性;和轻链可变(vl)区,所述vl区与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
在一些任何实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含vh区,所述vh区与选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性;和vl区,所述vl区与选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。在一些任何实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含vh区,所述vh区与seqidno:115的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性;和vl区,所述vl区与seqidno:536的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:含有重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3的重链可变(vh)区,其中:所述cdr-h1包含选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列;所述cdr-h2包含选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列;并且所述cdr-h3包含选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列;以及含有重链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3的轻链可变(vl)区,其中:所述cdr-l1包含选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列;所述cdr-l2包含选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列;并且所述cdr-l3包含选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列。
在一些任何实施方案中,所述cdr-h1包含选自seqidno:1和2中任何一个的氨基酸序列;所述cdr-h2包含选自seqidno:4和5中任何一个的氨基酸序列;并且所述cdr-h3包含选自seqidno:7和157中任何一个的氨基酸序列;并且所述cdr-l1包含选自seqidno:26、30、178和380中任何一个的氨基酸序列;所述cdr-l2包含选自seqidno:37、39、183或400中任何一个的氨基酸序列;并且所述cdr-l3包含选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的氨基酸序列。在一些任何实施方案中,所述cdr-h1包含seqidno:2的氨基酸序列;所述cdr-h2包含seqidno:5的氨基酸序列;并且所述cdr-h3包含seqidno:10的氨基酸序列;并且所述cdr-l1包含seqidno:33的氨基酸序列;所述cdr-l2包含seqidno:43的氨基酸序列;并且所述cdr-l3包含seqidno:421的氨基酸序列。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区,其中:所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和8的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:27、38和48的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:29、40和50的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:31、41和52的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:32、42和53的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:30、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:34、44和56的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和11的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:35、45和57的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:36、46和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:140、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和184的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:141、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和185的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:141、145和150的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和186的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:142、146和151的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和187的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:143、147和153的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和189的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:144、148和154的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:176、181和190的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和156的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:174、179和192的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:178、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:30、399和415的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、372和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:381、401和417的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:382、402和418的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和377的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:383、403和419的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:384、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:385、180和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、373和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和11的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:386、404和420的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和378的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:387、405和422的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:388、406和423的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:388、407和424的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:389、408和425的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:390、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、374和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:391、409和426的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:392、40和427的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:394、39和429的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:395、411和430的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:396、412和431的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:396、412和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:397、413和432的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:398、414和433的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些任何实施方案中,所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或所述vh区包含分别含有seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些任何实施方案中,所述vh区包含分别含有seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区包含分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些任何实施方案中,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;并且轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些任何实施方案中,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;并且轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3分别包含在seqidno:536的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区,其中:分别地,所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:116的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:111的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:117的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:118的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:119的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:120的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:121的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:122的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:123的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:112的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:124的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:113的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:125的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:114的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:126的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:127的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:247的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:257的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:248的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:258的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:249的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:259的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:250的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:260的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:251的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:261的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:252的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:262的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:253的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:263的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:254的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:264的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:255的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:265的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:256的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:266的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:256的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:267的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:518的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:534的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:519的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:535的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:536的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:520的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:264的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:521的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:537的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:522的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:538的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:523的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:539的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:519的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:540的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:524的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:541的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:525的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:261的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:526的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:542的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:527的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:543的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:528的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:544的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:529的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:545的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:528的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:546的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:522的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:547的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:256的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:548的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:530的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:549的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:531的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:550的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:519的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:552的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:553的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:118的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:533的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:554的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:555的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:524的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:556的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或所述vh区是或包含在seqidno:519的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:557的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些任何实施方案中,所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:116的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:110的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:120的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;所述vh区是或包含在seqidno:256的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:267的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或所述vh区是或包含在seqidno:519的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:535的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些任何实施方案中,分别地,所述vh区是或包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且所述vl区是或包含在seqidno:536的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
本文提供抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:含有分别与seqidno:110和116具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:111和117具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和118具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和119具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和120具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和121具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和122具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和123具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:112和124具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:113和125具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:114和126具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:115和127具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:247和257具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:248和258具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:249和259具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:250和260具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:251和261具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:252和262具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:253和263具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:254和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:255和265具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:256和266具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:518和534具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:519和535具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:520和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:521和537具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:522和538具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:523和539具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:519和540具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:524和541具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:525和261具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:526和542具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:527和543具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:528和544具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:529和545具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:528和546具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:522和547具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:256和548具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:530和549具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:531和550具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:519和552具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和553具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和118具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:533和554具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:115和555具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:524和556具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;或含有分别与seqidno:519和557具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。
在一些任何实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含:含有分别与seqidno:110和116具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:110和120具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;或含有分别与seqidno:519和535具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。在一些任何实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含与这样的seqidno至少为或至少约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的vh区序列和/或与这样的seqidno至少为或至少约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的vl区序列。
在一些实施方案中,所述vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:111和117的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和119的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和121的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和122的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和123的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:112和124的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:113和125的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:114和126的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:115和127的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:247和257的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:248和258的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:249和259的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:250和260的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:251和261的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:252和262的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:253和263的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:254和264的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:255和265的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:256和266的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:518和534的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:520和264的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:521和537的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:522和538的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:523和539的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:519和540的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:524和541的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:525和261的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:526和542的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:527和543的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:528和544的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:529和545的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:528和546的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:522和547的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:256和548的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:530和549的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:531和550的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:519和552的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和553的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:533和554的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:115和555的氨基酸序列;所述vh和vl区分别包含seqidno:524和556的氨基酸序列;或所述vh和vl区分别包含seqidno:519和557的氨基酸序列。
在一些任何实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;所述抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;所述抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;或所述抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列。在一些任何实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段与bcma蛋白特异性地结合。在一些实施方案中,所述bcma蛋白是人bcma蛋白、小鼠bcma蛋白或非人灵长类bcma蛋白。在一些实施方案中,所述bcma蛋白是人bcma蛋白。在一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段进一步与小鼠bcma或非人灵长类bcma特异性地结合。在一些实施方案中,所述人bcma蛋白包含seqidno:367或368的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段对bcma蛋白具有结合亲和力,其中ec50为从或从约0.1nm至400nm、从或从约0.5nm至200nm、从或从约1nm至100nm、或从或从约2nm至50nm;或所述抗体或抗原结合片段对bcma蛋白具有结合亲和力,其中ec50为小于或小于约400nm、小于或小于约300nm、小于或小于约200nm、小于或小于约100nm、小于或小于约50nm、小于或小于约25nm、或小于或小于约5nm。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段对人bcma蛋白的结合亲和力与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体对所述人bcma的结合亲和力至少一样高或基本上一样高。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体竞争结合人bcma蛋白。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体特异性地结合相同或重叠的人bcma蛋白表位。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段不与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体竞争结合人bcma蛋白。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段特异性地结合与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体不同的人bcma蛋白表位。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段将包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体与人bcma蛋白的结合抑制大于或大于约80%或大于或大于约90%。在一些任何此类实施方案中,所述人bcma蛋白包含seqidno:367或368的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体不包含与包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体内含有的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3和/或cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3序列。在一些任何此类实施方案中,所述抗体不包含在以下抗体内含有的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3和/或cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3序列:包含seqidno:328的氨基酸序列的抗体、和/或包含seqidno:329的氨基酸序列的抗体、和/或包含seqidno:585的氨基酸序列的抗体、和/或包含seqidno:586的氨基酸序列的抗体。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是人的。
本文提供特异性地结合与由参考抗体特异性地结合的表位相同或重叠的bcma蛋白表位的人抗体或其抗原结合片段,所述bcma蛋白任选地是人bcma,其中所述参考抗体是所述抗体或其抗原结合片段或包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体,所述人抗体或抗原结合片段包含重链和轻链cdr,所述重链和轻链cdr不同于在包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体内含有的重链和轻链cdr。
本文提供与bcma特异性地结合并与参考抗体竞争结合bcma的人抗体或其抗原结合片段,所述bcma任选地是人bcma,其中所述参考抗体是所述抗体或抗原结合片段或包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体,所述人抗体或抗原结合片段包含重链和轻链cdr,所述重链和轻链cdr不同于在包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体内含有的重链和轻链cdr。
在一些任何此类实施方案中,所述人抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含与由种系核苷酸人重链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,与由种系核苷酸人重链d区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,和/或与由种系核苷酸人重链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分;和/或所述抗体或抗原结合片段包含vl区,所述vl区包含与由种系核苷酸人κ或λ链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,和/或与由种系核苷酸人κ或λ链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分。
在一些任何此类实施方案中,所述人抗体或其抗原结合片段含有cdr-h1和/或cdr-h2,所述cdr-h1和/或cdr-h2包含与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的cdr-h1和/或cdr-h2的氨基酸序列相比为100%相同或具有不多于一个氨基酸差异的序列;和/或含有cdr-l1和/或cdr-l2,所述cdr-l1和/或cdr-l2包含与由种系核苷酸人κ或λ链v区段编码的序列内的cdr-l1和/或cdr-l2的氨基酸序列相比100%相同或具有不多于一个氨基酸差异的序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是重组的。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是单克隆的。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段是单链片段。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体是包含由柔性接头连接的vh和vl区的片段。在一些任何此类实施方案中,所述片段包含scfv。在一些实施方案中,所述scfv包含含有氨基酸序列ggggsggggsggggs(seqidno:361)的接头。在一些实施方案中,所述scfv包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列,或与选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些任何实施方案中,所述scfv包含选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的氨基酸序列,或与选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些任何实施方案中,所述scfv包含seqidno:560的氨基酸序列,或与seqidno:560的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所述受体包含抗原结合结构域,所述抗原结合结构域与在任何前述实施方案中包含的本文所述的任何抗体和片段或具有所提供的vh/vl或cdr序列组合的抗体结合相同或基本上相同的bcma表位或竞争结合bcma。在一些实施方案中,所述结合结构域识别包含bcma多肽内的一个或多个氨基酸序列的一部分的表位。在一些方面,此类一个或多个氨基酸序列是或包含:mlmag(seqidno:616)、yfdsl(seqidno:618)和qlrcssntppl(seqidno:619)。在一些方面,此类一个或多个氨基酸序列是或包含:mlmag(seqidno:616)、yfdsll(seqidno:620)和qlrcssntppl(seqidno:619)。在一些方面,此类一个或多个氨基酸序列是或包含:mlmag(seqidno:616)、qneyfdsll(seqidno:617)和qlrcssntppl(seqidno:619)。在一些方面,此类一个或多个氨基酸序列是或包含:qneyf(seqidno:613)、cipcql(seqidno:614)和cqryc(seqidno:615)。在一些方面,此类一个或多个氨基酸序列是或包含:csqneyf(如seqidno:611所示)和llhacipcqlr(如seqidno:612所示)。
本文还提供包含本文所提供的任何单链抗体片段的单链细胞表面蛋白。在一些实施方案中,所述单链细胞表面蛋白含有任何所提供的单结构域抗体。
提供单链细胞表面蛋白,其包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的scfv氨基酸序列或包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列。本文还提供包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的scfv氨基酸序列的单链细胞表面蛋白。在一些任何此类实施方案中,所述scfv包含选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中,所述scfv包含seqidno:560的氨基酸序列。
在一些任何此类实施方案中,所述抗体或抗原结合片段进一步包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分。在一些实施方案中,免疫球蛋白恒定区的所述部分包含铰链区的至少一部分。在一些实施方案中,免疫球蛋白恒定区的所述部分包含fc区。在一些实施方案中,所述fc区是人igg的fc区。
还提供包含任何所提供的抗体或抗原结合片段和异源分子或部分的缀合物。还提供含有任何所提供的单链细胞表面蛋白的缀合物。
还提供嵌合抗原受体(car),其包含含有任何所提供的抗体或抗原结合片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含仅vh结构域(例如,sdab)或scfv,并且所述细胞内信号传导结构域包含itam。在一些实施方案中,所述细胞内信号传导结构域包含cd3-zeta(cd3ζ)链(任选地人cd3ζ)的ζ链的信号传导结构域或其信号传导部分。
在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含连接所述细胞外结构域和所述细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些实施方案中,所述跨膜结构域包含共刺激分子(如t细胞共刺激分子,例如cd28和/或4-1bb,任选地人cd28)的跨膜部分。在一些实施方案中,所述t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。在一些实施方案中,所述细胞内信号传导结构域还包括t细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面,t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。在一些实施方案中,所述共刺激信号传导结构域包含4-1bb(任选地人4-1bb)的细胞内信号传导结构域。
在任何所提供的car的一些实施方案中,所述car含有如本文所提供的抗体或其抗原结合片段、作为cd28的一部分或其变体的跨膜结构域、以及含有cd28的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含含有ig铰链(例如,igg4铰链)的间隔子,例如仅铰链的间隔子。在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含截短的egfr序列。在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含igκ信号序列和/或cd33信号序列。
在任何所提供的car的一些实施方案中,所述car含有如本文所提供的抗体或其抗原结合片段、作为cd28的一部分或其变体的跨膜结构域、以及含有4-1bb的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中,所述car进一步包含含有ig铰链(例如,igg4铰链)的间隔子,例如仅铰链的间隔子。在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含截短的egfr序列。在一些任何此类实施方案中,所述car进一步包含igκ信号序列和/或cd33信号序列。
本文进一步提供核酸,其编码任何所提供的抗体或其抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、或任何所提供的car。在一些实施方案中,所述核酸进一步编码gm-csf信号序列、cd8信号序列、igκ信号序列或cd33信号序列。
还提供包含本文所提供的核酸的载体。在一些实施方案中,所述载体是表达载体。在一些任何此类实施方案中,所述载体是病毒载体。在一些任何此类实施方案中,所述载体是逆转录病毒载体。在一些任何此类实施方案中,所述病毒载体是慢病毒载体。在一些任何此类实施方案中,所述慢病毒载体源自hiv-1。
本文提供细胞,其含有任何所提供的抗体或其抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、或任何所提供的car。在一些实施方案中,所述细胞是表达受体(例如,嵌合抗原受体)的工程化细胞,所述工程化细胞包含任何所提供的抗体或其抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、或任何所提供的car。在一些实施方案中,所述细胞或工程化细胞是t细胞。还提供包含本文所提供的载体的工程化细胞。
提供如下组合物或药物组合物,所述组合物或药物组合物包含任何所提供的抗体或其抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、任何所提供的car或任何所提供的细胞。在一些实施方案中,所述组合物或药物组合物含有药学上可接受的赋形剂。
本文还提供治疗方法,其包括将任何一种或多种所提供的组合物或药物组合物给予至患有与bcma相关的疾病或障碍的受试者。提供治疗方法,其包括将任何所提供的抗体或抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、任何所提供的car或任何所提供的细胞(例如,工程化t细胞)给予至患有与bcma相关的疾病或障碍的受试者。
本文提供用于在治疗与bcma相关的疾病或障碍中使用的任何所提供的组合物或药物组合物。提供任何所提供的组合物或药物组合物用于制造治疗与bcma相关的疾病或障碍的药物的用途。本文还提供本文所述的任何组合物或药物组合物用于治疗与bcma相关的疾病或障碍的用途。在一些实施方案中,本文所提供的组合物或药物组合物包含任何所提供的抗体或抗原结合片段、任何所提供的单链细胞表面蛋白、任何所提供的缀合物、任何所提供的car或任何所提供的细胞(例如,工程化t细胞)。
在一些任何此类实施方案中,所述与bcma相关的疾病或障碍与bcma表达相关。在一些任何此类实施方案中,所述与bcma相关的疾病或障碍是b细胞相关障碍。在一些任何此类实施方案中,所述与bcma相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。在一些实施方案中,所述自身免疫性疾病或障碍是系统性红斑狼疮(sle)、狼疮性肾炎、炎性肠病、类风湿性关节炎(例如青少年类风湿性关节炎)、anca相关性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(itp)、血栓性血小板减少性紫癜(ttp)、自身免疫性血小板减少症、查加斯病(chagas’disease)、格雷夫斯病(grave’sdisease)、韦格纳氏肉芽肿病(wegener’sgranulomatosis)、结节性多动脉炎、舍格伦综合征(sjogren’ssyndrome)、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、牛皮癣、iga肾病、igm多发性周围神经病变、血管炎、糖尿病、雷诺综合征(reynaud’ssyndrome)、抗磷脂综合征、古德帕斯丘病(goodpasture’sdisease)、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力或进行性肾小球肾炎。
在一些任何此类实施方案中,所述与bcma相关的疾病或障碍是癌症。在一些实施方案中,所述癌症是表达bcma的癌症。在一些实施方案中,所述癌症是b细胞恶性肿瘤。在任何此类实施方案中,所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中,所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤(例如,地方性伯基特淋巴瘤或散发性伯基特淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症(waldenstrommacroglobulinemia)、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样b细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺b细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)或套细胞淋巴瘤(mcl)。在一些实施方案中,所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(all)。在一些实施方案中,所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(例如,非分泌性多发性骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤)或浆细胞瘤。在本文的一些实施方案中,与bcma相关的疾病或障碍是以下中的一种或多种:胶质母细胞瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、移植后淋巴增生性障碍、免疫调节性障碍、重链疾病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性和/或意义不明的单克隆丙种球蛋白病。
应当理解,可以将本文描述的各个实施方案的一个、一些或所有特性进行组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得清楚。本发明的这些和其他实施方案由随后的具体实施方式进行进一步描述。
具体实施方式
提供bcma结合分子,包括抗体(包括抗原结合抗体片段,如重链可变(vh)区和单链片段(包括scfv))以及含有此类抗体和抗原结合片段的重组受体(包括嵌合受体和单链细胞表面蛋白);编码此类抗体和抗原结合片段和受体的核酸;以及细胞(例如用于表达和产生这些抗体和抗原结合片段或受体的重组或工程化细胞)。还提供制备和使用抗体和抗原结合片段以及表达或含有抗体和抗原结合片段或受体的细胞(例如,工程化细胞)的方法。还提供含有此类抗体、抗原结合片段、受体或细胞的组合物,包括药物组合物。在一些方面,所提供的组合物、抗体、抗原结合片段、受体或细胞可以与疗法或治疗方法结合使用。
本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其全文并入,在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开的申请和其他出版物中所述的定义相反或在其他方面不一致,则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。
本文使用的章节标题仅用于组织目的,而不应解释为限制所描述的主题。
i.bcma结合分子
在一些方面,提供bcma结合分子,如bcma结合多肽。此类结合分子包括与bcma蛋白(如人bcma蛋白)特异性地结合的抗体(包括抗原结合片段)。结合分子还包括含有此类抗体的多肽,包括含有此类抗体的单链细胞表面蛋白(例如,重组受体,如嵌合抗原受体(car))。
a.bcma抗体
提供抗bcma抗体,包括功能抗原结合片段。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包括含有重链可变(vh)区的作为单结构域抗体的那些,所述单结构域抗体在不与轻链抗原结合位点(例如,轻链可变(vl)区)配对和/或没有任何另外的抗体结构域或结合位点的情况下能够与bcma特异性地结合。抗体或抗原结合片段还包括多结构域抗体,例如含有vh和vl结构域、由单结构域抗体的vh结构域或其抗原结合位点构成的那些。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区,如scfv。抗体包括与bcma(例如人bcma)特异性地结合的抗体。所提供的抗bcma抗体包括人抗体。抗体包括分离的抗体。还提供含有此类抗体的bcma结合分子,例如单链蛋白、融合蛋白和/或重组受体(如嵌合受体,包括抗原受体)。bcma结合分子包括分离的分子。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用,并且包括多克隆和单克隆抗体,包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段,包括片段抗原结合(fab)片段、f(ab')2片段、fab'片段、fv片段、重组igg(rigg)片段、能够特异性地结合抗原的重链可变(vh)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scfv))以及单结构域抗体(例如,sdab、sdfv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式,如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如,双特异性或三特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联双scfv、串联三scfv。除非另有说明,否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能抗体片段,在本文也称为“抗原结合片段”。所述术语还涵盖完整或全长抗体,包括任何类别或亚类(包括igg及其亚类、igm、ige、iga和igd)的抗体。
术语“互补决定区”和“cdr”与“高变区”或“hvr”同义,在本领域中是已知的,指代抗体可变区内的氨基酸的非连续序列,其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常,在每个重链可变区中有三个cdr(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3),并且在每个轻链可变区中有三个cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)。“框架区”和“fr”在本领域中是已知的,指代重链和轻链的可变区的非cdr部分。通常,在每个全长重链可变区中有四个fr(fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4),并且在每个全长轻链可变区中有四个fr(fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4)。
给定cdr或fr的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任何一种容易地确定,所述方案包括以下文献中所述的那些:kabat等人(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,贝塞斯达,马里兰州(“kabat”编号方案);al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948(“chothia”编号方案);maccallum等人,j.mol.biol.262:732-745(1996),“antibody-antigeninteractions:contactanalysisandbindingsitetopography,”j.mol.biol.262,732-745”(“contact”编号方案);lefrancmp等人,“imgtuniquenumberingforimmunoglobulinandtcellreceptorvariabledomainsandigsuperfamilyv-likedomains,”devcompimmunol,2003年1月;27(1):55-77(“imgt”编号方案);honeggera和plückthuna,“yetanothernumberingschemeforimmunoglobulinvariabledomains:anautomaticmodelingandanalysistool,”jmolbiol,2001年6月8日;309(3):657-70(“aho”编号方案);和martin等人,“modelingantibodyhypervariableloops:acombinedalgorithm,”pnas,1989,86(23):9268-9272(“abm”编号方案)。
给定cdr或fr的边界可能取决于用于鉴定的方案而变化。例如,kabat方案是基于结构比对,而chothia方案是基于结构信息。kabat和chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区域序列长度,其中通过插入字母提供插入(例如“30a”)并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置,从而产生不同的编号。contact方案是基于对复杂晶体结构的分析,并且在许多方面与chothia编号方案相似。abm方案是介于kabat与chothia定义之间的折衷,其基于oxfordmolecular的abm抗体建模软件所使用的方案。
以下表1列出了分别通过kabat、chothia、abm和contact方案鉴定的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3以及cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的示例性位置边界。对于cdr-h1,使用kabat和chothia两种编号方案列出了残基编号。fr位于cdr之间,例如,其中fr-l1位于cdr-l1之前,fr-l2位于cdr-l1与cdr-l2之间,fr-l3位于cdr-l2与cdr-l3之间,等等。应注意,因为所示的kabat编号方案在h35a和h35b处放置插入,所以当使用所示的kabat编号惯例进行编码时chothiacdr-h1环的末端取决于环的长度而在h32与h34之间变化。
表1.根据各种编号方案的cdr的边界。
1-kabat等人(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,贝塞斯达,马里兰州
2-al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948
因此,除非另有规定,否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的“cdr”或“互补决定区”或单个指定的cdr(例如,cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)涵盖如由任何上述方案或其他已知方案所定义的一个(或特定的)互补决定区。例如,在声明特定的cdr(例如,cdr-h3)含有给定vh或vl区氨基酸序列中的相应cdr的氨基酸序列的情况下,应理解,这样的cdr具有在可变区内的相应cdr(例如,cdr-h3)的序列,如由任何上述方案或其他已知方案所定义的。在一些实施方案中,指定了特定的cdr序列。使用各种编号方案描述所提供抗体的示例性cdr序列(参见例如表2、表3和表4),但应当理解,所提供抗体可以包括如根据任何其他上述编号方案或熟练技术人员已知的其他编号方案所描述的cdr。
同样,除非另有规定,否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的fr或单独指定的一个或多个fr(例如,fr-h1、fr-h2、fr-h3、fr-h4)涵盖如由任何已知方案所定义的一个(或特定的)框架区。在一些情形中,规定了用于鉴定特定的cdr、fr或者fr或cdr的方案,如通过kabat、chothia、abm或contact方法或其他已知方案定义的cdr。在其他情况下,给出了cdr或fr的特定氨基酸序列。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变区(分别为vh和vl)通常具有相似的结构,每个结构域包含四个保守的框架区(fr)和三个cdr。参见例如kindt等人kubyimmunology,第6版,w.h.freemanandco.,第91页(2007)。单个vh或vl结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外,可以使用来自结合抗原的抗体的vh或vl结构域分离结合所述特定抗原的抗体,以分别筛选互补的vl或vh结构域的文库。参见例如portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993);clarkson等人,nature352:624-628(1991)。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”或“抗原结合片段”是指除了完整抗体以外的分子,其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2;双抗体;线性抗体;重链可变(vh)区、单链抗体分子(如scfv)和仅含有vh区的单结构域抗体;和由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中,抗体是或包含含有可变重链(vh)区和可变轻链(vl)区的抗体片段。在特定实施方案中,抗体是包含重链可变(vh)区和/或轻链可变(vl)区的单链抗体片段(例如scfv)。
单结构域抗体(sdab)是包含抗体的全部或部分重链可变区或者全部或部分轻链可变区的抗体片段。在某些实施方案中,单结构域抗体是人单结构域抗体。
抗体片段可以通过各种技术制备,包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中,抗体是重组产生的片段,如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如,肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些),和/或可以不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些方面,抗体片段是scfv。
“人源化”抗体是这样的抗体,其中所有或基本上所有cdr氨基酸残基源自非人cdr并且所有或基本上所有fr氨基酸残基源自人fr。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体,其经历人源化以通常降低对人的免疫原性,同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中,人源化抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如,衍生出cdr残基的抗体)的相应残基取代,例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
所提供的抗bcma抗体包括人抗体。“人抗体”是具有与人或人细胞或者利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)的非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式,如所有或基本上所有cdr都是非人的那些。所述术语包括人抗体的抗原结合片段。
人抗体可以通过将免疫原给予转基因动物来制备,所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或一部分,其替代内源免疫球蛋白基因座,或者其存在于染色体外或随机整合至动物染色体中。在此类转基因动物中,通常内源免疫球蛋白基因座已经被失活。人抗体也可以衍生自含有衍生自人库的抗体编码序列的人抗体文库,包括噬菌体展示和无细胞文库。
所提供的抗体包括单克隆抗体,包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体(即,构成所述群体的单独抗体是相同的,但含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体除外,此类变体通常以少量存在)获得或在所述群体内的抗体。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反,单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备,所述技术包括但不限于从杂交瘤产生、重组dna方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。
术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用,是指氨基酸残基的聚合物,并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的抗体和抗体链以及其他肽(例如,接头和bcma结合肽))可以包括含有天然和/或非天然氨基酸残基的氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰,例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面,多肽可能含有关于原生或天然序列的修饰,只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(例如通过定点诱变),或者可能是偶然的(例如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于pcr扩增引起的错误)。
a.示例性抗体
在一些实施方案中,抗体(例如,抗bcma抗体或其抗原结合片段)含有如所述的重链和/或轻链可变(vh和/或vl)区或其足够的抗原结合部分。在一些实施方案中,抗bcma抗体或其抗原结合片段含有vh区序列或其足够的抗原结合部分,所述vh区序列或其足够的抗原结合部分含有如所述的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3。在一些实施方案中,抗bcma抗体或其抗原结合片段含有vl区序列或足够的抗原结合部分,所述vl区序列或足够的抗原结合部分含有如所述的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。在一些实施方案中,抗bcma抗体或其抗原结合片段含有vh区序列,所述vh区序列含有如所述的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3;并且含有vl区序列,所述vl区序列含有如所述的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。所提供的抗体还包括具有与这样的序列至少或至少约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、或约99%相同的序列的那些。
在一些实施方案中,抗体(例如,其抗原结合片段)具有重链可变(vh)区,所述vh区具有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列,或如下氨基酸序列,所述氨基酸序列与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性或者含有存在于这样的vh序列中的cdr-h1、+cdr-h2和/或cdr-h3。
在一些实施方案中,抗bcma抗体的vh区是包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14(seqidno:355)的重链互补决定区3(cdr-h3)的vh区,其中x1是a、d、e、g、l、v或w;x2是a、d、g、l、p、q或s;x3是a、d、g、l或y;x4是d、g、p、r、s、v、y或空;x5是d、i、p、s、t、y或空;x6是a、g、i、s、t、v、y或空;x7是a、d、e、f、l、p、s、y或空;x8是p、q、t、y或空;x9是d、g、r、y或空;x10是a、f、y或空;x11是d、f或空;x12是f或空;x13是d、t或y;并且x14是i、l、n、v或y。在一些此类实施方案中,在所述cdr-h3中,x1是v;x2是d;x3是g;x4是d;x5是y;x6是v;x7是d;x8是空;x9是空;x10是空;x11是空;x12是空;x13是d;并且x14是y。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h3,所述氨基酸序列包含选自根据chothia编号或abm编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有具有根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:9的氨基酸序列的cdr-h3。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区序列,在所述vh区序列中其中所含有的相应cdr-h3序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基h95至h102)被选自根据kabat编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个或根据chothia编号或abm编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的cdr-h3序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:7-10、149、153-157和376中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:7、9、10和157中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:10和157中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在seqidno:112的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
在一些实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段的vh区是包含含有氨基酸序列x1x2x3mx4(seqidno:353)的重链互补决定区1(cdr-h1)的vh区,x1是d或s;x2是y或s;x3是a、g、w或y;并且x4是h、q或s。在一些实施方案中,在所述cdr-h1中,x1是d;x2是y;x3是y;并且x4是s。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号的seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含选自根据chothia编号的seqidno:12-15和158-160中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含选自根据abm编号的seqidno:19-22、165-169和509中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有seqidno:2、13或20的氨基酸序列的cdr-h1。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区序列,在所述vh区序列中其中所含有的相应cdr-h1序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基h31至h35)被选自根据kabat编号的seqidno:1-3和140-144中任何一个、根据chothia编号的seqidno:12-15和158-160中任何一个、或根据abm编号的seqidno:19-22、165-169和509中任何一个的cdr-h1序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号的seqidno:1-3、141、143和144中任何一个、根据chothia编号的seqidno:12-15、158和160中任何一个、或根据abm编号的seqidno:19-22、166、168或169中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号的seqidno:1和2中任何一个、根据chothia编号的seqidno:12和13中任何一个、或根据abm编号的seqidno:19和20中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h1,所述氨基酸序列包含根据kabat编号的seqidno:2、根据chothia编号的seqidno:13、或根据abm编号的seqidno:20的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有在seqidno:112的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区是包含含有氨基酸序列x1ix2x3x4x5x6x7x8x9x10x11yx12x13x14x15x16x17(seqidno:354)的重链互补决定区2(cdr-h2)的vh区,其中x1是f、g、h、v、w或y;x2是n、r、s或v;x3是p、q、s、v、w或y;x4是k或空;x5是a或空;x6是d、g、n、s,或y;x7是g或s;x8是g或s;x9是e、g、n、t或s;x10是i、k或t;x11是e、g、n或y;x12是a或v;x13是a、d或q;x14是k或s;x15是f或v;x16是k或q;并且x17是e或g。在一些实施方案中,在所述cdr-h2中,x1是y;x2是s、x3是s;x4是空;x5是空;x6是s;x7是g;x8是s;x9是t;x10是i;x11是y;x12是a;x13是d;x14是s;x15是v;x16是k;并且x17是g。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有包含选自根据kabat编号的seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有包含选自根据chothia编号的seqidno:16-18、161-164和514-516中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有包含选自根据abm编号的seqidno:23-25、170-173和510-512中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有根据kabat编号的seqidno:5的氨基酸序列的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有根据chothia编号的seqidno:17的氨基酸序列的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有根据abm编号的seqidno:24的氨基酸序列的cdr-h2。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区序列,在所述vh区序列中其中所含有的相应cdr-h2序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基h50至h65)被选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个、根据chothia编号的seqidno:16-18、161-164和514-516中任何一个、或根据abm编号的seqidno:23-25、170-173和510-512中任何一个的cdr-h2序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h2,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号的seqidno:4-6、145、147、148和372中任何一个、根据chothia编号的seqidno:16-18、161、163、164和514中任何一个、或根据abm编号的seqidno:23-25、170、172、173和510中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h2,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号的seqidno:4和5中任何一个、根据chothia编号的seqidno:16和17中任何一个、或根据abm编号的seqidno:23和24中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有具有如下氨基酸序列的cdr-h2,所述氨基酸序列包含根据kabat编号的seqidno:5、根据chothia编号的seqidno:17、或根据abm编号的seqidno:24的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区含有在seqidno:112的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有cdr-h1,所述cdr-h1是或包含选自根据kabat编号的seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列;cdr-h2,所述cdr-h2是或包含选自根据kabat编号的seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列;和cdr-h3,所述cdr-h3是或包含选自根据kabat编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有cdr-h1,所述cdr-h1是或包含选自根据chothia编号的seqidno:12-15和158-160中任何一个的氨基酸序列;cdr-h2,所述cdr-h2是或包含选自根据chothia编号的seqidno:16-18、161-164和514-516中任何一个的氨基酸序列;和cdr-h3,所述cdr-h3是或包含选自根据chothia编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有cdr-h1,所述cdr-h1是或包含选自根据abm编号的seqidno:19-22、165-169和509中任何一个的氨基酸序列;cdr-h2,所述cdr-h2是或包含选自根据abm编号的seqidno:23-25、170-173和510-512中任何一个的氨基酸序列;和cdr-h3,所述cdr-h3是或包含选自根据abm编号的seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含如表2和表4所示的根据kabat编号的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含如表4所示的根据chothia编号的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含如表4所示的根据abm编号的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3选自:根据kabat编号,分别包含seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和8的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:3、6和11的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:140、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:141、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:141、145和150的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:142、146和151的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:143、147和153的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:144、148和154的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和156的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:3、372和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:3、6和377的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、373和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、5和378的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;分别包含seqidno:2、374和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有根据kabat编号的seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有根据chothia编号的seqidno:13、17和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有根据abm编号的seqidno:20、24和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。
