一种抑制肿瘤细胞生长的药物组合物及其应用的制作方法

本发明属于肿瘤药物技术领域，具体涉及一种抑制肿瘤细胞生长的药物组合物及其应用。

背景技术：

甘露糖(mannose)是一种可食用单糖。最近研究发现高浓度甘露糖可以抑制肿瘤生长，并且可以提高肿瘤化疗效果。研究显示甘露糖进入细胞后被磷酸化形成甘露糖-6-磷酸(mannose-6-phosphate，m6p)，而m6p可以抑制参与葡萄糖代谢的三种酶：己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，进而影响了三羧酸循环、磷酸戊糖途径及聚糖合成。在上述过程中，甘露糖代谢为m6p发挥抑制肿瘤作用。但现有技术中的m6p稳定性较差，易于被磷酸水解酶降解，且难以被细胞吸收进入细胞质，无法充分发挥其抑制肿瘤生长的功效。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种抑制肿瘤细胞生长的药物组合物，其有效成分包括m6cp-oet。

本发明的另一目的在于提供m6cp-oet的应用。

本发明的再一目的在于提供m6cp-oet的制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种抑制肿瘤细胞生长的药物组合物，其有效成分包括m6cp-oet，该m6cp-oet的结构式为：

在本发明的一个优选实施方案中，其有效成分为所述m6cp-oet。

本发明的另一技术方案如下：

m6cp-oet在制备抑制肿瘤细胞生长的药物的应用。

本发明的再一技术方案如下：

上述m6cp-oet的制备方法，其合成路线如下：

在本发明的一个优选实施方案中，包括如下步骤：

(1)将所述化合物1溶解于无水吡啶中，加入三苯基氯甲烷和4-二甲氨基吡啶充分混合，于氮气保护下，85-92℃搅拌反应10-13h，然后去除溶剂，其余物料溶于二氯甲烷中获得第一有机相，用水洗涤第一有机相后，将第一有机相经干燥、浓缩并柱层析，获得所述化合物2；

(2)将所述化合物2溶解于无水n，n-二甲基甲酰胺中并置于冰浴中，向其中依次缓慢加入nah、nai和苄化溴，室温反应10-15h，所得物料于冰浴中用meoh猝灭后用无水乙醚稀释获得第二有机相，用水洗涤第二有机相后，将第二有机相经干燥、浓缩，获得所述化合物3；

(3)将所述化合物3溶解于meoh和ch2cl2的混合溶剂中，加入对甲苯磺酸直至ph＝3.4-3.6，室温下搅拌反应10-13h，用et3n中和，然后去除溶剂，其余物料中加入et2o，获得第三有机相和水相，所得水相用et2o萃取后获得第四有机相，将第四有机相与经水洗涤后的第三有机相合并，再用饱和氯化钠溶液洗涤，接着经干燥、过滤、浓缩和柱层析纯化，获得化合物4；

(4)将所述化合物4溶解于无水乙腈中，加入2-碘酰苯甲酸，于氮气保护下，78-82℃搅拌反应3-5h，然后用硅藻土过滤并真空浓缩得到所述化合物5；

(5)将所述化合物5加入到溶有亚甲基二磷酸四乙酯的二氧六环中，接着加入k2co3，于68-72℃搅拌反应1.5-2.5h，再经过滤、浓缩和柱层析分离得到所述化合物6；

