AE作为制备治疗改善糖尿病药品食品及相关制剂的应用的制作方法

本发明属于食品药品领域，涉及AE(8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin)作为 α-葡萄糖苷酶抑制剂，在降糖食品，药品和保健品方面的应用。

技术背景

茶是世界上最受欢迎的饮料，在我国有着悠久的历史，具有独特的风味和丰 富的营养价值及保健功效，主要有绿茶(不发酵)、乌龙茶(半发酵)和红茶(发 酵)，茶中主要活性成分包括茶多糖和茶多酚等。

AE(8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin)(式1)，最早由Itsuo Nishioka课题组 于1989年从乌龙茶中提取分离得到。2013年，杨振课题组首次用儿茶素和维 生素C合成得到。研究表明，8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin对人体有多方面 的保健和药理作用,如抑制胰腺脂肪酶、抗HIV、抗肿瘤等作用。

式1 AE(8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin)的化学结构

α-葡萄糖苷酶抑制剂是一种有效的口服降糖药，能够与小肠中的α-葡萄糖苷 酶的中心活性部位结合，阻抑酶活性的发挥,阻滞双糖水解为单糖，吸收时间后 延从而对降低餐后高血糖起到有益的作用。α-葡萄糖苷酶抑制剂除了对糖尿病及 糖尿病并发症的预防和治疗有很好的效果外，还能抑制蛋白及脂类糖基化。我国 资源丰富，但是大多数具有降血糖的药物还没开发，因此，从天然产物中筛选新 的低毒、高效的α-葡萄糖苷酶抑制剂越来越受到人们的重视。

目前尚无关于8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin抑制α-葡萄糖苷酶以及抗糖尿 病的报道。因此，8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin作为α-葡萄糖苷酶抑制剂，在 降糖食品，保健品和药品方面的应用具有一定的研究意义和新颖性。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种天然小分子8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin作 为α-葡萄糖苷酶抑制剂，在降糖食品，药品和保健品方面的应用。本发明的上述 目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种AE作为制备治疗改善糖尿病药品的应用，所述AE其结构为：

一种AE作为制备降糖药品及食品添加剂的应用，所述AE其结构为：

一种AE作为制备降糖保健品添加剂的应用，在药学上可以接受的载体或赋 形剂，制成药学上可以接受的剂型。

一种AE作为制备降糖保健品添加剂的应用。

一种AE作为制备保健品添加剂的应用。

一种AE作为制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用

一种降糖药物，含有AE，所述AE其结构为：

而且，还包括降糖药物接受的载体或赋形剂。

而且，所述药物接受的赋形剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、 糖浆剂、散剂、膏剂或液体制剂。

本发明的优点和积极效果如下：

本发明发现8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin为α-葡萄糖苷酶抑制剂，可以用 作降糖食品和保健品添加剂，还可以用于制备降糖药物或保健品。

附图说明

图1为8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin促进HepG2细胞葡萄糖消耗(GC)， 以500μM的二甲双胍(Met)为参照物，*P＜0.05和**P＜0.01，与control组相 比。

图2为糖尿病小鼠给药后血糖水平。给药4周后小鼠空腹血糖浓度(图2A) 和相应的AUC(图2B)，口服麦芽糖负荷后小鼠的血糖浓度(图2C)和相应的 AUC(图2D)，口服葡萄糖后小鼠的血糖浓度(图2E)和相应的AUC(图2F)。 AE为8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin。数据表示为平均值±SD(n＝10)。*P ＜0.05和**P＜0.01对比于模型组。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保 护范围。

实施例1

8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin作为α-葡萄糖苷酶抑制剂，在降糖食品，药 品和保健品方面的应用

一、实验材料

酵母α-葡萄糖苷酶，对硝基苯基α-D-吡喃葡萄糖苷(pNαGP)，4-硝基苯基 磷酸二钠盐(pNPP)，HepG2细胞获自中国科学院上海生命科学研究院(中国上 海)。

雄性昆明小鼠(18-22g)，由中国人民解放军医学科学院实验动物中心提供， 经地方动物保护局批准，严格遵守当地和国家的道德准则。将小鼠保持在聚丙烯 笼中(每笼5只)并在实验室条件下(18-23℃，55-60％湿度，12小时光暗循 环)饲养，所有小鼠自由饮食饮水。

二、实验方法

1.体外α-葡萄糖苷酶抑制活性测试方法

设置空白组、对照组和实验组，反应体系为200μL，测试缓冲液为pH 6.8， 50mM的磷酸钾缓冲液。实验组包含10μL的测试化合物，20μL的α-葡萄糖苷 酶(0.04U/mL)，30μL，0.5mM的4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNαGP)作 为底物；空白组中不包含酶和化合物，阿卡波糖(250μM)作为阳性对照。酶 和测试化合物37℃条件下温孵5min，然后加入底物，继续温孵30min，使用 酶标仪在405nm下读取吸光度值，计算测试化合物对α-葡萄糖苷酶抑制率。