例如,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3:根据kabat编号的seqidno:1、4和7;seqidno:2、5和8;seqidno:2、5和9;seqidno:2、5和10;seqidno:3、6和11;seqidno:140、145和149;seqidno:141、145和149;seqidno:141、145和150;seqidno:142、146和151;seqidno:2、5和152;seqidno:143、147和153;seqidno:144、148和154;seqidno:3、6和155;seqidno:2、5和156;seqidno:2、5和157;seqidno:2、6和376;seqidno:3、372和376;seqidno:3、6和376;seqidno:3、6和377;seqidno:2、373和152;seqidno:2、5和378;seqidno:2、374和9。
在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3:根据kabat编号的seqidno:1、4和7;seqidno:2、5和8;seqidno:2、5和9;seqidno:2、5和10;seqidno:141、145和149;seqidno:143、147和153;seqidno:144、148和154;seqidno:3、6和155;seqidno:2、5和156;seqidno:2、5和157;seqidno:2、6和376;seqidno:3、372和376;以及seqidno:3、6和376。在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3:根据kabat编号的seqidno:1、4和7;seqidno:2、5和9;seqidno:2、5和10;以及seqidno:2、5和157。在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vh区,所述vh区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3:根据kabat编号的seqidno:2、5和10;以及seqidno:2、5和157。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在seqidno:112的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。
在本文提供的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中,vh区包含任何如所述的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3并且包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。例如,抗bcma抗体或其抗原结合片段可以包含分别在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,以及与在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的框架区(例如,fr1、fr2、fr3和/或fr4)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同一性的框架区(例如,fr1、fr2、fr3和/或fr4)。在一些实施方案中,所述vh区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:含有选自seqidno:59-63、195-203和434-439中任何一个的氨基酸序列的fr1;含有选自seqidno:64-66和204-209中任何一个的氨基酸序列的fr2;含有选自seqidno:67-69、210-216、441和443中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或含有选自seqidno:70-71、217-220、444和445中任何一个的氨基酸序列的fr4。在一些实施方案中,vh区包含含有seqidno:61的氨基酸序列的fr1、含有seqidno:65的氨基酸序列的fr2、含有seqidno:69的氨基酸序列的fr3、和/或含有seqidno:70的氨基酸的fr4。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列的vh区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的氨基酸序列的vh区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的氨基酸序列的vh区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:115和256中任何一个的氨基酸序列的vh区。
还提供具有与此类序列至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的序列的抗体及其抗原结合片段。例如,本文提供包含vh区的抗体或抗原结合片段,所述vh区包含与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体是单结构域抗体(sdab),所述sdab仅包含vh区序列或其足够的抗原结合部分,例如任何上述vh序列(例如,cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3和/或cdr-h4)。
在一些实施方案中,包含vh区的本文所提供的抗体(例如,抗bcma抗体)或其抗原结合片段进一步包含轻链或其足够的抗原结合部分。例如,在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含vh区和vl区、或vh和vl区的足够的抗原结合部分。在此类实施方案中,vh区序列可以是任何上述vh序列。在一些此类实施方案中,抗体是抗原结合片段,如fab或scfv。在一些此类实施方案中,抗体是还含有恒定区的全长抗体。
在一些实施方案中,抗体(例如,其抗原结合片段)具有轻链可变(vl)区,所述vl区具有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列、或者与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本文所述的抗体(例如,抗bcma抗体)或其抗原结合片段的vl区是包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12(seqidno:358)的轻链互补决定区3(cdr-l3)的vl区,其中x1是a、c、g、h、i、q或s;x2是a、q、s或v;x3是s、w或y;x4是d、f、g、h或y;x5是d、g、m、r、s或t;x6是a、g、h、l、r、s、t或y;x7是l、p、r、s或空;x8是d、g、n、r、s、t或空;x9是a、g、h、l、p或空;x10是f、s或空;x11是l、p、w或y;并且x12是s、t或v。在一些实施方案中,在所述cdr-l3中,x1是h;x2是v;x3是w;x4是d;x5是r;x6是s;x7是r;x8是d;x9是h;x10是空;x11是y;并且x12是v。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有具有根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:55的氨基酸序列的cdr-l3。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区序列,在所述vl区序列中其中所含有的相应cdr-l3序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基l89至l97)被选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的cdr-l3序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:47-49、51、52、55、56、185、189-194、415-418和421中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:47、51、55、194、416和421中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:194和421中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在seqidno:124的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。
在一些实施方案中,本文所述的抗体(例如,抗bcma抗体)或其抗原结合片段的vl区是包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14x15x16x17(seqidno:356)的轻链互补决定区1(cdr-l1)的vl区,其中x1是g、k、r、s或t;x2是a、g或s;x3是g、n、s或t;x4是g、k、n、q、r或s;x5是s或空;x6是d、n、v或空;x7是l、v或空;x8是h、s、y或空;x9是s、t或空;x10是s或空;x11是d、g、i、n、s或空;x12是d、e、g、k、i、n或空;x13是f、g、k、n、r、s、y或空;x14是d、k、n、t或空;x15是a、d、g、l、n、s、t或y;x16是l或v;x17是a、h、n、q或s。在一些实施方案中,x1是g;x2是a;x3是n;x4是n;x5是空;x6是空;x7是空;x8是空;x9是空;x10是空;x11是i;x12是g;x13是s;x14是k;x15是s;x16是v;x17是h。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有具有根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:33的氨基酸序列的cdr-l1。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区序列,在所述vl区序列中其中所含有的相应cdr-l1序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基l24至l34)被选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的cdr-l1序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区含有具有如下氨基酸序列的cdr-l1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26-28、30、31、33、34、174、176-178和380-382中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区含有具有如下氨基酸序列的cdr-l1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26、30、33、178和380中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区含有具有如下氨基酸序列的cdr-l1,所述氨基酸序列包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:33和178中任何一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在seqidno:124的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1。
在一些实施方案中,本文所提供的抗体(例如抗bcma抗体)或其抗原结合片段的vl区是包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7(seqidno:357)的轻链互补决定区2(cdr-l2)的vl区,其中x1是a、d、e、n、s、v或w;x2是a、d、n、s或v;x3是a、d、h、i、n或s;x4是d、k、n、q、r或t;x5是l、r或v;x6是a、e、p或q;并且x7是a、d、s或t。在一些实施方案中,x1是d;x2是d;x3是d;x4是d;x5是r;x6是p;并且x7是s。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有具有根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:43的氨基酸序列的cdr-l2。在任何此类例子中,所提供的抗体或其抗原结合片段可以含有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区序列,在所述vl区序列中其中所含有的相应cdr-l2序列(例如对应于根据kabat编号的氨基酸残基l50至l56)被选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的cdr-l2序列替代。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:37-39、41、43、44、179、181-183和399-401中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:37、39、43、183和400中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:43和183中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在seqidno:124的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有cdr-l1,所述cdr-l1是或包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列;cdr-l2,所述cdr-l2是或包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列;cdr-l3,所述cdr-l3是或包含选自根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含如表2和表4所示的根据kabat编号的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含如表4所示的根据chothia编号的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含如表4所示的根据abm编号的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。
在本文提供的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中,vl区包含选自以下各项的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:27、38和48的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:29、40和50的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:31、41和52的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:32、42和53的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:34、44和56的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:35、45和57的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:36、46和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和184的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和185的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和186的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和187的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和189的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:176、181和190的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:174、179和192的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:178、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:30、399和415的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:381、401和417的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:382、402和418的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:383、403和419的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:384、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:385、180和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:386、404和420的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:387、405和422的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:388、406和423的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:388、407和424的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:389、408和425的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:390、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:391、409和426的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:392、40和427的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:394、39和429的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:395、411和430的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:396、412和431的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:396、412和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:397、413和432的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;分别含有seqidno:398、414和433的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在本文提供的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中,vl区包含含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
例如,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vl区,所述vl区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:seqidno:26、37和47;seqidno:27、38和48;seqidno:28、39和49;seqidno:29、40和50;seqidno:30、39和51;seqidno:31、41和52;seqidno:32、42和53;seqidno:30、39和54;seqidno:33、43和55;seqidno:34、44和56;seqidno:35、45和57;seqidno:36、46和58;seqidno:174、179和184;seqidno:174、179和185;seqidno:174、179和186;seqidno:174、179和187;seqidno:175、180和188;seqidno:174、179和189;seqidno:176、181和190;seqidno:177、182和191;seqidno:174、179和192;seqidno:178、183和193;seqidno:178、183和194;seqidno:30、399和415;seqidno:380、400和416;seqidno:33、43和421;seqidno:381、401和417;seqidno:382、402和418;seqidno:383、403和419;seqidno:384、39和54;seqidno:385、180和58;seqidno:175、180和188;seqidno:386、404和420;seqidno:387、405和422;seqidno:388、406和423;seqidno:388、407和424;seqidno:389、408和425;seqidno:390、183和193;seqidno:391、409和426;seqidno:392、40和427;seqidno:394、39和429;seqidno:395、411和430;seqidno:396、412和431;seqidno:396、412和58;seqidno:397、413和432;seqidno:398、414和433。
在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vl区,所述vl区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26、37和47;seqidno:27、38和48;seqidno:28、39和49;seqidno:30、39和51;seqidno:31、41和52;seqidno:33、43和55;seqidno:34、44和56;seqidno:174、179和185;seqidno:174、179和189;seqidno:176、181和190;seqidno:177、182和191;seqidno:174、179和192;seqidno:178、183和193;seqidno:178、183和194;seqidno:30、399和415;seqidno:380、400和416;seqidno:33、43和421;seqidno:381、401和417;以及seqidno:382、402和418。
在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vl区,所述vl区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:26、37和47;seqidno:30、39和51;seqidno:33、43和55;seqidno:178、183和194;seqidno:380、400和416;以及seqidno:33、43和421。在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段包含vl区,所vl区包含分别含有选自以下各项的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:根据kabat编号、chothia编号或abm编号的seqidno:178、183和194;以及seqidno:33、43和421。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段含有分别在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体含有分别在选自seqidno:124的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含分别在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含分别在选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段的vl区包含分别在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在本文所提供的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中,vl区包含任何如所述的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3并且包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。例如,抗bcma抗体或其抗原结合片段可以包含分别在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3、以及与在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的框架区(例如,fr1、fr2、fr3和/或fr4)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同一性的框架区(例如,fr1、fr2、fr3和/或fr4)。在一些实施方案中,所述vl区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:含有选自seqidno:72-82、221-227、446-459和461-466中任何一个的氨基酸序列的fr1;含有选自seqidno:83-92、228-232、467-477和479-482中任何一个的氨基酸序列的fr2;含有选自seqidno:93-101、233-242、483-495和497-501中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或含有选自seqidno:102-109、243-246,502-506和508中任何一个的氨基酸序列的fr4。在一些实施方案中,vl区包含含有seqidno:79的氨基酸序列的fr1、含有seqidno:89的氨基酸序列的fr2、含有seqidno:98的氨基酸序列的fr3、和/或含有seqidno:108的氨基酸序列的fr4。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有seqidno:124的氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:267和536中任何一个的氨基酸序列的vl区。
还提供具有与此类序列至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的序列的抗体。
在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列并且抗体或片段的vl区包含选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的氨基酸序列并且抗体或片段的vl区包含选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的氨基酸序列并且抗体或片段的vl区包含选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含选自seqidno:115和256中任何一个的氨基酸序列并且抗体或片段的vl区包含选自seqidno:267和536中任何一个的氨基酸序列。
还提供具有与此类序列至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的序列的抗体及其抗原结合片段。例如,本文提供含有vl区的抗体或抗原结合片段,所述vl区包含与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列和/或包含与选自eqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段含有包含选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列的vl区和包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列的vh区。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;并且抗体或其抗原结合片段的vl区包含cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3分别包含分别在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列,并且抗体或片段的vl区包含cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3分别包含分别在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列,并且抗体或片段的vl区包含cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3分别包含分别在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、112、115、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列,并且抗体或片段的vl区包含cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3分别包含分别在选自seqidno:116、120、124、267、535和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中,抗体或片段的vh区包含cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3分别包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列,并且抗体或片段的vl区包含cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3分别包含分别在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh序列具有至少90%序列同一性的vh;以及与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl序列具有至少90%序列同一性的vl。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含与选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh序列具有至少90%序列同一性的vh;以及与选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的vl序列具有至少90%序列同一性的vl。在一些实施方案中,所述抗体或抗原结合片段包含与seqidno:115的vh序列具有至少90%序列同一性的vh;以及与seqidno:536的vl序列具有至少90%序列同一性的vl。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh,其中:cdr-h1包含选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的序列;cdr-h2包含选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的序列;并且cdr-h3包含选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的序列;以及含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl,其中:cdr-l1包含选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的序列;cdr-l2包含选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的序列;并且cdr-l3包含选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的序列。
在一些实施方案中,cdr-h1包含选自seqidno:1和2中任何一个的序列;cdr-h2包含选自seqidno:4和5中任何一个的序列;并且cdr-h3包含选自seqidno:7和157中任何一个的序列;并且cdr-l1包含选自seqidno:26、30、178和380中任何一个的序列;cdr-l2包含选自seqidno:37、39、183或400中任何一个的序列;并且cdr-l3包含选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的序列。在一些实施方案中,cdr-h1包含seqidno:2的序列;cdr-h2包含seqidno:5的序列;并且cdr-h3包含seqidno:10的序列;并且cdr-l1包含seqidno:33的序列;cdr-l2包含seqidno:43的序列;并且cdr-l3包含seqidno:421的序列。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含vh和vl,其中:vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:26、37和47的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和8的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:27、38和48的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:28、39和49的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:29、40和50的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:30、39和51的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:31、41和52的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:32、42和53的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:30、39和54的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和9的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:33、43和55的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:34、44和56的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和11的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:35、45和57的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:36、46和58的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:140、145和149的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和184的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:141、145和149的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和185的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:141、145和150的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和186的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:142、146和151的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和187的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和152的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:175、180和188的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:143、147和153的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和189的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:144、148和154的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:176、181和190的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和155的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:177、182和191的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和156的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:174、179和192的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和157的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:178、183和193的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和157的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:178、183和194的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、6和376的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:30、399和415的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:380、400和416的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:33、43和421的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和155的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:177、182和191的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、372和376的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:381、401和417的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和376的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:382、402和418的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和377的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:383、403和419的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:384、39和54的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:385、180和58的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、373和152的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:175、180和188的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和11的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:386、404和420的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和378的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:33、43和421的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和9的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:387、405和422的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和9的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:388、406和423的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和9的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:388、407和424的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:3、6和376的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:389、408和425的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和157的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:390、183和193的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、374和9的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:391、409和426的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:392、40和427的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:394、39和429的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:395、411和430的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:28、39和49的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:396、412和431的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:396、412和58的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:397、413和432的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:398、414和433的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些实施方案中,vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:26、37和47的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:30、39和51的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh包含分别含有seqidno:2、5和157的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:178、183和194的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或vh包含分别含有seqidno:1、4和7的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:380、400和416的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中,vh包含分别含有seqidno:2、5和10的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl包含分别含有seqidno:33、43和421的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh序列内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的序列;和/或cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl序列内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的序列。
在一些实施方案中,cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh序列内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的序列;并且cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的vl序列内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的序列。
在一些实施方案中,cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含seqidno:115内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的序列;并且cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含seqidno:536内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的序列。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含vh和vl,其中:分别地,vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:116内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:111内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:117内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:118内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:119内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:120内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:121内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:122内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:123内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:112内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:124内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:113内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:125内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:114内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:126内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:115内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:127内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:247内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:257内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:248内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:258内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:249内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:259内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:250内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:260内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:251内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:261内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:252内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:262内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:253内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:263内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:254内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:264内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:255内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:265内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:256内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:266内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:256内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:267内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:518内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:534内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:519内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:535内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:115内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:536内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:520内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:264内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:521内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:537内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:522内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:538内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:523内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:539内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:519内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:540内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:524内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:541内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:525内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:261内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:526内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:542内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:527内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:543内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:528内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:544内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:529内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:545内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:528内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:546内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:522内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:547内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:256内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:548内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:530内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:549内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:531内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:550内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:519内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:552内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:553内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:118内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:533内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:554内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:115内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:555内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:524内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:556内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或vh是或包含seqidno:519内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:557内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些实施方案中,vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:116内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:110内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:120内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;vh是或包含seqidno:256内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:267内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或vh是或包含seqidno:519内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:535内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;在一些实施方案中,分别地,vh是或包含seqidno:115内的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3,并且vl是或包含seqidno:536内的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:111和117的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和119的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和121的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和122的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和123的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:112和124的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:113和125的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:114和126的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和127的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:247和257的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:248和258的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:249和259的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:250和260的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:251和261的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:252和262的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:253和263的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:254和264的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:255和265的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和266的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:518和534的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:520和264的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:521和537的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:522和538的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:523和539的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和540的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:524和541的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:525和261的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:526和542的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:527和543的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:528和544的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:529和545的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:528和546的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:522和547的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和548的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:530和549的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:531和550的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和552的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和553的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:533和554的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和555的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:524和556的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和557的氨基酸序列;或任何抗体或其抗原结合片段与任何上述vh和vl具有至少90%序列同一性,例如与其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含:含有分别与seqidno:110和116具有至少90%同一性的序列的vh和vl区;含有分别与seqidno:110和120具有至少90%同一性的序列的vh和vl区;含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的序列的vh和vl区;或含有分别与seqidno:519和535具有至少90%同一性的序列的vh和vl区。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的序列的vh和vl区。
例如,本文提供的抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含选自以下各项的氨基酸序列:seqidno:110和116;seqidno:111和117;seqidno:110和118;seqidno:110和119;seqidno:110和120;seqidno:110和121;seqidno:110和122;seqidno:110和123;seqidno:112和124;seqidno:113和125;seqidno:114和126;seqidno:115和127;seqidno:247和257;seqidno:248和258;seqidno:249和259;seqidno:250和260;seqidno:251和261;seqidno:252和262;seqidno:253和263;seqidno:254和264;seqidno:255和265;seqidno:256和266;seqidno:256和267;seqidno:518和534;seqidno:519和535;seqidno:115和536;seqidno:520和264;seqidno:521和537;seqidno:522和538;seqidno:523和539;seqidno:519和540;seqidno:524和541;seqidno:525和261;seqidno:526和542;seqidno:527和543;seqidno:528和544;seqidno:529和545;seqidno:528和546;seqidno:522和547;seqidno:256和548;seqidno:530和549;seqidno:531和550;seqidno:519和552;seqidno:110和553;seqidno:110和118;seqidno:533和554;seqidno:115和555;seqidno:524和556;seqidno:519和557。
在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含选自以下各项的氨基酸序列:seqidno:110和116;seqidno:111和117;seqidno:110和118;seqidno:110和120;seqidno:110和121;seqidno:112和124;seqidno:113和125;seqidno:248和258;seqidno:252和262;seqidno:253和263;seqidno:254和264;seqidno:255和265;seqidno:256和266;seqidno:256和267;seqidno:518和534;seqidno:519和535;seqidno:115和536;seqidno:520和264;seqidno:521和537;以及seqidno:522和538。在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含选自以下各项的氨基酸序列:seqidno:110和116;seqidno:110和120;seqidno:112和124;seqidno:256和267;seqidno:519和535;以及seqidno:115和536。在一些实施方案中,本文提供的抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含选自以下各项的氨基酸序列:seqidno:256和267;以及seqidno:115和536。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和116的序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和120的序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和267的序列;或抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和535的序列。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和536的序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段以任何顺序或取向包含一个或多个重链可变(vh)区和一个或多个轻链可变(vl)区。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含vh区和vl区,并且vh区位于vl区的氨基末端。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含vh区和vl区,并且vh区位于vl区的羧基末端。在一些实施方案中,将一个或多个vh区和一个或多个vl区直接连接或任选地通过接头间接连接。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段(例如scfv)可以包含vh区或其部分,接着是接头,接着是vl区或其部分。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段(例如scfv)可以包含vl区或其部分,接着是接头,接着是vh区或其部分。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段是单链抗体片段,例如单链可变片段(scfv)或双抗体或单结构域抗体(sdab)。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段是仅包含vh区的单结构域抗体。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段是包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区的scfv。在一些实施方案中,单链抗体片段(例如scfv)包含连接两个抗体结构域或区域(如重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头,例如柔性和/或可溶性肽接头。接头包括富含甘氨酸和丝氨酸和/或在一些情况下苏氨酸的那些接头。在一些实施方案中,接头进一步包括带电荷的残基(如赖氨酸和/或谷氨酸),其可以改善溶解性。在一些实施方案中,接头进一步包括一个或多个脯氨酸。
因此,所提供的抗bcma抗体包括单链抗体片段,如scfv和双抗体,特别是人单链抗体片段,通常包含连接两个抗体结构域或区域(如vh和vl区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头,例如柔性和/或可溶性肽接头,例如富含甘氨酸和丝氨酸的一种肽接头。
在一些方面,富含甘氨酸和丝氨酸(和/或苏氨酸)的接头包括至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的此类氨基酸。在一些实施方案中,它们包括至少为或约50%、55%、60%、70%或75%的甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸。在一些实施方案中,接头基本上完全由甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸组成。接头的长度通常在约5个与约50个氨基酸之间,通常在为或约10个与为或约30个之间,例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个,并且在一些例子中长度在10个与25个氨基酸之间。示例性接头包括具有各种数量的序列ggggs(4gs;seqidno:359)或gggs(3gs;seqidno:360)的重复的接头,例如在这样的序列的2个、3个、4个和5个重复之间。示例性接头包括具有seqidno:361(ggggsggggsggggs)所示序列或由其组成的那些接头。示例性接头进一步包括具有seqidno:362(gstsgsgkpgsgegstkg)所示序列或由其组成的那些接头。
因此,在一些实施方案中,所提供的实施方案包括单链抗体片段(例如scfv),其包含一个或多个上述接头,例如富含甘氨酸/丝氨酸的接头(包括具有gggs或ggggs的重复的接头,例如seqidno:361所示的接头)。在一些实施方案中,接头具有含有seqidno:361所示序列的氨基酸序列。
在一些方面中,本文所提供的scfv包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列,或者具有与选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列具有至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
例如,本文所提供的scfv包含选自seqidno:128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、578、579、580、581、582和583中任何一个的氨基酸序列,或者具有与选自seqidno:128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、578、579、580、581、582和583中任何一个的氨基酸序列具有至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,本文所提供的scfv包含选自seqidno:128、129、130、132、133、136、137、269、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562和563中任何一个的氨基酸序列,或者具有与选自seqidno:128、129、130、132、133、136、137、269、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562和563中任何一个的氨基酸序列具有至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中,本文所提供的scfv包含选自seqidno:128、132、136、278、559和560中任何一个的氨基酸序列,或者具有与选自seqidno:128、132、136、278、559和560中任何一个的氨基酸序列具有至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中,本文所提供的scfv包含选自seqidno:278和560中任何一个的氨基酸序列,或者具有与选自seqidno:278和560中任何一个的氨基酸序列具有至少为或至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中,scfv包含选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的序列,或者与选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的序列具有至少90%序列同一性的序列。在一些实施方案中,scfv包含seqidno:560的序列或与seqidno:560的序列具有至少90%序列同一性的序列。
表2提供本文所提供的示例性抗体或抗原结合片段及其区域或结构域的seqidno:。在一些实施方案中,bcma结合抗体或其片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3序列的vh区和含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3序列的vl区,如下表2的每一行中列出的seqidno:所示(根据kabat编号)。在一些实施方案中,bcma结合抗体或其片段包含下表2的每一行中列出的seqidno:所示的vh区序列和vl区序列、或者包含与下表2的每一行中列出的seqidno:所示的vh区序列和vl区序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的vh和vl区氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中,bcma结合抗体或其片段包含下表2的每一行中列出的seqidno:所示的vh区序列和vl区序列。在一些实施方案中,bcma结合抗体或其片段包含下表2的每一行中列出的seqidno:所示的scfv序列、或者包含与下表2的每一行中列出的seqidno:所示的scfv序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的scfv氨基酸序列的抗体。
所提供的抗体(例如抗原结合片段)包括人抗体。在所提供的人抗bcma抗体(例如,抗原结合片段)的一些实施方案中,人抗体含有vh区,所述vh区包含与由种系核苷酸人重链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分、与由种系核苷酸人重链d区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分、和/或与由种系核苷酸人重链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分;和/或含有vl区,所述vl区包含与由种系核苷酸人κ或λ链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分、和/或与由种系核苷酸人κ或λ链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分。在一些实施方案中,vh区的所述部分对应于cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3。在一些实施方案中,vh区的所述部分对应于框架区1(fr1)、fr2、fr2和/或fr4。在一些实施方案中,vl区的所述部分对应于cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。在一些实施方案中,vl区的所述部分对应于fr1、fr2、fr2和/或fr4。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-h1,所述cdr-h1与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的相应cdr-h1区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-h1,所述序列与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的相应cdr-h1区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-h2,所述cdr-h2与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的相应cdr-h2区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-h2,所述序列与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的相应cdr-h2区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-h3,所述cdr-h3与由种系核苷酸人重链v区段、d区段和j区段编码的序列内的相应cdr-h3区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-h3,所述序列与由种系核苷酸人重链v区段、d区段和j区段编码的序列内的相应cdr-h3区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-l1,所述cdr-l1与由种系核苷酸人轻链v区段编码的序列内的相应cdr-l1区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-l1,所述序列与由种系核苷酸人轻链v区段编码的序列内的相应cdr-l1区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-l2,所述cdr-l2与由种系核苷酸人轻链v区段编码的序列内的相应cdr-l2区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-l2,所述序列与由种系核苷酸人轻链v区段编码的序列内的相应cdr-l2区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段含有cdr-l3,所述cdr-l3与由种系核苷酸人轻链v区段和j区段编码的序列内的相应cdr-l3区的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些实施方案中,人抗体含有具有如下序列的cdr-l3,所述序列与由种系核苷酸人轻链v区段和j区段编码的序列内的相应cdr-l3区相比为100%相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中,人抗体或其抗原结合片段包含含有人种系基因区段序列的框架区。例如,在一些实施方案中,人抗体含有vh区,其中框架区(例如fr1、fr2、fr3和fr4)与由人种系抗体区段(如v区段和/或j区段)编码的框架区具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。在一些实施方案中,人抗体含有vl区,其中框架区(例如fr1、fr2、fr3和fr4)与由人种系抗体区段(如v区段和/或j区段)编码的框架区具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。例如,在一些此类实施方案中,vh区和/或vl区内含有的框架区序列与由人种系抗体区段编码的框架区序列相比相差不多于10个氨基酸,例如不多于9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。
抗体或其抗原结合片段可以含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分,如一个或多个恒定区结构域。在一些实施方案中,恒定区包括轻链恒定区和/或重链恒定区1(ch1)。在一些实施方案中,抗体包括ch2和/或ch3结构域,如fc区。在一些实施方案中,fc区是人igg(如igg1或igg4)的fc区。
还提供编码抗体和/或其部分(例如链)的核酸,例如多核苷酸。所提供的核酸包括编码本文所述的抗bcma抗体(例如抗原结合片段)的那些。还提供编码一种或多种抗体和/或其部分的核酸(例如多核苷酸),例如编码本文所述的抗bcma抗体(例如抗原结合片段)和/或其他抗体和/或其部分(例如,结合其他靶抗原的抗体和/或其部分)中的一种或多种的那些核酸。核酸可以包括包含天然和/或非天然存在的核苷酸和碱基的那些,例如包括具有骨架修饰的那些。术语“核酸分子”、“核酸”和“多核苷酸”可以互换使用,并且是指核苷酸的聚合物。核苷酸的此类聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸,并且包括但不限于dna、rna和pna。“核酸序列”是指构成核酸分子或多核苷酸的核苷酸的线性序列。
还提供例如用于产生抗体或其抗原结合片段的含有核酸(例如多核苷酸)的载体以及含有所述载体的宿主细胞。还提供用于产生抗体或其抗原结合片段的方法。核酸可以编码包含抗体的vl区的氨基酸序列和/或包含抗体的vh区的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。核酸可以编码包含抗体的vl区的一个或多个氨基酸序列和/或包含抗体的vh区的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中,核酸(例如多核苷酸)以任何顺序或取向编码抗体的一个或多个vh区和/或一个或多个vl区。在一些实施方案中,核酸(例如多核苷酸)编码vh区和vl区,并且vh区的编码序列在vl区编码序列的上游。在一些实施方案中,核酸(例如多核苷酸)编码vh区和vl区,并且vl区的编码序列在vh区编码序列的上游。
在进一步的实施方案中,提供包含此类核酸的一种或多种载体(例如,表达载体)。在进一步的实施方案中,提供包含此类核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中,宿主细胞包含载体(例如,已经用载体转化),所述载体包含编码含有抗体的vh区的氨基酸序列的核酸。在另一个这样的实施方案中,宿主细胞包含(例如,已经用以下各项转化):(1)含有编码包含抗体的vl区的氨基酸序列和包含抗体的vh区的氨基酸序列的核酸的载体,或(2)含有编码包含抗体的vl区的氨基酸序列的核酸的第一载体和含有编码包含抗体的vh区的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中,宿主细胞包含(例如,已经用以下项转化)一种或多种载体,所述一种或多种载体包含编码一种或多种氨基酸序列的一种或多种核酸,所述一种或多种氨基酸序列包含一种或多种抗体和/或其部分(例如其抗原结合片段)。在一些实施方案中,提供一种或多种此类宿主细胞。在一些实施方案中,提供含有一种或多种此类宿主细胞的组合物。在一些实施方案中,所述一种或多种宿主细胞可以表达不同的抗体或相同的抗体。在一些实施方案中,每种宿主细胞可以表达多于一种抗体。
还提供制备抗bcma抗体(包括抗原结合片段)的方法。为了重组产生抗bcma抗体,可以将编码例如如上所述的抗体的核酸序列或多核苷酸分离并插入一种或多种载体中,以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。使用常规程序(例如,通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性地结合的寡核苷酸探针)可以容易地分离和测序此类核酸序列。在一些实施方案中,提供制备抗bcma抗体的方法,其中所述方法包括在适用于表达抗体的条件下培养包含编码如以上所提供的抗体的核酸序列的宿主细胞,以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收所述抗体。
除原核生物之外,真核微生物(如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的合适的克隆或表达宿主,包括其糖基化途径已经被修饰为模拟或接近人细胞中的那些糖基化途径从而产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。参见gerngross,nat.biotech.22:1409-1414(2004)和li等人,nat.biotech.24:210-215(2006)。
可用于表达多肽的示例性真核细胞包括但不限于cos细胞,包括cos7细胞;293细胞,包括293-6e细胞;cho细胞,包括cho-s、dg44.lec13cho细胞和fut8cho细胞;
在一些实施方案中,本文所提供的抗体或抗原结合片段是在无细胞系统中产生的。示例性无细胞系统描述于例如sitaraman等人,methodsmol.biol.498:229-44(2009);spirin,trendsbiotechnol.22:538-45(2004);endo等人,biotechnol.adv.21:695-713(2003)中。
所提供的实施方案进一步包括用于表达和产生抗体和其他抗原结合蛋白的载体和宿主细胞以及其他表达系统(包括真核和原核宿主细胞(包括细菌、丝状真菌和酵母)以及哺乳动物细胞(如人细胞))以及无细胞表达系统。
b.示例性特征
在一些方面,所提供的抗体或其抗原结合片段具有一个或多个指定的功能特征,如结合特性,包括与特定表位的结合。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段特异性地结合bcma蛋白。在本文提供的一些实施方案中,bcma蛋白是指人bcma、小鼠bcma蛋白或非人灵长类(例如食蟹猴)bcma蛋白。在本文的任何实施方案的一些实施方案中,bcma蛋白是指人bcma蛋白。抗体或其他结合分子与bcma蛋白结合或与bcma蛋白特异性地结合的观察结果并不一定意味着其与每种物种的bcma蛋白结合。例如,在一些实施方案中,与bcma蛋白结合的特征(例如与其特异性地结合和/或在某种程度上以特定亲和力结合的能力)在一些实施方案中是指对于人bcma蛋白的能力,并且抗体对于另一物种(如小鼠)的bcma蛋白可能不具有此功能。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段与哺乳动物bcma蛋白(包括与天然存在的bcma变体,如某些剪接变体或等位基因变体)结合。
在一些实施方案中,抗体与人bcma蛋白(例如与人bcma蛋白的表位或区域,例如包含seqidno:367(genbank号bab60895.1)或seqidno:368(ncbi号np_001183.2)的氨基酸序列的人bcma蛋白或其等位基因变体或剪接变体)特异性地结合。在一个实施方案中,人bcma蛋白是由转录物变体编码或是具有seqidno:369所示氨基酸序列的同种型。在一些实施方案中,抗体与食蟹猴bcma蛋白(如seqidno:371(genbank号ehh60172.1)所示食蟹猴bcma蛋白)结合。在一些实施方案中,抗体与人bcma结合,但与食蟹猴bcma蛋白(例如seqidno:371(genbank号ehh60172.1)所示的食蟹猴bcma蛋白)不结合或以较低水平或程度或亲和力结合。在一些实施方案中,抗体与小鼠bcma蛋白(例如seqidno:370(ncbi号np_035738.1)所示的小鼠bcma蛋白)不结合或以较低水平或程度或亲和力结合。在一些实施方案中,抗体与小鼠bcma蛋白(例如seqidno:370(ncbi号np_035738.1)所示的小鼠bcma蛋白)结合。在一些实施方案中,抗体与小鼠bcma蛋白结合的亲和力低于其与人bcm蛋白和/或食蟹猴bcma蛋白的结合。在一些实施方案中,抗体与小鼠bcma蛋白和/或食蟹猴bcma蛋白结合的亲和力低于其与人bcm蛋白的结合。在一些实施方案中,抗体与小鼠bcma蛋白和/或食蟹猴bcma蛋白结合的结合亲和力类似于其与人bcma蛋白的结合。
在一个实施方案中,抗bcma抗体与不相关的非bcma蛋白(如非人bcma蛋白或其他非bcma蛋白)的结合程度为抗体与人bcma蛋白的结合的小于或小于约10%,如例如通过放射免疫测定(ria)所测量。在一些实施方案中,所提供的抗体包括这样的抗体,其与小鼠bcma蛋白的结合为抗体与人bcma蛋白的结合的小于或等于或约10%。在一些实施方案中,所提供的抗体包括这样的抗体,其与食蟹猴bcma蛋白的结合为抗体与人bcma蛋白的结合的小于或等于或约10%。在一些实施方案中,所提供的抗体包括这样的抗体,其与食蟹猴bcma蛋白和/或小鼠bcma蛋白的结合类似于或约等于抗体与人bcma蛋白的结合。
在一些实施方案中,抗体与bcma蛋白(例如人bcma、小鼠bcma蛋白或非人灵长类动物(例如食蟹猴)bcma蛋白)特异性地结合和/或在某种程度上以特定亲和力结合。
在一些实施方案中,所提供的抗体能够以至少一定的亲和力结合bcma蛋白(如人bcma蛋白),如通过多种已知方法中的任一种所测量。在一些实施方案中,亲和力由平衡解离常数(kd)表示;在一些实施方案中,亲和力由ec50表示。
已知多种用于评估结合亲和力和/或确定结合分子(例如,抗体或其片段)是否与特定配体(例如,抗体,如bcma蛋白)特异性地结合的测定。例如通过使用本领域熟知的许多结合测定中的任何一种确定结合分子(例如,抗体)对抗原(例如,bcma,如人bcma或食蟹猴bcma或小鼠bcma)的结合亲和力在熟练技术人员的水平内。例如,在一些实施方案中,使用表面等离子体(spr)分析,可以将
spr测量当分子与表面结合或从表面解离时分子在传感器表面上的浓度变化。spr信号的变化与表面附近的质量浓度变化成正比,从而允许测量两个分子之间的结合动力学。可以通过监测当缓冲液通过芯片时折射率相对于时间的变化来确定复合物的解离常数。用于测量一种蛋白质与另一种蛋白质的结合的其他合适的测定包括例如免疫测定(如酶联免疫吸附测定(elisa)和放射免疫测定(ria))或通过借助荧光、紫外吸收、圆二色性或核磁共振(nmr)监测蛋白质的光谱或光学性质的变化来确定结合。其他示例性测定包括但不限于western印迹、elisa、分析型超速离心、光谱学、流式细胞术、测序和用于检测表达的核酸或蛋白质结合的其他方法。
在一些实施方案中,结合分子(例如抗体或其片段)与抗原(例如,bcma蛋白或其中的表位)结合(例如特异性地结合),其中亲和力或ka(即,特定结合相互作用的平衡缔合常数,单位为1/m;等于对于此缔合反应的缔合速率[kon或ka]与解离速率[koff或kd]的比率,假定双分子相互作用)等于或大于105m-1。在一些实施方案中,抗体或其片段对肽表位展现出结合亲和力,其中kd(即,特定结合相互作用的平衡解离常数,单位为m;等于对于此缔合反应的解离速率[koff或kd]与缔合速率[kon或ka]的比率,假定双分子相互作用)等于或小于10-5m。例如,平衡解离常数kd的范围为10-5m至10-13m,例如10-7m至10-11m、10-8m至10-10m或10-9m至10-10m。可以使用本领域已知的任何测定方法(例如,表面等离子体共振(spr))来确定缔合速率(缔合速率常数;kon或ka;单位为1/ms)和解离速率(解离速率常数;koff或kd;单位为1/s)。
在一些实施方案中,抗体(例如抗原结合片段)与bcma蛋白(如人bcma蛋白)的结合亲和力(ec50)和/或解离常数为从或从约0.01nm至约500nm、从或从约0.01nm至约400nm、从或从约0.01nm至约100nm、从或从约0.01nm至约50nm、从或从约0.01nm至约10nm、从或从约0.01nm至约1nm、从或从约0.01nm至约0.1nm,为从或从约0.1nm至约500nm、从或从约0.1nm至约400nm、从或从约0.1nm至约100nm、从或从约0.1nm至约50nm、从或从约0.1nm至约10nm、从或从约0.1nm至约1nm、从或从约0.5nm至约200nm、从或从约1nm至约500nm、从或从约1nm至约100nm、从或从约1nm至约50nm、从或从约1nm至约10nm、从或从约2nm至约50nm、从或从约10nm至约500nm、从或从约10nm至约100nm、从或从约10nm至约50nm、从或从约50nm至约500nm、从或从约50nm至约100nm、或者从或从约100nm至约500nm。在某些实施方案中,抗体与bcma蛋白(如人bcma蛋白)的结合亲和力(ec50)和/或平衡解离常数kd为等于或小于或约400nm、300nm、200nm、100nm、50nm、40nm、30nm、25nm、20nm、19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm、10nm、9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、或1nm或更小。在一些实施方案中,抗体以次纳摩尔的结合亲和力,例如以小于约1nm(例如小于约0.9nm、约0.8nm、约0.7nm、约0.6nm、约0.5nm、约0.4nm、约0.3nm、约0.2nm、或约0.1nm或更小)的结合亲和力与bcma蛋白(如人bcma蛋白)结合。
在一些实施方案中,可以将结合亲和力分类为高亲和力或低亲和力。在一些情况下,展现出低至中等亲和力结合的结合分子(例如抗体或其片段)展现出高达107m-1、高达106m-1、高达105m-1的ka。在一些情况下,展现出与特定表位的高亲和力结合的结合分子(例如抗体或其片段)与这种表位以至少107m-1、至少108m-1、至少109m-1、至少1010m-1、至少1011m-1、至少1012m-1或至少1013m-1的ka相互作用。在一些实施方案中,结合分子(例如,抗bcma抗体或其片段)与bcma蛋白的结合亲和力(ec50)和/或平衡解离常数kd为从或从约0.01nm至约1μm、0.1nm至1μm、1nm至1μm、1nm至500nm、1nm至100nm、1nm至50nm、1nm至10nm、10nm至500nm、10nm至100nm、10nm至50nm、50nm至500nm、50nm至100nm、或100nm至500nm。在某些实施方案中,结合分子(例如抗bcma抗体或其片段)与bcma蛋白的结合亲和力(ec50)和/或平衡解离常数的解离常数kd为或为约或者小于或小于约1μm、500nm、100nm、50nm、40nm、30nm、25nm、20nm、19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm、10nm、9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、或1nm或更小。
在一些实施方案中,可以比较结合分子(如抗bcma抗体)对不同抗原(例如来自不同物种的bcma蛋白)的结合亲和力以确定物种交叉反应性。例如,可以将物种交叉反应性分类为高交叉反应性或低交叉反应性。在一些实施方案中,可以比较对于不同抗原(例如来自不同物种(如人、食蟹猴或小鼠)的bcma蛋白)的平衡解离常数kd以确定物种交叉反应性。在一些实施方案中,抗bcma抗体的物种交叉反应性可以是高的,例如,抗bcma抗体与人bcma和物种变体bcma以相似的程度结合,例如,对于人bcma的kd与对于物种变体bcma的kd之比为或为约1。在一些实施方案中,抗bcma抗体的物种交叉反应性可以是低的,例如,抗bcma抗体对人bcma具有高亲和力,但对物种变体bcma具有低亲和力,反之亦然。例如,对于物种变体bcma的kd与对于人bcma的kd之比为大于10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000或更大,并且抗bcma抗体具有低物种交叉反应性。可以将物种交叉反应性的程度与已知抗体的物种交叉反应性进行比较。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma蛋白和非人bcma蛋白或其他非bcma蛋白以相似的程度结合。例如,在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma蛋白(例如包含seqidno:367(genbank号bab60895.1)或seqidno:368(ncbi号np_001183.2)的氨基酸序列的人bcma蛋白或其等位基因变体或剪接变体)以平衡解离常数(kd)结合,并且与非人bcma(如食蟹猴bcma,例如seqidno:371(genbank号ehh60172.1)所示的食蟹猴bcma蛋白)以相似的、或约相等的、或小于2倍差异或小于5倍差异的kd结合。
例如,在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma以约或小于或小于约1μm、500nm、100nm、50nm、40nm、30nm、25nm、20nm、19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm、10nm、9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、或1nm或更小的kd结合,并且与食蟹猴bcma以约或小于或小于约1μm、500nm、100nm、50nm、40nm、30nm、25nm、20nm、19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm、10nm、9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、或1nm或更小的kd结合。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与小鼠bcma蛋白以约或小于或小于约1μm、500nm、100nm、50nm、40nm、30nm、25nm、20nm、19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm、10nm、9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、或1nm或更小的kd结合。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma、食蟹猴bcma和小鼠bcma以高亲和力结合。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma和食蟹猴bcma以高亲和力结合,并且与小鼠bcma以低亲和力结合。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与人bcma和来自其他物种的bcma或bcma蛋白的其他变体以高亲和力结合。
在一些实施方案中,将如使用特定的表面等离子体共振(spr)条件所测量的总结合容量(rmax)用于确定所提供的抗体或其抗原结合片段与抗原(例如,bcma蛋白,如人bcma蛋白)的结合能力或容量。对于spr分析,“配体”是在传感器表面上的固定化靶分子(例如bcma蛋白),并且“分析物”是用于与“配体”结合的测试分子(例如抗体)。例如,“分析物”可以是与bcma蛋白结合的任何所提供的抗体或其抗原结合片段。对于spr中的特定配体和分析物对,可以针对特定条件在假定1:1结合化学计量模型的情况下确定rmax。在一些实施方案中,可以使用下式来确定结合容量(rmax):rmax(ru)=(分析物分子量)/(配体分子量)×固定化配体水平(ru)。在spr条件的特定方面,在任何所提供的抗体或其抗原结合片段与bcma蛋白(如人bcma或食蟹猴bcma)之间的结合的rmax为至少或至少约50个共振单位(ru),如约25ru、20ru、15ru、10ru、5ru或1ru。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段(如人抗体)与bcma蛋白的特定表位或区域(如例通常是细胞外表位或区域)特异性地结合。bcma蛋白是含有细胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域的184个氨基酸的iii型膜蛋白。关于seqidno:367所示的人bcma氨基酸序列,细胞外结构域对应于氨基酸1-54,氨基酸55-77对应于跨膜结构域,并且氨基酸78-184对应于胞质结构域。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段结合(例如特异性地结合)和/或识别bcma(例如人bcma)中的一个或多个表位。在一些实施方案中,表位是存在于bcma(例如人bcma)的细胞外结构域上的表位。在一些实施方案中,表位包括肽表位。在一些实施方案中,表位包括线性表位和/或构象表位或其组合。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段(例如本文所提供的抗bcma抗体或其抗原结合片段)结合或识别的在bcma上的一个或多个表位包括构象表位(例如,包括来自bcma的若干个肽段(peptidestretch)的表位)。在一些实施方案中,本文所提供的抗bcma抗体或其抗原结合片段结合或识别21cipcqlr27(seqidno:375所示)、30sntppltcqr39(seqidno:379所示)和44svtnsvk50(seqidno:393所示)中的一个或组合。在一些实施方案中,所述表位包含30sntppltcqr39(seqidno:379)和/或44svtnsvk50(seqidno:393)。在一些实施方案中,本文提供的抗bcma抗体或其抗原结合片段结合或识别30sntppltcqr39(seqidno:379所示)。在一些实施方案中,本文提供的抗bcma抗体或其抗原结合片段结合或识别8csqneyf14(seqidno:410所示)和17llhacipcqlr27(seqidno:428所示)中的一个或组合。在一些实施方案中,所述表位包含17llhacipcqlr27(seqidno:428)。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段与选自21cipcqlr27(seqidno:375)、30sntppltcqr39(seqidno:379)和44svtnsvk50(seqidno:393)中的一个或多个人bcma蛋白表位结合,但不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:496、507和/或513的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:517、532和/或551的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3;或者务必包括含有vh区和/或vl区的抗体或其抗原结合片段,所述vh区含有seqidno:577所示的氨基酸序列或与seqidno:577所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列,所述vl区含有seqidno:587所示的氨基酸序列或与seqidno:587所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段与选自8csqneyf14(seqidno:410)和17llhacipcqlr27(seqidno:428)中的一个或多个人bcma蛋白表位结合,但不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:496、507和/或513的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:517、532和/或551的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3;或者务必包括含有vh区和/或vl区的抗体或其抗原结合片段,所述vh区含有seqidno:577所示的氨基酸序列或与seqidno:577所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列,所述vl区含有seqidno:587所示的氨基酸序列或与seqidno:587所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:496、507和/或513的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:517、532和/或551的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3;或者务必包括含有vh区和/或vl区的抗体或其抗原结合片段,所述vh区含有seqidno:577所示的氨基酸序列或与seqidno:577所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列,所述vl区含有seqidno:587所示的氨基酸序列或与seqidno:587所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:588、589和/或590的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:591、592和/或593的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3;或者务必包括含有vh区和/或vl区的抗体或其抗原结合片段,所述vh区含有seqidno:594所示的氨基酸序列或与seqidno:577所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列,所述vl区含有seqidno:595所示的氨基酸序列或与seqidno:587所示的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段与包含30sntppltcqr39(seqidno:379)和/或44svtnsvk50(seqidno:393)的人bcma蛋白表位结合。例如,在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段包含含有选自seqidno:7和157中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)、或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h3、和/或含有选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)、或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段进一步包含含有选自seqidno:1和2中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1、和/或含有选自seqidno:26、30、178和380中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1;含有选自seqidno:4或5中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h2、和/或含有选自seqidno:37、39、183或400中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l2。例如,在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl区,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;或者抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列或与seqidno:519和535的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段与包含17llhacipcqlr27(seqidno:428)的人bcma蛋白表位结合。例如,在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含含有seqidno:10的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)、或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h3、和/或含有seqidno:421的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)、或在seqidno:536的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l3。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段进一步包含:含有seqidno:2的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1、和/或含有选自seqidno:33中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、或在选自seqidno:536中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1;和/或含有seqidno:5的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1、和/或含有选自seqidno:43中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、或在选自seqidno:536中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1。在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl区,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在seqidno:536的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段的vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列或与seqidno:115和536的氨基酸序列分别具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中,所提供的抗体(例如,抗原结合片段)的特性或特征是相对于针对另一种抗体(例如参考抗体)观察到的特性描述的。在一些实施方案中,参考抗体是非人抗bcma抗体,例如鼠或嵌合或人源化抗bcma抗体。在一些方面,参考抗体是名称为c11d5.3或a7d12.2的鼠抗体(参见例如,国际pct公开号wo2010/104949)、和/或由其衍生的片段(如其scfv片段)、和/或含有这样的抗体的vh和vl区和/或这样的抗体的重链和轻链cdr的抗体。已证明含有c11d5.3的抗原结合scfv片段的嵌合抗原受体(car)在car疗法中有效地促进抗肿瘤反应(carpenter等人,clincancerres.,2013,19(8):2048-2060)。
例如,在一些实施方案中,参考抗体具有含有seqidno:324所示氨基酸序列的vh区,或包含这样的序列内的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或具有含有seqidno:326所示氨基酸序列的vl区,或包含这样的序列内的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。例如,参考抗体可以是如下抗体,所述抗体含有dysin(seqidno:288)的cdr-h1序列、wintetrepayaydfrg(seqidno:290)的cdr-h2序列、dysyamdy(seqidno:292)的cdr-h3序列、rasesvtilgshlih(seqidno:302)的cdr-l1序列、lasnvqt(seqidno:304)的cdr-l2序列和/或lqsrtiprt(seqidno:306)的cdr-l3序列。在一些实施方案中,参考抗体是包含seqidno:328或585所示氨基酸序列的scfv。在一些实施方案中,参考抗体具有含有seqidno:325所示氨基酸序列的vh区,或包含这样的序列内的cdr-h1、cdr-h2和/或cdr-h3,和/或具有含有seqidno:327所示氨基酸序列的vl区,或包含这样的序列内的cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3。例如,参考抗体可以是如下抗体,所述抗体含有nfgmn(seqidno:289)的cdr-h1序列、wintytgesyfaddfkg(seqidno:291)的cdr-h2序列、geiyygydggfay(seqidno:293)的cdr-h3序列、rasqdvntavs(seqidno:303)的cdr-l1序列、sasyryt(seqidno:305)的cdr-l2序列和/或qqhystpwt(seqidno:307)的cdr-l3序列。在一些实施方案中,参考抗体是包含seqidno:329或586所示氨基酸序列的scfv。
在一些实施方案中,所提供的抗体(例如,抗原结合片段)含有与存在于一种或多种参考抗体中的cdr不同的重链和轻链cdr。在一些实施方案中,所提供的抗体含有与存在于seqidno:324所示的vh区氨基酸序列和/或seqidno:326所示的vl区氨基酸序列中的cdr不同的重链和轻链cdr。在一些实施方案中,所提供的抗体含有与存在于seqidno:325所示的vh区氨基酸序列和/或seqidno:327所示的vl区氨基酸序列中的cdr不同的重链和轻链cdr。
在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段结合(例如特异性地结合)和/或识别bcma(例如人bcma)中的一个或多个表位,但不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:496、507或513的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:517、532或551的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2或cdr-l3。在一些实施方案中,所提供的抗体或其抗原结合片段结合(例如特异性地结合)和/或识别bcma(例如人bcma)中的一个或多个表位,但不包含vh区,所述vh区包含分别含有seqidno:588、589或590的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2或cdr-h3,和/或抗体或抗原结合片段不包含vl区,所述vl区包含分别含有seqidno:588、589或590的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2或cdr-l3。在一些实施方案中,抗体或其抗原结合片段含有与包含seqidno:577和587分别所示或seqidno:594和595分别所示的vh区和vl区氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段不同的vh区和/或vl区。
在一些实施方案中,抗体或抗原结合片段不包含与在包含seqidno:328、329、585和/或586的氨基酸序列的抗体内含有的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3和/或cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3序列。
所提供的抗体(例如,抗原结合片段)包括如下那些抗体,其与本文所述的参考抗体竞争结合bcma蛋白表位和/或结合与被本文所述的参考抗体所结合的那些表位相同或重叠的bcma蛋白表位,但仍含有不同的cdr,例如不同的重链和/或轻链cdr1、cdr2和cdr3。
所提供的抗体(例如,抗原结合片段)包括如下那些抗体,其不与本文所述的参考抗体竞争结合bcma蛋白表位和/或结合与被本文所述的参考抗体所结合的那些表位不同的bcma蛋白表位。
在一些实施方案中,参考抗体具有存在于如本文所述的抗体或其部分(例如任何所提供的示例性抗体)中的序列。例如,在一些实施方案中,参考抗体含有:包含选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列的cdr-h1;包含选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列的cdr-h2;包含选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3;包含选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;包含选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2;和/或包含选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。例如,在一些实施方案中,参考抗体具有选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列和/或具有选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列。在一些此类实施方案中,抗体具有存在于这样的抗体中的重链和/或轻链cdr1、2和/或3。
在一些实施方案中,抗体(例如抗原结合片段)显示出如与bcma阴性细胞相比对表达bcma的细胞(例如本文已知和/或描述的表达bcma和已知不表达bcma的特定细胞)的结合偏好。在一些实施方案中,观察到结合偏好,其中与不表达bcma的细胞相比,测量出与表达bcma的细胞的结合程度显著更高。在一些实施方案中,如与不表达bcma的细胞相比,针对表达bcma的细胞检测到的结合程度(例如,如通过在基于流式细胞术的测定中的平均荧光强度和/或解离常数或ec50所测量)的倍数变化为针对相应形式的参考抗体所观察到的倍数变化的至少等于或至少约1.5、2、3、4、5、6倍或更多倍,和/或与针对相应形式的参考抗体所观察到的倍数变化大约一样大、大约相同、至少一样大或至少大约一样大、或大于对于针对相应形式的参考抗体所观察到的倍数变化。在一些情况下,所观察到的与bcma或与表达bcma的细胞的总结合程度与针对相应形式的参考抗体所观察到的总结合程度大致相同、至少一样大、或大于针对相应形式的参考抗体所观察到的总结合程度。
在一些实施方案中,抗体(例如,抗原结合片段)与表位特异性地结合,所述表位与参考抗体所结合的bcma蛋白表位重叠。在一些方面,此类抗体包括结合与参考抗体相同或相似的表位的抗体。在一些实施方案中,如果抗原中降低或消除一种抗体的结合的所有或基本上所有氨基酸突变降低或消除另一种抗体的结合,则两种抗体特异性地结合相同的表位和/或重叠的表位。
在一些实施方案中,抗体(例如,抗原结合片段)与表位特异性地结合,所述表位不与被参考抗体所结合的bcma蛋白表位重叠。在一些方面,此类抗体包括结合与参考抗体不同的表位的抗体。在一些实施方案中,如果抗原中降低或消除一种抗体的结合的所有或基本上所有氨基酸突变不降低或消除另一种抗体的结合,则两种抗体特异性地结合不同的表位。
如果抗体竞争性地抑制参考抗体与bcma蛋白的结合,和/或如果参考抗体竞争性地抑制抗体与bcma蛋白的结合,则抗体与参考抗体“竞争结合”bcma蛋白。如果抗体的过量存在可检测地抑制(阻断)另一种抗体与其抗原的结合,则抗体竞争性地抑制参考抗体与抗原的结合。可以指定特定的抑制程度。
竞争性抑制测定是已知的,并且包括基于elisa、基于流式细胞术的测定和基于ria的测定。在一些方面,通过掺入过量的未标记形式的一种抗体并评估其阻断另一种抗体的结合的能力来进行竞争性抑制测定,所述另一种抗体用可检测标记进行标记,使得可以通过检测标签或标记来评估结合及其降低的程度。在一些例子中,可以使用针对分子相互作用和结合动力学的测定(如表面等离子体共振分析)来测量竞争性结合。
可以通过各种已知测定对本文提供的抗bcma抗体(例如抗原结合片段)鉴定、筛选或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。在一方面,对抗体测试其抗原结合活性,例如通过已知方法,如elisa、western印迹和/或流式细胞术测定,包括基于细胞的结合测定,例如评估(例如与荧光标记缀合或标记的)抗体与表达靶抗原(例如bcma)的细胞的结合,在一些情况下与使用不表达靶抗原(例如bcma)的细胞的结果进行比较。可以将结合亲和力测量为kd或ec50。在一些例子中,可以使用确定分子相互作用的测定(如表面等离子体共振分析)来测量结合亲和力、结合动力学和/或结合常数。
竞争测定可以用于鉴定与本文所述的任何抗体(例如抗原结合片段)竞争的抗体。也可以使用用于定位被抗体和参考抗体所结合的表位的测定,并且所述测定是已知的。
c.免疫缀合物
在一些实施方案中,抗体(例如抗原结合片段)是免疫缀合物或是免疫缀合物的一部分,其中抗体与一个或多个异源分子或部分(例如但不限于细胞毒性剂或显像剂)缀合。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212、p32、pb212和lu的放射性同位素);化学治疗剂(例如甲氨蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑、丝裂霉素c、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他嵌入剂);生长抑制剂;酶及其片段(如溶核酶);抗生素;毒素(如小分子毒素或酶促活性毒素)。在一些实施方案中,抗体与一种或多种细胞毒性剂(如化学治疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如,蛋白质毒素,细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或片段))或放射性同位素缀合。
免疫缀合物包括抗体与一种或多种药物缀合的抗体-药物缀合物(adc),所述一种或多种药物包括但不限于美登木素生物碱(maytansinoid)(参见美国专利号5,208,020、5,416,064和欧洲专利ep0425235b1);澳瑞他汀如一甲基澳瑞他汀药物部分de和df(mmae和mmaf)(参见美国专利号5,635,483和5,780,588和7,498,298);尾海兔素;卡奇霉素或其衍生物(参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296;hinman等人,cancerres.53:3336-3342(1993);和lode等人,cancerres.58:2925-2928(1998));蒽环类药物如道诺霉素或多柔比星(参见kratz等人,currentmed.chem.13:477-523(2006);jeffrey等人,bioorganic&med.chem.letters16:358-362(2006);torgov等人,bioconj.chem.16:717-721(2005);nagy等人,proc.natl.acad.sci.usa97:829-834(2000);dubowchik等人,bioorg.&med.chem.letters12:1529-1532(2002);king等人,j.med.chem.45:4336-4343(2002);和美国专利号6,630,579);甲氨蝶呤;长春地辛;紫杉烷如多西他赛、紫杉醇、拉洛他赛、特西他赛(tesetaxel)和奥他赛;单端孢霉烯和cc1065。
免疫缀合物还包括抗体(例如抗原结合片段)与酶促活性毒素或其片段缀合的那些免疫缀合物,所述酶促活性毒素或其片段包括但不限于白喉a链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素a链(来自绿脓假单胞菌(pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒素a链、相思豆毒素a链、蒴莲根毒素(modeccin)a链、α-八叠球菌素、油桐(aleuritesfordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(phytolacaamericana)蛋白(papi、papii、和pap-s)、苦瓜(momordicacharantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素和单端孢霉烯。
免疫缀合物还包括抗体(例如抗原结合片段)与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的那些免疫缀合物。示例性放射性同位素包括at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212、p32、pb212和lu的放射性同位素。
可以使用许多已知蛋白质偶联剂中的任何一种(例如接头)来制备抗体(例如抗原结合片段)和细胞毒性剂的缀合物(参见vitetta等人,science238:1098(1987),wo94/11026)。在一些实施方案中,接头是肽或多肽,或者是化学接头。在一些实施方案中,接头是可释放接头或可切割接头。接头可以是促进细胞毒性药物在细胞中的释放的“可切割接头”或“可释放接头”,如酸不稳定性接头、肽酶敏感性接头、光不稳定性接头、二甲基接头和含二硫键的接头(chari等人,cancerres.52:127-131(1992);美国专利号5,208,020)。在一些实施方案中,可释放接头或可切割接头在存在于肿瘤微环境(tme)中的一种或多种条件或因子(包括基质金属蛋白酶(mmp)、低氧条件或酸性条件)的存在下被释放或切割。
d.多特异性抗体
在某些实施方案中,bcma结合分子(例如抗体或多肽,如含有抗体或多肽的嵌合受体)是多特异性的。多特异性结合分子包括多特异性抗体,所述多特异性抗体包括例如双特异性或三特异性抗体。多特异性结合配偶体(例如抗体)对至少两个不同的位点具有结合特异性,所述至少两个不同的位点可以在相同或不同的抗原中。在某些实施方案中,结合特异性中的一种是针对bcma,并且另一种是针对另一种抗原。在一些实施方案中,另外的结合分子结合和/或识别第三种或更多种抗原。在某些实施方案中,双特异性抗体可以结合bcma的两个不同表位。双特异性抗体也可以用于将细胞毒性剂定位于表达bcma的细胞。可以将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段。多特异性抗体包括多特异性单链抗体(例如双抗体、三抗体和四抗体)、串联双scfv和串联三scfv。还提供含有抗体(例如抗原结合片段)的多特异性嵌合受体,如多特异性car。还提供含有抗体或多肽(包含抗体)的多特异性细胞,例如含有细胞表面蛋白(包括抗bcma抗体)和与不同抗原或bcma上的不同表位结合的另外的细胞表面蛋白(如另外的嵌合受体)的细胞。
示例性抗原包括b细胞特异性抗原、其他肿瘤特异性抗原,例如在白血病(例如b细胞白血病)、淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等)或骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(mm)、浆细胞恶性肿瘤(例如浆细胞瘤))上特异性地表达或与所述肿瘤相关的抗原。例如,抗原包括在如下肿瘤上特异性地表达或与如下肿瘤相关的那些抗原:b细胞慢性淋巴细胞性白血病(cll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、急性骨髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、伯基特淋巴瘤(例如地方性伯基特淋巴瘤或散发性伯基特淋巴瘤)、套细胞淋巴瘤(mcl)、非小细胞肺癌(nsclc)、慢性骨髓性(或粒细胞性)白血病(cml)、毛细胞白血病(hcl)、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)、边缘区淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(hl)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、间变性大细胞淋巴瘤(alcl)、难治性滤泡性淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)、边缘区淋巴瘤、结节单核细胞样b细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺b细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)、神经母细胞瘤、肾细胞癌、结肠癌、结直肠癌、乳腺癌、上皮鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤(如多发性骨髓瘤(例如非分泌性多发性骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤))、胃癌、食道癌、脑癌、肺癌(例如小细胞肺癌)、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)(例如肝癌(hepaticcarcinoma)、肝细胞瘤等)、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、脾癌(例如脾淋巴瘤)、肾上腺癌和/或头颈癌,以及在t细胞上表达的抗原。
在一些实施方案中,用于多靶向策略的第二或另外的抗原包括其中至少一种抗原是通用肿瘤抗原或其家族成员的那些抗原。在一些实施方案中,所述第二或另外的抗原是在肿瘤上表达的抗原。在一些实施方案中,本文提供的bcma结合分子靶向与所述第二或另外的抗原相同的肿瘤类型上的抗原。在一些实施方案中,所述第二或另外的抗原也可以是通用肿瘤抗原或可以是对肿瘤类型具有特异性的肿瘤抗原。
示例性第二或另外的抗原包括cd4、cd5、cd8、cd14、cd15、cd19、cd20、cd21、cd22、cd23、cd25、cd33、cd37、cd38、cd40、cd40l、cd46、cd52、cd54、cd74、cd80、cd126、cd138、b7、muc-1、ia、hm1.24、hla-dr、腱生蛋白、血管生成因子、vegf、pigf、ed-b纤连蛋白、致癌基因、致癌基因产物、cd66a-d、坏死抗原、ii、il-2、t101、tac、il-6、ror1、trail-r1(dr4)、trail-r2(dr5)、tegfr、her2、l1-cam、间皮素、cea、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd24、cd30、cd44、egfr、egp-2、egp-4、epha2、erbb2、erbb3、erbb4、erbb二聚体、egfrviii、fbp、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、g蛋白偶联受体c型家族5d(gprc5d)、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、kdr、κ轻链、lewisy、l1-细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、黑色素瘤优先表达抗原(prame)、生存素、egp2、egp40、tag72、b7-h6、il-13受体a2(il-13ra2)、ca9、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、双抗原、与通用标签相关的抗原、癌症-睾丸抗原、muc1、muc16、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、htert、mdm2、cyp1b、wt1、活素、afp、p53、细胞周期蛋白(d1)、cs-1、baff-r、taci、cd56、tim-3、cd123、l1-细胞粘附分子、mage-a1、magea3、细胞周期蛋白(如细胞周期蛋白a1(ccna1))和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由hiv、hcv、hbv和/或其他病原体表达的分子;和/或在一些方面,其新表位或新抗原。在一些实施方案中,抗原与通用标签相关或者是通用标签。
在一些方面,抗原(例如第二或另外的抗原,如疾病特异性抗原和/或相关抗原,如g蛋白偶联受体c型家族5d(gprc5d)、cd38(环状adp核糖水解酶)、cd138(多配体聚糖-1、多配体聚糖、syn-1)、cs-1(cs1、cd2子集1、cracc、slamf7、cd319和19a24)、baff-r、taci和/或fcrh5)在多发性骨髓瘤上表达。其他示例性多发性骨髓瘤抗原包括cd56、tim-3、cd33、cd123、cd44、cd20、cd40、cd74、cd200、egfr、β2-微球蛋白、hm1.24、igf-1r、il-6r、trail-r1和iia型激活素受体(actriia)。参见benson和byrd,j.clin.oncol.(2012)30(16):2013-15;tao和anderson,bonemarrowresearch(2011):924058;chu等人,leukemia(2013)28(4):917-27;garfall等人,discovmed.(2014)17(91):37-46。在一些实施方案中,抗原包括存在于淋巴肿瘤、骨髓瘤、aids相关的淋巴瘤和/或移植后淋巴组织增生上的抗原,如cd38。针对此类抗原的抗体或抗原结合片段是已知的,并且包括例如在美国专利号8,153,765;8,603477、8,008,450;美国公开号us20120189622或us20100260748;和/或国际pct公开号wo2006099875、wo2009080829或wo2012092612或wo2014210064中所述的那些。在一些实施方案中,在多特异性抗体、多特异性嵌合受体(如多特异性car)和/或多特异性细胞中包含此类抗体或其抗原结合片段(例如scfv)。
e.变体
在某些实施方案中,与本文所述的抗体的序列相比,抗体(例如抗原结合片段)包含一个或多个氨基酸变异,例如取代、缺失、插入和/或突变。示例性变体包括被设计为改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性的那些。可以通过在编码所述抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基缺失和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终的构建体,条件是最终的构建体具有所需的特征(例如抗原结合)。
在某些实施方案中,例如与本文所述的抗体序列相比和/或与天然库(例如人类库)的序列相比,抗体(例如抗原结合片段)包含一个或多个氨基酸取代。用于取代诱变的目的位点包括cdr和fr。可以将氨基酸取代引入目的抗体中,并针对如下所需活性筛选产物:例如,保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性、改善的半衰期和/或改善的效应子功能,例如促进抗体依赖性细胞毒性(adcc)或补体依赖性细胞毒性(cdc)的能力。
在一些实施方案中,亲本抗体(例如人源化或人抗体)的cdr内的一个或多个残基被取代。在一些实施方案中,进行取代以将序列或序列中的位置恢复为种系序列(例如在种系(例如人种系)中发现的抗体序列),例如以降低例如在向人受试者给予后免疫原性的可能性。
在一些实施方案中,在cdr“热点”(即,由在体细胞成熟过程中经历高频率突变的密码子编码的残基(参见例如chowdhury,methodsmol.biol.207:179-196(2008))和/或接触抗原的残基)中进行改变,并对所得的变体vh或vl进行结合亲和力的测试。例如在hoogenboom等人的methodsinmolecularbiology178:1-37(o’brien等人,编辑,humanpress,totowa,nj,(2001))中已描述了通过构建二级文库和从其中重新选择的亲和力成熟。在亲和力成熟的一些实施方案中,通过多种方法中的任何一种(例如,易错pcr、链改组或寡核苷酸指导的诱变),将多样性引入选择进行成熟的可变基因中。然后建立二级文库。然后筛选所述文库以鉴定具有所需亲和力的任何抗体变体。用于引入多样性的另一种方法涉及cdr引导的方法,其中将几个cdr残基(例如,每次4-6个残基)随机化。可以使用例如丙氨酸扫描诱变或建模来特异性地鉴定抗原结合中涉及的cdr残基。特别地,通常靶向cdr-h3和cdr-l3。
在某些实施方案中,取代、插入或缺失可以在一个或多个cdr内发生,只要此类改变基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如,可以在cdr中进行基本上不降低结合亲和力的保守改变(例如,如本文提供的保守取代)。例如,此类改变可以在cdr中的抗原接触残基之外。在上文所提供的变体vh区和vl区的某些实施方案中,每个cdr或者不发生改变或者含有不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端融合,长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽,以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有n末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括将抗体的n或c末端与酶或增加抗体血清半衰期的多肽融合。
f.修饰
在某些实施方案中,通过例如以下方式改变抗体以增加或降低抗体被糖基化的程度:通过去除或插入一个或多个糖基化位点、通过改变氨基酸序列和/或通过修饰附接至糖基化位点的一个或多个寡糖(例如,使用特定细胞系)。在一些实施方案中,去除或插入n连接的糖基化,其是在共有序列-asn-xaa-ser/thr中的天冬酰胺处出现的糖基化位点。
示例性修饰、变体和细胞系描述于例如,专利公开号us2003/0157108、us2004/0093621、us2003/0157108;wo2000/61739;wo2001/29246;us2003/0115614;us2002/0164328;us2004/0093621;us2004/0132140;us2004/0110704;us2004/0110282;us2004/0109865;wo2003/085119;wo2003/084570;wo2005/035586;wo2005/035778;wo2005/053742;wo2002/031140;okazaki等人j.mol.biol.336:1239-1249(2004);yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87:614(2004);ripka等人arch.biochem.biophys.249:533-545(1986);美国专利申请号us2003/0157108a1,presta,l;和wo2004/056312a1,yamane-ohnuki等人biotech.bioeng.87:614(2004);kanda,y.等人,biotechnol.bioeng.,94(4):680-688(2006);和wo2003/085107;wo2003/011878(jean-mairet等人);美国专利号6,602,684(umana等人);和us2005/0123546(umana等人);wo1997/30087(patel等人);wo1998/58964(raju,s.);和wo1999/22764(raju,s.)中。
经修饰的抗体包括在fc区中具有一个或多个氨基酸修饰的那些,例如具有在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如取代)的人fc区序列或恒定区的其他部分(例如人igg1、igg2、igg3或igg4fc区)的那些。
可以进行此类修饰,例如以改善半衰期,改变与一种或多种类型的fc受体的结合和/或改变效应子功能。
变体还包括半胱氨酸工程化抗体,如“thiomab”和其他半胱氨酸工程化变体,其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代,以便在可接近位点产生反应性硫醇基团,例如用于药剂和接头-药剂的缀合,从而产生免疫缀合物。半胱氨酸工程化抗体描述于例如美国专利号7,855,275和7,521,541中。
在一些实施方案中,将抗体(例如,抗原结合片段)修饰为含有另外的非蛋白质部分,包括水溶性聚合物。示例性聚合物包括但不限于聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3-二氧戊环、聚1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)、和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如,甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性而可以在制备中具有优势。所述聚合物可以具有任何分子量,并且可以有支链或无支链。附接至抗体的聚合物的数量可以变化,并且如果附接超过一种聚合物,则它们可以是相同或不同的分子。通常,用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可以基于包括但不限于以下的考虑因素来确定:要改善的抗体的特定特性或功能、抗体衍生物是否将要用于在确定条件下的疗法等。
b.重组受体
结合分子还包括含有本文提供的任何此类抗体或抗原结合片段的多肽,所述多肽包括单链细胞表面蛋白(例如重组受体,例如含有此类抗体或抗原结合片段的嵌合抗原受体)。所提供的结合分子(例如bcma结合分子)包括包含所提供的抗体(例如抗原结合片段)中的一种的单链细胞表面蛋白,如重组受体(例如抗原受体)。重组受体包括与bcma特异性地结合的抗原受体,例如含有所提供的抗bcma抗体(例如抗原结合片段)的抗原受体。抗原受体包括功能性非tcr抗原受体,如嵌合抗原受体(car)。还提供表达重组受体的细胞及其在过继细胞疗法(例如与bcma表达相关的疾病和障碍的治疗)中的用途。
示例性抗原受体(包括car)以及将此类抗原受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些:国际专利申请公开号wo200014257、wo2013126726、wo2012/129514、wo2014031687、wo2013/166321、wo2013/071154、wo2013/123061,美国专利申请公开号us2002131960、us2013287748、us20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353、和8,479,118,以及欧洲专利申请号ep2537416;和/或以下文献中所述的那些:sadelain等人,cancerdiscov.2013年4月;3(4):388–398;davila等人(2013)plosone8(4):e61338;turtle等人,curr.opin.immunol.,2012年10月;24(5):633-39;wu等人,cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面,抗原受体包括如美国专利号7,446,190中所述的car以及国际专利申请公开号wo/2014055668a1中所述的那些。示例性car包括任何上述出版物(如wo2014031687、us8,339,645、us7,446,179、us2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282)中披露的car,例如并且其中抗原结合部分(例如scfv)被抗体或其抗原结合片段(例如,如本文提供的)替代。
嵌合受体包括嵌合抗原受体(car)。嵌合受体(如car)通常包含细胞外抗原结合结构域,其包括所提供的抗bcma抗体中的一种、是或包含在所提供的抗bcma抗体中的一种内。因此,嵌合受体(例如car)通常在其细胞外部分中包含一个或多个bcma结合分子(如一个或多个抗原结合片段、结构域或部分)或一个或多个抗体可变区和/或抗体分子(如本文所述的那些)。在一些实施方案中,car包含抗体分子的一个或多个bcma结合部分,如抗体的重链可变(vh)区和/或轻链可变(vl)区(例如scfv抗体片段)。
例如carpenter等人,clincancerres.,2013,19(8):2048-2060描述了靶向bcma的car。
在一些实施方案中,包含本文提供的抗体(例如抗原结合片段)的重组受体(如car)进一步包括间隔子,所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰的形式,如铰链区(例如,igg4铰链区)和/或ch1/cl和/或fc区。在一些实施方案中,恒定区或部分是人igg(如igg4或igg1)的。在一些方面,恒定区的所述部分用作抗原识别组分(例如,scfv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况相比,间隔子的长度可以提供在抗原结合后增加的细胞反应性。在一些例子中,间隔子的长度为或为约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸,约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中,间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的igg4铰链、与ch2和ch3结构域连接的igg4铰链或与ch3结构域连接的igg4铰链。示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些:hudecek等人(2013)clin.cancerres.,19:3153或国际专利申请公开号wo2014031687。在一些实施方案中,间隔子具有seqidno:363所示的序列,并且由seqidno:364所示的序列编码。在一些实施方案中,间隔子具有seqidno:365所示的序列。在一些实施方案中,间隔子具有seqidno:366所示的序列。
抗原识别组分通常与一种或多种细胞内信号传导组分(例如通过抗原受体复合物(在car的情况下,如tcr复合物)模拟激活和/或通过另一种细胞表面受体模拟信号的信号传导组分)连接。因此,在一些实施方案中,bcma结合分子(例如抗体或其抗原结合片段)与一个或多个跨膜结构域(如本文所述的那些)和包含一种或多种细胞内组分(如本文所述的那些)的细胞内信号传导结构域连接。在一些实施方案中,跨膜结构域与细胞外结构域融合。在一个实施方案中,使用天然地与受体(例如car)中的一个结构域缔合的跨膜结构域。在一些情形中,通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域,以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合,以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
在一些实施方案中,跨膜结构域源自天然来源或源自合成来源。在来源是天然的情况下,结构域在一些方面源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜结构域包括源自以下各项的那些(即,包含以下各项的至少一个或多个跨膜结构域):t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137和/或cd154。可替代地,在一些实施方案中,跨膜结构域是合成的。在一些方面,合成跨膜结构域主要包含疏水性残基,如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面,将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中,所述连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。
细胞内信号传导结构域包括通过天然抗原受体模拟或接近信号、通过这样的受体与共刺激受体的组合模拟或接近信号、和/或仅通过共刺激受体模拟或接近信号的那些。在一些实施方案中,短的寡肽或多肽接头(例如,长度在2与10个之间的氨基酸的接头,如含有甘氨酸和丝氨酸的接头,例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在并形成car的跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间的连接。
受体(例如car)通常包括含有至少一种或多种细胞内信号传导组分的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中,受体包括tcr复合物的细胞内组分,如介导t细胞激活和细胞毒性的tcrcd3链,例如cd3ζ链。因此,在一些方面,bcma结合抗体与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中,细胞信号传导模块包括cd3跨膜结构域、cd3细胞内信号传导结构域和/或其他cd跨膜结构域。在一些实施方案中,受体(例如,car)进一步包括一种或多种另外的分子(如fc受体γ、cd8、cd4、cd25或cd16)的一部分。例如,在一些方面,car包括cd3-zeta(cd3-ζ)或fc受体γ与cd8、cd4、cd25或cd16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中,在连接所述car后,所述car的胞质结构域或细胞内信号传导结构域激活免疫细胞(例如,被工程化以表达所述car的t细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如,在一些情境下,car诱导t细胞的功能,如细胞溶解活性或t辅助活性,如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中,使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域的截短部分代替完整的免疫刺激链,例如条件是所述截短部分转导效应子功能信号。在一些实施方案中,一个或多个细胞内信号传导结构域包括t细胞受体(tcr)的胞质序列,并且在一些方面还包括共受体(其在天然背景下与这种受体协同起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些,和/或具有相同功能能力的任何合成序列。
在天然tcr的情境下,完全激活通常不仅需要通过tcr进行信号传导,还需要共刺激信号。因此,在一些实施方案中,为了促进完全激活,用于产生次级或共刺激信号的组分也被包括在car中。在其他实施方案中,car不包括用于产生共刺激信号的组分。在一些方面,另外的car在同一细胞中表达,并且提供用于产生次级或共刺激信号的组分。
在一些方面,将t细胞激活描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导:通过tcr启动抗原依赖性初级激活的那些序列(初级胞质信号传导序列)以及以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些序列(次级胞质信号传导序列)。在一些方面,car包括此类胞质信号传导序列中的一种或两种。
在一些方面,car包括调节tcr复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或itam)。含有itam的初级胞质信号传导序列的例子包括源自tcr或cd3ζ、fcrγ、cd3γ、cd3δ和cd3ε的那些。在一些实施方案中,car中的细胞内信号传导结构域含有源自cd3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中,car包括共刺激分子(如t细胞共刺激分子)的信号传导结构域(例如细胞内信号传导结构域)和/或跨膜部分。示例性共刺激分子包括cd28、4-1bb、ox40、dap10和icos。在一些方面,同一car包括激活或刺激组分(例如胞质信号传导序列)和共刺激组分二者。
在一些实施方案中,激活或刺激组分被包括在一个car中,然而共刺激组分由识别另一种抗原的另一个car提供。在一些实施方案中,car包括在同一细胞上表达的激活或刺激car和共刺激car(参见wo2014/055668)。在一些方面,靶向bcma的car是刺激或激活car;在其他方面,其是共刺激car。在一些实施方案中,细胞进一步包括抑制性car(icar,参见fedorov等人,sci.transl.medicine,5(215)(2013年12月),例如识别除bcma之外的抗原的car,由此通过靶向bcma的car传递的激活或刺激信号由于抑制性car与其配体的结合而减小或被抑制,例如以降低脱靶效应。
在某些实施方案中,细胞内信号传导结构域包含与cd3(例如cd3ζ)细胞内结构域连接的cd28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中,细胞内信号传导结构域包含与cd3ζ细胞内结构域连接的嵌合cd28和cd137(4-1bb、tnfrsf9)共刺激结构域。
在一些实施方案中,car涵盖在胞质部分中的一个或多个(例如,两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如初级激活结构域)。示例性car包括cd3ζ、cd28和4-1bb的细胞内组分。
在一些实施方案中,编码重组受体(例如car)的核酸序列进一步包括编码一种或多种标记的核酸序列。在一些实施方案中,所述一种或多种标记是转导标记、替代标记和/或选择标记。
在一些实施方案中,标记是转导标记或替代标记。可以将转导标记或替代标记用于检测已经引入多核苷酸(例如,编码重组受体的多核苷酸)的细胞。在一些实施方案中,转导标记可以指示或确认细胞的修饰。在一些实施方案中,替代标记是制备以在细胞表面上与重组受体(例如car)共表达的蛋白质。在特定实施方案中,这样的替代标记是已经被修饰以具有极少活性或无活性的表面蛋白。在某些实施方案中,替代标记由编码重组受体的同一多核苷酸编码。在一些实施方案中,编码重组受体的核酸序列与编码标记的核酸序列可操作地连接,任选地通过内部核糖体进入位点(ires)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(例如2a序列,例如t2a、p2a、e2a或f2a)的核酸隔开。在一些情况下,外在标记基因可以结合工程化细胞以允许检测或选择细胞,并且在一些情况下还允许促进细胞自杀。
示例性替代标记可以包括截短的细胞表面多肽,例如截短的人表皮生长因子受体2(ther2)、截短的表皮生长因子受体(egfrt,seqidno:11或76所示的示例性egfrt序列)或前列腺特异性膜抗原(psma)或其经修饰形式。egfrt可以含有由抗体西妥昔单抗
在一些实施方案中,标记是或包含荧光蛋白,如绿色荧光蛋白(gfp)、增强型绿色荧光蛋白(egfp)(如超折叠gfp)、红色荧光蛋白(rfp)(如tdtomato、mcherry、mstrawberry、asred2、dsred或dsred2)、青色荧光蛋白(cfp)、蓝绿色荧光蛋白(bfp)、增强型蓝色荧光蛋白(ebfp)和黄色荧光蛋白(yfp)及其变体,包括荧光蛋白的物种变体、单体变体和密码子优化的和/或增强的变体。在一些实施方案中,标记是或包含酶(如萤光素酶)、来自大肠杆菌(e.coli)的lacz基因、碱性磷酸酶、分泌型胚胎碱性磷酸酶(seap)、氯霉素乙酰转移酶(cat)。示例性发光报告基因包括萤光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶(cat)、β-葡萄糖醛酸酶(gus)或其变体。
在一些实施方案中,标记是选择标记。在一些实施方案中,选择标记是或包含赋予对外源药剂或药物的抗性的多肽。在一些实施方案中,选择标记是抗生素抗性基因。在一些实施方案中,选择标记是向哺乳动物细胞赋予抗生素抗性的抗生素抗性基因。在一些实施方案中,选择标记是或包含嘌呤霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素抗性基因、新霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或博莱霉素抗性基因或其修饰形式。
在一些实施方案中,标记是并非在t细胞上天然发现或并非在t细胞表面上天然发现的分子(例如细胞表面蛋白)或其部分。
在一些实施方案中,所分子是非自身分子,例如非自身蛋白质,即并非被将细胞过继转移至其中的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中,标记不起任何治疗作用和/或不产生除了用作基因工程化标记(例如,用于选择成功工程化细胞)以外的作用。在其他实施方案中,标记可以是治疗性分子或原本发挥一定所需作用的分子,如在体内所遇到的细胞的配体,如共刺激或免疫检查点分子,以增强和/或减弱细胞在过继转移和遇到配体后的反应。
在一些情况下,car被称为第一代、第二代和/或第三代car。在一些方面,第一代car是在抗原结合后仅提供cd3链诱导的信号的car;在一些方面,第二代car是提供这种信号和共刺激信号的car,如包括来自共刺激受体(如cd28或cd137)的细胞内信号传导结构域的car;在一些方面,第三代car是在一些方面包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的car。
在一些实施方案中,嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分。在一些方面,嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中,抗体或片段包括scfv或仅包含vh区的单结构域抗体,并且细胞内信号传导结构域含有itam。在一些方面,细胞内信号传导结构域包括cd3-zeta(cd3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中,嵌合抗原受体包括将细胞外结构域与细胞内信号传导结构域连接的跨膜结构域。在一些方面,跨膜结构域含有cd28的跨膜部分。细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中,细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中,嵌合抗原受体含有共刺激分子(例如t细胞共刺激分子)的细胞内结构域,如在跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面,t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。
在一些实施方案中,受体(例如car)的跨膜结构域是人cd28的跨膜结构域或其变体,例如人cd28(登录号:p10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域。在一些实施方案中,细胞内信号传导结构域包含人cd28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体,例如其41个氨基酸的结构域,和/或在天然cd28蛋白的位置186-187处具有ll至gg取代的这种结构域。在一些实施方案中,细胞内结构域包含4-1bb的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体,例如人4-1bb(登录号q07011.1)的42个氨基酸的胞质结构域。在一些实施方案中,细胞内信号传导结构域包含人cd3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体,例如人cd3ζ(登录号:p20963.2)的同种型3的112个aa的细胞质结构域或如美国专利号7,446,190中所述的cd3ζ信号传导结构域。
在一些方面,间隔子仅含有igg的铰链区,如仅igg4或igg1的铰链,如seqidno:363所示的仅铰链的间隔子。在其他实施方案中,间隔子是与ch2和/或ch3结构域连接的ig铰链,例如igg4铰链。在一些实施方案中,间隔子是与ch2和ch3结构域连接的ig铰链,例如igg4铰链,如seqidno:366所示。在一些实施方案中,间隔子是仅与ch3结构域连接的ig铰链,例如igg4铰链,如seqidno:365所示。在一些实施方案中,间隔子是或包含富含甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头,如已知的柔性接头。
例如,在一些实施方案中,car包括bcma抗体或片段(如本文所述的任何人bcma抗体,包括sdab和scfv)、间隔子(如任何含有ig铰链的间隔子)、cd28跨膜结构域、cd28细胞内信号传导结构域、和cd3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中,car包括bcma抗体或片段(如本文所述的任何人bcma抗体,包括sdab和scfv)、间隔子(如任何含有ig铰链的间隔子)、cd28跨膜结构域、4-1bb细胞内信号传导结构域、和cd3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中,此类car构建体进一步包括例如在car下游的t2a核糖体跳跃元件和/或tegfr序列。
在某些实施方案中,多特异性结合分子(例如多特异性嵌合受体,如多特异性car)可以含有任何多特异性抗体,包括例如双特异性抗体、多特异性单链抗体,例如双抗体、三抗体和四抗体、串联双scfv和串联三scfv,如上文章节i.a中所述的任何一种。
本文还提供包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的scfv序列的单链细胞表面蛋白。在一些任何此类实施方案中,scfv包含选自seqidno:128、132、278和502中任何一个的序列。在一些任何此类实施方案中,scfv包含seqidno:560的序列。
c.工程化细胞
还提供含有重组受体(例如嵌合抗原受体)的细胞(如工程化细胞),所述重组受体例如为含有细胞外结构域(包括如本文所述的抗bcma抗体或片段)的重组受体。还提供此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物,例如其中表达bcma结合分子的细胞构成组合物中总细胞或某种类型的细胞(如t细胞或cd8+或cd4+细胞)的至少50、60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或更高百分比。组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供用于向受试者(例如患者)给予细胞和组合物的治疗方法。
因此,还提供表达含有抗体的重组受体的基因工程化细胞,例如含有car的细胞。细胞通常是真核细胞,如哺乳动物细胞,并且通常是人细胞。在一些实施方案中,细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官,是免疫系统的细胞,如先天免疫或适应性免疫的细胞,例如骨髓或淋巴样细胞(包括淋巴细胞,通常是t细胞和/或nk细胞)。其他示例性细胞包括干细胞,如多潜能干细胞和多能干细胞,包括诱导多能干细胞(ipsc)。细胞通常是原代细胞,例如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中,细胞包括t细胞或其他细胞类型的一个或多个子集,如整个t细胞群、cd4+细胞、cd8+细胞及其亚群,如由以下所定义的那些亚群:功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者,细胞可以是同种异体的和/或自体的。方法包括现成的方法。在一些方面,如对于现成的技术,细胞是多能的和/或多潜能的,如干细胞,如诱导多能干细胞(ipsc)。在一些实施方案中,所述方法包括从受试者中分离细胞,如本文所述制备、加工、培养和/或工程化它们,并且在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一患者体内。
t细胞和/或cd4+和/或cd8+t细胞的亚型和亚群包括幼稚t(tn)细胞、效应t细胞(teff)、记忆t细胞及其亚型(如干细胞记忆t(tscm)、中枢记忆t(tcm)、效应记忆t(tem)或终末分化的效应记忆t细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(til)、未成熟t细胞、成熟t细胞、辅助t细胞、细胞毒性t细胞、粘膜相关恒定t(mait)细胞、天然存在和适应性调节t(treg)细胞、辅助t细胞(如th1细胞、th2细胞、th3细胞、th17细胞、th9细胞、th22细胞、滤泡性辅助t细胞)、α/βt细胞以及δ/γt细胞。
在一些实施方案中,细胞是天然杀伤(nk)细胞。在一些实施方案中,细胞是单核细胞或粒细胞,例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中,细胞包括通过基因工程化引入的一种或多种核酸,并且由此表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中,核酸是异源的,即通常不存在于细胞中或从细胞获得的样品中,如从另一种生物或细胞获得的核酸,例如,所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中,核酸不是天然存在的,如在自然界中未发现的核酸,包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。在一些实施方案中,细胞(例如工程化细胞)包含如本文所述的载体(例如病毒载体、表达载体等),如包含编码本文所述的重组受体的核酸的载体。
a.用于基因工程化的载体和方法
还提供用于表达结合分子(例如抗bcma结合分子)(包括包含结合分子的重组受体(例如car))以及用于产生表达此类结合分子的基因工程化细胞的方法、核酸、组合物和试剂盒。在一些实施方案中,可以将包括重组受体(例如car)的一种或多种结合分子基因工程化至细胞或多种细胞中。基因工程化通常涉及将编码重组或工程化组分的核酸引入细胞中,例如通过逆转录病毒转导、转染或转化。
在一些实施方案中,通过以下方式完成基因转移:首先刺激细胞,如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合,例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的,然后转导激活的细胞,并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。