2.细胞水平降糖活性评价方法

2.1HepG2细胞葡萄糖消耗实验

HepG2细胞在含10％的胎牛血清，10U/mL青霉素和10mg/mL链霉素的 DMEM高糖培养基中，于37℃、5％CO2条件下培养。取处于对数生长期的细 胞，接种于96孔板上，接种密度为5×10⁴cells/mL，每孔100，同时设置空白孔 和对照孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h；将培养基弃去，1×PBS洗2 次，换成无血清的DMEM高糖培养基，继续培养24h；将培养基弃去，1×PBS 洗2次，换成含0.2％BSA的1640培养基，加入测试化合物或DMSO，二甲双 胍(500μM)作为阳性对照，作用24h；用葡萄糖试剂盒测定各测试孔葡萄糖 含量。

在葡萄糖消耗实验后，釆用MTT比色法测定细胞活性，校正各孔葡萄糖消 耗值。将MTT(20μL，5mg/mL溶于PBS中)加入各孔中，4h后，加入DMSO (100μL)以溶解晶体并置于振荡器上10min，用酶标仪在492nm的波长下测 量OD值。通过计算GC和MTT的比率(GC/MTT＝mmol·L^-1/OD)可以减少 由于细胞增殖引起的葡萄糖消耗。

3.动物体内抗糖尿病活性研究

3.1二型糖尿病小鼠模型的建立

小鼠适应性饲养1周后，高脂饲料饲养4周，禁食不禁水6h，以100mg/kg 的剂量小鼠腹腔注射STZ，继续高脂饲料喂养。1周后再次测量血糖值，对于未 造模成功的小鼠再次给予腹腔注射STZ 60mg/kg的剂量，1周后再次测量小鼠血 糖值，空腹血糖值大于11.0mM为造模成功。设置5组，即正常组、模型组、 阳性对照组、药物高、低剂量组。

3.2餐后血糖值和葡萄糖耐量(OGTT)的检测

禁食不禁水3h后，正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水，阳性对照 组给予阿卡波糖(50mg/kg)，给药组给予地奥司明(50mg/kg)和(100mg/kg)， 填满饲料，给药2h后，小鼠尾静脉取血，血糖仪测量餐后血糖值，并记录体重， 每天给药1次，连续给药4周。

给药第3周测小鼠口服葡萄糖耐量(OGTT),记录各组小鼠空腹血糖值和体 重，给药1h后，给予各组小鼠葡萄糖2g/kg的剂量，分别在30、60、90、120min 尾静脉采血测量血糖值，计算血糖变化曲线下面积(AUC)。

第4周测量小鼠口服麦芽糖耐量,记录各组小鼠空腹血糖值和体重，给药1h 后，给予各组小鼠麦芽糖2g/kg的剂量，分别在30、60、90、120min尾静脉采 血测量血糖值，计算血糖变化曲线下面积(AUC)。

三、实验结果

1、8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

对8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了研究。临 床上的α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖作为参考化合物。如表1所示， 8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin对α-葡萄糖苷酶有明显的抑制作用，IC50值为 142.8μM，其抑制作用优于阿卡波糖(IC50＝250.2μM)。

表1. 8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechind对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

^a结果是三次独立实验的平均值，^b参考化合物。

2、8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin促进HepG2细胞葡萄糖消耗

为研究8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin的抗糖尿病活性，评价了HepG2细胞 的葡萄糖消耗活性，并用MTT实验结果对葡萄糖消耗量(GC)结果进行矫正。 如图1所示，8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin在0.1-10μM的剂量下均能够促进 葡萄糖的消耗，且存在剂量依赖。

3. 8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin降低了体内的血糖水平。

为了解8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin对α-葡萄糖苷酶抑制的机制，我们进一步 用体内麦芽糖耐量试验研究了黄酮类化合物2对血糖水平的影响。α-葡萄糖苷酶 把麦芽糖水解为葡萄糖，因此，口服麦芽糖后的血糖水平间接反映了α-葡萄糖苷 酶的活性。如图2C所示，用8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin(50和100mg/kg)治 疗2h后，与糖尿病模型组相比，餐后血糖水平显著改善。在剂量为50mg/kg 和100mg/kg时，2组糖尿病小鼠的葡萄糖AUC分别减少11.2％和13.5％(图2D)。8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin能够显著降低体内空腹血糖水平和改善麦芽糖耐受 性，与阿卡波糖活性相当。

为了评估用8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin治疗的糖尿病小鼠的葡萄糖稳态和 胰岛素敏感性，我们还进行了葡萄糖耐量试验。口服8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin 导致空腹血糖水平显著降低(图2A和图2B)，同时葡萄糖耐量显著改善(图2E 和图2F)。

实施例2

8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin的应用

用作食品添加剂，如在饼干中添加适量的8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin制 成降血糖饼干。

用作保健品添加剂，如在蜂蜜中添加适量的8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin 制成降血糖保健蜂蜜。

用于制备降血糖药物，活性成分8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin，还包括药 学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型药学上可以接受的载 体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料；药学上可以接受的剂型包 括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂等。

上述实施例表明，8-C-Asorbyl-(-)-Epigallocatechin为α-葡萄糖苷酶抑制剂可 以用作降糖食品和保健品添加剂，还可以用于制备降糖药物或保健品。