在一些情境下,刺激因子(例如淋巴因子或细胞因子)的过表达可能对受试者有毒性。因此,在一些情境下,工程化细胞包括例如在过继免疫疗法中给予后导致细胞在体内对阴性选择易感的基因区段。例如,在一些方面,将细胞工程化,使得它们可以由于给予过它们的患者的体内状况的改变而被消除。阴性选择性表型可以由赋予对所给予的药剂(例如化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒i型胸苷激酶(hsv-itk)基因(wigler等人,cell2:223,1977),其赋予更昔洛韦敏感性;细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt)基因;细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(aprt)基因;细菌胞嘧啶脱氨酶(mullen等人,proc.natl.acad.sci.usa.89:33(1992))。
在一些方面,细胞进一步被工程化以促进细胞因子或其他因子的表达。用于引入基因工程化组分(例如,抗原受体,例如car)的各种方法是熟知的,并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些,包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。
在一些实施方案中,使用重组感染性病毒颗粒(例如源自猿猴病毒40(sv40)、腺病毒、腺相关病毒(aav)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中,使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到t细胞中(参见例如koste等人(2014)genetherapy2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25;carlens等人(2000)exphematol28(10):1137-46;alonso-camino等人(2013)molthernuclacids2,e93;park等人,trendsbiotechnol.2011年11月29日(11):550–557)。
在一些实施方案中,逆转录病毒载体具有长末端重复序列(ltr),例如,衍生自莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)、骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)、鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、脾病灶形成病毒(sffv)、人免疫缺陷病毒1型(hiv-1)或腺相关病毒(aav)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中,逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。逆转录病毒通常是双嗜性的,这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中,待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多例示性逆转录病毒系统(例如,美国专利号5,219,740;6,207,453;5,219,740;miller和rosman(1989)biotechniques7:980-990;miller,a.d.(1990)humangenetherapy1:5-14;scarpa等人(1991)virology180:849-852;burns等人(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:8033-8037;以及boris-lawrie和temin(1993)cur.opin.genet.develop.3:102-109。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如wang等人(2012)j.immunother.35(9):689-701;cooper等人(2003)blood.101:1637–1644;verhoeyen等人(2009)methodsmolbiol.506:97-114;以及cavalieri等人(2003)blood.102(2):497-505中。
在一些实施方案中,通过电穿孔将重组核酸转移到t细胞中(参见例如chicaybam等人,(2013)plosone8(3):e60298;和vantedeloo等人(2000)genetherapy7(16):1431-1437)。在一些实施方案中,通过转座将重组核酸转移到t细胞中(参见例如manuri等人(2010)humgenether21(4):427-437;sharma等人(2013)molecthernuclacids2,e74;以及huang等人(2009)methodsmolbiol506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如,如在currentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,newyork.n.y.中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染;钨粒子促进的微粒轰击(johnston,nature,346:776-777(1990));以及磷酸锶dna共沉淀(brash等人,mol.cellbiol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号wo2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。
另外的核酸(例如,用于引入的基因)包括用于改善治疗功效的那些,例如通过促进转移细胞的活力和/或功能;提供用于选择和/或评价细胞的遗传标记的基因,例如以评估体内存活或定位;改善安全性的基因,例如通过使细胞在体内对阴性选择易感,如luptons.d.等人,mol.andcellbiol.,11:6(1991);和riddell等人,humangenetherapy3:319-338(1992)所述;还参见lupton等人的pct/us91/08442和pct/us94/05601的公开,其描述了使用源自将显性阳性选择性标记与阴性选择性标记融合的双功能选择性融合基因。参见例如riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
在一些实施方案中,可以对包括抗体和/或重组受体(例如car)的一种或多种结合分子进行基因工程化,以在细胞或多种细胞中表达。在一些实施方案中,第一重组受体和第二结合分子(例如重组受体)由同一或单独的核酸分子编码。在一些实施方案中,将另外的结合分子工程化为在细胞或多种细胞中表达。
在一些实施方案中,载体或构建体可以含有驱动一种或多种核酸分子的表达的单个启动子。在一些实施方案中,此类核酸分子(例如转录物)可以是多顺反子的(双顺反子的或三顺反子的,参见例如美国专利号6,060,273)。例如,在一些实施方案中,可以将转录单元工程化为含有ires(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元,其允许通过来自单一启动子的信息共表达基因产物(例如其编码第一和第二嵌合受体)。可替代地,在一些情况下,单一启动子可以指导rna的表达,所述rna在单个开放阅读框(orf)中含有两个或三个基因(例如,编码参与调节代谢途径的分子和编码重组受体),所述两个或三个基因由编码自切割肽(例如2a序列)或蛋白酶识别位点(例如弗林蛋白酶(furin))的序列彼此分开。因此,orf编码单一多肽,其在翻译期间(在2a的情况下)或在翻译之后被加工成单一蛋白质。在一些情况下,肽(如t2a)可导致核糖体跳过2a元件c末端处肽键的合成(核糖体跳跃),导致2a序列末端与下游的下一个肽之间分开(参见例如defelipe.geneticvaccinesandther.2:13(2004)和defelipe等人traffic5:616-626(2004))。许多2a元件在本领域是已知的。可以用于本文所公开的方法和核酸中的2a序列的例子包括但不限于来自以下的2a序列:口蹄疫病毒(f2a,例如,seqidno:601)、马鼻炎a病毒(e2a,例如,seqidno:600)、明脉扁刺蛾β四体病毒(thoseaasignavirus)(t2a,例如,seqidno:596或597)和猪捷申病毒(porcineteschovirus)-1(p2a,例如,seqidno:598或599),如美国专利公开号20070116690中所述。在一些实施方案中,所述一种或多种不同或单独的启动子驱动编码所述一种或多种结合分子(例如重组受体)的一种或多种核酸分子的表达。
本文提供的任何结合分子(例如抗体和/或重组受体,例如bcma结合分子和/或另外的重组受体)可以由含有编码受体的一种或多种核酸分子的多核苷酸以任何组合或排列进行编码。例如,一种、两种、三种或更多种多核苷酸可以编码一种、两种、三种或更多种不同的受体或结构域。在一些实施方案中,一种载体或构建体含有编码一种或多种结合分子(例如抗体和/或重组受体)的核酸分子,并且单独的载体或构建体含有编码另外的结合分子(例如抗体和/或重组受体)的核酸分子。核酸分子中的每一种还可以编码一种或多种标记,如表面标记,例如截短的egfr(tegfr)。
还提供含有一种或多种核酸分子、载体或构建体(如上文所述的任何核酸分子、载体或构建体)的组合物。在一些实施方案中,核酸分子、载体、构建体或组合物可以用于将细胞(如t细胞)工程化为表达任何结合分子,例如抗体或重组受体和/或另外的结合分子。
b.制备用于工程化的细胞
在一些实施方案中,工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入重组受体(例如car)的细胞可以从样品(如生物样品,例如获自或源自受试者的样品)中分离。在一些实施方案中,分离出所述细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中,受试者是需要特定治疗性干预(如所分离、加工和/或工程化的细胞所用于的过继细胞疗法)的人。
因此,在一些实施方案中,细胞是原代细胞,例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品,以及由一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)产生的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品,包括由其衍生的加工样品。
在一些方面,衍生出或分离出细胞的样品是血液或血液衍生的样品,或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(pbmc)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如,过继细胞疗法)的情境下,样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中,细胞源自细胞系,例如t细胞系。在一些实施方案中,细胞获得自异种来源,例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物或猪。
在一些实施方案中,细胞的分离包括一个或多个制备步骤和/或非基于亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中,将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育,例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中,基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。
在一些例子中,来自受试者的循环血液的细胞例如通过单采术或白细胞单采术获得。在一些方面,样品含有淋巴细胞,包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板,并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中,洗涤从受试者收集的血细胞,例如以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于随后的加工步骤。在一些实施方案中,用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤细胞。在一些实施方案中,洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面,根据制造商的说明书,通过半自动“流通”离心机(例如,cobe2991细胞加工器,baxter)完成洗涤步骤。在一些方面,洗涤步骤是通过切向流过滤(tff)根据制造商的说明书完成的。在一些实施方案中,洗涤后将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如不含ca++/mg++的pbs)中。在某些实施方案中,去除血细胞样品的组分并将细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中,方法包括基于密度的细胞分离方法,如通过溶解红细胞并通过percoll或ficoll梯度进行离心来从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中,分离方法包括基于细胞中一种或多种特定分子(如表面标记(例如,表面蛋白)、细胞内标记或核酸)的表达或存在来分离不同细胞类型。在一些实施方案中,可以使用任何已知的基于此类标记的分离方法。在一些实施方案中,分离是基于亲和力或基于免疫亲和力的分离。例如,在一些方面,分离包括基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)在细胞中的表达或表达水平来分离细胞和细胞群,例如,通过与和此类标记特异性地结合的抗体或结合配偶体一起孵育,之后通常进行洗涤步骤并将已结合所述抗体或结合配偶体的细胞与尚未与所述抗体或结合配偶体结合的那些细胞分离。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留尚未结合至所述抗体或结合配偶体的细胞)。在一些例子中,保留两种级分以供进一步使用。在一些方面,在无法获得专门鉴定异质性群体中的细胞类型的抗体,使得最好基于除所需群体之外的细胞表达的标记来实施分离的情况下,阴性选择可以特别有用。
分离不需要导致100%富集或去除特定细胞群体或表达特定标记的细胞。例如,针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比,但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样,特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比,但不需要导致所有此类细胞的完全去除。
在一些例子中,进行多轮分离步骤,其中使来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一分离步骤,如后续阳性或阴性选择。在一些例子中,单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞,如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具有特异性)一起孵育。同样,通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育,可以同时阳性选择多种细胞类型。
例如,在一些方面,t细胞的特定亚群,如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如cd28+、cd62l+、ccr7+、cd27+、cd127+、cd4+、cd8+、cd45ra+和/或cd45ro+t细胞)通过阳性或阴性选择技术来分离。
例如,可以使用抗cd3/抗cd28缀合的磁珠(例如,
在一些实施方案中,通过经由阳性选择富集特定细胞群,或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中,阳性或阴性选择是通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成,所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记+)或以相对较高水平表达(标记高)的一种或多种表面标记特异性地结合。
在一些实施方案中,通过阴性选择在非t细胞(如b细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标记(如cd14),将t细胞与pbmc样品分离。在一些方面,cd4+或cd8+选择步骤用于分离cd4+辅助细胞和cd8+细胞毒性t细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应t细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择,可以将此类cd4+和cd8+群体进一步分类成亚群。
在一些实施方案中,如通过基于与相应亚群相关的表面抗原进行阳性或阴性选择,将cd8+细胞针对幼稚、中枢记忆、效应记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中,针对中枢记忆t(tcm)细胞进行富集以增加功效,如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植,这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见terakura等人(2012)blood.1:72–82;wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。在一些实施方案中,组合富含tcm的cd8+t细胞与cd4+t细胞进一步增强功效。
在实施方案中,记忆t细胞存在于cd8+外周血淋巴细胞的cd62l+和cd62l-两个子集中。可以例如使用抗cd8和抗cd62l抗体将pbmc针对cd62l-cd8+和/或cd62l+cd8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中,中枢记忆t(tcm)细胞的富集是基于cd45ro、cd62l、ccr7、cd28、cd3和/或cd127的阳性或高表面表达;在一些方面,它是基于对表达或高度表达cd45ra和/或颗粒酶b的细胞的阴性选择。在一些方面,通过表达cd4、cd14、cd45ra的细胞的耗尽和表达cd62l的细胞的阳性选择或富集来进行富含tcm细胞的cd8+群体的分离。在一方面,中枢记忆t(tcm)细胞的富集从基于cd4表达所选择的阴性细胞级分开始进行,对所述阴性细胞级分基于cd14和cd45ra的表达进行阴性选择且基于cd62l进行阳性选择。在一些方面,此类选择是同时进行的,并且在其他方面,是以任何顺序依次进行的。在一些方面,用于制备cd8+细胞群或亚群的相同的基于cd4表达的选择步骤也用于产生cd4+细胞群或亚群,使得来自基于cd4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中,任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在特定例子中,使pbmc样品或其他白细胞样品经历cd4+细胞的选择,其中保留了阴性和阳性两种级分。然后使阴性级分经历基于cd14和cd45ra的表达的阴性选择和基于中枢记忆t细胞所特有的标记(如cd62l或ccr7)的阳性选择,其中阳性和阴性选择是以任何顺序进行的。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群,将cd4+t辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。cd4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中,幼稚cd4+t淋巴细胞是cd45ro-、cd45ra+、cd62l+、cd4+t细胞。在一些实施方案中,中枢记忆cd4+细胞是cd62l+和cd45ro+。在一些实施方案中,效应cd4+细胞是cd62l-和cd45ro-。
在一个例子中,为了通过阴性选择富集cd4+细胞,单克隆抗体混合剂通常包括针对cd14、cd20、cd11b、cd16、hla-dr和cd8的抗体。在一些实施方案中,抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合,以允许分离细胞以供阳性和/或阴性选择。例如,在一些实施方案中,使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于methodsinmolecularmedicine,第58卷:metastasisresearchprotocols,第2卷:cellbehaviorinvitroandinvivo,第17-25页s.a.brooks和u.schumacher编辑
在一些方面,将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒,如顺磁珠(例如像dynabeads或macs珠))一起孵育。磁响应材料(例如颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如抗体),所述结合配偶体与希望分离(例如,希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如表面标记)特异性地结合。
在一些实施方案中,磁粒或磁珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。存在许多熟知的用于磁分离方法的磁响应材料。合适的磁粒包括在molday,美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书ep452342b中所述的那些,将所述专利通过引用特此并入。胶体大小的颗粒(例如在owen美国专利号4,795,698和liberti等人,美国专利号5,200,084中所述的那些)是其他的例子。
孵育通常在这样的条件下进行,由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁粒或磁珠的此类抗体或结合配偶体特异性地结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于样品内的细胞上的话)特异性地结合。
在一些方面,将样品置于磁场中,并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引至磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择,保留被磁体吸引的细胞;对于阴性选择,保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面,在同一选择步骤期间进行阳性与阴性选择的组合,其中保留阳性和阴性级分并进一步加工或使其经历进一步的分离步骤。
在某些实施方案中,磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合配偶体、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中,磁粒通过对一种或多种标记具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中,用一抗或结合配偶体标记细胞而不是珠,然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁粒。在某些实施方案中,链霉亲和素包被的磁粒是与生物素化的一抗或二抗结合使用的。
在一些实施方案中,磁响应颗粒保持附着于细胞,所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化;在一些方面,颗粒保持附着于细胞以用于给予患者。在一些实施方案中,从细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。用于从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的,并且包括例如使用竞争性非标记抗体、可磁化颗粒或与可切割接头缀合的抗体等。在一些实施方案中,所述可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中,基于亲和力的选择是通过磁激活细胞分选(macs)(miltenyibiotec,加利福尼亚州奥本)来进行的。磁激活细胞分选(macs)系统能够高纯度选择具有附着其上的磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中,macs以如下模式操作,其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶种类和靶种类。也就是说,附着于磁化颗粒的细胞被保持在适当的位置,而未附着的种类被洗脱。然后,在完成这个第一洗脱步骤之后,以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类,使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中,标记非靶细胞并将其从异质性细胞群耗尽。
在某些实施方案中,使用这样的系统、装置或设备进行分离或分开,所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、加工、孵育、培养和/或配制步骤中的一个或多个。在一些方面,将系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个,例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中,系统是如国际专利申请公开号wo2009/072003、或us20110003380a1中所述的系统。
在一些实施方案中,系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动或可编程方式进行分离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如,全部)。在一些方面,系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序,所述计算机和/或计算机程序允许用户编程、控制、评估加工、分离、工程化和配制步骤的结果,和/或调整加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面。
在一些方面,分离和/或其他步骤是使用clinimacs系统(miltenyibiotec)来进行的,例如用于在封闭且无菌的系统中以临床规模水平自动化分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面,集成计算机控制仪器的所有部件并指示所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面,磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。蠕动泵控制整个管组的流速,并且与夹紧阀一起确保经过所述系统的缓冲液的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面,clinimacs系统使用抗体偶联的可磁化颗粒,其在无菌、无热原的溶液中提供。在一些实施方案中,在用磁粒标记细胞后,洗涤细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组,所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。管组由预装配的无菌管路(包括预柱和分离柱)组成,并且仅供一次性使用。在启动分离程序后,系统将细胞样品自动施加到分离柱上。标记的细胞保留在柱内,而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中,用于与本文所述的方法一起使用的细胞群未被标记并且不保留在柱中。在一些实施方案中,用于与本文所述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中,用于与本文所述方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱,并收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中,使用clinimacsprodigy系统(miltenyibiotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面,clinimacsprodigy系统配备有细胞加工联合体,其允许通过离心自动化洗涤和分级细胞。clinimacsprodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件,其通过辨识源细胞产品的宏观层来确定最佳细胞分级终点。例如,可以将外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。clinimacsprodigy系统还可以包括集成细胞培育室,其实现细胞培养方案,例如像细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可以允许无菌移除和补充培养基,并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如klebanoff等人(2012)jimmunother.35(9):651–660,terakura等人(2012)blood.1:72–82,和wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中,通过流式细胞术收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群,其中针对多种细胞表面标记染色的细胞携载于流体流中。在一些实施方案中,通过制备规模(facs)分选来收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群。在某些实施方案中,通过使用微机电系统(mems)芯片结合基于facs的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如wo2010/033140,cho等人(2010)labchip10,1567-1573;和godin等人(2008)jbiophoton.1(5):355-376。在两种情况下,可以用多种标记来标记细胞,从而允许以高纯度分离明确限定的t细胞子集。
在一些实施方案中,用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体,以促进分离供阳性和/或阴性选择。例如,分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中,基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞携载于流体流中,如通过荧光激活细胞分选(facs)(包括制备规模(facs))和/或微机电系统(mems)芯片,例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中,制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如,冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中,冷冻和后续解冻步骤去除细胞群中的粒细胞,并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中,例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面,可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20%dmso和8%人血清白蛋白(hsa)的pbs,或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释,使得dmso和hsa的最终浓度分别为10%和4%。然后将细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中,所提供的方法包括培育、孵育、培养和/或基因工程化步骤。例如,在一些实施方案中,提供用于孵育耗尽的细胞群和培养起始组合物和/或将它们工程化的方法。
因此,在一些实施方案中,在培养起始组合物中孵育所述细胞群。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行,所述培养容器是例如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。
在一些实施方案中,在基因工程化之前或与基因工程化结合孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。在一些实施方案中,在刺激条件或刺激剂的存在下孵育组合物或细胞。此类条件包括针对以下而设计的那些条件:诱导群体中的细胞的增殖、扩增、激活和/或存活,模拟抗原暴露,和/或引发细胞用于基因工程化(如用于引入重组抗原受体)。
条件可以包括以下中的一种或多种:特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如,营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。
在一些实施方案中,刺激条件或刺激剂包括能够激活tcr复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如,配体)。在一些方面,药剂在t细胞中开启或启动tcr/cd3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体,如对tcr具特异性的那些,例如抗cd3。在一些实施方案中,刺激条件包括能够刺激共刺激受体的一种或多种药剂(例如配体),例如抗cd28。在一些实施方案中,此类药剂和/或配体可以与固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子结合。任选地,扩增方法还可以包括向培养基中(例如,以至少约0.5ng/ml的浓度)添加抗cd3和/或抗cd28抗体的步骤。在一些实施方案中,刺激剂包括il-2、il-15和/或il-7。在一些方面,il-2浓度为至少约10单位/ml。
在一些方面,孵育是根据多种技术来进行,例如以下文献中所述的那些技术:授予riddell等人的美国专利号6,040,177;klebanoff等人(2012)jimmunother.35(9):651–660,terakura等人(2012)blood.1:72–82,和/或wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中,通过以下方式扩增t细胞:向培养起始组合物中添加饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(pbmc))(例如,使得所得细胞群含有至少约5、10、20或40种或更多种pbmc饲养细胞,以使初始群体中的每种t淋巴细胞进行扩增);以及孵育培养物(例如,持续足以扩增t细胞数的时间)。在一些方面,所述非分裂饲养细胞可以包含γ辐照的pbmc饲养细胞。在一些实施方案中,用约3000至3600拉德范围内的γ射线辐照pbmc以防止细胞分裂。在一些方面,在添加t细胞群之前将饲养细胞添加至培养基中。
在一些实施方案中,刺激条件包括适合于人t淋巴细胞生长的温度,例如至少约25摄氏度,通常为至少约30摄氏度,并且通常为或为约37摄氏度。任选地,孵育还可以包括添加非分裂ebv转化的类淋巴母细胞(lcl)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐照lcl。在一些方面,lcl饲养细胞以任何合适的量(如lcl饲养细胞与初始t淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。
在实施方案中,通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性t淋巴细胞获得抗原特异性t细胞,如抗原特异性cd4+和/或cd8+t细胞。例如,可以通过从被感染的受试者分离t细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞,针对巨细胞病毒抗原来产生抗原特异性t细胞系或克隆。
c.用于多靶向的工程化细胞、载体和组合物
还提供可以结合和/或靶向多种抗原的细胞,如工程化细胞。在一些实施方案中,通过靶向多种抗原的策略实现改善的选择性和特异性。此类策略通常涉及多个抗原结合结构域,其通常存在于不同的基因工程化抗原受体上并特异性地结合不同的抗原。在一些实施方案中,将细胞工程化为具有结合多于一种抗原的能力。例如,在一些实施方案中,将细胞工程化为表达多特异性结合分子。在一些实施方案中,细胞表达多种结合分子(例如重组受体),其每一种都可以靶向一种抗原或多种抗原,例如一种受体(如本文所述的任何一种)靶向bcma且另一种受体靶向另一种抗原(例如肿瘤抗原)。在一些方面,将与不同抗原特异地结合的多种基因工程化抗原受体引入细胞中,所述不同抗原中的每一种在将被细胞或组织或其细胞靶向的疾病或病症之中或之上表达。在一些方面,此类特征可以解决脱靶效应或减少脱靶效应的可能性或增加功效。例如,在疾病或病症中表达的单个抗原也在非患病或正常细胞之上或之中表达的情况下,此类多靶向方法可以通过要求经由多种抗原受体结合来激活细胞或诱导特定效应子功能,从而提供对所需细胞类型的选择性。在一些实施方案中,可以将多种细胞工程化为表达一种或多种不同的结合分子(例如重组受体),其每一种都可以靶向一种抗原或多种抗原。
还提供含有本文所述的任何结合分子的多特异性细胞,例如含有细胞表面蛋白(包括抗bcma抗体)和与不同抗原或bcma上的不同表位结合的另外的细胞表面蛋白(如另外的嵌合受体)的细胞。在一些实施方案中,提供表达重组受体的细胞的组合物,其中结合分子、多特异性结合分子和/或重组受体中的一种或多种结合和/或靶向bcma。还提供含有多种细胞的细胞组合物,所述多种细胞表达可以靶向一种或多种抗原的一种或多种不同的结合分子,例如重组受体。在一些实施方案中,多特异性结合分子和/或重组受体靶向bcma上的一个或多个不同的表位。
在一些实施方案中,提供细胞的组合物,其中每种类型的细胞表达一种或多种结合分子,例如重组受体。在一些实施方案中,细胞包含(例如,已经用以下项转化)一种或多种载体,所述一种或多种载体包含编码一种或多种氨基酸序列的一种或多种核酸,所述一种或多种氨基酸序列包含一种或多种抗体和/或其部分(例如其抗原结合片段)。在一些实施方案中,提供一种或多种此类细胞。在一些实施方案中,提供含有一种或多种此类细胞的组合物。在一些实施方案中,所述一种或多种细胞可以表达不同的抗体或相同的抗体。在一些实施方案中,每种细胞表达一种或多种抗体,如多于一种抗体。在一些实施方案中,每种细胞表达多特异性结合分子,例如多特异性受体,例如car。
在一些实施方案中,细胞包括靶向bcma和与特定疾病或病症相关的第二或另外的抗原的多靶向策略。在一些实施方案中,第二或另外的抗原被多特异性结合分子和/或多种结合分子和/或多种细胞(例如,一种或多种细胞)靶向,每种细胞被工程化为表达一种或多种重组受体。在一些实施方案中,靶向第二或另外的抗原的重组受体在与bcma结合分子相同的细胞上或在不同的细胞上表达。
在一些实施方案中,用于多靶向策略的第二或另外的抗原包括其中至少一种抗原是通用肿瘤抗原或其家族成员的那些抗原。在一些实施方案中,所述第二或另外的抗原是在肿瘤上表达的抗原。在一些实施方案中,本文提供的bcma结合分子靶向与所述第二或另外的抗原相同的肿瘤类型上的抗原。在一些实施方案中,所述第二或另外的抗原也可以是通用肿瘤抗原或可以是对肿瘤类型具有特异性的肿瘤抗原。在一些实施方案中,细胞进一步包含识别在待治疗的疾病或病症上表达的第二或另外的抗原并诱导刺激或激活信号的另外的基因工程化抗原受体。
示例性抗原包括cd4、cd5、cd8、cd14、cd15、cd19、cd20、cd21、cd22、cd23、cd25、cd33、cd37、cd38、cd40、cd40l、cd46、cd52、cd54、cd74、cd80、cd126、cd138、b7、muc-1、ia、hm1.24、hla-dr、腱生蛋白、血管生成因子、vegf、pigf、ed-b纤连蛋白、致癌基因、致癌基因产物、cd66a-d、坏死抗原、ii、il-2、t101、tac、il-6、ror1、trail-r1(dr4)、trail-r2(dr5)、b细胞成熟抗原(bcma)、tegfr、her2、l1-cam、间皮素、cea、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd24、cd30、cd44、egfr、egp-2、egp-4、epha2、erbb2、erbb3、erbb4、erbb二聚体、egfrviii、fbp、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、kdr、κ轻链、lewisy、l1-细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、黑色素瘤优先表达抗原(prame)、生存素、egp2、egp40、tag72、b7-h6、il-13受体a2(il-13ra2)、ca9、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、双抗原、与通用标签相关的抗原、癌症-睾丸抗原、muc1、muc16、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、htert、mdm2、cyp1b、wt1、活素、afp、p53、细胞周期蛋白(d1)、cs-1、bcma、baff-r、taci、cd56、tim-3、cd123、l1-细胞粘附分子、mage-a1、magea3、细胞周期蛋白(如细胞周期蛋白a1(ccna1))和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由hiv、hcv、hbv和/或其他病原体表达的分子;和/或在一些方面,其新表位或新抗原。在一些实施方案中,抗原与通用标签相关或者是通用标签。
在一些实施方案中,所述多种抗原(例如,第一抗原(例如bcma)和第二或另外的抗原)在所靶向的细胞、组织或者疾病或病症上(例如在癌细胞上)表达。在一些方面,细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。所述多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(如正常或未患病细胞或组织)和/或工程化细胞本身上表达。在此类实施方案中,通过需要连接多种受体以实现细胞的反应,实现了特异性和/或功效。
在一些方面,抗原(例如第二或另外的抗原,如疾病特异性抗原和/或相关抗原,如cd38(环状adp核糖水解酶)、cd138(多配体聚糖-1、多配体聚糖,syn-1)、cs-1(cs1、cd2子集1、cracc、slamf7、cd319和19a24)、baff-r、taci和/或fcrh5)在多发性骨髓瘤上表达。其他示例性多发性骨髓瘤抗原包括cd56、tim-3、cd33、cd123、cd44、cd20、cd40、cd74、cd200、egfr、β2-微球蛋白、hm1.24、igf-1r、il-6r、trail-r1和iia型激活素受体(actriia)。参见benson和byrd,j.clin.oncol.(2012)30(16):2013-15;tao和anderson,bonemarrowresearch(2011):924058;chu等人,leukemia(2013)28(4):917-27;garfall等人,discovmed.(2014)17(91):37-46。在一些实施方案中,抗原包括存在于淋巴肿瘤、骨髓瘤、aids相关的淋巴瘤和/或移植后淋巴组织增生上的抗原,如cd38。针对此类抗原的抗体或抗原结合片段是已知的,并且包括例如在美国专利号8,153,765;8,603477、8,008,450;美国公开号us20120189622或us20100260748;和/或国际pct公开号wo2006099875、wo2009080829或wo2012092612或wo2014210064中所述的那些。在一些实施方案中,在多特异性抗体、多特异性嵌合受体(如多特异性car)和/或多特异性细胞中包含此类抗体或其抗原结合片段(例如scfv)。
在一些实施方案中,所述细胞和方法包括多靶向策略,如例在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体,每种受体识别不同的抗原并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中:国际专利申请公开号wo2014055668a1(描述激活和共刺激car的组合,例如,靶向单独存在于脱靶(例如正常细胞)上,但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和fedorov等人,sci.transl.medicine,5(215)(2013年12月)(描述表达激活和抑制性car的细胞,例如这样的细胞,其中激活car与同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原结合,并且抑制性car与仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原结合)。
在一些实施方案中,提供多种细胞,每种细胞被工程化为表达一种或多种重组受体。例如,在一些实施方案中,将一种细胞工程化为表达结合和/或靶向bcma的结合分子,并且将另一种细胞工程化为表达结合和/或靶向另外或第二抗原的结合分子。在一些实施方案中,细胞可以各自表达多特异性结合分子,例如多特异性重组受体,其中靶抗原中的一种或多种是bcma。在一些此类实施方案中,所述多种细胞可以一起或单独给予。在一些实施方案中,所述多种细胞中的一些与其他细胞同时或并行地给予,例如与所述多种细胞中的另一种工程化细胞在同一天和/或以任何顺序依次或间歇地给予。例如,在一些实施方案中,将表达bcma结合分子(例如car)的工程化细胞与表达结合不同靶抗原或bcma上的不同表位的结合分子的另一种工程化细胞同时或以任何顺序依次给予。在一些实施方案中,所述多种细胞可以在同一组合物中或在不同组合物中。细胞的示例性组合物包括以下章节ii中所描述的组合物。
ii.药物组合物
还提供包含bcma结合分子、免疫缀合物、重组受体和工程化细胞的组合物,包括药物组合物和配制品。
提供药物配制品,其包含bcma结合分子(例如抗体)、免疫缀合物、重组受体(例如嵌合抗原受体)、表达所述分子(例如重组受体)的工程化细胞、表达所述分子(例如重组受体)的多种工程化细胞和/或用于组合治疗或疗法的另外的药剂。药物组合物和配制品通常包含一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中,所述组合物包含至少一种另外的治疗剂。
术语“药物配制品”是指这样的制剂,其所采取的形式允许其中所含活性成分的生物活性有效,并且其不含对待给予所述配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些方面中,载体的选择部分地由特定细胞、结合分子和/或抗体和/或由给予方法决定。因此,存在多种合适的配制品。例如,药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面,使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001%至约2%的量存在。载体描述于例如remington’spharmaceuticalsciences第16版,osol,a.编辑(1980)中。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒,并且包括但不限于:缓冲剂,如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵;六甲氯铵;苯扎氯铵;苄索氯铵;苯酚、丁醇或苄醇;烷基对羟基苯甲酸酯,如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯;儿茶酚;间苯二酚;环己醇;3-戊醇;和间甲酚);低分子量(少于约10个残基)多肽;蛋白质,如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其他碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,如edta;糖类,如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇;成盐抗衡离子,如钠;金属络合物(例如锌-蛋白质络合物);和/或非离子表面活性剂,如聚乙二醇(peg)。
在一些方面,组合物中包含缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面,使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001%至约4%的量存在。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincottwilliams&wilkins;第21版(2005年5月1日)中。
本文所述的抗体配制品可以包括冻干配制品和水性溶液。
配制品或组合物还可以含有可用于用结合分子或细胞治疗的特定适应症、疾病或病症的多于一种的活性成分,优选地具有与结合分子或细胞互补的活性的那些,其中各活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量合适地组合存在。因此,在一些实施方案中,药物组合物还包含其他药物活性剂或药物如化学治疗剂,例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、道诺霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。在一些实施方案中,所述细胞或抗体以盐(例如药学上可接受的盐)的形式给予。合适的药学上可接受的酸加成盐包括衍生自以下的那些:无机酸,如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸,硝酸和硫酸;以及有机酸,如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸,例如对甲苯磺酸。
可以将活性成分包埋在微胶囊、胶体药物递送系统(例如,脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳液中。在某些实施方案中,将药物组合物配制为包合物(如环糊精包合物)或配制成脂质体。脂质体可以用于将宿主细胞(例如,t细胞或nk细胞)靶向特定组织。许多方法可用于制备脂质体,例如在例如以下参考文献中所述的那些方法:szoka等人,ann.rev.biophys.bioeng.,9:467(1980);以及美国专利4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369。
在一些方面,药物组合物可以利用定时释放、延迟释放和持续释放递送系统,使得所述组合物的递送发生在待治疗部位的致敏之前并且有足够的时间引起致敏。许多类型的释放递送系统是可用的且已知的。此类系统可以避免重复给予所述组合物,从而增加对受试者和医师的便利性。
在一些实施方案中,药物组合物含有有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)的结合分子和/或细胞。在一些实施方案中,通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给予,根据病症,重复所述治疗直至出现疾病症状的所需抑制为止。然而,其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注给予组合物、通过多次推注给予组合物或通过连续输注给予组合物来递送。
在某些实施方案中,在含有结合分子的基因工程化细胞的情境下,向受试者给予以下范围的细胞:约一百万至约1000亿个细胞(例如100万至约500亿个细胞(例如,约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值限定的范围),如约1000万至约1000亿个细胞(例如,约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值限定的范围),并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如,约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或在这些范围之间的任何值和/或每千克受试者体重的这种数量的细胞。
可以使用标准给予技术、配制品和/或装置来给予细胞。提供用于储存和给予组合物的配制品和装置,如注射器和小瓶。细胞的给予可以是自体的或异源的。例如,免疫反应性细胞或祖细胞可以从一名受试者获得,并给予至同一受试者或不同的相容受试者。外周血衍生的免疫应答细胞或其后代(例如,体内、离体或体外衍生的)可以通过局部注射给予,包括导管给予、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给予。在给予治疗组合物(例如,含有经基因修饰的免疫应答细胞的药物组合物)时,通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予的那些。在一些实施方案中,肠胃外地给予细胞群。如本文所用,术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道、颅内、胸腔内和腹膜内给予。在一些实施方案中,通过静脉内、腹膜内或皮下注射使用外周全身递送向受试者给予细胞群。
在一些实施方案中,组合物作为无菌液体制剂(例如,等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物,其在一些方面可以缓冲至所选ph)提供。液体制剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外地,液体组合物稍微更方便给予,特别是通过注射。在另一方面,粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内,以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体,所述载体可以是溶剂或分散介质,所述溶剂或分散介质含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如,甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过将结合分子掺入溶剂中来制备,例如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。组合物也可以是冻干的。组合物可以含有辅助物质,如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如,甲基纤维素)、ph缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、着色剂等,这取决于给予途径和所需的制剂。在一些方面,可以查阅标准文本来制备合适的制剂。
可以添加增强组合物的稳定性和无菌性的各种添加剂,包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如,对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸等)来确保防止微生物的作用。可以通过使用延迟吸收的药剂(例如,单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质,所述基质呈成型制品(例如薄膜)或微胶囊的形式。
用于体内给予的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌性。
还提供用于组合疗法的药物组合物。可以制备本文所述的用于组合疗法的任何另外的药剂(例如章节iii.b中所述的药剂),并将其与本文所述的bcma结合分子(例如抗体)、免疫缀合物、重组受体(例如嵌合抗原受体)和/或表达所述分子(例如重组受体)的工程化细胞一起作为一种或多种药物组合物来给予。可以将组合疗法在一种或多种药物组合物中给予,例如,其中结合分子、重组受体和/或细胞与另外的药剂在同一药物组合物中或在单独的药物组合物中。例如,在一些实施方案中,另外的药剂是另外的工程化细胞(例如被工程化为表达靶向不同抗原或bcma上的不同表位的不同重组受体的细胞)并在同一组合物或在单独的组合物中式给予。在一些实施方案中,根据特定的结合分子、重组受体、细胞(例如工程化细胞)和/或另外的药剂、以及特定的剂量方案和/或递送方法,将每种药物组合物配制成合适的配制品。
iii.方法和用途
还提供使用bcma结合分子、免疫缀合物、重组受体、工程化细胞及其药物组合物和配制品的方法(如治疗方法),以及bcma结合分子、免疫缀合物、重组受体、工程化细胞及其药物组合物和配制品例如在治疗其中表达bcma的疾病、病症和障碍中、和/或在检测、诊断和预后方法中的用途。还提供组合疗法和/或治疗的方法。
a.治疗和预防方法及用途
还提供bcma结合分子(包括抗bcma抗体(例如抗体片段)和含有其的蛋白质如重组受体(例如car))、表达重组受体(例如car)的工程化细胞、表达受体的多种工程化细胞和/或包含上述各项的组合物的给予方法和用途(如治疗和预防用途)。此类方法和用途包括例如涉及向受试者给予分子(例如,bcma结合分子、重组受体)、细胞(例如,工程化细胞)或含有所述分子、所述细胞的组合物的治疗方法和用途,所述受试者患有与bcma相关的疾病、病症或障碍,例如与bcma表达相关和/或其中细胞或组织表达(例如特异性地表达)bcma的疾病、病症或障碍。在一些实施方案中,以实现所述疾病或障碍的治疗的有效量给予所述分子、细胞和/或组合物。本文提供结合分子(例如抗bcma抗体或其抗原结合片段)、重组受体(例如car)和细胞(例如工程化细胞)在此类方法和治疗中以及在制备药物以便执行此类治疗方法中的用途。在一些实施方案中,通过向患有、已经患有或怀疑患有疾病或病症的受试者给予结合分子或细胞或包含所述结合分子或所述细胞的组合物来执行所述方法。在一些实施方案中,所述方法由此治疗所述受试者的所述疾病或病症或障碍。本文还提供任何组合物(如本文所提供的药物组合物)用于治疗与bcma相关的疾病或障碍(例如多发性骨髓瘤)的用途。
如本文所用,“治疗”(“treatment”)(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与其相关的症状、不良作用或结果、或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓和症状、减少疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用,“延迟疾病的发生”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发生。这种延迟可以具有不同的时间长度,这取决于病史和/或所治疗的受试者。对本领域技术人员而言清楚的是,足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防,因为受试者不会患上疾病。例如,可以延迟晚期癌症,如转移的发生。
如本文所用,“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防,所述受试者可能易患上所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中,将所提供的分子和组合物用于延迟疾病的发生或减缓疾病的进展。
如本文所用,“抑制”功能或活性是当与除目标条件或参数以外的原本相同的条件相比时,或者可替代地如与另一种条件相比时,降低功能或活性。例如,与不存在抗体或组合物或细胞的情况下的肿瘤生长速率相比,抑制肿瘤生长的抗体或组合物或细胞降低肿瘤的生长速率。
在给予的情境下,药剂(例如,药物配制品、结合分子、抗体、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如药物配制品、结合分子、抗体、细胞或组合物)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下的因素而变化:疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、和所给予的细胞群。在一些实施方案中,所提供的方法涉及以有效量(例如,治疗有效量)给予分子、抗体、细胞和/或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的,因为预防剂量是在疾病之前或较早阶段在受试者中使用的,所以预防有效量将小于治疗有效量。
如本文所用,“受试者”或“个体”是哺乳动物。在一些实施方案中,“哺乳动物”包括人、非人灵长类动物、家畜和农场动物,以及动物园、运动或宠物动物,如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫、猴等。在一些实施方案中,受试者是人。
待治疗的疾病包括与bcma相关的任何疾病或障碍,或其中特异性地表达bcma和/或其中bcma已被靶向用于治疗的任何疾病或障碍(在本文中也可互换地称为“bcma相关疾病或障碍”)。与bcma表达相关的癌症包括血液恶性肿瘤,如多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症以及霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤二者。关于bcma的综述,参见coquery等人,critrevimmunol.,2012,32(4):287-305。由于bcma已参与介导肿瘤细胞的存活,因此它是癌症疗法的潜在靶标。先前已经描述过抗bcma抗体,如抑制性抗bcma抗体sg1,其促进表达bcma的多发性骨髓瘤细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。参见ryan等人,molcancerther.,2007,6(11):3009-3018和国际pct公开号wo2010/104949。先前也已经描述过含有小鼠抗人bcma抗体的嵌合抗原受体和表达此类嵌合受体的细胞。参见carpenter等人,clincancerres.,2013,19(8):2048-2060。
在一些实施方案中,与bcma相关的疾病或障碍是b细胞相关障碍。在一些实施方案中,与bcma相关的疾病或障碍是选自以下中的一种或多种疾病或病症:胶质母细胞瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、移植后淋巴增生性障碍、免疫调节性障碍、重链疾病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性、或意义不明的单克隆丙种球蛋白病。
在一些实施方案中,与bcma相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。此类自身免疫性疾病或障碍包括但不限于系统性红斑狼疮(sle)、狼疮性肾炎、炎性肠病、类风湿性关节炎(例如青少年类风湿性关节炎)、anca相关性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(itp)、血栓性血小板减少性紫癜(ttp)、自身免疫性血小板减少症、查加斯病(chagas’disease)、格雷夫斯病(grave’sdisease)、韦格纳氏肉芽肿病(wegener’sgranulomatosis)、结节性多动脉炎、舍格伦综合征(sjogren’ssyndrome)、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、牛皮癣、iga肾病、igm多发性周围神经病变、血管炎、糖尿病、雷诺综合征(reynaud’ssyndrome)、抗磷脂综合征、古德帕斯丘病(goodpasture’sdisease)、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力或进行性肾小球肾炎。
在某些疾病和病症中,bcma在恶性细胞和癌症上表达。在一些实施方案中,癌症(例如表达bcma的癌症)是b细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中,癌症(例如表达bcma的癌症)是白血病(例如b细胞白血病)、淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等)或骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(mm)、浆细胞恶性肿瘤(例如浆细胞瘤))。本文中考虑的淋巴瘤包括但不限于伯基特淋巴瘤(例如,地方性伯基特淋巴瘤或散发性伯基特淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样b细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺b细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)或套细胞淋巴瘤(mcl)。此处考虑的白血病包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病(cll)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(all)。本文还考虑骨髓瘤,例如多发性骨髓瘤(mm,例如,非分泌性多发性骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤)。本文还考虑浆细胞恶性肿瘤,包括但不限于浆细胞瘤。可以被治疗的与bcma相关的疾病、障碍或病症(例如,表达bcma的癌症)包括但不限于神经母细胞瘤、肾细胞癌、结肠癌、结直肠癌、乳腺癌、上皮鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、胃癌、脑癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、肾上腺癌和头颈癌。
在一些实施方案中,所述方法可以鉴定患有、怀疑患有或有风险患上与bcma相关的疾病或障碍的受试者。因此,提供用于鉴定患有与bcma表达升高相关的疾病或障碍的受试者并选择他们来用所提供的bcma结合分子(包括任何抗bcma抗体(例如抗体片段)和含有其的蛋白质(如重组受体(例如car))和/或表达重组受体的工程化细胞进行治疗的方法。
例如,可以对受试者筛选与bcma表达升高相关的疾病或障碍(如表达bcma的癌症)的存在。在一些实施方案中,所述方法包括筛选或检测bcma相关疾病(例如肿瘤)的存在。因此,在一些方面,可以从怀疑患有与bcma表达升高相关的疾病或障碍的患者获得样品,并对其测定bcma的表达水平。在一些方面,可以选择测试为对于bcma相关的疾病或障碍呈阳性的受试者进行通过本发明方法的治疗,并且可以向其给予治疗有效量的如本文所述的bcma结合分子(例如抗bcma抗体或其抗原结合片段)、包含bcma结合分子的重组受体(例如car)、含有重组受体的细胞或其药物组合物。在一些实施方案中,可以将所述方法用于监测表达bcma的组织(例如肿瘤)随时间推移(例如在通过所述方法治疗之前、期间或之后)的大小或密度。
在一些实施方案中,例如在用另一种bcma特异性抗体和/或表达靶向bcma的嵌合受体的细胞和/或其他疗法(包括化学疗法、辐射和/或造血干细胞移植(hsct)(例如同种异体hsct))治疗之后,受试者患有顽固性或复发性疾病。在一些实施方案中,尽管受试者已经对另一种bcma靶向疗法产生抗性,但给予仍有效地治疗所述受试者。在一些实施方案中,受试者尚未复发,但是被确定为具有复发风险(例如具有高复发风险),因此预防性地给予化合物或组合物,例如以降低复发的可能性或防止复发。
在一些实施方案中,治疗不诱导受试者对疗法的免疫应答,和/或诱导这样的应答没有达到阻止疾病或病症的有效治疗的程度。在一些方面,免疫原性和/或移植物抗宿主应答的程度小于用不同但可比较的治疗所观察到的程度。例如,与包含结合与所提供抗体(如小鼠或猴或兔或人源化抗体)相似的(例如重叠的)表位和/或竞争结合bcma的不同抗体的car相比,在使用表达包含所提供的抗bcma抗体的car的细胞的过继细胞疗法的情况下,在一些实施方案中免疫原性的程度降低。
在一些实施方案中,所述方法包括过继细胞疗法,由此将表达包含bcma结合分子的所提供的重组受体(例如,包含抗bcma抗体或其抗原结合片段的car)的基因工程化细胞给予至受试者。这种给予能以bcma靶向的方式促进细胞激活(例如,t细胞激活),使得疾病或障碍的细胞被靶向进行破坏。
因此,所提供的方法和用途包括用于过继细胞疗法的方法和用途。在一些实施方案中,所述方法包括将细胞、多种细胞、含有所述细胞或所述多种细胞的组合物给予至受试者、组织或细胞,例如患有、有风险患上或怀疑患有疾病、病症或障碍的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中,将细胞、群体和组合物给予至患有将要例如通过过继细胞疗法(如过继t细胞疗法)治疗的特定疾病或病症的受试者。在一些实施方案中,将细胞或组合物给予至受试者,例如患有或有风险患上疾病或病症的受试者。在一些方面,所述方法由此治疗疾病或病症(例如,改善其一种或多种症状),例如通过减轻表达bcma的癌症中的肿瘤负荷来治疗。
用于过继细胞疗法的细胞的给予方法是已知的,并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。例如,过继t细胞治疗方法描述于例如授予gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238;授予rosenberg的美国专利号4,690,915;rosenberg(2011)natrevclinoncol.8(10):577-85中。参见例如themeli等人(2013)natbiotechnol.31(10):928-933;tsukahara等人(2013)biochembiophysrescommun438(1):84-9;davila等人(2013)plosone8(4):e61338。
在一些实施方案中,细胞疗法(例如过继细胞疗法,例如过继t细胞疗法)通过自体转移进行,其中从接受所述细胞疗法的受试者或从衍生自这种受试者的样品中分离和/或以其他方式制备细胞。因此,在一些方面,细胞源自需要治疗的受试者(例如患者),并且在分离和加工后将所述细胞给予至同一受试者。
在一些实施方案中,细胞疗法(例如过继细胞疗法,例如过继t细胞疗法)通过同种异体转移进行,其中从除了将要接受或最终接受所述细胞疗法的受试者以外的受试者(例如第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中,然后将细胞给予至相同物种的不同受试者,例如第二受试者。在一些实施方案中,第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中,第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中,第二受试者表达与第一受试者相同的hla类别或超型。
在一些实施方案中,给予细胞、细胞群或组合物的受试者是灵长类动物,如人。在一些实施方案中,给予细胞、细胞群或组合物的受试者是非人灵长类动物。在一些实施方案中,非人灵长类动物是猴(例如食蟹猴)或猿。受试者可以是雄性或雌性,并且可以是任何合适的年龄,包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中,受试者是非灵长类哺乳动物,如啮齿动物(例如小鼠、大鼠等)。在一些例子中,患者或受试者是用于疾病、过继细胞疗法和/或用于评估毒性结果(如细胞因子释放综合征(crs))的经验证的动物模型。
bcma结合分子(如抗体、含有所述抗体的重组受体(例如car))和表达bcma结合分子的细胞可以通过任何合适的方式给予,例如通过注射,例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房内注射、结膜下注射(subconjunctivalinjection,subconjunctivalinjection)、眼球筋膜下(sub-tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中,它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、颅内、胸腔内或皮下给予。给药和给予可以部分取决于给予是短暂的还是长期的。各种给药时间表包括但不限于在不同时间点的单次或多次给予、推注给予和脉冲输注。
为了预防或治疗疾病,结合分子、重组受体或细胞的适当剂量可以取决于待治疗的疾病类型、结合分子或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、给予结合分子或重组受体是出于预防目的还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对结合分子、重组受体或细胞的反应以及主治医师的决断。在一些实施方案中,组合物和分子和细胞合适地一次或在一系列治疗中给予至患者。
取决于疾病的类型和严重程度,结合分子(例如抗bcma抗体或其抗原结合片段)或重组受体的剂量可以包括约1μg/kg至约15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)、约1μg/kg至约100mg/kg、约0.05mg/kg至约10mg/kg、约0.5mg/kg、约2.0mg/kg、约4.0mg/kg或约10mg/kg。可以间歇地(例如每周一次或每三周一次)给予多个剂量。可以给予初始较高负荷剂量,接着给予一个或多个较低剂量。
在某些实施方案中,在含有结合分子或重组受体的基因工程化细胞的情境下,向受试者给予以下范围的细胞:约一百万至约1000亿个细胞和/或每千克体重的该细胞量,例如100万至约500亿个细胞(例如,约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值限定的范围),如约1000万至约1000亿个细胞(例如,约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值限定的范围),并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如,约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或在这些范围和/或每公斤体重的这些范围之间的任何值。同样,剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特定的属性而变化。
在一些实施方案中,例如,在受试者是人的情况下,剂量包括少于约1x108个总重组受体(例如,car)表达细胞、t细胞或外周血单核细胞(pbmc),例如在约1x106至1x108个此类细胞的范围内,如2x106、5x106、1x107、5x107或1x108个总此类细胞,或任两个前述值之间的范围内。
在一些方面,所述剂量的大小基于一个或多个标准来确定,如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如,crs、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面,剂量的大小由受试者的疾病或病症的负荷决定。例如,在一些方面,在剂量中给予的细胞数量基于就在所述细胞剂量开始给予之前在受试者中存在的肿瘤负荷来确定。在一些实施方案中,第一剂量和/或随后剂量的大小与疾病负荷呈逆相关。在一些方面,如在疾病负荷大的情境下,向受试者给予少量的细胞。在其他实施方案中,如在疾病负荷较低的情境下,向受试者给予较大量的细胞。
在一些实施方案中,将细胞、结合分子或重组受体作为组合治疗的一部分与另一种治疗性干预(如另一种抗体或工程化细胞或受体或药剂,如细胞毒性剂或治疗剂,如章节i.c或iii.b中所述的任何一种)例如同时或以任何顺序依次给予。
在一些实施方案中,细胞、结合分子和/或重组受体是与一种或多种另外的治疗剂或结合另一种治疗性干预同时或以任何顺序依次共给予。在一些情境下,细胞是与另一种疗法共给予,其时间足够接近,使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的作用,或反之亦然。在一些实施方案中,在所述一种或多种另外的治疗剂之前给予细胞、结合分子和/或重组受体。在一些实施方案中,在所述一种或多种另外的治疗剂之后给予细胞、结合分子和/或重组受体。
在将细胞给予至哺乳动物(例如人)后,工程化细胞群和/或抗体的生物活性在一些方面通过许多已知方法中的任何一种来测量。待评估的参数包括工程化或天然t细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合,其在体内例如通过成像进行评估,或离体例如通过elisa或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中,工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用本领域已知的任何合适的方法来测量,所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定:kochenderfer等人,j.immunotherapy,32(7):689-702(2009),和herman等人j.immunologicalmethods,285(1):25-40(2004)中。在某些实施方案中,还可以通过测定某些细胞因子(如cd107a、ifnγ、il-2和tnf)的表达和/或分泌来测量所述细胞的生物活性。在一些方面,生物学活性是通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量。
在某些实施方案中,工程化细胞以任何数量的方式进行修饰,使得其治疗或预防功效增加。例如,在一些实施方案中,将由群体表达的工程化car或tcr直接或通过接头间接与靶向部分缀合。将化合物(例如car或tcr)与靶向部分缀合的实践在本领域是已知的。参见例如wadwa等人,j.drugtargeting,3(2):111(1995)和美国专利5,087,616。
b.组合疗法
还提供组合疗法的方法,所述组合疗法包括bcma结合分子(包括抗bcma抗体(例如抗体片段)和含有抗bcma抗体的蛋白质如重组受体(例如car))、表达重组受体(例如car)的工程化细胞、表达受体的多种工程化细胞和/或包含上述各项的组合物的给予和用途(如治疗和预防用途)。
在一些实施方案中,将本文所述的bcma结合分子(例如抗体)、免疫缀合物、重组受体(例如嵌合抗原受体)和/或表达所述分子(例如重组受体)的工程化细胞作为组合治疗或组合疗法的一部分例如与一种或多种另外的治疗性干预同时、以任何顺序依次或间歇地给予。在一些实施方案中,所述一种或多种另外的治疗性干预包括例如抗体、工程化细胞、受体和/或药剂(如表达重组受体的细胞和/或细胞毒性剂或治疗剂(例如化学治疗剂))。在一些实施方案中,组合疗法包括给予一种或多种另外的药剂、疗法和/或治疗,例如本文所述的另外的药剂、疗法和/或治疗中的任何一种。在一些实施方案中,组合疗法包括给予用于治疗或疗法的一种或多种另外的药剂,如免疫调节剂、免疫检查点抑制剂、腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂和激酶抑制剂。在一些实施方案中,组合治疗或组合疗法包括另外的治疗,如手术治疗、移植和/或放射疗法。还提供组合治疗或组合疗法的方法,所述组合治疗或组合疗法包括给予本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物、以及一种或多种另外的治疗性干预。
在一些实施方案中,用于组合治疗或组合疗法的另外的药剂增强、加强和/或促进结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的治疗作用的功效和/或安全性。在一些实施方案中,另外的药剂增强或改善所给予的细胞(例如表达结合分子或重组受体的细胞)的功效、存活或持久性。在一些实施方案中,另外的药剂选自蛋白磷酸酶抑制剂、激酶抑制剂、细胞因子、免疫调节剂或降低调节性t(treg)细胞的水平或活性的药剂。在一些实施方案中,另外的药剂通过减少或改善所给予的结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的不良反应而增强安全性。在一些实施方案中,另外的药剂可以治疗同一疾病、病症或共病(comorbidity)。在一些实施方案中,另外的药剂可以改善、减少或消除与结合分子、重组受体、细胞和/或组合物(例如表达car的细胞)的给予相关的一种或多种毒性、不良反应或副作用。
在一些实施方案中,另外的疗法、治疗或药剂包括化学疗法、放射疗法、手术、移植、过继细胞疗法、抗体、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂、保心药、免疫刺激剂、免疫抑制剂、免疫检查点抑制剂、抗生素、血管发生抑制剂、代谢调节剂或其他治疗剂或其任何组合。在一些实施方案中,另外的药剂是蛋白质、肽、核酸、小分子药剂、细胞、毒素、脂质、碳水化合物或其组合,或任何其他类型的治疗剂,例如辐射。在一些实施方案中,另外的疗法、药剂或治疗包括手术、化学疗法、放射疗法、移植、给予表达重组受体(例如car)的细胞、激酶抑制剂、免疫检查点抑制剂、mtor途径抑制剂、免疫抑制剂、免疫调节剂、抗体、免疫清除剂、抗体和/或其抗原结合片段、抗体缀合物、其他抗体疗法、细胞毒素、类固醇、细胞因子、肽疫苗、激素疗法、抗代谢物、代谢调节剂、抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶或p70s6激酶fk506或抑制p70s6激酶的药物、烷化剂、蒽环类、长春花生物碱、蛋白酶体抑制剂、gitr激动剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、溶瘤病毒和/或其他类型的免疫疗法。在一些实施方案中,另外的药剂或治疗是骨髓移植、使用化学治疗剂(如氟达拉滨)的t细胞清除疗法、外线束放射疗法(xrt)、环磷酰胺和/或抗体疗法。
在一些实施方案中,将细胞、结合分子(例如,bcma结合分子)、重组受体和/或组合物(例如表达car的细胞)与其他工程化细胞(例如其他表达car的细胞)组合给予。在一些实施方案中,另外的药剂是激酶抑制剂,例如,布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂,例如,依鲁替尼。在一些实施方案中,另外的药剂是腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂。在一些实施方案中,另外的药剂是免疫调节剂,如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如,来那度胺)。在一些实施方案中,另外的疗法、药剂或治疗是细胞毒性剂或化学治疗剂、生物疗法(例如,抗体,例如,单克隆抗体,或细胞疗法)或抑制剂(例如,激酶抑制剂)。
在一些实施方案中,向受试者给予化学治疗剂(有时称为细胞毒性剂)以破坏病灶。在某些实施方案中,病灶是肿瘤。在特定实施方案中,病灶是癌性的。在特定实施方案中,化学治疗剂是本领域技术人员已知的对于过度增殖性障碍(如癌症)的治疗、预防或改善有效的任何药剂。化学治疗剂包括但不限于小分子、合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(例如,dna和rna多核苷酸,其包括但不限于编码生物活性蛋白质、多肽或肽的反义核苷酸序列、三螺旋和核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂和合成或天然有机分子。在特定实施方案中,化学治疗药物包括烷化剂、蒽环类、细胞骨架破坏剂(紫杉烷类)、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶ii抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物和前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂以及长春花生物碱和衍生物。
在某些实施方案中,通过给予化学治疗剂破坏病灶以在体内调节基因工程化细胞。化学治疗剂可以包括但不限于阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维a酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活性bcg、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、阿法达贝泊汀、道诺霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西紫杉醇、多柔比星、屈他雄酮、elliott'sb溶液、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿嘧啶、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉西他滨、吉妥珠单抗奥佐米星、吉非替尼、戈舍瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸、左旋咪唑、洛莫司汀、氯硝胺(meclorethamine)、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲氧沙林、甲基泼尼松龙、丝裂霉素c、米托坦、米托蒽醌、诺龙、诺菲单抗、奥利美生、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、培加酶、培门冬酶、培非格司亭、培美曲塞、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、聚苯丙生、卟菲尔钠、丙卡巴肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、链脲佐菌素、滑石、他莫昔芬、特罗凯、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、噻替哌、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维a酸、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨和唑来膦酸盐。
在一些实施方案中,示例性化学治疗剂包括蒽环类(例如多柔比星,如脂质体多柔比星);长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨);烷化剂(例如环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、异环磷酰胺、替莫唑胺);免疫细胞抗体(例如阿仑单抗、吉妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗);抗代谢物(包括例如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂如氟达拉滨);tnfr糖皮质激素诱导的tnfr相关蛋白(gitr)激动剂;蛋白酶体抑制剂(例如阿克拉霉素a、胶霉毒素或硼替佐米);免疫调节剂,如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如来那度胺)。
在一些实施方案中,另外的疗法或治疗是细胞疗法,例如过继细胞疗法。在一些实施方案中,另外的疗法包括给予工程化细胞,例如另外的表达car的细胞。在一些实施方案中,另外的工程化细胞是表达car的细胞,所述表达car的细胞表达与本文提供的工程化细胞(例如表达抗bcmacar的细胞)相同或不同的重组受体。在一些实施方案中,在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如car)识别不同的抗原和/或表位。在一些实施方案中,在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如car)与本文所述的重组受体识别相同抗原(例如bcma)的不同表位。在一些实施方案中,在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如car)识别不同的抗原,例如不同的肿瘤抗原或抗原的组合。例如,在一些实施方案中,在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如car)靶向表达早期谱系标记的癌细胞(例如癌干细胞),而其他表达car的细胞靶向表达晚期谱系标记的癌细胞。在此类实施方案中,在给予(例如输注)本文所述的表达car的细胞之前、与其并行或之后给予另外的工程化细胞。在一些实施方案中,另外的工程化细胞表达同种异体car。
在一些实施方案中,一种或多种car分子的构型包含一个初级细胞内信号传导结构域和两个或更多个(例如2、3、4或5或更多个)共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中,所述一种或多种car分子可以具有相同或不同的初级细胞内信号传导结构域、相同或不同的共刺激信号传导结构域、或相同数量或不同数量的共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中,所述一种或多种car分子可以被配置为分离的car,其中一种car分子包含抗原结合结构域和共刺激结构域(例如4-1bb),而另一种car分子包含抗原结合结构域和初级细胞内信号传导结构域(例如cd3ζ)。
在一些实施方案中,另外的药剂是多特异性结合分子和/或被工程化为表达本文所述的一种或多种结合分子的细胞和/或被工程化为表达靶向不同抗原的另外的结合分子(例如重组受体(例如car))的细胞中的任何一种。在一些实施方案中,另外的药剂包括本文(例如在章节i.c中)所述的细胞中的任何一种或多种细胞。在一些实施方案中,另外的药剂是被工程化为表达靶向不同表位和/或抗原(例如与疾病或病症相关的不同抗原)的重组受体(例如car)的细胞。在一些实施方案中,另外的药剂是被工程化为表达靶向多发性骨髓瘤中表达的第二或另外的抗原(例如cd38、cd138、cs-1、baff-r、taci和/或fcrh5)的重组受体(例如car)的细胞。
在一些实施方案中,另外的药剂是免疫调节剂。在一些实施方案中,组合疗法包括可以刺激、放大和/或以其他方式增强抗肿瘤免疫应答(例如,来自所给予工程化细胞的抗肿瘤免疫应答)的免疫调节剂,如通过抑制免疫抑制信号传导或增强免疫刺激信号传导。在一些实施方案中,免疫调节剂是肽、蛋白质或是小分子。在一些实施方案中,蛋白质可以是融合蛋白或重组蛋白。在一些实施方案中,免疫调节剂结合免疫靶标,例如在免疫细胞(如t细胞、b细胞或抗原呈递细胞)上表达的细胞表面受体。例如,在一些实施方案中,免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段、融合蛋白、小分子或多肽。在一些实施方案中,结合分子、重组受体、细胞和/或组合物是与作为抗体或其抗原结合片段(如单克隆抗体)的另外的药剂组合给予。
在一些实施方案中,免疫调节剂阻断、抑制或抵消免疫检查点途径的组分。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫应答的多个抑制途径。肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制,特别是针对对肿瘤抗原具有特异性的t细胞(pardoll(2012)naturereviewscancer12:252-264),例如工程化细胞,如car表达细胞。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用起始的,所以它们可能易于被针对配体和/或其受体的抗体阻断。
因此,用阻断免疫检查点途径的拮抗性分子(如小分子、核酸抑制剂(例如rnai)或抗体分子)的疗法正在成为针对癌症和其他疾病的免疫疗法的有前途的途径。与大多数抗癌剂相反,检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞,而是靶向淋巴细胞受体或其配体,以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。
如本文所用,术语“免疫检查点抑制剂”是指完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节t细胞激活或功能。这些蛋白质负责t细胞应答的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节并维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。在一些实施方案中,可以向受试者给予另外的药剂,所述另外的药剂可以增强或加强针对疾病或病症(例如癌症,如本文所述的任何一种)的免疫应答,例如由本文提供的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物所产生的免疫应答。
免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。此类抑制剂可以包括小分子抑制剂或者可以包括与免疫检查点受体、配体结合并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的示例性免疫检查点分子包括但不限于pd-1(cd279)、pd-l1(cd274、b7-h1)、pdl2(cd273、b7-dc)、ctla-4、lag-3(cd223)、tim-3、4-1bb(cd137)、4-1bbl(cd137l)、gitr(tnfrsf18、aitr)、cd40、ox40(cd134、tnfrsf4)、cxcr2、肿瘤相关抗原(taa)、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、gal9、b7h3、b7h4、vista、kir、2b4(属于分子的cd2家族并且在所有nk、γδ和记忆cd8+(αβ)t细胞上表达)、cd160(也称为by55)、cgen-15049、ceacam(例如,ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5)、tigit、lair1、cd160、2b4、cd80、cd86、b7-h3(cd276)、b7-h4(vtcn1)、hvem(tnfrsf14或cd270)、kir、a2ar、mhci类、mhcii类、gal9、腺苷和转化生长因子受体(tgfr;例如,tgfrβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白,其与一种或多种任何所述分子结合并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美目单抗(ctla-4阻断抗体,也称为替西木单抗、cp-675,206)、抗ox40、pd-l1单克隆抗体(抗b7-h1;medi4736)、mk-3475(pd-1阻断剂)、纳武单抗(抗pd-1抗体)、ct-011(抗pd-1抗体)、by55单克隆抗体、amp224(抗pd-l1抗体)、bms-936559(抗pd-l1抗体)、mpldl3280a(抗pd-l1抗体)、msb0010718c(抗pd-l1抗体)和伊匹单抗(抗ctla-4抗体,也称为
程序性细胞死亡1(pd-1)是在b细胞、nk细胞和t细胞中表达的免疫检查点蛋白(shinohara等人,1995,genomics23:704-6;blank等人,2007,cancerimmunolimmunother56:739-45;finger等人,1997,gene197:177-87;pardoll(2012)naturereviewscancer12:252-264)。pd-1的主要作用是在响应感染的炎症过程中限制外周组织中t细胞的活性,以及限制自身免疫。在激活的t细胞中诱导pd-1表达,并且pd-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制t细胞激活的作用。pd-1还起到抑制tcr“停止信号”的作用。pd-1在treg细胞上高度表达,并且可以在配体存在下增加所述treg细胞的增殖(pardoll(2012)naturereviewscancer12:252-264)。抗pd1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(topalian等人,2012,nengljmed366:2443-54;lipson等人,2013,clincancerres19:462-8;berger等人,2008,clincancerres14:3044-51;gildener-leapman等人,2013,oraloncol49:1089-96;menzies和long,2013,theradvmedoncol5:278-85)。示例性抗pd-1抗体包括纳武单抗(bms的opdivo)、派姆单抗(merck的keytruda)、匹地利珠单抗(curetech的ct-011)、兰姆利珠单抗(lambrolizumab)(merck的mk-3475)和amp-224(merck),纳武单抗(也称为opdivo、bms-936558或mdx1106;bristol-myerssquibb)是特异性阻断pd-1的完全人igg4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5c4)和特异性地结合pd-1的其他人单克隆抗体描述于us8,008,449和wo2006/121168。匹地利珠单抗(ct-011;curetech)是与pd-1结合的人源化igg1k单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗pd-1单克隆抗体描述于wo2009/101611中。派姆单抗(先前称为兰姆利珠单抗,也称为keytruda,mk03475;merck)是与pd-1结合的人源化igg4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗pd-1抗体描述于us8,354,509和wo2009/114335中。其他抗pd-1抗体尤其包括amp514(amplimmune),例如,us8,609,089、us2010028330、us20120114649和/或us20150210769中描述的抗pd-1抗体。amp-224(b7-dcig;amplimmune;例如,描述于wo2010/027827和wo2011/066342中)是阻断pd-1与b7-h1之间相互作用的pd-l2fc融合可溶性受体。
pd-l1(也称为cd274和b7-h1)和pd-l2(也称为cd273和b7-dc)是pd-1的配体,发现于激活的t细胞、b细胞、骨髓细胞、巨噬细胞和一些类型的肿瘤细胞上。抗肿瘤疗法已集中于抗pd-l1抗体。pd-1与pd-l1的复合物抑制cd8+t细胞的增殖并降低免疫应答(topalian等人,2012,nengljmed366:2443-54;brahmer等人,2012,nengjmed366:2455-65)。抗pd-l1抗体已被用于治疗非小细胞肺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌和血液恶性肿瘤(brahmer等人,2012,nengjmed366:2455-65;ott等人,2013,clincancerres19:5300-9;radvanyi等人,2013,clincancerres19:5541;menzies&long,2013,theradvmedoncol5:278-85;berger等人,2008,clincancerres14:13044-51)。示例性抗pd-l1抗体包括mdx-1105(medarex)、medi4736(medimmune)、mpdl3280a(genentech)、bms-935559(bristol-myerssquibb)和msb0010718c。medi4736(medimmune)是结合pd-l1并抑制配体与pd-1相互作用的人单克隆抗体。mdpl3280a(genentech/roche)是与pd-l1结合的人fc优化的igg1单克隆抗体。mdpl3280a和针对pd-l1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906中。其他抗pd-l1结合剂包括yw243.55.s70(参见wo2010/077634)和mdx-1105(也称为bms-936559,以及例如描述于wo2007/005874中的抗pd-l1结合剂)。
细胞毒性t淋巴细胞相关抗原(ctla-4)也称为cd152,是功能为调节t细胞激活的一种共抑制分子。ctla-4是仅在t细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。ctla-4起到抑制t细胞激活的作用,并且据报道其抑制辅助t细胞活性并增强调节性t细胞免疫抑制活性。尽管ctla-4的准确作用机制仍在研究之中,但已经提出其通过在与cd80和cd86结合中与cd28竞争而胜出以及将抑制剂信号主动递送至t细胞来抑制t细胞激活(pardoll(2012)naturereviewscancer12:252-264)。抗ctla-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(robert&ghiringhelli,2009,oncologist14:848-61;ott等人,2013,clincancerres19:5300;weber,2007,oncologist12:864-72;wada等人,2013,jtranslmed11:89)。抗ctla-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学,其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下,在治疗开始后,在观察到缩小之前,肿瘤的大小可能实际上增加(pardoll(2012)naturereviewscancer12:252-264)。示例性抗ctla-4抗体包括伊匹单抗(bristol-myerssquibb)和曲美目单抗(pfizer)。伊匹单抗最近已经被fda批准用于治疗转移性黑色素瘤(wada等人,2013,jtranslmed11:89)。
淋巴细胞激活基因-3(lag-3)也称为cd223,是另一种免疫检查点蛋白。lag-3与对淋巴细胞活性的抑制相关,并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。lag-3在免疫系统中的各种细胞上表达,包括b细胞、nk细胞和树突细胞。lag-3是mhcii类受体的天然配体,所述mhcii类受体在黑色素瘤浸润的t细胞(包括被赋予有效免疫抑制活性的那些t细胞)上大量表达。示例性抗lag-3抗体包括bms-986016(bristol-myerssquib),其是靶向lag-3的单克隆抗体。imp701(immutep)是拮抗剂lag-3抗体,并且imp731(immutep和glaxosmithkline)是耗尽的lag-3抗体。其他lag-3抑制剂包括imp321(immutep),其是lag-3的可溶部分和结合mhcii类分子并激活抗原呈递细胞(apc)的ig的重组融合蛋白。其他抗体描述于例如wo2010/019570和us2015/0259420中。
最初在激活的th1细胞上鉴定的t细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(tim-3)已被证明是免疫应答的负调节物。tim-3的阻断促进t细胞介导的抗肿瘤免疫,并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。tim-3阻断与其他免疫治疗剂(如tsr-042、抗cd137抗体和其他)的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。tim-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、nsclc和肾癌)相关,另外,肿瘤内tim-3的表达已经被证明与跨越一系列肿瘤类型(包括nsclc、宫颈癌和胃癌)的不良预后相关。tim-3的阻断也有利于提高对许多慢性病毒性疾病的免疫。tim-3也已被证明与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和hmgb1)相互作用,尽管目前尚不清楚这些配体中有哪些(如果存在)是与抗肿瘤反应的调节有关。在一些实施方案中,靶向tim-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与tim-3的igv结构域结合以抑制与其配体的相互作用。抑制tim-3的示例性抗体和肽描述于us2015/0218274、wo2013/006490和us2010/0247521中。其他抗tim-3抗体包括rmt3-23的人源化形式(ngiow等人,2011,cancerres,71:3540-3551)和克隆8b.2c12(monney等人,2002,nature,415:536-541)。抑制tim-3和pd-1的双特异性抗体描述于us2013/0156774中。
在一些实施方案中,另外的药剂是ceacam抑制剂(例如,ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5抑制剂)。在一些实施方案中,ceacam抑制剂是抗ceacam抗体分子。示例性抗ceacam-1抗体描述于wo2010/125571、wo2013/082366、wo2014/059251和wo2014/022332中,例如,单克隆抗体34b1、26h7和5f4;或其重组形式,如在例如us2004/0047858、us7,132,255和wo99/052552中所述。在一些实施方案中,抗ceacam抗体与ceacam-5结合,如在例如zheng等人plosone.(2011)6(6):e21146中所述;或与ceacam-1和ceacam-5交叉反应,如在例如wo2013/054331和us2014/0271618中所述。
4-1bb也称为cd137,是属于tnfr超家族的跨膜糖蛋白。4-1bb受体存在于激活的t细胞和b细胞和单核细胞上。示例性抗4-1bb抗体是乌瑞鲁单抗(bms-663513),其具有潜在的免疫刺激和抗肿瘤活性。
肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tnfrsf4)也称为ox40和cd134,是tnfr超家族的另一个成员。ox40在静止幼稚t细胞上并非组成型表达,并且起次级共刺激免疫检查点分子的作用。示例性抗ox40抗体是medi6469和moxr0916(rg7888,genentech)。
在一些实施方案中,另外的药剂包括减少调节性t细胞(treg)群体的分子。减小(例如,耗尽)treg细胞数量的方法是本领域中已知的,并且包括例如cd25耗尽、环磷酰胺给予和调节糖皮质激素诱导的tnfr家族相关基因(gitr)功能。gitr是tnfr超家族的成员,其在激活的t细胞上发生上调,从而增强免疫系统。在单采术之前或在给予工程化细胞(例如,car表达细胞)之前减小受试者中treg细胞的数量可以减小肿瘤微环境中不需要的免疫细胞(例如,treg)的数量并降低所述受试者的复发风险。在一些实施方案中,另外的药剂包括靶向gitr和/或调节gitr功能的分子,如耗尽调节性t细胞(treg)的gitr激动剂和/或gitr抗体。在一些实施方案中,另外的药剂包括环磷酰胺。在一些实施方案中,gitr结合分子和/或调节gitr功能的分子(例如gitr激动剂和/或耗尽treg的gitr抗体)是在工程化细胞(例如car表达细胞)之前给予。例如,在一些实施方案中,gitr激动剂可以在细胞的单采术之前给予。在一些实施方案中,在给予(例如,输注或再输注)工程化细胞(例如,car表达细胞)之前或在细胞的单采术之前,将环磷酰胺给予受试者。在一些实施方案中,在给予(例如,输注或再输注)工程化细胞(例如,car表达细胞)之前或在细胞的单采术之前,将环磷酰胺和抗gitr抗体给予受试者。
在一些实施方案中,另外的药剂是gitr激动剂。示例性gitr激动剂包括例如gitr融合蛋白和抗gitr抗体(例如,二价抗gitr抗体),如例如美国专利号6,111,090、欧洲专利号090505b1、美国专利号8,586,023、pct公开号wo2010/003118和2011/090754中描述的gitr融合蛋白;或例如美国专利号7,025,962、欧洲专利号1947183b1、美国专利号7,812,135、美国专利号8,388,967、美国专利号8,591,886、欧洲专利号ep1866339、pct公开号wo2011/028683、pct公开号wo2013/039954、pct公开号wo2005/007190、pct公开号wo2007/133822、pct公开号wo2005/055808、pct公开号wo99/40196、pct公开号wo2001/03720、pct公开号wo99/20758、pct公开号wo2006/083289、pct公开号wo2005/115451、美国专利号7,618,632和pct公开号wo2011/051726中描述的抗gitr抗体。示例性抗gitr抗体是trx518。
在一些实施方案中,另外的药剂增强所给予细胞(例如car表达细胞)的肿瘤浸润或迁移。例如,在一些实施方案中,另外的药剂刺激cd40,如cd40l,例如,重组人cd40l。分化簇40(cd40)也是tnfr超家族的成员。cd40是在抗原呈递细胞上发现的共刺激蛋白,并且介导众多种免疫应答和炎性应答。cd40还在一些恶性肿瘤上表达,其中cd40促进增殖。示例性抗cd40抗体是达西珠单抗(sgn-40)、鲁卡木单抗(novartis,拮抗剂)、sea-cd40(seattlegenetics)和cp-870,893。在一些实施方案中,增强肿瘤浸润的另外的药剂包括酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、乙酰肝素酶和/或趋化因子受体(如ccr2、ccr4和ccr7)。
在一些实施方案中,另外的药剂是沙利度胺的结构或功能类似物或衍生物和/或e3泛素连接酶的抑制剂。在一些实施方案中,免疫调节剂与赛拉隆蛋白(cereblon)(crbn)结合。在一些实施方案中,免疫调节剂与crbne3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中,免疫调节剂与crbn和crbne3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中,免疫调节剂上调crbn的蛋白质或基因表达。在一些方面,crbn是crl4crbne3泛素连接酶的底物衔接子,并调节所述酶的特异性。在一些实施方案中,与crb或crbne3泛素连接酶复合物的结合会抑制e3泛素连接酶的活性。在一些实施方案中,免疫调节剂诱导kzf1(ikaros)和ikzf3(aiolos)的泛素化和/或诱导ikzf1(ikaros)和ikzf3(aiolos)的降解。在一些实施方案中,免疫调节剂通过crl4crbne3泛素连接酶诱导酪蛋白激酶1a1(ck1α)的泛素化。在一些实施方案中,ck1α的泛素化导致ck1α降解。
在一些实施方案中,另外的药剂是ikaros(ikzf1)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中,另外的药剂增强ikaros的泛素化。在一些实施方案中,另外的药剂增强ikaros的降解。在一些实施方案中,另外的药剂下调ikaros的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中,另外的药剂的给予导致ikaros蛋白水平降低。
在一些实施方案中,另外的药剂是aiolos(ikzf3)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中,另外的药剂增强aiolos的泛素化。在一些实施方案中,另外的药剂增强aiolos的降解。在一些实施方案中,另外的药剂下调aiolos的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中,另外的药剂的给予导致aiolos蛋白水平降低。
在一些实施方案中,另外的药剂是ikaros(ikzf1)和aiolos(ikzf3)转录因子二者的抑制剂。在一些实施方案中,另外的药剂增强ikaros和aiolos二者的泛素化。在某些实施方案中,另外的药剂增强ikaros和aiolos二者的降解。在一些实施方案中,另外的药剂增强ikaros和aiolos二者的泛素化和降解。在一些实施方案中,另外的药剂的给予引起aiolos蛋白水平和ikaros蛋白水平同时下降。
在一些实施方案中,另外的药剂是选择性细胞因子抑制药物(selcid)。在一些实施方案中,另外的药剂抑制磷酸二酯酶-4(pde4)的活性。在一些实施方案中,另外的药剂抑制cdc25磷酸酶的酶活性。在一些实施方案中,另外的药剂改变cdc25磷酸酶的细胞内运输。
在一些实施方案中,另外的药剂是沙立度胺(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-lh-异吲哚-l,3(2h)-二酮)或沙立度胺的类似物或衍生物。在某些实施方案中,沙利度胺衍生物包括具有相似生物学活性的沙利度胺结构变体。示例性沙利度胺衍生物包括但不限于来那度胺(revlimmunomodulatorycompoundtm;celgenecorporation)、泊马度胺(也称为actimmunomodulatorycompoundtm或pomalysttm(celgenecorporation))、cc-1088、cdc-501和cdc-801,以及在美国专利号5,712,291、7,320,991和8,716,315;美国申请号2016/0313300;以及pct公开号wo2002/068414和wo2008/154252中所披露的化合物。
在一些实施方案中,另外的药剂是被苯并环中的氨基取代的1-氧代-和1,3二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉,如美国专利号5,635,517中所述,将所述专利通过引用并入本文。
在一些实施方案中,另外的药剂是下式的化合物:
其中x和y中的一个是-c(o)-并且x和y中的另一个是-c(o)-或-ch2-,并且r5是氢或低级烷基;或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中,x是-c(o)-并且y是-ch2-。在一些实施方案中,x和y二者都是-c(o)-。在一些实施方案中,r5是氢。在其他实施方案中,r5是甲基。
在一些实施方案中,另外的药剂是属于一类经取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)邻苯二甲酸酯免疫调节化合物和经取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚,例如在美国专利号6,281,230、6,316,471、6,335,349和6,476,052以及国际专利申请号pct/us97/13375(国际公开号wo98/03502)中所述的那些,将所述专利中的每一篇通过引用并入本文。
在一些实施方案中,另外的药剂是下式的化合物:
其中
x和y中的一个是-c(o)-,并且x和y中的另一个是-c(o)-或-ch2-;
(1)r1、r2、r3和r4中每一个独立地是卤代、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基,或
(2)r1、r3、r4和r5中的一个是-nhra,并且r1、r2、r3和r4中其余的是氢,其中ra是氢或1至8个碳原子的烷基;
r5是氢或1至8个碳原子的烷基、苄基或卤代;
条件是如果x和y是-c(o)-并且(i)r1、r2、r3和r4中每一个是氟;或(ii)r1、r2、r3和r4中每一个是氨基,则r5不是氢;
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中,另外的药剂是属于以下专利中所披露的一类异吲哚免疫调节化合物的化合物:美国专利号7,091,353、美国专利公开号2003/0045552和国际申请号pct/usoi/50401(国际公开号wo02/059106),将所述专利中的每一篇通过引用并入本文。例如,在一些实施方案中,另外的药剂是[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-4-基甲基]-酰胺;(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯;4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异吲哚啉-1,3-二酮;n-(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-4-基甲基)-乙酰胺;n-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}环丙基-甲酰胺;2-氯-n-{(2-(2,6-二氧代)(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}乙酰胺;n-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺;3-{1-氧代-4-(苄基氨基)异吲哚啉-2-基}哌啶-2,6-二酮;2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-4-(苄氨基)异吲哚啉-1,3-二酮;n-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}丙酰胺;n-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-3-吡啶基甲酰胺;n-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二异吲哚啉-4-基)甲基}庚酰胺;n-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-2-呋喃甲酰胺;{n-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)氨基甲酰基}乙酸甲酯;n-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺;n-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2-噻吩基甲酰胺;n-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(丁基氨基)甲酰胺;n-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺;或n-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基]甲基}(苄氨基)甲酰胺。
在一些实施方案中,另外的药剂是属于以下专利中所披露的一类异吲哚免疫调节化合物的化合物:美国专利申请公开号2002/0045643、国际公开号wo98/54170和美国专利号6,395,754,将所述专利中的每一篇通过引用并入本文。在一些实施方案中,另外的药剂是以下专利中所述的四取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉:美国专利号5,798,368,将其通过引用并入本文。在一些实施方案中,另外的药剂是通过引用并入本文的美国专利号6,403,613中所披露的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉。在一些实施方案中,另外的药剂是美国专利号6,380,239和美国专利号7,244,759中所述的在吲哚啉环的4-或5-位取代的1-氧代或1,3-二氧代异吲哚啉,所述两篇专利均通过引用并入本文。
在一些实施方案中,另外的药剂是2-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸或4-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸。在一些实施方案中,免疫调节化合物是4-氨基甲酰基-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-4-苯基氨基甲酰基-丁酸或2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-戊二酸。
在一些实施方案中,另外的药剂是如通过引用并入本文的美国专利号6,458,810中所述的在2-位被2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异吲哚啉-1-酮或异吲哚啉-1,3-二酮。在一些实施方案中,免疫调节化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-4h-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮,或其对映异构体或对映异构体的混合物;或它们的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中,免疫调节化合物是3-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。
在一些实施方案中,另外的药剂是如以下文献中所述:oshima,k.等人,nihonrinsho.,72(6):1130-5(2014);millrine,d.等人,trendsmolmed.,23(4):348-364(2017);和collins等人,biochemj.,474(7):1127-1147(2017)。
在一些实施方案中,另外的药剂是来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺,来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体,或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中,免疫调节化合物是来那度胺、来那度胺的立体异构体、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中,免疫调节化合物是来那度胺或((rs)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2h-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。
在某些实施方案中,通过向受试者给予沙利度胺衍生物来那度胺((rs)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2h-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)来破坏病灶。来那度胺被fda批准用于治疗多发性骨髓瘤、与缺失5q相关的骨髓增生异常综合症以及最近用于治疗复发/难治性套细胞淋巴瘤(mcl)。来那度胺通常是沙利度胺的合成衍生物,并且目前被理解为具有多种免疫调节作用,包括在t细胞与抗原呈递细胞(apc)之间使得免疫突触形成。例如,在一些情况下,来那度胺调节t细胞应答并导致cd4+和cd8+t细胞中白细胞介素(il)-2的产生增加,诱导t辅助(th)应答从th2转变为th1,抑制调节性t细胞子集(treg)的扩增,以及改善滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(cll)中免疫突触的功能(otahal等人,oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺在患有多发性骨髓瘤(mm)的患者中也具有直接的肿瘤杀伤活性,并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的呵护样细胞(nurse-likecell))直接和间接地调节cll肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应于通过cd3连接激活t细胞或树突细胞介导的激活而增强t细胞增殖和干扰素-γ产生。此外,来那度胺被认为减少包括tnf-α、il-1、il-6和il-12在内的促炎细胞因子的增殖,并通过增加nk细胞激活来增强抗体依赖性细胞毒性(adcc)。来那度胺还可以诱导恶性b细胞表达更高水平的免疫刺激分子,如cd80、cd86、hla-dr、cd95和cd40(fecteau等人,blood(2014)124(10):1637-1644)。赛拉隆蛋白(cereblon)是一种e3泛素连接酶,被鉴定为沙利度胺诱导的畸形发生的主要靶标(ito,t.,等人(2010)science327:1345-1350)。来那度胺也靶向赛拉隆蛋白,并且已经显示这导致c-myc和irf4表达的减少,同时还增加导致g1细胞周期阻滞的p21的表达(lopez-girona等人,(2012)leukemia26:2326–2335)。
在一些实施方案中,另外的药剂包括沙利度胺药物或其类似物和/或其衍生物,如来那度胺、泊马度胺或阿普斯特。参见例如bertilaccio等人,blood(2013)122:4171;otahal等人,oncoimmunology(2016)5(4):e1115940;fecteau等人,blood(2014)124(10):1637-1644;和kuramitsu等人,cancergenetherapy(2015)22:487-495。来那度胺((rs)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2h-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮;也称为revlimid)是沙利度胺的合成衍生物,并且具有多种免疫调节作用,包括加强t细胞与抗原呈递细胞(apc)之间的免疫突触形成。例如,在一些情况下,来那度胺调节t细胞应答并导致cd4+和cd8+t细胞中白细胞介素(il)-2的产生增加,诱导t辅助(th)应答从th2转变为th1,抑制调节性t细胞子集(treg)的扩增,以及改善滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(cll)中免疫突触的功能(otahal等人,oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺在患有多发性骨髓瘤(mm)的患者中也具有直接的肿瘤杀伤活性,并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的呵护样细胞(nurse-likecell))直接和间接地调节cll肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应于通过cd3连接激活t细胞或树突细胞介导的激活而增强t细胞增殖和干扰素-γ产生。来那度胺还可以诱导恶性b细胞表达更高水平的免疫刺激分子,如cd80、cd86、hla-dr、cd95和cd40(fecteau等人,blood(2014)124(10):1637-1644)。
在一些实施方案中,另外的药剂是b细胞抑制剂。在一些实施方案中,另外的药剂是一种或多种b细胞抑制剂,所述一种或多种b细胞抑制剂选自cd10、cd19、cd20、cd22、cd34、cd123、cd79a、cd79b、cd179b、flt-3或ror1或其组合的抑制剂。在一些实施方案中,b细胞抑制剂是抗体(例如,单特异性或双特异性抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中,另外的药剂是表达靶向b细胞靶标(例如,cd10、cd19、cd20、cd22、cd34、cd123、cd79a、cd79b、cd179b、flt-3或ror1)的重组受体的工程化细胞。
在一些实施方案中,另外的药剂是cd20抑制剂,例如,抗cd20抗体(例如,抗cd20单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗cd20抗体包括但不限于利妥昔单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗(也称为ga101或ro5072759)、维妥珠单抗、奥比妥珠单抗、tru-015(trubionpharmaceuticals)、奥卡妥珠单抗(也称为ame-133v或奥卡妥珠单抗)和pro131921(genentech)。参见例如lim等人haematologica.(2010)95(1):135-43。在一些实施方案中,抗cd20抗体包含利妥昔单抗。利妥昔单抗是嵌合小鼠/人单克隆抗体igg1κ,其与cd20结合并引起cd20表达细胞的细胞溶解。在一些实施方案中,另外的药剂包括利妥昔单抗。在一些实施方案中,cd20抑制剂是小分子。
在一些实施方案中,另外的药剂是cd22抑制剂,例如,抗cd22抗体(例如,抗cd22单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗cd22抗体包括依帕珠单抗和rfb4。在一些实施方案中,cd22抑制剂是小分子。在一些实施方案中,抗体是单特异性抗体,任选地与诸如化学治疗剂的第二药剂缀合。例如,在一些实施方案中,抗体是抗cd22单克隆抗体-mmae缀合物(例如,dcdt2980s)。在一些实施方案中,抗体是抗cd22抗体的scfv,例如,抗体rfb4的scfv。在一些实施方案中,scfv与假单胞菌属(pseudomonas)外毒素-a(例如bl22)的全部或片段融合。在一些实施方案中,scfv与假单胞菌属外毒素-a(例如,moxetumomabpasudotox)的全部或片段(例如,38kda片段)融合。在一些实施方案中,抗cd22抗体是抗cd19/cd22双特异性抗体,任选地与毒素缀合。例如,在一些实施方案中,抗cd22抗体包含抗cd19/cd22双特异性部分(例如,两个scfv配体,识别人cd19和cd22),其任选地连接至白喉毒素(dt)的全部或一部分,例如白喉毒素(dt)的前389个氨基酸(dt390),例如配体引导的毒素如dt2219arl。在一些实施方案中,双特异性部分(例如抗cd19/抗cd22)连接至毒素如脱糖基化蓖麻毒素a链(例如,combotox)。
在一些实施方案中,免疫调节剂是细胞因子。在一些实施方案中,免疫调节剂是细胞因子或者是诱导肿瘤微环境中的细胞因子表达增加的药剂。细胞因子具有与t细胞扩增、分化、存活和稳态有关的重要功能。可以向接受本文提供的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物的受试者给予的细胞因子包括以下中的一种或多种:il-2、il-4、il-7、il-9、il-15、il-18和il-21。在一些实施方案中,所给予的细胞因子是il-7、il-15或il-21或其组合。在一些实施方案中,将细胞因子给予至对工程化细胞(例如car表达细胞)的给予具有次最佳反应的受试者改善所给予细胞(例如car表达细胞)的功效和/或抗肿瘤活性。
“细胞因子”意指由一个细胞群释放的作为细胞间介体作用于另一种细胞的蛋白质的通用术语。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素,如人生长激素、n-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素;甲状旁腺激素;甲状腺素;胰岛素;胰岛素原;松弛素;松弛素原;糖蛋白激素,如卵泡刺激素(fsh)、甲状腺刺激素(tsh)和黄体化激素(lh);肝生长因子;成纤维细胞生长因子;泌乳素;胎盘催乳素;肿瘤坏死因子-α和-β;缪勒抑制物质;小鼠促性腺激素相关肽;抑制素;激活素;血管内皮生长因子;整合素;血小板产生素(tpo);神经生长因子,如ngf-β;血小板生长因子;转化生长因子(tgf),如tgf-α和tgf-β;胰岛素样生长因子-i和-ii;促红细胞产生素(epo);骨诱导因子;干扰素,如干扰素-α、-β和-γ;集落刺激因子(csf),如巨噬细胞-csf(m-csf);粒细胞-巨噬细胞-csf(gm-csf);和粒细胞-csf(g-csf);白细胞介素(il),如il-1、il-1α、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-11、il-12、il-15;肿瘤坏死因子,如tnf-α或tnf-β;以及其他多肽因子,包括lif和kit配体(kl)。如本文所用,术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质,以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。例如,免疫调节剂是细胞因子,并且所述细胞因子是il-4、tnf-α、gm-csf或il-2。
在一些实施方案中,另外的药剂包括白细胞介素-15(il-15)多肽、白细胞介素-15受体α(il-15rα)多肽、或其组合(例如hetil-15(admunetherapeutics,llc))。hetil-15是il-15与il-15rα的异二聚体非共价复合物。hetil-15描述于例如以下文献中:u.s.8,124,084、u.s.2012/0177598、u.s.2009/0082299、u.s.2012/0141413和u.s.2011/0081311。在一些实施方案中,免疫调节剂可以含有一种或多种细胞因子。例如,白细胞介素可以包括白细胞-白细胞介素注射剂(multikine),其是天然细胞因子的组合。在一些实施方案中,免疫调节剂是toll样受体(tlr)激动剂、佐剂或细胞因子。
在一些实施方案中,另外的药剂是改善或中和与细胞疗法相关的一种或多种毒性或副作用的药剂。在一些实施方案中,另外的药剂选自类固醇(例如皮质类固醇)、tnfα抑制剂和il-6抑制剂。tnfα抑制剂的例子是抗tnfα抗体分子,如英夫利昔单抗、阿达木单抗、塞妥珠单抗(certolizumabpegol)和戈利木单抗。tnfα抑制剂的另一个例子是融合蛋白,如依那西普。tnfα的小分子抑制剂包括但不限于黄嘌呤衍生物(例如己酮可可碱)和安非他酮。il-6抑制剂的例子是抗il-6抗体分子,如托珠单抗、sarilumab、伊斯利莫(elsilimomab)、cnto328、ald518/bms-945429、cnto136、cpsi-2364、cdp6038、vx30、argx-109、fe301和fm101。在一些实施方案中,抗il-6抗体分子是托珠单抗。在一些实施方案中,另外的药剂是il-1r抑制剂,如阿那白滞素。
在一些实施方案中,另外的药剂是腺苷水平和/或腺苷途径组分的调节剂。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如,腺苷和非选择性地激活腺苷受体亚型的一些腺苷类似物降低炎性氧化产物的嗜中性粒细胞产生(cronstein等人,ann.n.y.acad.sci.451:291,1985;roberts等人,biochem.j.,227:669,1985;schrier等人,j.immunol.137:3284,1986;cronstein等人,clinicalimmunol.immunopath.42:76,1987)。在一些情况下,细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度在特定环境(例如肿瘤微环境(tme))中可能增加。在一些情况下,腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或者在缺氧或其调节中所涉及的因子(例如缺氧诱导因子(hif))。在一些实施方案中,腺苷信号传导的增加可以增加细胞内camp和camp依赖性蛋白激酶,从而导致抑制促炎性细胞因子产生,并且可以导致免疫抑制分子的合成和treg的发展(sitkovsky等人,cancerimmunolres(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中,另外的药剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制作用。在一些实施方案中,另外的药剂可以减少或逆转缺氧驱动的a2-腺苷酸能t细胞免疫抑制。在一些实施方案中,另外的药剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、cd39/cd73胞外酶的腺苷产生的抑制剂、和缺氧-hif-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中,另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。
通过细胞外腺苷的抑制剂(例如防止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(例如腺苷受体拮抗剂)可以增强免疫应答,如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞、t细胞和/或b细胞介导的应答。此外,gs蛋白介导的camp依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。
在一些实施方案中,另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂,例如腺苷受体a2a、a2b、a1和a3中的一种或多种的拮抗剂或激动剂。分别地,a1和a3抑制腺苷酸环化酶活性,并且a2a和a2b刺激腺苷酸环化酶活性。某些腺苷受体(如a2a、a2b和a3)可以在炎症期间抑制或降低免疫应答。因此,拮抗免疫抑制性腺苷受体可以扩大、加强或增强免疫应答,例如来自所给予细胞(例如,car表达t细胞)的免疫应答。在一些实施方案中,另外的药剂抑制细胞外腺苷的产生和腺苷通过腺苷受体触发的信号传导。例如,通过抑制或减少产生腺苷的局部组织缺氧;通过降解积累的细胞外腺苷(或使其失活);通过阻止或减少免疫细胞上腺苷受体的表达;和/或通过抑制/拮抗腺苷配体通过腺苷受体进行的信号传导,可以增强免疫应答、局部组织炎症和所靶向组织破坏的增强。
拮抗剂是作为与细胞受体结合而不引发生物学反应的药剂,倾向于消除另一种物质的作用的任何物质。在一些实施方案中,拮抗剂是化学化合物,其是腺苷受体(如a2a、a2b或a3受体)的拮抗剂。在一些实施方案中,拮抗剂是结合腺苷受体但是不触发gi蛋白依赖性细胞内途径的肽或拟肽。示例性拮抗剂描述于以下文献中:美国专利号5,565,566、5,545,627、5,981,524、5,861,405、6,066,642、6,326,390、5,670,501、6,117,998、6,232,297、5,786,360、5,424,297、6,313,131、5,504,090和6,322,771。
在一些实施方案中,另外的药剂是a2受体(a2r)拮抗剂,如a2a拮抗剂。示例性a2r拮抗剂包括kw6002(伊曲茶碱(istradefyline))、sch58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(dmpx)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(csc)、msx-2、msx-3、msx-4、cgs-15943、zm-241385、sch-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(bii014)、v2006、st-1535、syn-115、psb-1115、zm241365、fsptp和靶向a2r表达的抑制性核酸(例如,sirna或shrna)或靶向a2r的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,另外的药剂是描述于例如以下文献中的a2r拮抗剂:ohta等人,procnatlacadsciusa(2006)103:13132-13137;jin等人,cancerres.(2010)70(6):2245-2255;leone等人,computationalandstructuralbiotechnologyjournal(2015)13:265-272;beavis等人,procnatlacadsciusa(2013)110:14711–14716;和pinna,a.,expertopininvestigdrugs(2009)18:1619-1631;sitkovsky等人,cancerimmunolres(2014)2(7):598-605;us8,080,554;us8,716,301;us20140056922;wo2008/147482;us8,883,500;us20140377240;wo02/055083;us7,141,575;us7,405,219;us8,883,500;us8,450,329和us8,987,279。
在一些实施方案中,拮抗剂是特异性地结合编码腺苷受体的mrna的反义分子、抑制性核酸分子(例如,小抑制性rna(sirna))或催化性核酸分子(例如,核酶)。在一些实施方案中,反义分子、抑制性核酸分子或催化性核酸分子结合编码a2a、a2b或a3的核酸。在一些实施方案中,反义分子、抑制性核酸分子或催化性核酸靶向腺苷受体下游的生化途径。例如,反义分子或催化性核酸可以抑制gs蛋白或gi蛋白依赖性细胞内途径中涉及的酶。在一些实施方案中,另外的药剂包括腺苷受体(如a2a、a2b或a3)的显性阴性突变体形式。
在一些实施方案中,抑制细胞外腺苷的另外的药剂包括使细胞外腺苷无功能(或降低这种功能)的药剂,例如修饰腺苷结构以抑制腺苷通过腺苷受体进行信号传导的能力的物质。在一些实施方案中,另外的药剂是细胞外产生腺苷或腺苷降解的酶,其修饰形式或其调节剂。例如,在一些实施方案中,另外的药剂是酶(例如,腺苷脱氨酶)或另一种催化分子,所述酶或另一种催化分子选择性地结合并破坏腺苷,从而消除或显著降低内源形成的腺苷通过腺苷受体进行信号传导并终止炎症的能力。
在一些实施方案中,另外的药剂是腺苷脱氨酶(ada)或其修饰形式,例如,重组ada和/或聚乙二醇修饰的ada(ada-peg),其可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ada-peg已用于治疗患有adascid的患者(hershfield(1995)hummutat.5:107)。在一些实施方案中,抑制细胞外腺苷的药剂包括阻止或减少细胞外腺苷形成,和/或阻止或减少细胞外腺苷积累,从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用的药剂。在一些实施方案中,另外的药剂特异性地抑制参与对促炎性分子的合成和/或分泌进行调节的酶和蛋白质,所述另外的药剂包括核转录因子的调节剂。对腺苷受体表达、或gs蛋白或gi蛋白依赖性细胞内途径、或camp依赖性细胞内途径的抑制可以导致免疫应答的增加/增强。
在一些实施方案中,另外的药剂可以靶向生成或产生细胞外腺苷的胞外酶。在一些实施方案中,另外的药剂靶向共同作用于产生细胞外腺苷的cd39和cd73胞外酶。cd39(也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外atp(或adp)转化为5'amp。随后,cd73(也称为5'核苷酸酶)将5'amp转化为腺苷。cd39的活性可通过ndp激酶和腺苷酸激酶的作用逆转,而cd73的活性是不可逆的。cd39和cd73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和treg)上表达,并且也在许多癌细胞上表达。例如,在肿瘤微环境的低氧条件下,cd39和cd73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能源于血液供应不足和无组织的肿瘤脉管系统,从而影响氧气的输送(carroll和ashcroft(2005),expert.rev.mol.med.7(6):1-16)。缺氧也抑制将腺苷转化为amp的腺苷酸激酶(ak),从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此,响应缺氧以高浓度释放腺苷,缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围的肿瘤微环境(tme)中频繁出现的条件。在一些实施方案中,另外的药剂是抗cd39抗体或其抗原结合片段、抗cd73抗体或其抗原结合片段(例如medi9447或ty/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(adp)、arl67156、pom-3、iph52中的一种或多种(参见例如allard等人clincancerres(2013)19(20):5626-5635;hausler等人,amjtranslres(2014)6(2):129-139;zhang,b.,cancerres.(2010)70(16):6407-6411)。
在一些实施方案中,另外的药剂是缺氧诱导型因子1α(hif-1α)信号传导的抑制剂。示例性hif-1α抑制剂包括地高辛、吖啶黄素、瑟土因-7(sirtuin-7)和甘那特匹(ganetespib)。
在一些实施方案中,另外的药剂包括蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂,例如,本文所述的蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂。在一些实施方案中,蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂是shp-1抑制剂,例如本文所述的shp-1抑制剂,例如,葡萄糖酸锑钠。在一些实施方案中,蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂是shp-2抑制剂,例如本文所述的shp-2抑制剂。
在一些实施方案中,另外的药剂是激酶抑制剂。激酶抑制剂(如cdk4激酶抑制剂、btk激酶抑制剂、mnk激酶抑制剂或dgk激酶抑制剂)可以调节肿瘤细胞中存在的组成型活性的存活途径和/或调节免疫细胞的功能。在一些实施方案中,激酶抑制剂是布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂,例如,依鲁替尼。在一些实施方案中,激酶抑制剂是磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯3-激酶(pi3k)抑制剂。在一些实施方案中,激酶抑制剂是cdk4抑制剂,例如,cdk4/6抑制剂。在一些实施方案中,激酶抑制剂是mtor抑制剂,例如雷帕霉素、雷帕霉素类似物、osi-027。mtor抑制剂可以是例如mtorc1抑制剂和/或mtorc2抑制剂,例如mtorc1抑制剂和/或mtorc2抑制剂。在一些实施方案中,激酶抑制剂是mnk抑制剂或双重pi3k/mtor抑制剂。在一些实施方案中,其他示例性激酶抑制剂包括akt抑制剂哌立福辛(perifosine)、mtor抑制剂替西罗莫司(temsirolimus)、src激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)和福他替尼(fostamatinib)、jak2抑制剂帕克替尼和鲁索替尼、pkcβ抑制剂恩扎妥林(enzastaurin)和苔藓抑素,以及aak抑制剂阿立塞替(alisertib)。
在一些实施方案中,激酶抑制剂是选自以下的btk抑制剂:依鲁替尼(pci-32765);gdc-0834;rn-486;cgi-560;cgi-1764;hm-71224;cc-292;ono-4059;cnx-774;和lfm-a13。在一些实施方案中,btk抑制剂不会降低或抑制白细胞介素-2诱导型激酶(itk)的激酶活性,并且选自gdc-0834;rn-486;cgi-560;cgi-1764;hm-71224;cc-292;ono-4059;cnx-774;和lfm-a13。
在一些实施方案中,激酶抑制剂是btk抑制剂,例如,依鲁替尼(1-[(3r)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮;也称为pci-32765)。在一些实施方案中,激酶抑制剂是btk抑制剂,例如依鲁替尼(pci-32765)。在一些实施方案中,给予1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个周期的依鲁替尼。在一些实施方案中,btk抑制剂是国际申请wo2015/079417中所述的btk抑制剂。
在一些实施方案中,激酶抑制剂是pi3k抑制剂。pi3k是参与细胞周期调节和淋巴瘤存活的pi3k/akt/mtor途径的核心。示例性pi3k抑制剂包括艾代拉里司(idelalisib)(pi3kδ抑制剂)。在一些实施方案中,另外的药剂是艾代拉里司和利妥昔单抗。
在一些实施方案中,另外的药剂是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mtor)的抑制剂。在一些实施方案中,激酶抑制剂是选自以下的mtor抑制剂:坦罗莫司;利罗莫司(ridaforolimus)(也称为ap23573和mk8669);依维莫司(rad001);雷帕霉素(ay22989);simapimod;azd8055;pf04691502;sf1126;和xl765。在一些实施方案中,另外的药剂是丝裂原激活蛋白激酶(mapk)抑制剂,如威罗菲尼(vemurafenib)、达拉非尼(dabrafenib)和曲美替尼(trametinib)。
在一些实施方案中,另外的药剂是调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的药剂。在一些实施方案中,另外的药剂包括b细胞淋巴瘤2(bcl-2)抑制剂(例如,维奈托克(venetoclax),也称为abt-199或gdc-0199;或abt-737)。维奈托克是抑制抗细胞凋亡蛋白bcl-2的小分子(4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基}-1-哌嗪基)-n-({3-硝基-4-[(四氢-2h-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺)。调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的其他药剂包括bcl-2抑制剂abt-737、那维妥拉(navitoclax)(abt-263);用于最大功效的mcl-1sirna或mcl-1抑制剂类视色素n-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-hpr)。在一些实施方案中,另外的药剂提供促细胞凋亡刺激,如重组肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(trail),其可以通过与肿瘤细胞表面上的trail死亡受体dr-4和dr-5结合激活细胞凋亡途径;或trail-r2激动抗体。
在一些实施方案中,另外的药剂包括吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)抑制剂。ido是一种催化氨基酸l-色氨酸降解为犬尿氨酸的酶。许多癌症过表达ido,例如前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、卵巢癌、头癌和肺癌。浆细胞样树突细胞(pdc)、巨噬细胞和树突细胞(dc)可以表达ido。在一些方面,l-色氨酸的减少(例如由ido催化)通过诱导t细胞无反应性和凋亡而导致免疫抑制环境。因此,在一些方面,例如通过减少所给予的car表达细胞的抑制或死亡,ido抑制剂可以增强本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物的功效。ido的示例性抑制剂包括但不限于1-甲基-色氨酸、indoximod和incb024360(艾卡哚司他(epacadostat))。
在一些实施方案中,另外的药剂包括细胞毒性剂,例如,cpx-351(celatorpharmaceuticals)、阿糖胞苷、道诺霉素、沃沙隆沙星(vosaroxin)(sunesispharmaceuticals)、沙帕他滨(cyclacelpharmaceuticals)、伊达比星或米托蒽醌。在一些实施方案中,另外的药剂包括低甲基化剂,例如,dna甲基转移酶抑制剂,例如,阿扎胞苷或地西他滨。
在另一个实施方案中,另外的疗法是移植,例如,同种异体干细胞移植。
在一些实施方案中,另外的疗法是淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中,在例如给予工程化细胞(例如,car表达细胞)之前对受试者进行淋巴细胞清除。在一些实施方案中,淋巴细胞清除包括给予以下中的一种或多种:美法仑、环磷酰胺(cytoxan)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和氟达拉滨。在一些实施方案中,在工程化细胞(例如,car表达细胞)的给予(例如,输注)之前、与其并行或之后,向受试者给予淋巴细胞清除化学疗法。在一个例子中,在工程化细胞(例如,car表达细胞)的给予之前向受试者给予淋巴细胞清除化学疗法。
在一些实施方案中,另外的药剂是溶瘤病毒。在一些实施方案中,溶瘤病毒能够在癌细胞中选择性地复制并触发所述癌细胞的死亡或减慢所述癌细胞的生长。在一些情况下,溶瘤病毒对非癌细胞无影响或影响极小。溶瘤病毒包括但不限于溶瘤腺病毒、溶瘤单纯疱疹病毒、溶瘤逆转录病毒、溶瘤细小病毒、溶瘤痘苗病毒、溶瘤辛德毕斯病毒(oncolyticsinbisvirus)、溶瘤流感病毒或溶瘤rna病毒(例如,溶瘤呼吸弧病毒、溶瘤新城疫病毒(ndv)、溶瘤麻疹病毒或溶瘤水疱性口炎病毒(vsv))。
其他示例性组合疗法、治疗和/或药剂包括抗过敏剂、止吐药、镇痛药和辅助疗法。在一些实施方案中,另外的药剂包括细胞保护剂,如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂和营养素。
在一些实施方案中,用作另外的药剂的抗体与本文所述的治疗剂缀合或以其他方式结合,所述治疗剂是例如化学治疗剂(例如,环磷酰胺、氟达拉滨、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、脱甲基剂、肽疫苗、抗肿瘤抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗微管剂或抗有丝分裂剂)、抗过敏剂、止吐剂(anti-nauseaagent)(或止吐药(anti-emetic))、止痛药或细胞保护剂。在一些实施方案中,另外的药剂是抗体-药物缀合物。
在一些实施方案中,另外的药剂可以在dna、rna或蛋白质水平上调节、抑制或刺激特定因子,以增强或加强本文提供的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物的功效。在一些实施方案中,另外的药剂可以在所给予的细胞(例如被工程化为表达重组受体(例如car)的细胞)内在核酸(例如dna或rna)水平上调节因子。在一些实施方案中,抑制性核酸(例如抑制性核酸,例如dsrna,例如sirna或shrna)或成簇的规律间隔短回文重复序列(crispr)、转录激活因子样效应核酸酶(talen)或锌指核酸内切酶(zfn)可以用于抑制工程化细胞(例如car表达细胞)中抑制性分子的表达。在一些实施方案中,抑制剂是shrna。在一些实施方案中,抑制性分子在工程化细胞(例如car表达细胞)内被抑制。在一些实施方案中,编码抑制调节或调控(例如抑制)t细胞功能的分子的表达的dsrna分子的核酸分子可操作地连接至启动子(例如源自hi或u6的启动子),使得抑制所述抑制性分子的表达的dsrna分子在工程化细胞(例如car表达细胞)内表达。参见例如brummelkamptr,等人(2002)science296:550-553;miyagishim,等人(2002)nat.biotechnol.19:497-500。
在一些实施方案中,另外的药剂(如本文所述的任何免疫检查点抑制剂)能够破坏编码抑制性分子的基因。在一些实施方案中,破坏是通过缺失(例如整个基因、外显子或区域的缺失),和/或用外源序列替代,和/或通过在基因内通常在基因的外显子内的突变(例如移码或错义突变)。在一些实施方案中,破坏导致提前终止密码子并入基因中,使得抑制性分子不表达或不以能够在细胞表面上表达和/或能够介导细胞信号传导的形式表达。破坏通常在dna水平上进行。破坏通常是永久性的、不可逆的或非暂时性的。
在一些方面,破坏通过基因编辑例如使用在被靶向进行破坏的区域处与基因特异性地结合或杂交的dna结合蛋白或dna结合核酸进行。在一些方面,所述蛋白质或核酸与核酸酶偶联或复合,例如以嵌合或融合蛋白的形式。例如,在一些实施方案中,使用对所破坏的基因具有特异性的、包含dna靶向蛋白质和核酸酶的融合物(如锌指核酸酶(zfn)或tal效应子核酸酶(talen)或rna指导的核酸酶(如成簇的规律间隔短回文重复序列(crispr)-cas系统,如crispr-cas9系统))来实现破坏。在一些实施方案中,产生或生成基因工程化细胞(例如car表达细胞)的方法包括向细胞群中引入编码基因工程化抗原受体(例如car)的核酸分子和编码靶向抑制性分子的药剂的核酸分子,所述药剂是对抑制分子具有特异性的基因编辑核酸酶,例如dna靶向蛋白质和核酸酶的融合物(如zfn或talen或rna指导的核酸酶(如crispr-cas9系统))。
可以制备任何本文所述的另外的药剂,并将其与本文所述的bcma结合分子(例如抗体)、免疫缀合物、重组受体(例如嵌合抗原受体)和/或表达所述分子(例如重组受体)的工程化细胞一起作为组合疗法来给予,例如以包含组合疗法的一种或多种药剂和药学上可接受的载体(如本文所述的任何一种)的药物组合物来给予。在一些实施方案中,可以将bcma结合分子(例如抗体)、免疫缀合物、重组受体(例如嵌合抗原受体)、表达所述分子(例如重组受体)的工程化细胞、表达所述分子(例如重组受体)的多种工程化细胞与另外的药剂、疗法或治疗同时、并行或以任何顺序依次给予,其中这种给予在受试者体内提供每种药剂的治疗有效水平。可以将药剂与本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物共给予,例如作为同一药物组合物的一部分或使用相同的递送方法来共给予。在一些实施方案中,在给予细胞之前,将另外的药剂与所述工程化细胞(例如,car表达细胞)一起孵育。
在一些例子中,在给予本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物之后或之前(相隔所选时间段),给予所述一种或多种另外的药剂。在一些例子中,所述时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月或3个月。在一些例子中,多次给予所述一种或多种另外的药剂和/或多次给予本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物。例如,在一些实施方案中,在本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物之前,例如在给予前两周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天,给予另外的药剂。例如,在一些实施方案中,在本文所述的结合分子(例如bcma结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物之后,例如在给予后两周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天,给予另外的药剂。
另外的药剂的剂量可以是任何治疗有效量,例如本文所述的任何剂量的量,并且另外的药剂的适当剂量可以取决于待治疗疾病的类型,所给予的结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的类型、剂量和/或频率,疾病的严重程度和病程,给予结合分子、重组受体、细胞和/或组合物是出于预防目的还是治疗目的,先前疗法,患者的临床病史和对结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的反应,以及主治医师的决断。可以将结合分子、重组受体、细胞和/或组合物和/或另外的药剂和/或疗法一次给予至患者、重复地给予或经一系列治疗来给予。
c.诊断和检测方法
还提供涉及在检测bcma中,例如在与表达bcma的疾病或病症相关的诊断和/或预后方法中使用所提供的结合分子(例如抗体或其抗原结合片段)的方法。在一些实施方案中,所述方法包括将生物样品与抗体或其抗原结合片段一起孵育和/或将抗体或其抗原结合片段给予至受试者。在某些实施方案中,生物样品包括细胞或组织,如肿瘤或癌症组织。在某些实施方案中,接触是在允许抗bcma抗体与bcma结合并检测在抗bcma抗体与bcma之间是否形成复合物的条件下进行。这样的方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中,将抗bcma抗体(例如抗原结合片段)用于选择有资格进行用抗bcma抗体(例如抗原结合片段)或重组受体的疗法的受试者,例如其中bcma是用于选择患者的生物标记。
在一些实施方案中,使样品(如细胞、组织样品、裂解物、组合物或从其衍生的其他样品)与抗bcma抗体(例如抗原结合片段)接触,并且确定或检测在抗体与样品(例如样品中的bcma)之间的结合或复合物的形成。当与相同组织类型的参考细胞相比证明或检测到测试样品中的结合时,这可能指示存在相关疾病或病症。在一些实施方案中,样品来自人组织。
可以使用本领域已知的用于检测特异性抗体-抗原结合的各种方法。示例性免疫测定包括荧光偏振免疫测定(fpia)、荧光免疫测定(fia)、酶免疫测定(eia)、比浊法抑制免疫测定(nia)、酶联免疫吸附测定(elisa)和放射免疫测定(ria)。可以将指示剂部分或标记基团附接到所述主题抗体上并进行选择以满足所述方法的各种应用的需要,所述各种应用通常由测定设备的可用性和相容的免疫测定程序决定。示例性标签包括放射性核素(例如125i、131i、35s、3h或32p)、酶(例如,碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶或β-半乳糖苷酶)、荧光部分或蛋白质(例如,荧光素、罗丹明、藻红蛋白、gfp或bfp)或发光部分(例如,由加利福尼亚州帕洛阿尔托的quantumdotcorporation提供的qdottm纳米颗粒)。用于进行上述各种免疫测定的一般技术是本领域普通技术人员已知的。
出于诊断目的,可以用可检测部分标记抗体(例如抗原结合片段),所述可检测部分包括但不限于放射性同位素、荧光标签和本领域已知的各种酶-底物标签。将标签与抗体缀合的方法在本领域是已知的。
在一些实施方案中,不需要对抗体(例如抗原结合片段)进行标记,并且可以使用与抗体结合的经标记的抗体来检测所述抗体的存在。
在一些实施方案中,所提供的抗体(例如抗原结合片段)可以用于任何已知的测定方法,如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定和免疫沉淀测定。zola,monoclonalantibodies:amanualoftechniques,第147-158页(crcpress,inc.1987)。
抗体(例如抗原结合片段)和多肽也可以用于体内诊断测定(如体内成像)。通常,将抗体用放射性核素(如111in、99tc、14c、131i、125i或3h)进行标记,使得在给予至受试者后可以在体内定位目的细胞或组织。
抗体(例如抗原结合片段)也可以在例如使用已知技术的病理学中用作染色试剂。
iii.制品或试剂盒
还提供制品或试剂盒,所述制品或试剂盒含有所提供的结合分子(例如抗体)、重组受体(例如car)、基因工程化细胞和/或包含上述各项的组合物。所述制品可以包括容器和在所述容器上或与所述容器相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、试管、iv输液袋等。容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中,容器具有无菌接入端口。示例性容器包括静脉输液袋、小瓶,包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些。所述制品或试剂盒可以进一步包括包装插页,其指示所述组合物可以用于治疗特定病症如本文所述的病症(例如多发性骨髓瘤)。可替代地或另外地,所述制品或试剂盒可以进一步包括另一个或相同的包含药学上可接受的缓冲剂的容器。它可以进一步包括其他材料,如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针和/或注射器。
标签或包装插页可以指示所述组合物用于治疗个体中表达bcma的或bcma相关的疾病、障碍或病症。在容器上或与容器相关的标签或包装插页可以指示关于重构和/或使用配制品的指导说明。标签或包装插页可以进一步指示所述配制品可用于或旨在用于皮下、静脉内或其他方式的给予以治疗或预防个体中表达bcma的或bcma相关的疾病、障碍或病症。
在一些实施方案中,容器容纳组合物本身或组合物与可有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物的组合。所述制品或试剂盒可以包括(a)在其中含有组合物(即第一药物)的第一容器,其中所述组合物包含抗体(例如抗bcma抗体)或其抗原结合片段或重组受体(例如car);和(b)在其中含有组合物(即第二药物)的第二容器,其中所述组合物包含另外的药剂(如细胞毒性剂或其他治疗剂),并且所述制品或试剂盒进一步包含在标签或包装插页上的用于采用有效量的所述第二药物治疗受试者的说明书。
iv.定义
如本文所用,提及抗体的“对应形式”意指当比较两种抗体的特性或活性时,使用相同形式的抗体来比较特性。例如,如果声明抗体与第一抗体的对应形式的活性相比具有更高的活性,则意味着特定形式(如所述抗体的scfv)与第一抗体的scfv形式相比具有更高的活性。
“效应子功能”是指可归因于抗体fc区的那些生物活性,其随抗体同种型的变化而变化。抗体效应子功能的例子包括:c1q结合和补体依赖性细胞毒性(cdc);fc受体结合;抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc);吞噬作用;细胞表面受体(例如,b细胞受体)的下调;和b细胞激活。
本文的术语“fc区”用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的c末端区。所述术语包括天然序列fc区和变体fc区。在一个实施方案中,人igg重链fc区从cys226或从pro230延伸至重链的羧基末端。然而,fc区的c末端赖氨酸(lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另有说明,否则fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据eu编号系统(也称为eu索引),如kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,b贝塞斯达,马里兰州,1991中所述。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换地使用以指代具有与天然抗体结构基本上相似的结构或具有含有如本文所定义的fc区的重链的抗体。
“分离的”抗体是已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中,如通过例如电泳(例如,sds-page、等电聚焦(ief)、毛细管电泳)或色谱(例如,离子交换或反相hplc)确定的,将抗体纯化至大于95%或99%的纯度。关于评估抗体纯度的方法的综述,参见例如flatman等人,j.chromatogr.b848:79-87(2007)。
“分离的”核酸是指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括细胞中含有的核酸分子,所述细胞通常含有所述核酸分子,但所述核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。
“编码抗bcma抗体的分离的核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子,包括在单个载体或单独载体中这样的一种或多种核酸分子、以及在宿主细胞中的一个或多个位置存在的这样的一种或多种核酸分子。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用,并且是指已引入外源核酸的细胞,包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”,其包括原代转化细胞和源自其的后代,不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲代细胞不完全相同,但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择的具有相同功能或生物学活性的突变型后代。
如本文所用,在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时,“氨基酸序列同一性百分比(%)”和“同一性百分比”和“序列同一性”被定义为,在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后,候选序列(例如,主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以本领域技术范围内的多种方式来实现,例如,使用公众可获得的计算机软件,诸如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的合适参数,包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
氨基酸取代可以包括用另一种氨基酸替代多肽中的一个氨基酸。可以将氨基酸取代引入目的结合分子(例如抗体)和针对所需活性(例如,保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的adcc或cdc)筛选的产物中。
通常可以根据以下常见的侧链特性将氨基酸进行分组:
(1)疏水性的:正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile;
(2)中性亲水性的:cys、ser、thr、asn、gln;
(3)酸性的:asp、glu;
(4)碱性的:his、lys、arg;
(5)影响链取向的残基:gly、pro;
(6)芳香族的:trp、tyr、phe。
非保守氨基酸取代将涉及将这些类别之一的成员与另一个类别交换。
如本文所用,术语“载体”是指能够传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够引导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
术语“包装插页”用于指代通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书,其含有关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、给予、组合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
除非上下文另有明确规定,否则如本文所用,单数形式“一种/一个”(“a”)、“一种/一个”(“an”)和“所述”(“the”)包括复数指示物。例如,“一种/一个”(“a”)或“一种/一个”(“an”)意指“至少一种/至少一个”或“一种或多种/一个或多个”。应理解,本文所述的方面、实施方案和变化包括“包含”方面、实施方案和变化、“由方面、实施方案和变化组成”和/或“基本上由方面、实施方案和变化组成”。
在整个本公开文本中,所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解,范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁,并且不应当被解释为对所要求保护的主题的范围的硬性限制。因此,应当将范围的描述视为已明确公开所有可能的子范围以及该范围内的单独数值。例如,在提供值的范围的情况下,应理解,该范围的上限与下限之间的每个中间值以及该所陈述范围中的任何其他所陈述值或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内,并且也涵盖在所要求保护的主题内,受制于在所陈述范围内任何明确排除的限值。在所陈述范围包括所述限值中的一个或两个的情况下,排除那些所包括限值中的任何一个或两个的范围也被包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何,这都适用。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常用误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如,提及“约x”的描述包括“x”的描述。
如本文所用,“组合物”是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性的、非水性的或其任何组合。
如本文所用,细胞或细胞群针对特定标记呈“阳性”的陈述是指,特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标记时,所述术语是指如通过流式细胞术检测到的,表面表达的存在,例如通过用与所述标记特异性地结合的抗体进行染色并检测所述抗体,其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的,所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色,和/或所述水平与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平基本上相似,和/或所述水平基本上高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平。
如本文所用,细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指,特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中不存在基本上可检测的存在。当提及表面标记时,所述术语是指如通过流式细胞术检测到的,表面表达的不存在,例如通过用与所述标记特异性地结合的抗体进行染色并检测所述抗体,其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到,所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色,和/或所述水平基本上低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平,和/或所述水平与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。
除非另有定义,否则本文使用的所有技术术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下,为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语,并且本文中包含的此类定义不一定应当被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。
iv.示例性实施方案
本文提供的实施方案包括:
1.一种抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(vh)区,所述vh区包含:
含有选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3);或
在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
2.一种抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含与选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的vh区。
3.根据实施方案2所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14(seqidno:355)的cdr-h3,其中x1是a、d、e、g、l、v或w;x2是a、d、g、l、p、q或s;x3是a、d、g、l或y;x4是d、g、p、r、s、v、y或空;x5是d、i、p、s、t、y或空;x6是a、g、i、s、t、v、y或空;x7是a、d、e、f、l、p、s、y或空;x8是p、q、t、y或空;x9是d、g、r、y或空;x10是a、f、y或空;x11是d、f或空;x12是f或空;x13是d、t或y;并且x14是i、l、n、v或y。
4.根据实施方案2或实施方案3所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含:
含有选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列的cdr-h3;或
在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含:
含有氨基酸序列x1x2x3mx4(seqidno:353)的重链互补决定区1(cdr-h1),x1是d或s;x2是y或s;x3是a、g、w或y;并且x4是h、q或s;和/或
含有氨基酸序列x1ix2x3x4x5x6x7x8x9x10x11yx12x13x14x15x16x17(seqidno:354)的重链互补决定区2(cdr-h2),其中x1是f、g、h、v、w或y;x2是n、r、s或v;x3是p、q、s、v、w或y;x4是k或空;x5是a或空;x6是d、g、n、s或y;x7是g或s;x8是g或s;x9是e、g、n、t或s;x10是i、k或t;x11是e、g、n或y;x12是a或v;x13是a、d或q;x14是k或s;x15是f或v;x16是k或q;并且x17是e或g。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含:
含有选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1);和/或
含有选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含:
在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;和/或
在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2。
8.根据实施方案7所述的抗体或其抗原结合片段,其中:
所述cdr-h1包含选自seqidno:1-3、141、143和144中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;
所述cdr-h2包含选自seqidno:4-6、145、147、148和372中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或
所述cdr-h3包含选自seqidno:7-10、149、153-157和376中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
9.根据实施方案7或实施方案8所述的抗体或其抗原结合片段,其中:
所述cdr-h1包含seqidno:1的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;
所述cdr-h2包含seqidno:5的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或
所述cdr-h3包含选自seqidno:10和157中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
10.一种抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含含有重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3的重链可变(vh)区,其中:
所述cdr-h1包含选自seqidno:1-3和140-144中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;
所述cdr-h2包含选自seqidno:4-6、145-148和372-374中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或
所述cdr-h3包含选自seqidno:7-11、149-157、279-287和376-378中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
11.根据实施方案10所述的抗体或其抗原结合片段,其中:
所述cdr-h1包含选自seqidno:1-3、141、143和144中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;
所述cdr-h2包含选自seqidno:4-6、145、147、148和372中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或
所述cdr-h3包含选自seqidno:7-10、149、153-157和376中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
12.根据实施方案10或实施方案11所述的抗体或其抗原结合片段,其中:
所述cdr-h1包含seqidno:1的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1;
所述cdr-h2包含seqidno:5的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h2;和/或
所述cdr-h3包含选自seqidno:10和157中任何一个的氨基酸序列或在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h3。
13.根据实施方案1-10中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3选自:
分别包含seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和8的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、6和11的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:140、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:141、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:141、145和150的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:142、146和151的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:143、147和153的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:144、148和154的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和156的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、372和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、6和377的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、373和152的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和378的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;或
分别包含seqidno:2、374和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。
14.根据实施方案13所述的抗体或抗原结合片段,其中所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3选自:
分别包含seqidno:1、4和7的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和8的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和9的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:141、145和149的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:143、147和153的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:144、148和154的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、6和155的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和156的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:2、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;
分别包含seqidno:3、372和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;或
分别包含seqidno:3、6和376的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。
15.根据实施方案13所述的抗体或抗原结合片段,其中所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3选自:
分别包含seqidno:2、5和10的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3;或
分别包含seqidno:2、5和157的氨基酸序列的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。
16.一种抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。
17.根据实施方案16所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-h1、所述cdr-h2和所述cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。
18.根据实施方案16或实施方案17所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-h1、所述cdr-h2和所述cdr-h3分别包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。
19.根据实施方案1-16中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,其中所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:
含有选自seqidno:59-63、195-203和434-439中任何一个的氨基酸序列的fr1;
含有选自seqidno:64-66和204-209中任何一个的氨基酸序列的fr2;或
含有选自seqidno:67-69、210-216、441和443中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或
含有选自seqidno:70-71、217-220、444和445中任何一个的氨基酸序列的fr4。
21.根据实施方案1-16中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的氨基酸序列。
22.根据实施方案21所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述vh区包含选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的氨基酸序列。
23.根据实施方案21或实施方案22所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述vh区包含选自seqidno:115和256中任何一个的氨基酸序列。
24.根据实施方案1-21中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段不包含轻链可变(vl)区,不包含轻链互补决定区(cdr-l1)、cdr-l2和/或cdr-l3,和/或是仅包含所述vh区的单结构域抗体(sdab)。
25.根据实施方案1-24中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段是仅包含vh区的sdab。
26.根据实施方案1-21中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段进一步包含vl区。
27.根据实施方案26所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区与选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
28.根据实施方案26或实施方案27所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12(seqidno:358)的轻链互补决定区3(cdr-l3),其中x1是a、c、g、h、i、q或s;x2是a、q、s或v;x3是s、w或y;x4是d、f、g、h或y;x5是d、g、m、r、s或t;x6是a、g、h、l、r、s、t或y;x7是l、p、r、s或空;x8是d、g、n、r、s、t或空;x9是a、g、h、l、p或空;x10是f、s或空;x11是l、p、w或y;并且x12是s、t或v。
29.根据实施方案26-28中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含含有选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-l3)或在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l3。
30.根据实施方案26-29中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14x15x16x17(seqidno:356)的轻链互补决定区1(cdr-l1),其中x1是g、k、r、s或t;x2是a、g或s;x3是g、n、s或t;x4是g、k、n、q、r或s;x5是s或空;x6是d、n、v或空;x7是l、v或空;x8是h、s、y或空;x9是s、t或空;x10是s或空;x11是d、g、i、n、s或空;x12是d、e、g、k、i、n或空;x13是f、g、k、n、r、s、y或空;x14是d、k、n、t或空;x15是a、d、g、l、n、s、t或y;x16是l或v;x17是a、h、n、q或s;和/或
含有氨基酸序列x1x2x3x4x5x6x7(seqidno:357)的轻链互补决定区2(cdr-l2),其中x1是a、d、e、n、s、v或w;x2是a、d、n、s或v;x3是a、d、h、i、n或s;x4是d、k、n、q、r或t;x5是l、r或v;x6是a、e、p或q;并且x7是a、d、s或t。
31.根据实施方案26-30中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
含有选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1);和/或
含有选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的轻互补决定区2(cdr-l2)。
32.根据实施方案26-31中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1;和/或
在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l2。
33.根据实施方案26-32中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
含有选自seqidno:26-36、174-178、380-392和394-398中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;
含有选自seqidno:37-46、179-183、399-409和411-414中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2;和/或
含有选自seqidno:47-58、184-194、415-427和429-433中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。
34.根据实施方案33所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
含有选自seqidno:26-28、30、31、33、34、174、176-178和380-382中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;
含有选自seqidno:37-39、41、43、44、179、181-183和399-401中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2;和/或
含有选自seqidno:47-49、51、52、55、56、185、189-194、415-418和421中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。
35.根据实施方案33或实施方案34所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含:
含有选自seqidno:33和178中任何一个的氨基酸序列的cdr-l1;
含有选自seqidno:43和183中任何一个的氨基酸序列的cdr-l2;和/或
含有选自seqidno:194和421中任何一个的氨基酸序列的cdr-l3。
36.根据实施方案26-33中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含选自以下各项的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3:
分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:27、38和48的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:29、40和50的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:31、41和52的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:32、42和53的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:34、44和56的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:35、45和57的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:36、46和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和184的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和185的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和186的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和187的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和189的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:176、181和190的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和192的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:178、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、399和415的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:381、401和417的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:382、402和418的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:383、403和419的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:384、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:385、180和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:386、404和420的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:387、405和422的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:388、406和423的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:388、407和424的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:389、408和425的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:390、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:391、409和426的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:392、40和427的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:394、39和429的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:395、411和430的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:396、412和431的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:396、412和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:397、413和432的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或
分别含有seqidno:398、414和433的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
37.根据实施方案36所述的抗体或抗原结合片段,其中所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3选自:
分别含有seqidno:26、37和47的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:27、38和48的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:28、39和49的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:29、40和50的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、39和51的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:31、41和52的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:32、42和53的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:33、43和55的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:34、44和56的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:35、45和57的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:36、46和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和184的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和185的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和186的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和187的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和189的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:176、181和190的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:177、182和191的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:174、179和192的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:178、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:30、399和415的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:380、400和416的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:381、401和417的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:382、402和418的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:383、403和419的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:384、39和54的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:385、180和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:175、180和188的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:386、404和420的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:387、405和422的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:388、406和423的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:388、407和424的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:389、408和425的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:390、183和193的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:391、409和426的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:392、40和427的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:394、39和429的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:395、411和430的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:396、412和431的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:396、412和58的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;
分别含有seqidno:397、413和432的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或
分别含有seqidno:398、414和433的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
38.根据实施方案36或实施方案37所述的抗体或抗原结合片段,其中所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3选自:
分别包含seqidno:178、183和194的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3;或
分别包含seqidno:33、43和421的氨基酸序列的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
39.根据实施方案26-36中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段包含含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl区,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
40.根据实施方案39所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
41.根据实施方案39或实施方案40所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-l1、所述cdr-l2和所述cdr-l3分别包含在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
42.根据实施方案26-39中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4,其中所述fr1、fr2、fr3和/或fr4分别与在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。
43.根据实施方案26-42中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区包含选自以下各项的fr1、fr2、fr3和/或fr4:
含有选自seqidno:72-82、221-227、446-459和461-466中任何一个的氨基酸序列的fr1;
含有选自seqidno:83-92、228-232、467-477和479-482中任何一个的氨基酸序列的fr2;
含有选自seqidno:93-101、233-242、483-495和497-501中任何一个的氨基酸序列的fr3;和/或
含有选自seqidno:102-109、243-246、502-506和508中任何一个的氨基酸序列的fr4。
44.根据实施方案26-43中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vl区包含选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的氨基酸序列。
45.根据实施方案44所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述vl区包含选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的氨基酸序列。
46.根据实施方案44或实施方案45所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述vl区包含选自seqidno:267和536中任何一个的氨基酸序列。
47.一种抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
分别含有在选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3;和/或
分别含有在选自seqidno:116-127、257-267、534-550和552-557中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3。
48.根据实施方案47所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110-113、115、248、252-256和518-522中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或
分别含有在选自seqidno:116-118、120、121、124、125、258、262-267和534-538中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3。
49.根据实施方案47或实施方案48所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:115和256中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或
分别含有在选自seqidno:267和536中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、cdr-l2和cdr-l3。
50.一种抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
含有分别与seqidno:110和116具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:111和117具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和118具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和119具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和120具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和121具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和122具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和123具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:112和124具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:113和125具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:114和126具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:115和127具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:247和257具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:248和258具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:249和259具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:250和260具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:251和261具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:252和262具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:253和263具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:254和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:255和265具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:256和266具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:518和534具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:519和535具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:520和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:521和537具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:522和538具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:523和539具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:519和540具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:524和541具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:525和261具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:526和542具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:527和543具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:528和544具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:529和545具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:528和546具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:522和547具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:256和548具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:530和549具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:531和550具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:519和552具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和553具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和118具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:533和554具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:115和555具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:524和556具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;或
含有分别与seqidno:519和557具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。
51.根据实施方案50所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
含有分别与seqidno:110和116具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:111和117具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和118具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和120具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:110和121具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:112和124具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:113和125具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:248和258具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:252和262具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:253和263具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:254和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:255和265具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:256和266具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:518和534具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:519和535具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:520和264具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:521和537具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;或
含有分别与seqidno:522和538具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。
52.根据实施方案50或实施方案51所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
含有分别与seqidno:256和267具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区;
含有分别与seqidno:115和536具有至少90%同一性的氨基酸序列的vh区和vl区。
53.根据实施方案50所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段包含与这种seqidno为至少等于或至少约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的vh区序列和/或与这种seqidno为至少等于或至少约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的vl区序列。
54.根据实施方案50或实施方案53所述的抗体或抗原结合片段,其中:
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:111和117的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和119的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和121的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和122的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和123的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:112和124的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:113和125的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:114和126的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和127的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:247和257的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:248和258的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:249和259的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:250和260的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:251和261的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:252和262的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:253和263的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:254和264的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:255和265的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和266的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:518和534的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:520和264的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:521和537的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:522和538的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:523和539的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和540的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:524和541的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:525和261的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:526和542的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:527和543的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:528和544的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:529和545的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:528和546的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:522和547的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和548的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:530和549的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:531和550的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和552的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和553的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:533和554的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和555的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:524和556的氨基酸序列;或
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和557的氨基酸序列。
55.根据实施方案50所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:111和117的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和118的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和121的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:112和124的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:113和125的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:248和258的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:252和262的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:253和263的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:254和264的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:255和265的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和266的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:518和534的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:520和264的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:521和537的氨基酸序列;或
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:522和538的氨基酸序列。
56.根据实施方案54或实施方案55所述的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列。
57.根据实施方案1-54中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段特异性地结合bcma蛋白。
58.根据实施方案57所述的抗体或抗原结合片段,其中所述bcma蛋白是人bcma蛋白、小鼠bcma蛋白或非人灵长类bcma蛋白。
59.根据实施方案57所述的抗体或抗原结合片段,其中所述bcma蛋白是人bcma蛋白。
60.根据实施方案1-59中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含含有选自seqidno:7和157中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h3,和/或
含有选自seqidno:47、51、194和416中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l3。
61.根据实施方案1-60中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段进一步包含:
含有选自seqidno:1和2中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1,和/或
含有选自seqidno:26、30、178和380中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1;
含有选自seqidno:4或5中任何一个的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)或在选自seqidno:110、256和519中任何一个的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h2,和/或
含有选自seqidno:37、39、183或400中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)或在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l2。
62.根据实施方案1-61中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在选自seqidno:110、256和519中任何一个的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl区,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在选自seqidno:116、120、267和535中任何一个的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
63.根据实施方案1-62中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中:
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和116的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:110和120的氨基酸序列;
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:256和267的氨基酸序列;或
所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:519和535的氨基酸序列。
64.根据实施方案1-59中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含含有seqidno:10的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h3,和/或
含有seqidno:421的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)或在seqidno:536的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l3。
65.根据实施方案1-59和64中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段进一步包含:
含有seqidno:2的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1,和/或
含有选自seqidno:33中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)或在选自seqidno:536中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1;和/或
含有seqidno:5的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)或在seqidno:115的重链可变(vh)区氨基酸序列内含有的cdr-h1,和/或
含有选自seqidno:43中任何一个的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)或在选自seqidno:536中任何一个的轻链可变(vl)区氨基酸序列内含有的cdr-l1。
66.根据实施方案1-59、64和65中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段包含含有cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的vh区,所述cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3分别包含在seqidno:115的vh区氨基酸序列内含有的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列;和/或含有cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的vl区,所述cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3分别包含在seqidno:536的vl区氨基酸序列内含有的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。
67.根据实施方案1-59和64中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段的所述vh和vl区分别包含seqidno:115和536的氨基酸序列。
68.根据实施方案1-59中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段进一步与小鼠bcma或非人灵长类动物bcma特异性地结合。
69.根据实施方案58-68中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述人bcma蛋白包含seqidno:367或368的氨基酸序列。
70.根据实施方案1-69中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段是人的。
71.根据实施方案1-70中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体是人抗体。
72.根据实施方案70或实施方案71所述的抗体或抗原结合片段,其中:
所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(vh)区,所述vh区包含与由种系核苷酸人重链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,与由种系核苷酸人重链d区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,和/或与由种系核苷酸人重链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分;和/或
所述抗体或抗原结合片段包含轻链可变(vl)区,所述vl区包含与由种系核苷酸人κ或λ链v区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分,和/或与由种系核苷酸人κ或λ链j区段编码的氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的一部分。
73.根据实施方案70-72中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中:
所述cdr-h1和/或cdr-h2包含分别与由种系核苷酸人重链v区段编码的序列内的cdr-h1和/或cdr-h2的氨基酸序列相比为100%相同或具有不多于一个氨基酸差异的序列;和/或
所述cdr-l1和/或cdr-l2包含分别与由种系核苷酸人κ或λv区段编码的序列内的cdr-l1和/或cdr-l2的氨基酸序列相比为100%相同或具有不多于一个氨基酸差异的序列。
74.根据实施方案1-73中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段是重组的。
75.根据实施方案1-74中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述抗体或抗原结合片段是单克隆的。
76.根据实施方案1-75中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段是抗原结合片段。
77.根据实施方案1-76中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段是单链片段。
78.根据实施方案1-77中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区位于所述vl区的氨基末端。
79.根据实施方案1-78中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述vh区位于所述vl区的羧基末端。
80.根据实施方案1-79中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段是包含通过柔性接头连接的抗体vh和vl区的片段。
81.根据实施方案77或实施方案80所述的抗体或抗原结合片段,其中所述片段包含scfv。
82.根据实施方案81所述的抗体或抗原结合片段,其中所述scfv包含含有氨基酸序列ggggsggggsggggs(seqidno:361)的接头。
83.根据实施方案81或实施方案82所述的抗体或抗原结合片段,其中所述scfv包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列,或与选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
84.根据实施方案81-83中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述scfv包含选自seqidno:128、129、130、132、133、136、137、269、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562和563中任何一个的氨基酸序列,或与选自seqidno:128、129、130、132、133、136、137、269、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562和563中任何一个的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
85.根据实施方案81-84中任一项所述的抗体或抗原结合片段,其中所述scfv包含选自seqidno:278和560中任何一个的氨基酸序列,或与选自seqidno:278和560中任何一个的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。
86.一种单链细胞表面蛋白,其包含根据实施方案1-85中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
87.一种单链细胞表面蛋白,其包含选自seqidno:128-139、268-278、558-576和578-583中任何一个的scfv氨基酸序列或包含选自seqidno:110-115、247-256、518-531和533中任何一个的vh区氨基酸序列。
88.根据实施方案87所述的单链细胞表面蛋白,其中所述scfv包含选自seqidno:128、129、130、132、133、136、137、269、273、274、275、276、277、278、558、559、560、561、562和563中任何一个的氨基酸序列。
89.根据实施方案87或实施方案88所述的单链细胞表面蛋白,其中所述scfv包含选自seqidno:278和560中任何一个的氨基酸序列。
90.根据实施方案1-87中任一项所述的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段进一步包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分。
91.根据实施方案90所述的抗体或抗原结合片段,其中免疫球蛋白恒定区的所述部分包含铰链区的至少一部分。
92.根据实施方案90所述的抗体或抗原结合片段,其中免疫球蛋白恒定区的所述部分包含fc区。
93.根据实施方案92所述的抗体或抗原结合片段,其中所述fc区是人igg的fc区。
94.一种缀合物,其包含根据实施方案1-98中任一项所述的抗体或抗原结合片段和异源分子或部分。
95.一种嵌合抗原受体(car),其包含细胞外部分和细胞内信号传导区域,所述细胞外部分含有根据实施方案1-93中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
96.根据实施方案95所述的嵌合抗原受体,其中所述抗体或抗原结合片段包含仅含有vh区的sdab或scfv,并且所述细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。
97.根据实施方案96所述的嵌合抗原受体,其中所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域、和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。
98.根据实施方案97所述的嵌合抗原受体,其中所述细胞内信号传导结构域是或包含cd3链任选地cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
99.根据实施方案95-98中任一项所述的嵌合抗原受体,其中所述重组受体进一步包含设置在所述细胞外结构域与所述细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。
100.根据实施方案99所述的嵌合抗原受体,其中所述跨膜结构域包含cd28的跨膜部分。
101.根据实施方案95-100中任一项所述的嵌合抗原受体,其中所述细胞内信号传导区域进一步包含共刺激信号传导结构域。
102.根据实施方案101所述的嵌合抗原受体,其中所述共刺激信号传导结构域包含t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
103.根据实施方案101或实施方案102所述的嵌合抗原受体,其中所述共刺激信号传导结构域包含cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
104.根据实施方案101-103中任一项所述的嵌合抗原受体,其中所述共刺激信号传导结构域位于所述跨膜结构域与所述细胞内信号传导结构域之间。
105.一种多核苷酸,其编码根据实施方案1-93中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据实施方案94所述的缀合物或根据实施方案95-104中任一项所述的嵌合抗原受体。
106.根据实施方案105所述的多核苷酸,其进一步编码gm-csf信号序列、cd8信号序列、igκ信号序列或cd33信号序列。
107.一种载体,其包含根据实施方案105或实施方案106所述的多核苷酸。
108.根据实施方案107所述的载体,其中所述载体是表达载体。
109.根据实施方案107或实施方案108所述的载体,其中所述载体是病毒载体。
110.根据实施方案109所述的载体,其中所述病毒载体是逆转录病毒载体。
111.根据实施方案109或实施方案110所述的载体,其中所述病毒载体是慢病毒载体。
112.根据实施方案111所述的载体,其中所述慢病毒载体源自hiv-1。
113.一种工程化细胞,其包含根据实施方案107-112中任一项所述的载体。
114.一种工程化细胞,其表达包含根据实施方案1-93中任一项所述的抗体或抗原结合片段的受体、根据实施方案94所述的缀合物或根据实施方案95-102中任一项所述的嵌合抗原受体。
115.根据实施方案114或实施方案115所述的工程化细胞,其中所述工程化细胞是t细胞。
116.一种组合物,所述组合物包含根据实施方案1-93中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据实施方案94所述的缀合物、根据实施方案95-102中任一项所述的嵌合抗原受体或根据实施方案113-115中任一项所述的细胞。
117.根据实施方案116所述的组合物,其进一步包含药学上可接受的赋形剂。
118.一种治疗方法,其包括将根据实施方案116或实施方案117所述的组合物给予至患有与bcma相关的疾病或障碍的受试者。
119.一种治疗方法,其包括将根据实施方案1-93中任一项所述的抗体或抗原结合片段、根据实施方案94所述的缀合物、根据实施方案95-102中任一项所述的嵌合抗原受体或根据实施方案113-115中任一项所述的细胞给予至患有与bcma相关的疾病或障碍的受试者。
120.根据实施方案118或实施方案119所述的方法,其中所述与bcma相关的疾病或障碍与bcma表达相关。
121.根据实施方案118-120中任一项所述的方法,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是b细胞相关障碍。
122.根据实施方案118-121中任一项所述的方法,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。
123.根据实施方案122所述的方法,其中所述自身免疫性疾病或障碍是系统性红斑狼疮(sle)、狼疮性肾炎、炎性肠病、类风湿性关节炎、anca相关性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(itp)、血栓性血小板减少性紫癜(ttp)、自身免疫性血小板减少症、查加斯病、格雷夫斯病、韦格纳氏肉芽肿病、结节性多动脉炎、舍格伦综合征、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、牛皮癣、iga肾病、igm多发性周围神经病变、血管炎、糖尿病、雷诺综合征、抗磷脂综合征、古德帕斯丘病、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力或进行性肾小球肾炎。
124.根据实施方案118-121中任一项所述的方法,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是癌症。
125.根据实施方案124所述的方法,其中所述癌症是表达bcma的癌症。
126.根据实施方案124或实施方案125所述的方法,其中所述癌症是b细胞恶性肿瘤。
127.根据实施方案124-126中任一项所述的方法,其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。
128.根据实施方案127所述的方法,其中所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样b细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺b细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)或套细胞淋巴瘤(mcl)。
129.根据实施方案127所述的方法,其中所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(all)。
130.根据实施方案127所述的方法,其中所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(mm)或浆细胞瘤。
131.根据实施方案116或实施方案117所述的组合物,其用于在治疗与bcma相关的疾病或障碍中使用。
132.根据实施方案116或实施方案117所述的组合物用于制造治疗与bcma相关的疾病或障碍的药物的用途。
133.根据实施方案132所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述与bcma相关的疾病或障碍与bcma表达相关。
134.根据实施方案131-133中任一项所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是b细胞相关障碍。
135.根据实施方案131-134中任一项所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。
136.根据实施方案135所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述自身免疫性疾病或障碍是系统性红斑狼疮(sle)、狼疮性肾炎、炎性肠病、类风湿性关节炎、anca相关性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(itp)、血栓性血小板减少性紫癜(ttp)、自身免疫性血小板减少症、查加斯病、格雷夫斯病、韦格纳氏肉芽肿病、结节性多动脉炎、舍格伦综合征、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、牛皮癣、iga肾病、igm多发性周围神经病变、血管炎、糖尿病、雷诺综合征、抗磷脂综合征、古德帕斯丘病、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力或快速进行性肾小球肾炎。
137.根据实施方案131-134中任一项所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述与bcma相关的疾病或障碍是癌症。
138.根据实施方案137所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述癌症是表达bcma的癌症。
139.根据实施方案137或实施方案138所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述癌症是b细胞恶性肿瘤。
140.根据实施方案137-139中任一项所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。
141.根据实施方案140所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(malt)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样b细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺b细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)或套细胞淋巴瘤(mcl)。
142.根据实施方案140所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(all)。
143.根据实施方案140所述的用于所述用途的组合物或用途,其中所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(mm)或浆细胞瘤。
v.实施例
以下实施例被包括在内仅用于说明目的,并不旨在限制本发明的范围。
实施例1:抗bcma抗体(仅vh链)的产生和评估
产生并评估含有重链可变(vh)区的示例性抗bcma抗体,所述vh区即使在不存在轻链可变(vl)区的情况下也与bcma特异性地结合。
1a.文库选择和抗体产生
通过对在无细胞系统中展示的dsdna编码的his标记的人正常供体抗体vh文库的成员执行的一系列选择步骤,可以产生许多结合bcma的vh区。对vh文库的成员进行多轮筛选,以选择与融合至免疫球蛋白fc区的可溶性人bcma(hbcma-fc)特异性地结合的vh区。使用荧光色素缀合的抗his抗体通过流式细胞术,针对与不表达bcma的亲本hek293细胞系相比与表达人bcma的重组hek293细胞系(hbcma/hek293细胞系)的结合,以及与表达内源性bcma的人骨髓瘤细胞系(h929细胞)的结合筛选来自所选hbcma-fc库的vh区。结果鉴定出展现出与hbcma/hek293细胞特异性结合以及在较低的程度上与h929细胞特异性结合的vh区克隆。
对展现出与表达bcma的细胞系特异性地结合但不与bcma阴性对照细胞特异性地结合的示例性vh克隆进行测序并纯化以供进一步表征。纯化并滴定克隆,并且采用荧光色素缀合的抗his抗体使用基于流式细胞术的测定测量所述克隆与hbcma/hek293细胞的结合亲和力(ec50)。表3列出了示例性克隆的含有源自人vh3的框架区的重链互补决定区3(cdr-h3)序列以及在本研究中观察到的它们各自的结合亲和力(ec50)。
表3.代表性vh克隆的cdr3氨基酸序列
a根据kabat编号示出的氨基酸序列。
bnd指示未检测到
实施例2:抗bcma抗体(scfv)的产生和评估
鉴定出形式为单链抗体片段(scfv)的示例性抗bcma抗体,并评估其与bcma的结合。
2a.文库选择和scfv抗体产生
通过对在无细胞系统中展示的dsdna编码的人正常供体抗体文库执行的各种选择,产生示例性抗bcmascfv抗体。在一种方法中,从实施例1中所述方法的第一轮筛选中富集的vh区文库成员通过与人正常供体vl文库的成员混排(shuffling)进行配对,以产生呈vh-(g4s)3-vl形式的scfv文库。在针对与亲本hek293细胞相比与表达bcma的hek293细胞的特异性结合的随后几轮选择中富集所得的scfv文库。
在另一种方法中,通过在存在或不存在用小鼠抗bcma参考scfv抗体(bcma-c1,vl-vhscfv抗体,seqidno:328;或bcma-c2,vh-vlscfv抗体,seqidno:329)竞争性洗脱的情况下,通过针对与hbcma-fc的bcma特异性结合筛选源自正常供体的人scfv文库来进行从头选择。在至少2轮的选择之后,回收scfv结合者。
用体外翻译的粗制细胞裂解物或用细菌产生的上清液通过流式细胞术评估与不表达bcma的对照细胞相比所得的scfv克隆与表达bcma的hek293细胞的特异性结合。进一步分析了展示出对bcma具有结合偏好的某些scfv克隆。
使用正向和反向引物对所选scfv克隆进行测序并纯化以供进一步表征。表4列出了与scfv的氨基酸(aa)和核苷酸(nt)序列以及相应的重链(vh)或轻链(vl)可变区、cdr和框架区(fr)的氨基酸序列对应的序列标识符(seqidno)。对于克隆bcma-22,轻链cdr3的被观察到已从种系框架区遗传的首个残基(半胱氨酸)被丝氨酸取代,以产生另外的scfv,称为bcma-23。表4还列出在如随后实施例所述的竞争研究中用作对照的示例性小鼠抗bcma参考抗体的序列。
表4.示例性克隆和参考抗体的序列标识符(seqidno)
2b.结合亲和力
如实施例1所述,纯化并滴定克隆,并且使用荧光色素缀合的检测抗体利用基于流式细胞术的测定评估所述克隆与表达hbmca的hek293细胞的结合亲和力(ec50)。还确定小鼠抗bcma抗体(bcma-c1,vl-vhscfv抗体(seqidno:328);或bcma-c2,vh-vlscfv抗体(seqidno:329))的ec50。
2c.结合选择性
评估示例性scfv克隆与表达hbmca的hek293细胞的结合并将结合与亲本hek293细胞进行比较。结果显示克隆展现出与亲本hek293细胞相比对表达hbmca的hek293细胞的结合选择性。作为例子,克隆bcma-18、-19、-20、-21和-22分别展现出2.2倍、4.2倍、10.8倍、3.4倍和7.5倍的选择性结合。
评估与表达中等水平的内源性bcma的opm2和rpmi-8226细胞系相比示例性scfv克隆与过表达hbmca的hek293细胞的结合。结果显示,与表达中等水平bcma的opm2和rpmi-8226细胞系相比,许多测试克隆展现出与表达高水平bcma的表达hbmca的hek293细胞更高的结合。例如,克隆bcma-1、-2、-3、-4、-5、-7、-8、-9、-10、-12、-18、-19、-20、-21、-22、-30、-31和-32展现出与过表达hbcma的hek293细胞更高的结合。在本特定实验中,与阴性对照相比,bcma-13、-14和-16未展现出与表达hbcma的hek293细胞显著更高的结合。
实施例3:抗bcma抗体(scfv)的产生和评估
使用完全不连续的表位定位通过在支架上化学连接肽(chemicallinkageofpeptidesontoscaffolds,clips;pepscanprestobv,荷兰莱利斯塔德;参见例如timmerman等人,(2007)j.mol.recognit.20:283-329)评估由示例性抗bcmascfv克隆(bcma-1、bcma-5、bcma-9、bcma-23、bcma-25、bcma-26、bcma-52和bcma-55抗bcmascfv)识别(例如特异性地结合)的表位。使用抗bcmascfv克隆(如与小鼠fc融合的那些(scfv-mfc))进行定位。
基于组合矩阵设计产生人bcma的氨基酸残基1-54(如seqidno:367的氨基酸残基1-54所示)的线性和构象肽文库。在氨基官能化固体支持物上使用线性肽和结构模拟物,包括单环、α-螺旋、β-转角、组合和线性二硫桥模拟物和不连续的表位模拟物,以及阳性和阴性对照肽。
使用elisa确定与表位文库中的肽的结合亲和力。将肽阵列与含有scfv的溶液在4℃下孵育过夜。在迭代筛选中使用亲和力信息来定义表位的序列和构象。生成两个或更多个环的亲和力信息的热图。
观察到评估的scfv识别构象表位,所述构象表位包括bcma肽序列的若干个不连续肽段。观察到bcma-1、bcma-5、bcma-23和bcma-25scfv与肽30sntppltcqr39(seqidno:608所示)结合,所述肽可以以线性形式被识别。在一些方面,此类抗体识别包含seqidno:608这种肽的残基的非线性或线性表位,并且在一些方面,识别进一步包含21cipcqlr27(seqidno:609所示)、30sntppltcqr39(seqidno:608)和/或44svtnsvk50(seqidno:610所示)的残基的非线性表位。观察到bcma-26scfv识别包含存在于8csqneyf14(seqidno:611所示)和17llhacipcqlr27(seqidno:612所示)中的残基的表位。观察到bcma-52-scfv-mfc与含有以下不连续肽的残基的表位结合:10qneyf14(seqidno:613)、21cipcql26(seqidno:614)和7cqryc41(seqidno:615)。观察到bcma-55-scfv-mfc与表位特异性地结合,所述表位含有存在于包含bcma多肽序列的不连续部分的肽中的残基,所述不连续部分单独地包含以下序列:1mlmag6(seqidno:616)、13yfdsl17(seqidno:618)和25qlrcssntppl35(seqidno:619)。在一些实施方案中,所提供的抗体或受体与表位特异性地结合,所述表位包含存在于具有以下序列的不连续肽中的一个或多个(例如,每一个)内的残基:mlmag(seqidno:616)、yfdsl(seqidno:618)和qlrcssntppl(seqidno:619)。在一些方面,所提供的抗体或受体与表位特异性地结合,所述表位包含存在于具有以下序列的不连续肽中的一个或多个(例如,每一个)内的残基:mlmag(seqidno:616)、yfdsll(seqidno:620)和qlrcssntppl(seqidno:619);在一些方面,所提供的抗体或受体与表位特异性地结合,所述表位包含存在于具有以下序列的不连续肽中的一个或多个(例如,每一个)内的残基:mlmag(seqidno:617)、qneyfdsll(seqidno:617)和qlrcssntppl(seqidno:619)。
本发明在范围上并不旨在限于具体公开的实施方案,提供具体公开的实施方案例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授,对所描述的组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不背离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化,并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
序列表
<110>junotherapeutics,inc.
sather,blythed.
<120>对b细胞成熟抗原具有特异性的嵌合抗原受体和编码多核苷酸
<130>735042004340
<140>pct/us2018/058767
<141>2018-11-01
<150>us62/580,431
<151>2017-11-01
<150>us62/596,772
<151>2017-12-08
<160>620
<170>用于windows4.0版的fastseq
<210>1
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<212>prt
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15
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-26、-32、-33、-35、-36、-37、-38、-40、-41、-47、
-48、-49cdr-h1(aa)kabat编码
<400>2
asptyrtyrmetser
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(aa)kabat编码
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asptyralamethis
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<211>19
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<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51cdr-h2(aa)kabat编码
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pheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaalaser
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vallysgly
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-32、-35、-36、-37、-38、-40、-47、-48、-49cdr-h2
(aa)kabat编码
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tyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspservallys
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gly
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151015
gly
<210>7
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51和vh-2cdr-h3(aa)
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trpseralaprothrasptyr
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<212>prt
<213>人工序列
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valaspglyproproserseraspile
15
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<211>9
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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<223>bcma-9、-36、-37、-38、-41和vh-8cdr-h3(aa)
<400>9
valaspglyasptyrvalaspasptyr
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10、-12、-26、-32、-47、-48、-49和vh-1
cdr-h3(aa)
<400>10
valaspglyproproserpheaspile
15
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<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-34cdr-h3(aa)
<400>11
aspleuglyproasptyraspproaspalapheaspile
1510
<210>12
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-30、-31、
-42、-44、-45、-46、-51cdr-h1(aa)chothia
编码
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glyphethrpheglyasptyr
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
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<220>
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-32、-33、-35、-36、-37、-38、-40、-41、-47、-48、
-49cdr-h1(aa)chothia编码
<400>13
glyphethrpheserasptyr
15
<210>14
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10cdr-h1(aa)chothia编码
<400>14
glyphepropheserasptyr
15
<210>15
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-20、-27、-28、-29、-34、-39cdr-h1(aa)
chothia编码
<400>15
glyphethrpheaspasptyr
15
<210>16
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51cdr-h2(aa)chothia编码
<400>16
argserlysalatyrglyglythr
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-9、-10、-12、-17、-21、-22、-23、-26、
-32、-35、-36、-37、-38、-40、-47、-48cdr-h2(aa)
chothia编码
<400>17
serserserglyserthr
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-20、-24、-27、-29、-30、-34、-39cdr-h2
(aa)chothia编码
<400>18
sertrpasnserglyser
15
<210>19
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51cdr-h1(aa)abm编码
<400>19
glyphethrpheglyasptyralametser
1510
<210>20
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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-32、-33、-35、-36、-37、-38、-40、-41、-47、-48、
-49cdr-h1(aa)abm编码
<400>20
glyphethrpheserasptyrtyrmetser
1510
<210>21
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10cdr-h1(aa)abm编码
<400>21
glyphepropheserasptyrtyrmetser
1510
<210>22
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-20、-27、-28、-29、-34、-39cdr-h1(aa)
abm编码
<400>22
glyphethrpheaspasptyralamethis
1510
<210>23
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51cdr-h2(aa)abm编码
<400>23
pheileargserlysalatyrglyglythrthrglu
1510
<210>24
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-9、-10、-12、-17、-21、-22、-23、-26、
-32、-35、-36、-37、-38、-40、-47、-48、-49cdr-h2
(aa)abm编码
<400>24
tyrileserserserglyserthriletyr
1510
<210>25
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-20、-24、-27、-29、-30、-34、-39cdr-h2
(aa)abm编码
<400>25
glyilesertrpasnserglyserilegly
1510
<210>26
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1cdr-l1(aa)
<400>26
lysserserglnservalleuserthrserasnasnlysasntyrleu
151015
ala
<210>27
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2cdr-l1(aa)
<400>27
argalaserglnserilelysthrasnleuala
1510
<210>28
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-46cdr-l1(aa)
<400>28
lysserserglnservalleuhisserserasnasnlysasntyrleu
151015
ala
<210>29
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4cdr-l1(aa)
<400>29
argalaserglnaspileargasnserleuala
1510
<210>30
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-5、-8、-24cdr-l1(aa)
<400>30
lysserserglnservalleutyrserserasnasnlysasntyrleu
151015
ala
<210>31
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6cdr-l1(aa)
<400>31
argalaserglnserileserasnserleuala
1510
<210>32
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7cdr-l1(aa)
<400>32
argalaserglnaspileglyasptyrleuala
1510
<210>33
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9、-26、-35cdr-l1(aa)
<400>33
glyalaasnasnileglyserlysservalhis
1510
<210>34
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10cdr-l1(aa)
<400>34
glyglyasnasnilegluarglysasnvalhis
1510
<210>35
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11cdr-l1(aa)
<400>35
serglyserserserasnileglyserasnalavalasn
1510
<210>36
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12cdr-l1(aa)
<400>36
serglyserargserasnileglyasnasntyrvalser
1510
<210>37
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1cdr-l2(aa)
<400>37
trpalaserthrarggluala
15
<210>38
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2cdr-l2(aa)
<400>38
alaalaserthrargalathr
15
<210>39
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-5、-8、-31、-44、-46cdr-l2(aa)
<400>39
trpalaserthrarggluser
15
<210>40
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4、-42cdr-l2(aa)
<400>40
alaalaserargleugluser
15
<210>41
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6cdr-l2(aa)
<400>41
alaalaserasnvalgluasp
15
<210>42
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7cdr-l2(aa)
<400>42
valalaserthrleuglnser
15
<210>43
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9、-26、-35cdr-l2(aa)
<400>43
aspaspaspaspargproser
15
<210>44
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10cdr-l2(aa)
<400>44
aspaspseraspargalaser
15
<210>45
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11cdr-l2(aa)
<400>45
asnserhisglnargproser
15
<210>46
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12cdr-l2(aa)
<400>46
aspasnalalysargproser
15
<210>47
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1cdr-l3(aa)
<400>47
glnglntyrpheserserprotyrthr
15
<210>48
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2cdr-l3(aa)
<400>48
glnglntyrglyserserprothr
15
<210>49
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-46cdr-l3(aa)
<400>49
glnglntyrtyrthrthrproleuthr
15
<210>50
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4cdr-l3(aa)
<400>50
glnglntyrtyrserleuproleuser
15
<210>51
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-5cdr-l3(aa)
<400>51
glnglntyrtyrserthrprotrpthr
15
<210>52
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6cdr-l3(aa)
<400>52
glnglnserhismettyrproprothr
15
<210>53
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7cdr-l3(aa)
<400>53
glnglntyrhisserhisprotrpthr
15
<210>54
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-8、-31cdr-l3(aa)
<400>54
glnglntyrtyrserthrprotyrthr
15
<210>55
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9cdr-l3(aa)
<400>55
hisvaltrpaspargserargasphistyrval
1510
<210>56
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10cdr-l3(aa)
<400>56
glnalatrpaspserserserthrleutyrval
1510
<210>57
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11cdr-l3(aa)
<400>57
alaalatrpaspaspserleuargglytyrval
1510
<210>58
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12、-32、-48cdr-l3(aa)
<400>58
glnvaltrpaspserserserasphistrpval
1510
<210>59
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-45、-46vhfr1
(aa)
<400>59
glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrphegly
202530
<210>60
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-12、-22、-23、-26、-40、-48vhfr1(aa)
<400>60
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>61
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9、-24、-35、-37vhfr1(aa)
<400>61
gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>62
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10vhfr1(aa)
<400>62
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphepropheser
202530
<210>63
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11、-28、-29、-39vhfr1(aa)
<400>63
glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheasp
202530
<210>64
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51vhfr2(aa)
<400>64
trppheargglnalaproglylysglyleuglutrpvalgly
1510
<210>65
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-9、-10、-12、-21、-22、-23、-24、-26、
-32、-33、-35、-36、-37、-38、-40、-41、-47、-48、
-49vhfr2(aa)
<400>65
trpileargglnalaproglylysglyleuglutrpvalser
1510
<210>66
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11vhfr2(aa)
<400>66
trpvalargargalaproglylysglyleuglutrpvalser
1510
<210>67
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-25、-31、-42、
-44、-45、-46、-51vhfr3(aa)
<400>67
argphethrileserargaspaspserlysserilealatyrleugln
151015
metasnserleulysthrgluaspthralavaltyrtyrcysalaala
202530
<210>68
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-10、-12、-21、-22、-23、-26、-32、-40、
-41、-48、-49vhfr3(aa)
<400>68
argphethrileserargaspasnalalysasnserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalalys
202530
<210>69
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9、-11、-17、-24、-28、-29、-30、-33、-34、
-35、-36、-38、-39vhfr3(aa)
<400>69
argphethrileserargaspasnalalysasnserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalaarg
202530
<210>70
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-15、-16、-18、
-20、-21、-22、-23、-25、-27、-31、-35、-36、-37、
-38、-40、-41、-42、-44、-45、-46、-51vhfr4(aa)
<400>70
trpglyglnglythrleuvalthrvalserser
1510
<210>71
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-10、-11、-12、-24、-26、-29、-30、-32、
-34、-39、-48、-49、-50vhfr4(aa)
<400>71
trpglyglnglythrmetvalthrvalserser
1510
<210>72
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1vlfr1(aa)
<400>72
aspilevalmetthrglnserproaspserleuservalserprogly
151015
gluargalathrilesercys
20
<210>73
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2vlfr1(aa)
<400>73
gluilevalmetthrglnserproalathrleuservalserprogly
151015
gluthralathrleusercys
20
<210>74
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-46vlfr1(aa)
<400>74
aspilevalmetthrglnserproaspserleuvalvalserleugly
151015
gluargalathrileasncys
20
<210>75
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4vlfr1(aa)
<400>75
alaileargmetthrglnserproserserleuseralaserleugly
151015
aspargvalthrilethrcys
20
<210>76
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-5、-8、-24vlfr1(aa)
<400>76
aspilevalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly
151015
gluargalathrileasncys
20
<210>77
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6vlfr1(aa)
<400>77
aspilevalmetthrglnserproserserleuservalservalgly
151015
gluargvalthrilethrcys
20
<210>78
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7vlfr1(aa)
<400>78
valileglnleuthrglnserproserserleuseralaservalgly
151015
aspargvalthrilethrcys
20
<210>79
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-9vlfr1(aa)
<400>79
sertyrgluleuthrglnproproservalservalalaproglygln
151015
thralaargvalthrcys
20
<210>80
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10、-26vlfr1(aa)
<400>80
sertyrvalleuthrglnproproservalservalalaproglygln
151015
thralaargilethrcys
20
<210>81
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11vlfr1(aa)
<400>81
glnleuvalleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercys
20
<210>82
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12vlfr1(aa)
<400>82
glnseralaleuthrglnproproservalseralaalaproglygln
151015
lysvalthrilesercys
20
<210>83
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1vlfr2(aa)
<400>83
trptyrglnglnlysproglyglnproproargleuleuleutyr
151015
<210>84
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2、-34vlfr2(aa)
<400>84
trptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuiletyr
151015
<210>85
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-5、-8、-24、-44、-46vlfr2(aa)
<400>85
trptyrglnglnlysproglyglnproprolysleuleuiletyr
151015
<210>86
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4vlfr2(aa)
<400>86
trptyrglnglnargproglylysalaprolysleuleuleuser
151015
<210>87
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6vlfr2(aa)
<400>87
trptyrlysglnargproglyglualaprolysleuleuilehis
151015
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<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7vlfr2(aa)
<400>88
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151015
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<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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151015
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<223>合成的
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151015
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<220>
<223>合成的
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151015
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<220>
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151015
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<220>
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<400>93
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151015
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<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>94
glyileproaspargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leuthrilethrargleugluprogluaspphealavaltyrtyrcys
202530
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<211>32
<212>prt
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<220>
<223>合成的
<220>
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151015
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202530
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151015
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<220>
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glyvalproserargpheserglyserglyserglythrhisphethr
151015
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202530
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<212>prt
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<220>
<223>合成的
<220>
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glyileprogluargpheserglyserasnserglyasnthralathr
151015
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202530
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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glyileprogluargpheseralaserasnserglyasnthralathr
151015
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202530
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<212>prt
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<220>
<223>合成的
<220>
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglythrseralaser
151015
leualaileasnglyleuglnsergluaspglualaasptyrtyrcys
202530
<210>101
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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glyileproaspargpheserglyserlysserglythrseralathr
151015
leuaspilealaglyleuglnthrglyaspglualaasptyrtyrcys
202530
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
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<212>prt
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<220>
<223>合成的
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pheglyglnglythrlysleugluilelys
1510
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-37、-38、-41、-48、-49、-50vlfr4(aa)
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pheglyglyglythrlysleuthrvalleu
1510
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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(aa)
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrpheglyasptyr
202530
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505560
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65707580
alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr
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100105110
leuvalthrvalserser
115
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<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2vh链(aa)
<400>111
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
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100105110
metvalthrvalserser
115
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<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>112
gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargvalaspglyasptyrvalaspasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
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<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10vh链(aa)
<400>113
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphepropheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyproproserpheaspiletrpglyglnglythr
100105110
metvalthrvalserser
115
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<211>122
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11vh链(aa)
<400>114
glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheaspasptyr
202530
alamethistrpvalargargalaproglylysglyleuglutrpval
354045
serglyilesertrpasnserglyserileglytyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargaspleuglyproasptyraspproaspalapheaspiletrp
100105110
glyglnglythrmetvalthrvalserser
115120
<210>115
<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12、-26、-48vh链(aa)
<400>115
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyproproserpheaspiletrpglyglnglythr
100105110
metvalthrvalserser
115
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<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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aspilevalmetthrglnserproaspserleuservalserprogly
151015
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202530
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354045
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505560
proaspargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthr
65707580
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859095
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100105110
lys
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2vl链(aa)
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gluilevalmetthrglnserproalathrleuservalserprogly
151015
gluthralathrleusercysargalaserglnserilelysthrasn
202530
leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile
354045
tyralaalaserthrargalathrglyileproaspargphesergly
505560
serglyserglythraspphethrleuthrilethrargleuglupro
65707580
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859095
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<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3、-46vl链(aa)
<400>118
aspilevalmetthrglnserproaspserleuvalvalserleugly
151015
gluargalathrileasncyslysserserglnservalleuhisser
202530
serasnasnlysasntyrleualatrptyrglnglnlysproglygln
354045
proprolysleuleuiletyrtrpalaserthrarggluserglyval
505560
proaspargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthr
65707580
ileserserleuglnalagluaspvalalavaltyrtyrcysglngln
859095
tyrtyrthrthrproleuthrpheglyglyglythrlysvalgluile
100105110
lys
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<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-4vl链(aa)
<400>119
alaileargmetthrglnserproserserleuseralaserleugly
151015
aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspileargasnser
202530
leualatrptyrglnglnargproglylysalaprolysleuleuleu
354045
seralaalaserargleugluserglyvalproserargphesergly
505560
thrthrserglyalaglutyralaleuserileserserleuglnpro
65707580
gluaspvalalasertyrphecysglnglntyrtyrserleuproleu
859095
serpheglyglyglythrlysvalgluilelys
100105
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<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-5vl链(aa)
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aspilevalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly
151015
gluargalathrileasncyslysserserglnservalleutyrser
202530
serasnasnlysasntyrleualatrptyrglnglnlysproglygln
354045
proprolysleuleuiletyrtrpalaserthrarggluserglyval
505560
proaspargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthr
65707580
ileserserleuglnalagluaspvalalavaltyrtyrcysglngln
859095
tyrtyrserthrprotrpthrpheglyglnglythrlysvalaspile
100105110
lys
<210>121
<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-6vl链(aa)
<400>121
aspilevalmetthrglnserproserserleuservalservalgly
151015
gluargvalthrilethrcysargalaserglnserileserasnser
202530
leualatrptyrlysglnargproglyglualaprolysleuleuile
354045
hisalaalaserasnvalgluaspglyvalproserargphesergly
505560
argglyserglythrvalphethrleualaileserasnvalglnpro
65707580
gluaspphealathrtyrtyrcysglnglnserhismettyrpropro
859095
thrpheglyglyglythrlysvalgluilelys
100105
<210>122
<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-7vl链(aa)
<400>122
valileglnleuthrglnserproserserleuseralaservalgly
151015
aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspileglyasptyr
202530
leualatrppheglnglnargproglylysalaprolysserleuile
354045
tyrvalalaserthrleuglnserglyvalproserargphesergly
505560
serglyserglythrhisphethrleuthrileasnserleuglnpro
65707580
gluaspphealathrtyrtyrcysglnglntyrhisserhisprotrp
859095
thrpheglyproglythrlysvalaspilelys
100105
<210>123
<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-8vl链(aa)
<400>123
aspilevalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly
151015
gluargalathrileasncyslysserserglnservalleutyrser
202530
serasnasnlysasntyrleualatrptyrglnglnlysproglygln
354045
proprolysleuleuiletyrtrpalaserthrarggluserglyval
505560
proaspargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthr
65707580
ileserserleuglnalagluaspvalalavaltyrtyrcysglngln
859095
tyrtyrserthrprotyrthrpheglyglnglythrlysleugluile
100105110
lys
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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sertyrgluleuthrglnproproservalservalalaproglygln
151015
thralaargvalthrcysglyalaasnasnileglyserlysserval
202530
histrptyrglnglnlysproglyglnalaprometleuvalvaltyr
354045
aspaspaspaspargproserglyileprogluargpheserglyser
505560
asnserglyasnthralathrleuthrileserglyvalglualagly
65707580
aspglualaasptyrphecyshisvaltrpaspargserargasphis
859095
tyrvalpheglythrglythrlysleuthrvalleu
100105
<210>125
<211>108
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-10vl链(aa)
<400>125
sertyrvalleuthrglnproproservalservalalaproglygln
151015
thralaargilethrcysglyglyasnasnilegluarglysasnval
202530
histrptyrglnglnlysproglyglnalaprovalprovalvaltyr
354045
aspaspseraspargalaserglyileprogluargpheseralaser
505560
asnserglyasnthralathrleuthrileserglyalaglnalathr
65707580
aspglualaglutyrtyrcysglnalatrpaspserserserthrleu
859095
tyrvalpheglythrglythrlysleuthrvalleu
100105
<210>126
<211>110
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-11vl链(aa)
<400>126
glnleuvalleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercysserglyserserserasnileglyserasn
202530
alavalasntrptyrglnglnleuproglythralaprogluvalleu
354045
iletyrasnserhisglnargproserglyvalproaspargpheser
505560
glyserlysserglythrseralaserleualaileasnglyleugln
65707580
sergluaspglualaasptyrtyrcysalaalatrpaspaspserleu
859095
argglytyrvalpheglythrglythrlysleuthrvalleu
100105110
<210>127
<211>110
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-12vl链(aa)
<400>127
glnseralaleuthrglnproproservalseralaalaproglygln
151015
lysvalthrilesercysserglyserargserasnileglyasnasn
202530
tyrvalsertrptyrglnglnleuproglythralaprolysleuleu
354045
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thrlysvalaspilelys
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<220>
<223>合成的
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202530
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354045
glypheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaala
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servallysglyargphethrileserargaspaspserlysserile
65707580
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100105110
leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
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serargpheserglyargglyserglythrvalphethrleualaile
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hisserhisprotrpthrpheglyproglythrlysvalaspilelys
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151015
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202530
alametsertrppheargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
glypheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaala
505560
servallysglyargphethrileserargaspaspserlysserile
65707580
alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr
859095
tyrcysalaalatrpseralaprothrasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
glyglyglyglyseraspilevalmetthrglnserproaspserleu
130135140
alavalserleuglygluargalathrileasncyslyssersergln
145150155160
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165170175
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180185190
arggluserglyvalproaspargpheserglyserglyserglythr
195200205
aspphethrleuthrileserserleuglnalagluaspvalalaval
210215220
tyrtyrcysglnglntyrtyrserthrprotyrthrpheglyglngly
225230235240
thrlysleugluilelys
245
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<212>prt
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<220>
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<220>
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151015
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202530
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354045
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65707580
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859095
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leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
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130135140
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tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
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100105110
metvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
glyglyglyglysersertyrvalleuthrglnproproservalser
130135140
valalaproglyglnthralaargilethrcysglyglyasnasnile
145150155160
gluarglysasnvalhistrptyrglnglnlysproglyglnalapro
165170175
valprovalvaltyraspaspseraspargalaserglyileproglu
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argpheseralaserasnserglyasnthralathrleuthrileser
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leu
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tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
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505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
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100105110
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115120125
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130135140
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145150155160
asnileglyasnasntyrvalsertrptyrglnglnleuproglythr
165170175
alaprolysleuleuiletyraspasnalalysargproserglyile
180185190
proaspargpheserglyserlysserglythrseralathrleuasp
195200205
ilealaglyleuglnthrglyaspglualaasptyrtyrcysglnval
210215220
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225230235240
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15
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15
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valilesertyraspglyserasnlystyrtyralaaspservallys
151015
gly
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<213>人工序列
<220>
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151015
glu
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hisileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalaspservallys
151015
gly
<210>148
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h2(aa)kabat编码
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trpileasnproasnserglyglythrasntyralaglnlysphegln
151015
gly
<210>149
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<213>人工序列
<220>
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1510
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<400>151
alaprotyrtyraspileleuthrglytyrtyrleu
1510
<210>152
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33cdr-h3(aa)
<400>152
glualaaspserseralaasptyr
15
<210>153
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18cdr-h3(aa)
<400>153
trpleualavalthrasn
15
<210>154
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h3(aa)
<400>154
aspglyglyaspval
15
<210>155
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27cdr-h3(aa)
<400>155
glyglyleuglyilethrprotyrtyrpheasptyr
1510
<210>156
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-21cdr-h3(aa)
<400>156
valaspglyglytyrthrgluasptyr
15
<210>157
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-22、-23、-40cdr-h3(aa)
<400>157
valaspglyasptyrthrgluasptyr
15
<210>158
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15、-18cdr-h1(aa)chothia
编码
<400>158
glyphethrphesersertyr
15
<210>159
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16cdr-h1(aa)chothia编码
<400>159
glyphethrphethrserser
15
<210>160
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h1(aa)chothia编码
<400>160
glytyrthrphethrsertyr
15
<210>161
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15cdr-h2(aa)chothia编码
<400>161
sertyraspglyserasn
15
<210>162
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16cdr-h2(aa)chothia编码
<400>162
valvalglyserglyasn
15
<210>163
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18cdr-h2(aa)chothia编码
<400>163
asnglnaspglyserglu
15
<210>164
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h2(aa)chothia编码
<400>164
asnproasnserglygly
15
<210>165
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13cdr-h1(aa)abm编码
<400>165
glyphethrphesersertyralamethis
1510
<210>166
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14、-15cdr-h1(aa)abm编码
<400>166
glyphethrphesersertyrglymethis
1510
<210>167
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16cdr-h1(aa)abm编码
<400>167
glyphethrphethrserseralametgln
1510
<210>168
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18cdr-h1(aa)abm编码
<400>168
glyphethrphesersertyrtrpmetser
1510
<210>169
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h1(aa)abm编码
<400>169
glytyrthrphethrsertyrtyrmethis
1510
<210>170
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15cdr-h2(aa)abm编码
<400>170
valilesertyraspglyserasnlystyr
1510
<210>171
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16cdr-h2(aa)abm编码
<400>171
trpilevalvalglyserglyasnthrasn
1510
<210>172
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18cdr-h2(aa)abm编码
<400>172
hisileasnglnaspglyserglulystyr
1510
<210>173
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-h2(aa)abm编码
<400>173
trpileasnproasnserglyglythrasn
1510
<210>174
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15、-16、-18、-21cdr-l1(aa)
<400>174
glyserglyserasnileglyserasnaspvalser
1510
<210>175
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33cdr-l1(aa)
<400>175
glyglyasnasnileglyphelysglyvalgln
1510
<210>176
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-l1(aa)
<400>176
thrglythrserseraspvalglyasptyrasntyrvalala
1510
<210>177
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27cdr-l1(aa)
<400>177
serglyglylysthrvalasn
15
<210>178
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-22、-23cdr-l1(aa)
<400>178
thrglyserserseraspvalglylystyrasnleuvalser
1510
<210>179
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15、-16、-18、-21cdr-l2(aa)
<400>179
trpasnaspglnargproser
15
<210>180
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-32、-33cdr-l2(aa)
<400>180
aspaspseraspargproser
15
<210>181
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-l2(aa)
<400>181
gluvalileasnargproser
15
<210>182
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27cdr-l2(aa)
<400>182
serasnaspglnargproser
15
<210>183
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-22、-23、-40cdr-l2(aa)
<400>183
aspvalasnlysargproser
15
<210>184
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13cdr-l3(aa)
<400>184
alaalatrpaspaspserleuglyglysertrpval
1510
<210>185
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14cdr-l3(aa)
<400>185
alaalatrpaspaspargleuasnglyphetrpval
1510
<210>186
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-15cdr-l3(aa)
<400>186
alaalatrpaspaspserleuserglytrpval
1510
<210>187
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16cdr-l3(aa)
<400>187
alasertrpaspaspserleuserglytrpval
1510
<210>188
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33cdr-l3(aa)
<400>188
glnvaltrpaspseralaserasphistrpval
1510
<210>189
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18cdr-l3(aa)
<400>189
alaalatrpaspaspserleuasnglytrpval
1510
<210>190
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19cdr-l3(aa)
<400>190
ilesertyrserargglyserthrprotyrval
1510
<210>191
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27cdr-l3(aa)
<400>191
glysertrpaspaspserleuasnalatrpval
1510
<210>192
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-21cdr-l3(aa)
<400>192
alaalatrpaspaspserleuasnglytyrval
1510
<210>193
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-22、-40cdr-l3(aa)
<400>193
cyssertyrglyglyserargsertyrval
1510
<210>194
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-23cdr-l3(aa)
<400>194
sersertyrglyglyserargsertyrval
1510
<210>195
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13vhfr1(aa)
<400>195
glnmetglnleuvalglntyrglyglyglyvalvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>196
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14vhfr1(aa)
<400>196
gluvalglnleuleugluserglyglyglyvalvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>197
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-15、-47vhfr1(aa)
<400>197
glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>198
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16vhfr1(aa)
<400>198
gluvalglnleuvalglnserglyprogluvallyslysproglythr
151015
servallysvalsercyslysalaserglyphethrphethr
202530
<210>199
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33、-36、-38、-41vhfr1(aa)
<400>199
glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>200
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18vhfr1(aa)
<400>200
gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>201
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19vhfr1(aa)
<400>201
glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethr
202530
<210>202
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20vhfr1(aa)
<400>202
gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheasp
202530
<210>203
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-21vhfr1(aa)
<400>203
gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleulysleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>204
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13、-14、-15vhfr2(aa)
<400>204
trpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpvalala
1510
<210>205
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16vhfr2(aa)
<400>205
trpvalargglnalaargglyglnargleuglutrpilegly
1510
<210>206
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17vhfr2(aa)
<400>206
trpileargleualaproglylysglyleuglutrpvalser
1510
<210>207
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18vhfr2(aa)
<400>207
trphisargglnalaproglylysglyproglutrpvalala
1510
<210>208
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19vhfr2(aa)
<400>208
trpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmetgly
1510
<210>209
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27、-28、-29、-30、-34、-39vhfr2(aa)
<400>209
trpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpvalser
1510
<210>210
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13vhfr3(aa)
<400>210
argphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyrleugln
151015
metasnserleulysalagluaspthralavaltyrtyrcysalathr
202530
<210>211
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14vhfr3(aa)
<400>211
argphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalathr
202530
<210>212
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-15vhfr3(aa)
<400>212
argphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalalys
202530
<210>213
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-16vhfr3(aa)
<400>213
argvalthrilethrargaspmetserthrserthralatyrmetglu
151015
leuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcysalaala
202530
<210>214
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18vhfr3(aa)
<400>214
argphethrileserargaspasnalagluserserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalaarg
202530
<210>215
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19vhfr3(aa)
<400>215
argvalthrmetthrargaspthrserileserthralatyrmetglu
151015
leuserargleuargseraspaspthralavaltyrtyrcysalaarg
202530
<210>216
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-20、-27vhfr3(aa)
<400>216
argphethrileserargaspasnalalysasnserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralaleutyrtyrcysalalys
202530
<210>217
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-13vhfr4(aa)
<400>217
argglyglnglythrleuvalthrvalserser
1510
<210>218
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14vhfr4(aa)
<400>218
argglyproglythrleuvalthrvalserser
1510
<210>219
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33vhfr4(aa)
<400>219
trpglyglnglythrleuvalasnvalserser
1510
<210>220
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-19vhfr4(aa)
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1510
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glnservalleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercys
20
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151015
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151015
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151015
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151015
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151015
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151015
leualaileserglyleuglnsergluaspglualaasptyrtyrcys
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglythrseralaser
151015
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglythrseralaser
151015
leualaileserglyleuglnsergluaspglualaasptyrtyrcys
202530
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<211>32
<212>prt
<213>人工序列
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glyileprogluargpheserglyserasnserglyasnthralathr
151015
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglythrseralaser
151015
leualaileserglyleuargsergluaspglualaasptyrtyrcys
202530
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glyvalseraspargpheserglyserlysserglyasnthralaser
151015
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglyserseralaser
151015
leuaspileserglyleuglnsergluaspglualatyrtyrtyrcys
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glyvalproaspargpheserglyserlysserglyileseralaser
151015
leualaileserglyleuargsergluaspglualaasptyrtyrcys
202530
<210>242
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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glyvalserasnargpheserglyserlysserglyasnthralathr
151015
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202530
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<400>244
ileglythrglythrlysvalthrvalleu
1510
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<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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pheglyglygluthrlysleuthrvalleu
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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pheglythrglythrlysvalthrvalleu
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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glnmetglnleuvalglntyrglyglyglyvalvalglnproglyarg
151015
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gluvalglnleuleugluserglyglyglyvalvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr
202530
glymethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
alavalilesertyraspglyserasnlystyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alathrleuproglyargaspglytyrproglyalapheasptyrarg
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glyproglythrleuvalthrvalserser
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glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr
202530
glymethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
alavalilesertyraspglyserasnlystyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysaspglntyrserserseralaglnargalaasppheasptyr
100105110
trpglyglnglythrleuvalthrvalserser
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<213>人工序列
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gluvalglnleuvalglnserglyprogluvallyslysproglythr
151015
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202530
alametglntrpvalargglnalaargglyglnargleuglutrpile
354045
glytrpilevalvalglyserglyasnthrasntyralaglnlysphe
505560
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65707580
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100105110
glnglythrleuvalthrvalserser
115120
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargleualaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
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100105110
valasnvalserser
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<223>合成的
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gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr
202530
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354045
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505560
lysglyargphethrileserargaspasnalagluserserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargtrpleualavalthrasntrpglyglnglythrleuvalthr
100105110
valserser
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<213>人工序列
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<223>合成的
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glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala
151015
servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr
202530
tyrmethistrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet
354045
glytrpileasnproasnserglyglythrasntyralaglnlysphe
505560
glnglyargvalthrmetthrargaspthrserileserthralatyr
65707580
metgluleuserargleuargseraspaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargaspglyglyaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrval
100105110
serser
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<213>人工序列
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gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
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202530
alamethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
serglyilesertrpasnserglyserileglytyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralaleutyrtyrcys
859095
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100105110
glnglythrleuvalthrvalserser
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<213>人工序列
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<223>合成的
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gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleulysleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyglytyrthrgluasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
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<213>人工序列
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<223>合成的
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<223>bcma-22、-23、-40vh链(aa)
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gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyasptyrthrgluasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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151015
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-14vl链(aa)
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glnalavalleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercysserglyserglyserasnileglyserasn
202530
aspvalsertrptyrglnglnileproglythralaprolysleuleu
354045
iletyrtrpasnaspglnargproserglyvalproaspargpheser
505560
glyserlysserglyalaseralaserleualaileserglyleugln
65707580
sergluaspglualaasptyrtyrcysalaalatrpaspaspargleu
859095
asnglyphetrpvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu
100105110
<210>259
<211>110
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-15vl链(aa)
<400>259
glnservalleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercysserglyserglyserasnileglyserasn
202530
aspvalsertrptyrglnglnileproglythralaprolysleuleu
354045
iletyrtrpasnaspglnargproserglyvalproaspargpheser
505560
glyserlysserglythrseralaserleuvalileserglyleuarg
65707580
sergluaspglualaasptyrtyrcysalaalatrpaspaspserleu
859095
serglytrpvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu
100105110
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<211>110
<212>prt
<213>人工序列
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<223>合成的
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<223>bcma-16vl链(aa)
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glnseralaleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrilesercysserglyserglyserasnileglyserasn
202530
aspvalsertrptyrglnglnileproglythralaprolysleuleu
354045
iletyrtrpasnaspglnargproserglyvalproaspargpheser
505560
glyserlysserglythrseralaserleualaileserglyleugln
65707580
sergluaspglualaasptyrtyrcysalasertrpaspaspserleu
859095
serglytrpvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu
100105110
<210>261
<211>108
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-17、-33vl链(aa)
<400>261
glnprovalleuthrglnproproservalservalalaproglylys
151015
thralametilethrcysglyglyasnasnileglyphelysglyval
202530
glntrptyrglnglnlysthrglyglnalaprovalleuvalvaltyr
354045
aspaspseraspargproserglyileprogluargpheserglyser
505560
asnserglyasnthralathrleuthrileserargvalglualagly
65707580
aspglualaasptyrtyrcysglnvaltrpaspseralaserasphis
859095
trpvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu
100105
<210>262
<211>110
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-18vl链(aa)
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lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
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leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
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leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
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glyglyglyglyserglnseralaleuthrglnproalaservalser
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<220>
<223>vh-6cdr-h3(aa)
<400>282
valaspglyproprosertyraspile
15
<210>283
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>vh-7cdr-h3(aa)
<400>283
glyasptrpaspaspalapheaspile
15
<210>284
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>vh-9cdr-h3(aa)
<400>284
valaspglyasptyrgluasptyr
15
<210>285
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>vh-10cdr-h3(aa)
<400>285
aspvalproserserglyaspaspalapheaspile
1510
<210>286
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>vh-11cdr-h3(aa)
<400>286
valaspglyaspaspvalpheaspile
15
<210>287
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>vh-12cdr-h3(aa)
<400>287
valaspglyaspalapheaspile
15
<210>288
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h1(aa)
<400>288
asptyrserileasn
15
<210>289
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h1(aa)
<400>289
asnpheglymetasn
15
<210>290
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h2(aa)
<400>290
trpileasnthrgluthrarggluproalatyralatyraspphearg
151015
gly
<210>291
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h2(aa)
<400>291
trpileasnthrtyrthrglyglusertyrphealaaspaspphelys
151015
gly
<210>292
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h3(aa)
<400>292
asptyrsertyralametasptyr
15
<210>293
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h3(aa)
<400>293
glygluiletyrtyrglytyraspglyglyphealatyr
1510
<210>294
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h1(aa)chothia编码
<400>294
glytyrthrphethrasptyr
15
<210>295
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h1(aa)chothia编码
<400>295
glytyrthrphethrasnphe
15
<210>296
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h2(aa)chothia编码
<400>296
asnthrgluthrargglu
15
<210>297
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h2(aa)chothia编码
<400>297
asnthrtyrthrglyglu
15
<210>298
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h1(aa)abm编码
<400>298
glytyrthrphethrasptyrserileasn
1510
<210>299
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h1(aa)abm编码
<400>299
glytyrthrphethrasnpheglymetasn
1510
<210>300
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhcdr-h2(aa)abm编码
<400>300
trpileasnthrgluthrarggluproala
1510
<210>301
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhcdr-h2(aa)abm编码
<400>301
trpileasnthrtyrthrglyglusertyr
1510
<210>302
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlcdr-l1(aa)
<400>302
argalasergluservalthrileleuglyserhisleuilehis
151015
<210>303
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlcdr-l1(aa)
<400>303
argalaserglnaspvalasnthralavalser
1510
<210>304
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlcdr-l2(aa)
<400>304
leualaserasnvalglnthr
15
<210>305
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlcdr-l2(aa)
<400>305
seralasertyrargtyrthr
15
<210>306
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlcdr-l3(aa)
<400>306
leuglnserargthrileproargthr
15
<210>307
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlcdr-l3(aa)
<400>307
glnglnhistyrserthrprotrpthr
15
<210>308
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhfr1(aa)
<400>308
glnileglnleuvalglnserglyprogluleulyslysproglyglu
151015
thrvallysilesercyslysalaserglytyrthrphethr
202530
<210>309
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhfr1(aa)
<400>309
glnileglnleuvalglnserglyproaspleulyslysproglyglu
151015
thrvallysleusercyslysalaserglytyrthrphethr
202530
<210>310
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhfr2(aa)
<400>310
trpvallysargalaproglylysglyleulystrpmetgly
1510
<210>311
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhfr2(aa)
<400>311
trpvallysglnalaproglylysglyphelystrpmetala
1510
<210>312
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhfr3(aa)
<400>312
argphealapheserleugluthrseralaserthralatyrleugln
151015
ileasnasnleulystyrgluaspthralathrtyrphecysalaleu
202530
<210>313
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhfr3(aa)
<400>313
argphealapheservalgluthrseralathrthralatyrleugln
151015
ileasnasnleulysthrgluaspthralathrtyrphecysalaarg
202530
<210>314
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vhfr4(aa)
<400>314
trpglyglnglythrservalthrvalserser
1510
<210>315
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vhfr4(aa)
<400>315
trpglyglnglythrleuvalthrvalserala
1510
<210>316
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlfr1(aa)
<400>316
aspilevalleuthrglnserproproserleualametserleugly
151015
lysargalathrilesercys
20
<210>317
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlfr1(aa)
<400>317
aspvalvalmetthrglnserhisargphemetserthrservalgly
151015
aspargvalserilethrcys
20
<210>318
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlfr2(aa)
<400>318
trptyrglnglnlysproglyglnproprothrleuleuilegln
151015
<210>319
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlfr2(aa)
<400>319
trptyrglnglnlysproglyglnserprolysleuleuilephe
151015
<210>320
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlfr3(aa)
<400>320
glyvalproalaargpheserglyserglyserargthraspphethr
151015
leuthrileaspprovalglugluaspaspvalalavaltyrtyrcys
202530
<210>321
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlfr3(aa)
<400>321
glyvalproaspargphethrglyserglyserglyalaaspphethr
151015
leuthrileserservalglnalagluaspleualavaltyrtyrcys
202530
<210>322
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vlfr4(aa)
<400>322
pheglyglyglythrlysleugluilelys
1510
<210>323
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vlfr4(aa)
<400>323
pheglyglyglythrlysleuaspilelys
1510
<210>324
<211>117
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vh链(aa)
<400>324
glnileglnleuvalglnserglyprogluleulyslysproglyglu
151015
thrvallysilesercyslysalaserglytyrthrphethrasptyr
202530
serileasntrpvallysargalaproglylysglyleulystrpmet
354045
glytrpileasnthrgluthrarggluproalatyralatyraspphe
505560
argglyargphealapheserleugluthrseralaserthralatyr
65707580
leuglnileasnasnleulystyrgluaspthralathrtyrphecys
859095
alaleuasptyrsertyralametasptyrtrpglyglnglythrser
100105110
valthrvalserser
115
<210>325
<211>122
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vh链(aa)
<400>325
glnileglnleuvalglnserglyproaspleulyslysproglyglu
151015
thrvallysleusercyslysalaserglytyrthrphethrasnphe
202530
glymetasntrpvallysglnalaproglylysglyphelystrpmet
354045
alatrpileasnthrtyrthrglyglusertyrphealaaspaspphe
505560
lysglyargphealapheservalgluthrseralathrthralatyr
65707580
leuglnileasnasnleulysthrgluaspthralathrtyrphecys
859095
alaargglygluiletyrtyrglytyraspglyglyphealatyrtrp
100105110
glyglnglythrleuvalthrvalserala
115120
<210>326
<211>111
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vl链(aa)
<400>326
aspilevalleuthrglnserproproserleualametserleugly
151015
lysargalathrilesercysargalasergluservalthrileleu
202530
glyserhisleuilehistrptyrglnglnlysproglyglnpropro
354045
thrleuleuileglnleualaserasnvalglnthrglyvalproala
505560
argpheserglyserglyserargthraspphethrleuthrileasp
65707580
provalglugluaspaspvalalavaltyrtyrcysleuglnserarg
859095
thrileproargthrpheglyglyglythrlysleugluilelys
100105110
<210>327
<211>107
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vl链(aa)
<400>327
aspvalvalmetthrglnserhisargphemetserthrservalgly
151015
aspargvalserilethrcysargalaserglnaspvalasnthrala
202530
valsertrptyrglnglnlysproglyglnserprolysleuleuile
354045
pheseralasertyrargtyrthrglyvalproaspargphethrgly
505560
serglyserglyalaaspphethrleuthrileserservalglnala
65707580
gluaspleualavaltyrtyrcysglnglnhistyrserthrprotrp
859095
thrpheglyglyglythrlysleuaspilelys
100105
<210>328
<211>243
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c1vl-vhscfv(aa)
<400>328
aspilevalleuthrglnserproproserleualametserleugly
151015
lysargalathrilesercysargalasergluservalthrileleu
202530
glyserhisleuilehistrptyrglnglnlysproglyglnpropro
354045
thrleuleuileglnleualaserasnvalglnthrglyvalproala
505560
argpheserglyserglyserargthraspphethrleuthrileasp
65707580
provalglugluaspaspvalalavaltyrtyrcysleuglnserarg
859095
thrileproargthrpheglyglyglythrlysleugluilelysgly
100105110
glyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyserglnile
115120125
glnleuvalglnserglyprogluleulyslysproglygluthrval
130135140
lysilesercyslysalaserglytyrthrphethrasptyrserile
145150155160
asntrpvallysargalaproglylysglyleulystrpmetglytrp
165170175
ileasnthrgluthrarggluproalatyralatyraspphearggly
180185190
argphealapheserleugluthrseralaserthralatyrleugln
195200205
ileasnasnleulystyrgluaspthralathrtyrphecysalaleu
210215220
asptyrsertyralametasptyrtrpglyglnglythrservalthr
225230235240
valserser
<210>329
<211>244
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-c2vh-vlscfv(aa)
<400>329
glnileglnleuvalglnserglyproaspleulyslysproglyglu
151015
thrvallysleusercyslysalaserglytyrthrphethrasnphe
202530
glymetasntrpvallysglnalaproglylysglyphelystrpmet
354045
alatrpileasnthrtyrthrglyglusertyrphealaaspaspphe
505560
lysglyargphealapheservalgluthrseralathrthralatyr
65707580
leuglnileasnasnleulysthrgluaspthralathrtyrphecys
859095
alaargglygluiletyrtyrglytyraspglyglyphealatyrtrp
100105110
glyglnglythrleuvalthrvalseralaglyglyglyglysergly
115120125
glyglyglyserglyglyglyglyseraspvalvalmetthrglnser
130135140
hisargphemetserthrservalglyaspargvalserilethrcys
145150155160
argalaserglnaspvalasnthralavalsertrptyrglnglnlys
165170175
proglyglnserprolysleuleuilepheseralasertyrargtyr
180185190
thrglyvalproaspargphethrglyserglyserglyalaaspphe
195200205
thrleuthrileserservalglnalagluaspleualavaltyrtyr
210215220
cysglnglnhistyrserthrprotrpthrpheglyglyglythrlys
225230235240
leuaspilelys
<210>330
<211>738
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-1scfv(nt)
<400>330
caggtgcagctggtgcagtctgggggaggcttggtacagccagggcggtccctgagactc60
tcctgtacagcttctggattcacctttggtgattatgctatgagctggttccgccaggct120
ccagggaaggggctggagtgggtaggtttcattagaagcaaagcttatggtgggacaaca180
gaatacgccgcgtctgtgaaaggcagattcaccatctcaagagatgattccaaaagcatc240
gcctatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacagccgtgtattactgtgcggcc300
tggagtgccccgactgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcaggtgga360
ggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcggatattgtgatgacccagtct420
ccagactccctgtctgtgtctccgggcgagagggccaccatcagctgcaagtccagccag480
agtgttttatccacctccaacaataagaactatttagcttggtatcagcagaaaccagga540
cagccccctaggctgctcctttactgggcatctacccgggaggccggggtccctgaccga600
ttcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaa660
gatgtggcggtttattactgtcaacaatatttcagttctccgtacacttttggccacggg720
accaagctggaaatcaaa738
<210>331
<211>717
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-2scfv(nt)
<400>331
gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactc60
tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggct120
ccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactac180
gcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtat240
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaaagtggat300
ggccctccttcttctgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcctcaggtgga360
ggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcggaaatagtgatgacgcagtct420
ccagccaccctgtctgtgtctccaggggaaacagccaccctctcctgcagggccagtcag480
agtattaagaccaacttggcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctc540
atctatgctgcatccaccagggccactggcatcccagacagattcagtggcagtgggtct600
gggacagacttcactctcaccatcaccagactggagcctgaagattttgcagtgtattac660
tgtcagcaatatggtagctcacccacttttggccgggggaccaagctggaaatcaaa717
<210>332
<211>738
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-3scfv(nt)
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agtaatgatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggctcc600
tcagcctccctggacatcagtgggctccagtctgaggatgaggcttattattactgtgga660
tcatgggatgacagcctcaatgcttgggtgttcggcggagagaccaagctgaccgtccta720
<210>350
<211>729
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>350
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tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggct120
ccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactac180
gcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtat240
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaaagtagac300
ggaggctacacagaggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcaggtgga360
ggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcgcagtctgtgctgactcagcca420
ccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcggctcc480
aacatcggaagtaatgatgtctcctggtatcagcagatcccaggaacggcccccaaactc540
ctcatctactggaatgatcagcggccctcaggggtccctgaccggttctcaggctccaag600
tctggcatctcagcctccctggccatcagcgggctccggtccgaggatgaggctgattat660
tactgtgcagcatgggatgacagcctgaatggttatgtcttcggaactgggaccaaggtc720
accgtccta729
<210>351
<211>729
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-22scfv(nt)
<400>351
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactc60
tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggct120
ccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactac180
gcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtat240
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaaagtagac300
ggagactacacagaggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcaggtgga360
ggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcgcagtctgccctgactcagcct420
gcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcactatctcctgcactggaagcagcagt480
gatgttggcaaatataatcttgtctcctggtaccaacagcccccaggcaaagcccccaag540
ctcataatttatgacgtcaataagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctcc600
aagtctggcaacacggccaccctgacaatctctgggctccagggtgacgacgaggctgat660
tattattgttgctcatatggaggtagtaggtcttatgtcttcggaactgggaccaaggtg720
accgtccta729
<210>352
<211>729
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-23scfv(nt)
<400>352
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactc60
tcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggct120
ccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactac180
gcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtat240
ctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgaaagtagac300
ggagactacacagaggactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcaggtgga360
ggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcgcagtctgccctgactcagcct420
gcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcactatctcctgcactggaagcagcagt480
gatgttggcaaatataatcttgtctcctggtaccaacagcccccaggcaaagcccccaag540
ctcataatttatgacgtcaataagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctcc600
aagtctggcaacacggccaccctgacaatctctgggctccagggtgacgacgaggctgat660
tattattgtagctcatatggaggtagtaggtcttatgtcttcggaactgggaccaaggtg720
accgtccta729
<210>353
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-h1
<220>
<221>变体
<222>1
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<220>
<221>变体
<222>2
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<220>
<221>变体
<222>3
<223>xaa=a、g、w或y
<220>
<221>变体
<222>5
<223>xaa=h、q或s
<400>353
xaaxaaxaametxaa
15
<210>354
<211>19
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-h2
<220>
<221>变体
<222>1
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<220>
<221>变体
<222>3
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<220>
<221>变体
<222>4
<223>xaa=p、q、s、v、w或y
<220>
<221>变体
<222>5
<223>xaa=k或空
<220>
<221>变体
<222>6
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<220>
<221>变体
<222>7
<223>xaa=d、g、n、s或y
<220>
<221>变体
<222>8
<223>xaa=g或s
<220>
<221>变体
<222>9
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<220>
<221>变体
<222>10
<223>xaa=e、g、n、t或s
<220>
<221>变体
<222>11
<223>xaa=i、k或t
<220>
<221>变体
<222>12
<223>xaa=e、g、n或y
<220>
<221>变体
<222>14
<223>xaa=a或v
<220>
<221>变体
<222>15
<223>xaa=a、d或q
<220>
<221>变体
<222>16
<223>xaa=k或s
<220>
<221>变体
<222>17
<223>xaa=f或v
<220>
<221>变体
<222>18
<223>xaa=k或q
<220>
<221>变体
<222>19
<223>xaa=e或g
<400>354
xaailexaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaatyrxaaxaaxaa
151015
xaaxaaxaa
<210>355
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-h3
<220>
<221>变体
<222>1
<223>xaa=a、d、e、g、l、v或w
<220>
<221>变体
<222>2
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<220>
<221>变体
<222>3
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<220>
<221>变体
<222>4
<223>xaa=d、g、p、r、s、v、y或空
<220>
<221>变体
<222>5
<223>xaa=d、i、p、s、t、y或空
<220>
<221>变体
<222>6
<223>xaa=a、g、i、s、t、v、y或空
<220>
<221>变体
<222>7
<223>xaa=a、d、e、f、l、p、s、y或空
<220>
<221>变体
<222>8
<223>xaa=p、q、t、y或空
<220>
<221>变体
<222>9
<223>xaa=d、g、r、y或空
<220>
<221>变体
<222>10
<223>xaa=a、f、y或空
<220>
<221>变体
<222>11
<223>xaa=d、f或空
<220>
<221>变体
<222>12
<223>xaa=f或空
<220>
<221>变体
<222>13
<223>xaa=d、t或y
<220>
<221>变体
<222>14
<223>xaa=i、l、n、v或y
<400>355
xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa
1510
<210>356
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-l1
<220>
<221>变体
<222>1
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<220>
<221>变体
<222>2
<223>xaa=a、g或s
<220>
<221>变体
<222>3
<223>xaa=g、n、s或t
<220>
<221>变体
<222>4
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<220>
<221>变体
<222>5
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<220>
<221>变体
<222>6
<223>xaa=d、n、v或空
<220>
<221>变体
<222>7
<223>xaa=l、v或空
<220>
<221>变体
<222>8
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<220>
<221>变体
<222>9
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<220>
<221>变体
<222>10
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<220>
<221>变体
<222>11
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<220>
<221>变体
<222>12
<223>xaa=d、e、g、k、i、n或空
<220>
<221>变体
<222>13
<223>xaa=f、g、k、n、r、s、y或空
<220>
<221>变体
<222>14
<223>xaa=d、k、n、t或空
<220>
<221>变体
<222>15
<223>xaa=a、d、g、l、n、s、t或y
<220>
<221>变体
<222>16
<223>xaa=l或v
<220>
<221>变体
<222>17
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xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa
151015
xaa
<210>357
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-l2
<220>
<221>变体
<222>1
<223>xaa=a、d、e、n、s、v或w
<220>
<221>变体
<222>2
<223>xaa=a、d、n、s或v
<220>
<221>变体
<222>3
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<220>
<221>变体
<222>4
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<220>
<221>变体
<222>5
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<220>
<221>变体
<222>6
<223>xaa=a、e、p或q
<220>
<221>变体
<222>7
<223>xaa=a、d、s或t
<400>357
xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa
15
<210>358
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>共有序列cdr-l3
<220>
<221>变体
<222>1
<223>xaa=a、c、g、h、i、q或s
<220>
<221>变体
<222>2
<223>xaa=a、q、s或v
<220>
<221>变体
<222>3
<223>xaa=s、w或y
<220>
<221>变体
<222>4
<223>xaa=d、f、g、h或y
<220>
<221>变体
<222>5
<223>xaa=d、g、m、r、s或t
<220>
<221>变体
<222>6
<223>xaa=a、g、h、l、r、s、t或y
<220>
<221>变体
<222>7
<223>xaa=l、p、r、s或空
<220>
<221>变体
<222>8
<223>xaa=d、g、n、r、s、t或空
<220>
<221>变体
<222>9
<223>xaa=a、g、h、l、p或空
<220>
<221>变体
<222>10
<223>xaa=f、s或空
<220>
<221>变体
<222>11
<223>xaa=l、p、w或y
<220>
<221>变体
<222>12
<223>xaa=s、t或v
<400>358
xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa
1510
<210>359
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>4gs接头(aa)
<400>359
glyglyglyglyser
15
<210>360
<211>4
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>3gs接头(aa)
<400>360
glyglyglyser
1
<210>361
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>(4gs)3接头(aa)
<400>361
glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
151015
<210>362
<211>18
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>接头(aa)
<400>362
glyserthrserglyserglylysproglyserglygluglyserthr
151015
lysgly
<210>363
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>间隔子(igg4铰链)(aa)
<400>363
gluserlystyrglyproprocysproprocyspro
1510
<210>364
<211>36
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>间隔子(igg4铰链)(nt)
<400>364
gaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccct36
<210>365
<211>119
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>铰链-ch3间隔子(aa)
<400>365
gluserlystyrglyproprocysproprocysproglyglnproarg
151015
gluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglumetthrlys
202530
asnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproserasp
354045
ilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlys
505560
thrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyrser
65707580
argleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasnvalpheser
859095
cysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysser
100105110
leuserleuserleuglylys
115
<210>366
<211>229
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>铰链-ch2-ch3间隔子(aa)
<400>366
gluserlystyrglyproprocysproprocysproalaprogluphe
151015
leuglyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthr
202530
leumetileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspval
354045
serglngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyval
505560
gluvalhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnser
65707580
thrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleu
859095
asnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproser
100105110
serileglulysthrileserlysalalysglyglnproargglupro
115120125
glnvaltyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasngln
130135140
valserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspileala
145150155160
valglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthr
165170175
proprovalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleu
180185190
thrvalasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysser
195200205
valmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuser
210215220
leuserleuglylys
225
<210>367
<211>184
<212>prt
<213>智人(homosapiens)
<220>
<223>合成的
<220>
<223>人bcma;genbank号bab60895.1
<400>367
metleuglnmetalaglyglncysserglnasnglutyrpheaspser
151015
leuleuhisalacysileprocysglnleuargcysserserasnthr
202530
proproleuthrcysglnargtyrcysasnalaservalthrasnser
354045
vallysglythrasnalaileleutrpthrcysleuglyleuserleu
505560
ileileserleualavalphevalleumetpheleuleuarglysile
65707580
sersergluproleulysaspgluphelysasnthrglyserglyleu
859095
leuglymetalaasnileaspleuglulysserargthrglyaspglu
100105110
ileileleuproargglyleuglutyrthrvalgluglucysthrcys
115120125
gluaspcysilelysserlysprolysvalaspserasphiscysphe
130135140
proleuproalametglugluglyalathrileleuvalthrthrlys
145150155160
thrasnasptyrcyslysserleuproalaalaleuseralathrglu
165170175
ileglulysserileseralaarg
180
<210>368
<211>184
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma;ncbi号np_001183.2
<400>368
metleuglnmetalaglyglncysserglnasnglutyrpheaspser
151015
leuleuhisalacysileprocysglnleuargcysserserasnthr
202530
proproleuthrcysglnargtyrcysasnalaservalthrasnser
354045
vallysglythrasnalaileleutrpthrcysleuglyleuserleu
505560
ileileserleualavalphevalleumetpheleuleuarglysile
65707580
asnsergluproleulysaspgluphelysasnthrglyserglyleu
859095
leuglymetalaasnileaspleuglulysserargthrglyaspglu
100105110
ileileleuproargglyleuglutyrthrvalgluglucysthrcys
115120125
gluaspcysilelysserlysprolysvalaspserasphiscysphe
130135140
proleuproalametglugluglyalathrileleuvalthrthrlys
145150155160
thrasnasptyrcyslysserleuproalaalaleuseralathrglu
165170175
ileglulysserileseralaarg
180
<210>369
<211>135
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma变体;genbank号abn42510.1
<400>369
metleuglnmetalaglyglncysserglnasnglutyrpheaspser
151015
leuleuhisalacysileprocysglnleuargcysserserasnthr
202530
proproleuthrcysglnargtyrcysasnalaargserglyleuleu
354045
glymetalaasnileaspleuglulysserargthrglyaspgluile
505560
ileleuproargglyleuglutyrthrvalgluglucysthrcysglu
65707580
aspcysilelysserlysprolysvalaspserasphiscysphepro
859095
leuproalametglugluglyalathrileleuvalthrthrlysthr
100105110
asnasptyrcyslysserleuproalaalaleuseralathrgluile
115120125
glulysserileseralaarg
130135
<210>370
<211>185
<212>prt
<213>小家鼠(musmusculus)
<220>
<223>小鼠bcma;ncbi号np_035738.1
<400>370
metalaglnglncysphehisserglutyrpheaspserleuleuhis
151015
alacyslysprocyshisleuargcysserasnproproalathrcys
202530
glnprotyrcysaspproservalthrserservallysglythrtyr
354045
thrvalleutrpilepheleuglyleuthrleuvalleuserleuala
505560
leuphethrileserpheleuleuarglysmetasnproglualaleu
65707580
lysaspgluproglnserproglyglnleuaspglyseralaglnleu
859095
asplysalaaspthrgluleuthrargileargalaglyaspasparg
100105110
ilepheproargserleuglutyrthrvalgluglucysthrcysglu
115120125
aspcysvallysserlysprolysglyaspserasphisphephepro
130135140
leuproalametglugluglyalathrileleuvalthrthrlysthr
145150155160
glyasptyrglylysserservalprothralaleuglnservalmet
165170175
glymetglulysprothrhisthrarg
180185
<210>371
<211>183
<212>prt
<213>食蟹猴(macacafascicular)
<220>
<223>食蟹猴bcma;genbank号ehh60172.1
<400>371
metleuglnmetalaargglncysserglnasnglutyrpheaspser
151015
leuleuhisaspcyslysprocysglnleuargcysserserthrpro
202530
proleuthrcysglnargtyrcysasnalasermetthrasnserval
354045
lysglymetasnalaileleutrpthrcysleuglyleuserleuile
505560
ileserleualavalphevalleuthrpheleuleuarglysmetser
65707580
sergluproleulysaspgluphelysasnthrglyserglyleuleu
859095
glymetalaasnileaspleuglulysglyargthrglyaspgluile
100105110
valleuproargglyleuglutyrthrvalgluglucysthrcysglu
115120125
aspcysilelysasnlysprolysvalaspserasphiscysphepro
130135140
leuproalametglugluglyalathrileleuvalthrthrlysthr
145150155160
asnasptyrcysasnserleuseralaalaleuservalthrgluile
165170175
glulysserileseralaarg
180
<210>372
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28cdr-h2(aa)kabat编码
<220>
<221>变体
<222>10
<223>xaa=任何氨基酸
<400>372
glyilesertrpasnserglyserilexaatyralaaspservallys
151015
gly
<210>373
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-33cdr-h2(aa)kabat编码
<400>373
tyrileserglyserglyserthriletyrtyralaaspservallys
151015
gly
<210>374
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41cdr-h2kabat编码
<400>374
tyrileserserserglyasnthriletyrtyralaaspservallys
151015
gly
<210>375
<211>7
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma表位(残基21-27)
<400>375
cysileprocysglnleuarg
15
<210>376
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-24、-28、-29、-39cdr-h3(aa)
<400>376
aspleuglyproprotyrglyaspaspalapheaspile
1510
<210>377
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30cdr-h3(aa)
<400>377
aspleuaspproaspaspalapheaspile
1510
<210>378
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-35cdr-h3(aa)
<400>378
valaspglyasptyraspasptyr
15
<210>379
<211>10
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma表位(残基30-39)
<400>379
serasnthrproproleuthrcysglnarg
1510
<210>380
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25cdr-l1(aa)
<400>380
argalaserglnglyileserasntyrleuala
1510
<210>381
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28cdr-l1(aa)
<400>381
argserserglnserleuleuhisserasnglytyrasntyrleuasp
151015
<210>382
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-29cdr-l1(aa)
<400>382
thrglythrserseraspvalglysertyrasnleuvalser
1510
<210>383
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30cdr-l1(aa)
<400>383
argalaserglnproileargserasnleuala
1510
<210>384
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-31cdr-l1(aa)
<400>384
lysserserglnservalleuasnserserasnasnlysasntyrval
151015
ala
<210>385
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-32cdr-l1(aa)
<400>385
glyglyasnasnileglyserlysglyvalhis
1510
<210>386
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34cdr-l1(aa)
<400>386
argalaserglnserileserasntyrleuala
1510
<210>387
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36cdr-l1(aa)
<400>387
glyserserthrglyprovalthrseralahisserproser
1510
<210>388
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37、-38cdr-l1(aa)
<400>388
glyserserthrglyalavalthrasnglyhisserprotyr
1510
<210>389
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-39cdr-l1(aa)
<220>
<221>变体
<222>11
<223>xaa=任何氨基酸
<400>389
argalaserglnglyileargtyrgluleuxaa
1510
<210>390
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-40cdr-l1(aa)
<400>390
thrglyserserseraspvalserlystyrasnleuvalser
1510
<210>391
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41cdr-l1(aa)
<400>391
serglyserserserasnileglyglyasnservalasp
1510
<210>392
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42cdr-l1(aa)
<400>392
argalaserglnglyileglyasnglyleuala
1510
<210>393
<211>7
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma表位(残基44-50)
<400>393
servalthrasnservallys
15
<210>394
<211>17
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-44cdr-l1(aa)
<400>394
lysserserglnasnleuleutyrserserasnasnlysasntyrleu
151015
ala
<210>395
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-45cdr-l1(aa)
<400>395
argalaserglnglyileglyargserleuala
1510
<210>396
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47、-48cdr-l1(aa)
<400>396
glyglyasnasnileglyserlysservalhis
1510
<210>397
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49cdr-l1(aa)
<400>397
glyglyaspglnileglyarglysservalhis
1510
<210>398
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-51cdr-l1(aa)
<400>398
argalaserglnasnileglyasptrpleuala
1510
<210>399
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-24cdr-l2(aa)
<400>399
trpglyserthrarggluser
15
<210>400
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25cdr-l2(aa)
<400>400
seralaserthrleuglnser
15
<210>401
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28cdr-l2(aa)
<400>401
leuglyserasnargalaser
15
<210>402
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-29cdr-l2(aa)
<400>402
gluvalserlysargproser
15
<210>403
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30cdr-l2(aa)
<400>403
seralaserthrargalathr
15
<210>404
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34cdr-l2(aa)
<400>404
aspalaserasnargalathr
15
<210>405
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36cdr-l2(aa)
<400>405
gluthrthrasnarghisser
15
<210>406
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37cdr-l2(aa)
<400>406
aspthrthrasnarghisser
15
<210>407
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-38cdr-l2(aa)
<400>407
aspthrasnasnarghisser
15
<210>408
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-39cdr-l2(aa)
<400>408
alaalaserthrleuglnser
15
<210>409
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41cdr-l2(aa)
<400>409
alaasnaspargargproser
15
<210>410
<211>7
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma表位(残基8-15)
<400>410
cysserglnasnglutyrphe
15
<210>411
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-45cdr-l2(aa)
<400>411
aspalaserserleuargser
15
<210>412
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47、-48cdr-l2(aa)
<400>412
tyraspthraspargproser
15
<210>413
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49cdr-l2(aa)
<400>413
tyraspseraspargproser
15
<210>414
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-51cdr-l2(aa)
<400>414
glyalaserileleugluser
15
<210>415
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-24cdr-l3(aa)
<400>415
glnglntyrileserleuprotrpthr
15
<210>416
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25cdr-l3(aa)
<400>416
glnglnsertyrthrserargglnthr
15
<210>417
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28cdr-l3(aa)
<400>417
metglnalaleuglnthrproprotrpthr
1510
<210>418
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-29cdr-l3(aa)
<400>418
cyssertyralaglyserserthrserargaspval
1510
<210>419
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30cdr-l3(aa)
<400>419
arghistyralaproleuthr
15
<210>420
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34cdr-l3(aa)
<400>420
glnglnargserasntrpproprotyrthr
1510
<210>421
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-26、-35cdr-l3(aa)
<400>421
hisleutrpaspargserargasphistyrval
1510
<210>422
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36cdr-l3(aa)
<400>422
leuleuserserglyaspalaargmetval
1510
<210>423
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37cdr-l3(aa)
<400>423
serleuserhisalaglyaspargvalphe
1510
<210>424
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-38cdr-l3(aa)
<400>424
leuleusertyrseraspalaargleuala
1510
<210>425
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-39cdr-l3(aa)
<400>425
leuglnhisasnsertyrproleuthr
15
<210>426
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41cdr-l3(aa)
<400>426
glusertrpaspaspalaleuasnglyhisval
1510
<210>427
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42cdr-l3(aa)
<400>427
glnglntyrvalgluaspalaleuthr
15
<210>428
<211>11
<212>prt
<213>智人
<220>
<223>人bcma表位(残基17-27)
<400>428
leuleuhisalacysileprocysglnleuarg
1510
<210>429
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-44cdr-l3(aa)
<400>429
glnglntyrtyrserserprotyrthr
15
<210>430
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-45cdr-l3(aa)
<400>430
glnglnleuasnglytyrprotrpthr
15
<210>431
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47cdr-l3(aa)
<400>431
glnleutrpaspseraspseraspasppheala
1510
<210>432
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49cdr-l3(aa)
<400>432
glnvaltrpaspserserthrglyglntyrvalval
1510
<210>433
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-51cdr-l3(aa)
<400>433
glnlystyraspglyalaproprotrpthr
1510
<210>434
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-27vhfr1(aa)
<400>434
gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysvalalaserglyphethrpheasp
202530
<210>435
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30vhfr1(aa)
<400>435
glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrphegly
202530
<210>436
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25、-31、-44、-51vhfr1(aa)
<400>436
gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrphegly
202530
<210>437
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-32、-49vhfr1(aa)
<400>437
glnvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheser
202530
<210>438
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34vhfr1(aa)
<400>438
thrglyglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheasp
202530
<210>439
<211>30
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42vhfr1(aa)
<400>439
gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrphegly
202530
<210>440
<211>746
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-52scfv(nt)
<400>440
tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatg60
tcttgttctggaaccagctccaacatcggaagtcactctgtaaactggtaccagcagctc120
ccaggaacggcccccaaactcctcatctatactaataatcagcggccctcaggggtccct180
gaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtggcctccag240
tctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatggcagcctgaatggtctggta300
ttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggc360
ggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtgcagtctgga420
gcagaggtgaaaaagcccggggagtctctgaagatctcctgtaagggttctggatacagc480
tttaccagctactggatcggctgggtgcgccagatgcccgggaaaggcctggagtggatg540
gggatcatctatcctggtgactctgataccagatacagcccgtccttccaaggccacgtc600
accatctcagctgacaagtccatcagcactgcctacctgcagtggagcagcctgaaggcc660
tcggacaccgccatgtattactgtgcgcgctactctggttctttcgataactggggtcaa720
ggtactctggtgaccgtctcctcagc746
<210>441
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37vhfr3(aa)
<400>441
argphethrileserargaspasnalalysserserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalaarg
202530
<210>442
<211>248
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-52scfv(aa)
<400>442
sertyrgluleuthrglnproproseralaserglythrproglygln
151015
argvalthrmetsercysserglythrserserasnileglyserhis
202530
servalasntrptyrglnglnleuproglythralaprolysleuleu
354045
iletyrthrasnasnglnargproserglyvalproaspargpheser
505560
glyserlysserglythrseralaserleualaileserglyleugln
65707580
sergluaspglualaasptyrtyrcysalaalatrpaspglyserleu
859095
asnglyleuvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleuglyser
100105110
argglyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
leuglumetalagluvalglnleuvalglnserglyalagluvallys
130135140
lysproglygluserleulysilesercyslysglyserglytyrser
145150155160
phethrsertyrtrpileglytrpvalargglnmetproglylysgly
165170175
leuglutrpmetglyileiletyrproglyaspseraspthrargtyr
180185190
serproserpheglnglyhisvalthrileseralaasplysserile
195200205
serthralatyrleuglntrpserserleulysalaseraspthrala
210215220
mettyrtyrcysalaargtyrserglyserpheaspasntrpglygln
225230235240
glythrleuvalthrvalserser
245
<210>443
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47vhfr3(aa)
<400>443
aspserproserproglythrthrprolysasnserleutyrleugln
151015
metasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcysalalys
202530
<210>444
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>444
glyglyglnglythrmetvalthrvalserser
1510
<210>445
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>445
trpargglnglythrmetvalthrvalserser
1510
<210>446
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25vlfr1(aa)
<400>446
aspileglnmetthrglnserproalapheleuseralaservalgly
151015
aspargvalthrvalthrcys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28vlfr1(aa)
<400>447
aspilevalmetthrglnserproleuserleuservalthrprogly
151015
gluproalaserilesercys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>448
glnprovalleuthrglnproalaservalserglyserproglygln
151015
serilethrilesercys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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151015
gluargalathrleusercys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-31vlfr1(aa)
<400>450
aspvalvalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly
151015
gluargalathrilesercys
20
<210>451
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-32vlfr1(aa)
<400>451
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151015
thralaargilethrcys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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gluilevalmetthrglnserproalathrleuserleuserprogly
151015
aspargalathrleusercys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>453
asnphemetleuthrglnproproservalservalalaproglygln
151015
thralaargilethrcys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36vlfr1(aa)
<400>454
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151015
thrvalthrleuthrcys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37vlfr1(aa)
<400>455
glnleuvalleuthrglngluproserleuthrvalserproglygly
151015
thrvalthrleuthrcys
20
<210>456
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-38vlfr1(aa)
<400>456
glnalavalleuthrglngluproserleuthrvalserproglygly
151015
thrvalthrleuthrcys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<220>
<221>变体
<222>4
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<400>457
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151015
aspargvalthrilethrcys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41vlfr1(aa)
<400>458
glnprovalleuthrglnproproservalserglythrproglygln
151015
argvalthrileprocys
20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42vlfr1(aa)
<400>459
aspileglnmetthrglnserproserleuvalseralaservalgly
151015
aspargvalthrilethrcys
20
<210>460
<211>732
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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(o/sse)
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ctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggc360
ggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgagatgaagaaacct420
ggcgcctctctgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcatcgactactacgtg480
tactggatgcggcaggcccctggacagggactcgaatctatgggctggatcaaccccaat540
agcggcggcaccaattacgcccagaaattccagggcagagtgaccatgaccagagacacc600
agcatcagcaccgcctacatggaactgagccggctgagatccgacgacaccgccatgtac660
tactgcgccagatctcagcgcgacggctacatggattattggggccagggaaccctggtc720
accgtgtccagc732
<210>461
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>461
aspvalvalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly
151015
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20
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<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-45vlfr1(aa)
<400>462
alaileargmetthrglnserproserserleuseralaservalgly
151015
aspargvalthrilethrcys
20
<210>463
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47vlfr1(aa)
<400>463
glnalavalleuthrglnproproservalservalalaproglylys
151015
thralathrilethrcys
20
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<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-48vlfr1(aa)
<400>464
glnprovalleuthrglnproproservalservalalaproglylys
151015
thralathrilethrcys
20
<210>465
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49vlfr1(aa)
<400>465
leuprovalleuthrglnproproservalservalalaproglylys
151015
thralaargilethrcys
20
<210>466
<211>23
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-51vlfr1(aa)
<400>466
alaileglnleuthrglnserproserthrleuseralaservalgly
151015
aspargvalalailethrcys
20
<210>467
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25vlfr2(aa)
<400>467
trptyrglnglnlysproglyasnalaproargleuleuiletyr
151015
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<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28vlfr2(aa)
<400>468
trptyrleuglnlysproglyglnserproglnleuleuiletyr
151015
<210>469
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-29vlfr2(aa)
<400>469
trptyrglnglnhisproglylysalaprolysleumetiletyr
151015
<210>470
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30vlfr2(aa)
<400>470
trptyrglnglnlysproglyglnalaprolysleuleuiletyr
151015
<210>471
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-31vlfr2(aa)
<400>471
trptyrlysglnlysproglyglnproprolysleuvalileser
151015
<210>472
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-32vlfr2(aa)
<400>472
trptyrargglnargproglyglnalaprogluvalvaliletyr
151015
<210>473
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36vlfr2(aa)
<400>473
trppheglnlyslysproglyglnalaprothrthrleuiletyr
151015
<210>474
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37、-38vlfr2(aa)
<400>474
trppheglnglnlysproglyglnalaproargthrleuiletyr
151015
<210>475
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-39vlfr2(aa)
<400>475
trptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuiletyr
151015
<210>476
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-41vlfr2(aa)
<400>476
trppheglngluvalproglythralaprolysleuleuiletyr
151015
<210>477
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42vlfr2(aa)
<400>477
trptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuleuphe
151015
<210>478
<211>244
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-55scfv(aa)
<400>478
glnseralaleuthrglnproalaservalseralaserproglygln
151015
serilealailesercysthrglythrserseraspvalglytrptyr
202530
glnglnhisproglylysalaprolysleumetiletyrgluaspser
354045
lysargproserglyvalserasnargpheserglyserlyssergly
505560
asnthralaserleuthrileserglyleuglnalagluaspgluala
65707580
asptyrtyrcysserserasnthrargserserthrleuvalphegly
859095
glyglythrlysleuthrvalleuglyserargglyglyglyglyser
100105110
glyglyglyglyserglyglyglyglyserleuglumetalagluval
115120125
glnleuvalglnserglyalaglumetlyslysproglyalaserleu
130135140
lysleusercyslysalaserglytyrthrpheileasptyrtyrval
145150155160
tyrtrpmetargglnalaproglyglnglyleuglusermetglytrp
165170175
ileasnproasnserglyglythrasntyralaglnlyspheglngly
180185190
argvalthrmetthrargaspthrserileserthralatyrmetglu
195200205
leuserargleuargseraspaspthralamettyrtyrcysalaarg
210215220
serglnargaspglytyrmetasptyrtrpglyglnglythrleuval
225230235240
thrvalserser
<210>479
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-45vlfr2(aa)
<400>479
trptyrlysglnlysproglyglyvalproglnleuleuilehis
151015
<210>480
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47、-48vlfr2(aa)
<400>480
trptyrglnarglysproglyglnglyprovalvalvalilegln
151015
<210>481
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49vlfr2(aa)
<400>481
trptyrglnglnlysproglyglnalaprovalleuvalmetser
151015
<210>482
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-51vlfr2(aa)
<400>482
trptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuilephe
151015
<210>483
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-24vlfr3(aa)
<400>483
glyvalproaspargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leuthrileserserleuglnalagluaspvalalailetyrhiscys
202530
<210>484
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25vlfr3(aa)
<400>484
glyvalproserargpheargglythrglytyrglythrglupheser
151015
leuthrileaspserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcys
202530
<210>485
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-28vlfr3(aa)
<400>485
glyvalproaspargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leulysileserargvalglualagluaspvalglyvaltyrtyrcys
202530
<210>486
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-29vlfr3(aa)
<400>486
glyvalserasnargpheserglyserlysserglyasnthralaser
151015
prothrileserglyleuglnalagluaspglualaasptyrtyrcys
202530
<210>487
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-30vlfr3(aa)
<400>487
glyileproaspargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leuthrileserargleugluhisgluaspphealavaltyrtyrarg
202530
<210>488
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-32vlfr3(aa)
<400>488
glyvalproaspargpheserglyserasnserglyasnthralathr
151015
leuthrvalargglyvalglualaglyaspglualaasptyrtyrcys
202530
<210>489
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34vlfr3(aa)
<400>489
glyileproalaargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leuthrileserserleugluprogluaspphealavaltyrtyrcys
202530
<210>490
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-36vlfr3(aa)
<400>490
trpthrproalaargpheserglyserleuleuglyglylysalaala
151015
leuthrleuserglyalaglnprogluaspglualaasptyrtyrcys
202530
<210>491
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-37vlfr3(aa)
<400>491
trpthrproalaargpheserglyserleuleuglyglylysalaala
151015
leuthrleuserglyalaglnprogluaspglualaglutyrtyrcys
202530
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<212>prt
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<220>
<223>合成的
<220>
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<400>492
trpthrproalaargpheserglyserleuleuglyglylysalaala
151015
leuthrleuserglyalaglnprogluaspglualaasptyrphecys
202530
<210>493
<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-39vlfr3(aa)
<400>493
glyvalproserargpheserglyserglyserglythrasppheala
151015
leuthrileargserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcys
202530
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<220>
<223>合成的
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glyvalproaspargpheserglythrlysserglythrseralaser
151015
leualaileargglyleuglnseraspaspaspalahistyrtyrcys
202530
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glyvalproserargpheserglyserargserglythrasptyrthr
151015
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glyvalproserargpheserglyserglyserglythrgluphethr
151015
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<223>合成的
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glyileprogluargpheserglyserlysserglyaspthralaser
151015
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202530
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<220>
<223>合成的
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glyileprogluargpheserglyserasnserglyasnthralathr
151015
leuthrileserargvalglualaglyaspgluglyasptyrtyrcys
202530
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<211>32
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-49vlfr3(aa)
<400>500
glyileprogluargpheserglyserasnserglyasnthralathr
151015
leuthrileserargvalglualaglyaspglualaalatyrtyrcys
202530
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<220>
<223>合成的
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glyvalproserargpheserglyserglyserglythraspphethr
151015
leuthrileserserleuglnprogluaspvalalavaltyrtyrcys
202530
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<223>合成的
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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<220>
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<220>
<223>合成的
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<400>505
pheglythrglythrlysleuaspilelys
1510
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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<400>506
pheglyglyglythrlysvalaspilelys
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<220>
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iletyrproglyaspseraspthr
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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<400>508
pheglyglnglythrlysvalgluilelys
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<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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glyphethrpheglyasptyralamethis
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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<223>bcma-28cdr-h2(aa)abm编码
<220>
<221>变体
<222>10
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glyilesertrpasnserglyserilexaa
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<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
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tyrileserglyserglyserthriletyr
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<212>prt
<213>人工序列
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<223>合成的
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<400>512
tyrileserserserglyasnthriletyr
1510
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<213>人工序列
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<223>合成的
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alaargtyrserglyserpheaspasn
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<213>人工序列
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serglyserglyserthr
15
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<213>人工序列
<220>
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<213>人工序列
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serserasnileglyserhisser
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<212>prt
<213>人工序列
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<213>人工序列
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gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrpheglyasptyr
202530
alametsertrppheargglnalaproglylysglyleuglutrpval
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glypheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaala
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alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr
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leuvalthrvalserser
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gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
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<223>合成的
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
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202530
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
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lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
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<213>人工序列
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
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202530
alamethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
serglyilesertrpasnserglyserileglytyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alaargaspleuaspproaspaspalapheaspiletrpglyglngly
100105110
thrmetvalthrvalserser
115
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<212>prt
<213>人工序列
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<223>合成的
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glnvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
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sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
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lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
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metvalthrvalserser
115
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserglyserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
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859095
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100105110
valasnvalserser
115
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<211>122
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-34vh链(aa)
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thrglyglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
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202530
alamethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
serglyilesertrpasnserglyserileglytyralaaspserval
505560
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65707580
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glyglnglythrmetvalthrvalserser
115120
<210>527
<211>117
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
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gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
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lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
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100105110
valthrvalserser
115
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<213>人工序列
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
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100105110
leuvalthrvalserser
115
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<212>prt
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gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysserserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
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100105110
leuvalthrvalserser
115
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<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
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<223>bcma-41vh链(aa)
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glnvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyasnthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyasptyrvalaspasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
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<211>118
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-42vh链(aa)
<400>531
gluvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglyarg
151015
serleuargleusercysthralaserglyphethrpheglyasptyr
202530
alametsertrppheargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
glypheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaala
505560
servallysglyargphethrileserargaspaspserlysserile
65707580
alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr
859095
tyrcysalaalatrpseralaprothrasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserser
115
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<212>prt
<213>人工序列
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<223>合成的
<220>
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thrasnasn
1
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-47vh链(aa)
<400>533
glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvallysproglygly
151015
serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasptyr
202530
tyrmetsertrpileargglnalaproglylysglyleuglutrpval
354045
sertyrileserserserglyserthriletyrtyralaaspserval
505560
lysglyaspserproserproglythrthrprolysasnserleutyr
65707580
leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
alalysvalaspglyproproserpheaspiletrpargglnglythr
100105110
metvalthrvalserser
115
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<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
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<220>
<223>bcma-24vl链(aa)
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151015
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354045
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354045
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505560
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151015
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151015
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histrptyrglnarglysproglyglnglyprovalvalvalilegln
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354045
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tyrvalvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu
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151015
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100105
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leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
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glyglyglyglyseraspileglnmetthrglnserproalapheleu
130135140
seralaservalglyaspargvalthrvalthrcysargalasergln
145150155160
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165170175
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180185190
serargpheargglythrglytyrglythrglupheserleuthrile
195200205
aspserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcysglnglnser
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lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleutyr
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354045
glypheileargserlysalatyrglyglythrthrglutyralaala
505560
servallysglyargphethrileserargaspaspserlysserile
65707580
alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr
859095
tyrcysalaalatrpseralaprothrasptyrtrpglyglnglythr
100105110
leuvalthrvalserserglyglyglyglyserglyglyglyglyser
115120125
glyglyglyglyseralaileglnleuthrglnserproserthrleu
130135140
seralaservalglyaspargvalalailethrcysargalasergln
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asnileglyasptrpleualatrptyrglnglnlysproglylysala
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prolysleuleuilepheglyalaserileleugluserglyvalpro
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serargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrile
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leugluglyglyglygluglyargglyserleuleuthrcysglyasp
151015
valglugluasnproglyproarg
20
<210>597
<211>18
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>t2a
<400>597
gluglyargglyserleuleuthrcysglyaspvalglugluasnpro
151015
glypro
<210>598
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>p2a
<400>598
glyserglyalathrasnpheserleuleulysglnalaglyaspval
151015
glugluasnproglypro
20
<210>599
<211>19
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>p2a
<400>599
alathrasnpheserleuleulysglnalaglyaspvalglugluasn
151015
proglypro
<210>600
<211>20
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>e2a
<400>600
glncysthrasntyralaleuleulysleualaglyaspvalgluser
151015
asnproglypro
20
<210>601
<211>22
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>f2a
<400>601
vallysglnthrleuasnpheaspleuleulysleualaglyaspval
151015
gluserasnproglypro
20
<210>602
<211>357
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>egfrt
<400>602
metleuleuleuvalthrserleuleuleucysgluleuprohispro
151015
alapheleuleuileproarglysvalcysasnglyileglyilegly
202530
gluphelysaspserleuserileasnalathrasnilelyshisphe
354045
lysasncysthrserileserglyaspleuhisileleuprovalala
505560
pheargglyaspserphethrhisthrproproleuaspproglnglu
65707580
leuaspileleulysthrvallysgluilethrglypheleuleuile
859095
glnalatrpprogluasnargthraspleuhisalaphegluasnleu
100105110
gluileileargglyargthrlysglnhisglyglnpheserleuala
115120125
valvalserleuasnilethrserleuglyleuargserleulysglu
130135140
ileseraspglyaspvalileileserglyasnlysasnleucystyr
145150155160
alaasnthrileasntrplyslysleupheglythrserglyglnlys
165170175
thrlysileileserasnargglygluasnsercyslysalathrgly
180185190
glnvalcyshisalaleucysserprogluglycystrpglyproglu
195200205
proargaspcysvalsercysargasnvalserargglyargglucys
210215220
valasplyscysasnleuleugluglygluproarggluphevalglu
225230235240
asnserglucysileglncyshisproglucysleuproglnalamet
245250255
asnilethrcysthrglyargglyproaspasncysileglncysala
260265270
histyrileaspglyprohiscysvallysthrcysproalaglyval
275280285
metglygluasnasnthrleuvaltrplystyralaaspalaglyhis
290295300
valcyshisleucyshisproasncysthrtyrglycysthrglypro
305310315320
glyleugluglycysprothrasnglyprolysileproserileala
325330335
thrglymetvalglyalaleuleuleuleuleuvalvalalaleugly
340345350
ileglyleuphemet
355
<210>603
<211>335
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>egfrt
<400>603
arglysvalcysasnglyileglyileglygluphelysaspserleu
151015
serileasnalathrasnilelyshisphelysasncysthrserile
202530
serglyaspleuhisileleuprovalalapheargglyaspserphe
354045
thrhisthrproproleuaspproglngluleuaspileleulysthr
505560
vallysgluilethrglypheleuleuileglnalatrpprogluasn
65707580
argthraspleuhisalaphegluasnleugluileileargglyarg
859095
thrlysglnhisglyglnpheserleualavalvalserleuasnile
100105110
thrserleuglyleuargserleulysgluileseraspglyaspval
115120125
ileileserglyasnlysasnleucystyralaasnthrileasntrp
130135140
lyslysleupheglythrserglyglnlysthrlysileileserasn
145150155160
argglygluasnsercyslysalathrglyglnvalcyshisalaleu
165170175
cysserprogluglycystrpglyprogluproargaspcysvalser
180185190
cysargasnvalserargglyargglucysvalasplyscysasnleu
195200205
leugluglygluproarggluphevalgluasnserglucysilegln
210215220
cyshisproglucysleuproglnalametasnilethrcysthrgly
225230235240
argglyproaspasncysileglncysalahistyrileaspglypro
245250255
hiscysvallysthrcysproalaglyvalmetglygluasnasnthr
260265270
leuvaltrplystyralaaspalaglyhisvalcyshisleucyshis
275280285
proasncysthrtyrglycysthrglyproglyleugluglycyspro
290295300
thrasnglyprolysileproserilealathrglymetvalglyala
305310315320
leuleuleuleuleuvalvalalaleuglyileglyleuphemet
325330335
<210>604
<211>720
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-25scfv序列(nt)
<400>604
gaggtgcagctggtgcagagcggaggaggcctggtgcagcctggcaggtccctgcgcctg60
tcttgcaccgccagcggcttcacatttggcgactatgccatgtcctggttcaggcaggca120
ccaggcaagggcctggagtgggtgggctttatccgctctaaggcctacggcggcaccaca180
gagtatgccgccagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacgactctaagagcatc240
gcctacctgcagatgaactctctgaagaccgaggacacagccgtgtactattgcgcagca300
tggagcgccccaaccgattattggggccagggcaccctggtgacagtgagctccggcggc360
ggcggctctggaggaggaggaagcggaggaggaggatccgacatccagatgacacagtcc420
cctgcctttctgtccgcctctgtgggcgatagggtgaccgtgacatgtcgcgcctcccag480
ggcatctctaactacctggcctggtatcagcagaagcccggcaatgcccctcggctgctg540
atctacagcgcctccaccctgcagagcggagtgccctcccggttcagaggaaccggctat600
ggcacagagttttctctgaccatcgacagcctgcagccagaggatttcgccacatactat660
tgtcagcagtcttacaccagccggcagacatttggccccggcacaagactggatatcaag720
<210>605
<211>723
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-26scfv序列(nt)
<400>605
gaggtgcagctggtggagtccggaggaggcctggtgaagccaggaggctctctgaggctg60
agctgcgcagcctccggcttcaccttttctgactactatatgagctggatcaggcaggca120
ccaggcaagggcctggagtgggtgtcttacatcagctcctctggcagcacaatctactat180
gccgactccgtgaagggcaggttcaccatctctcgcgataacgccaagaatagcctgtat240
ctgcagatgaactccctgcgggccgaggatacagccgtgtactattgcgccaaggtggac300
ggccccccttcctttgatatctggggccagggcacaatggtgaccgtgagctccggagga360
ggaggatccggcggaggaggctctggcggcggcggctctagctatgtgctgacccagcca420
ccatccgtgtctgtggcacctggacagacagcaaggatcacctgtggagcaaacaatatc480
ggcagcaagtccgtgcactggtaccagcagaagcctggccaggccccaatgctggtggtg540
tatgacgatgacgatcggcccagcggcatccctgagagattttctggcagcaactccggc600
aataccgccacactgaccatctctggagtggaggcaggcgacgaggcagattacttctgt660
cacctgtgggaccggagcagagatcactacgtgttcggcacaggcaccaagctgaccgtg720
ctg723
<210>606
<211>744
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-52scfv序列(nt)
<400>606
tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatg60
tcttgttctggaaccagctccaacatcggaagtcactctgtaaactggtaccagcagctc120
ccaggaacggcccccaaactcctcatctatactaataatcagcggccctcaggggtccct180
gaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtggcctccag240
tctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatggcagcctgaatggtctggta300
ttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggc360
ggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtgcagtctgga420
gcagaggtgaaaaagcccggggagtctctgaagatctcctgtaagggttctggatacagc480
tttaccagctactggatcggctgggtgcgccagatgcccgggaaaggcctggagtggatg540
gggatcatctatcctggtgactctgataccagatacagcccgtccttccaaggccacgtc600
accatctcagctgacaagtccatcagcactgcctacctgcagtggagcagcctgaaggcc660
tcggacaccgccatgtattactgtgcgcgctactctggttctttcgataactggggtcaa720
ggtactctggtgaccgtctcctca744
<210>607
<211>732
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma-55scfv序列(nt)
<400>607
caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgcgtctcctggacagtcgatcgccatc60
tcctgcactggaaccagcagtgacgttggttggtatcaacagcacccaggcaaagccccc120
aaactcatgatttatgaggacagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggc180
tccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggct240
gattattactgcagctcaaatacaagaagcagcactttggtgttcggcggagggaccaag300
ctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggt360
ggatccctcgagatggccgaagtgcagctggtgcagtctggggctgagatgaagaagcct420
ggggcctcactgaagctctcctgcaaggcttctggatacaccttcatcgactactatgta480
tactggatgcgacaggcccctggacaagggcttgagtccatgggatggatcaaccctaac540
agtggtggcacaaactatgcacagaagtttcagggcagggtcaccatgaccagggacacg600
tccatcagcacagcctacatggagctgagcaggctgagatctgacgacaccgccatgtat660
tactgtgcgcgctcccagcgtgacggttacatggattactggggtcaaggtactctggtg720
accgtctcctca732
<210>608
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>608
serasnthrproproleuthrcysglnarg
1510
<210>609
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>609
cysileprocysglnleuarg
15
<210>610
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>610
servalthrasnservallys
15
<210>611
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>611
cysserglnasnglutyrphe
15
<210>612
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>612
leuleuhisalacysileprocysglnleuarg
1510
<210>613
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>613
glnasnglutyrphe
15
<210>614
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>614
cysileprocysglnleu
15
<210>615
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>615
cysglnargtyrcys
15
<210>616
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>616
metleumetalagly
15
<210>617
<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>617
glnasnglutyrpheaspserleuleu
15
<210>618
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>618
tyrpheaspserleu
15
<210>619
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>619
glnleuargcysserserasnthrproproleu
1510
<210>620
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的
<220>
<223>bcma表位
<400>620
tyrpheaspserleuleu
15