(6)将所述化合物6溶解于甲醇和盐酸的混合溶剂中，加入pd/c，氢气气氛下室温搅拌20-25h，通过硅藻土过滤，然后经真空浓缩，即得到所述m6cp-oet。

进一步优选的，所述步骤(1)中，于氮气保护下，90℃搅拌反应12h。

进一步优选的，所述步骤(4)中，于氮气保护下，80℃搅拌反应4h。

进一步优选的，所述步骤(5)中，于70℃搅拌反应2h。

本发明的有益效果是：本发明中的m6cp-oet能够在较低浓度下抑制包括骨肉瘤、肺癌和黑色素瘤在内的多种肿瘤细胞生长。

附图说明

图1为本发明实施例2中的m6cp-oet对人骨肉瘤细胞(u2os)生长的抑制效果；

图2为本发明实施例2中的m6cp-oet对人肺癌细胞(a549)生长的抑制效果；

图3为本发明实施例2中的m6cp-oet对小鼠黑色素瘤细胞(b16f10)生长的抑制效果。

具体实施方式

以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。

实施例1

本实施例中的m6cp-oet的结构式为：

m6cp-oet的合成路线如下：

具体包括如下步骤：

(1)将所述化合物1(10.0g，37.0mmol)溶解于无水吡啶(py.，200ml)中，加入三苯基氯甲烷(trtcl，15.4g，55.5mmol)和4-二甲氨基吡啶(dmap，1.0g，8.3mmol)充分混合，于氮气保护下，90℃搅拌反应12h，然后去除溶剂，其余物料溶于二氯甲烷(dcm，300ml)中获得第一有机相，用水(300ml)洗涤第一有机相后，将第一有机相经干燥(无水na2so4)、浓缩并柱层析(dcm，然后25％己烷的etoac溶液)，获得所述化合物2(17.0g，90％)；

(2)将所述化合物2(17.0g，32.7mmol)溶解于无水n，n-二甲基甲酰胺(dmf，250ml)中并置于0℃的冰浴中，向其中依次缓慢加入60％nah(7.8g，196.1mmol)、nai(4.9g，32.7mmol)和苄化溴(bnbr，23.2ml，196.1mmol)，室温反应10-15h，所得物料于冰浴中用meoh(30ml)猝灭后用无水乙醚(et2o，300ml)稀释获得第二有机相，用水(300ml)洗涤第二有机相后，将第二有机相经干燥(无水na2so4)、浓缩，获得所述化合物3；

(3)将所述化合物3溶解于meoh和ch2cl2的混合溶剂(2∶1，300ml)中，加入对甲苯磺酸(p-tsoh)直至ph＝3.5，室温下搅拌反应12h，用et3n中和，然后去除溶剂，其余物料中加入et2o(300ml)，获得第三有机相和水相，所得水相用et2o(2×100ml)萃取后获得第四有机相，将第四有机相与经水(200ml)洗涤后的第三有机相合并，再用饱和氯化钠溶液(200ml)洗涤，接着经干燥(无水na2so4)、过滤、浓缩和柱层析纯化(石油醚(pe)/etoac)，5∶1-1∶1)，获得化合物4(13.9g，79％，两步)；

(4)将所述化合物4(32.7mmol，5g)溶解于无水乙腈(mecn，200ml)中，加入2-碘酰苯甲酸(ibx，3eq)，于氮气保护下，80℃搅拌反应4h，然后用硅藻土过滤并真空浓缩得到所述化合物5；

(5)将所述化合物5加入到溶有亚甲基二磷酸四乙酯(temdp，1.5eq)的二氧六环中，接着加入k2co3(1.5eq)，于70℃搅拌反应2h，再经过滤、浓缩和柱层析分离得到所述化合物6(pe/etoac，10∶1-1∶1，60％，两步)；

(6)将所述化合物6(1.0g，1.5mmol)溶解于甲醇和盐酸的混合溶剂(meoh/na，10∶1)中，加入0.1g10％pd/c，氢气气氛下室温搅拌24h，通过硅藻土过滤，然后经真空浓缩，即得到所述m6cp-oet(100％)。

实施例2

1)配制浓度为250mmm6cp-oet和mannose的标准溶液：

分别称取78.5mg的m6cp-oet和45.0mgmannose溶于1.0ml的pbs(0.1m)。即得250mmm6cp-oet和mannose的标准溶液。

2)配制浓度为25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose的细胞培养溶液：

分别取100μl、40μl、20μl、4μl的m6cp-oet和mannose标准溶液与1ml细胞培养溶液混合，得到含有25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose的细胞培养溶液。

3)mtt法评估25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose对u2os细胞生长的抑制作用：

分别将含有25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose的细胞培养液与生长在96孔板上的u2os细胞共同孵育24h、48h、72h后用新鲜的细胞培养液洗三遍，再用mtt法对细胞吸收值信号进行采集。

从图1可以观察到1mmm6cp-oet即可对u2os细胞生长具有明显的抑制作用。

4)mtt法评估25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose对a549细胞生长的抑制作用：

分别将含有25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose的细胞培养液与生长在96孔板上的a549细胞共同孵育24h、48h、72h后用新鲜的细胞培养液洗三遍，再用mtt法对细胞吸收值信号进行采集。

从图2可以观察到5mmm6cp-oet即可对a549细胞生长具有明显的抑制作用。

5)mtt法评估25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose对b16f10细胞生长的抑制作用：

分别将含有25mm、10mm、5mm、1mmm6cp-oet和mannose的细胞培养液与生长在96孔板上的b16f10细胞共同孵育24h、48h、72h后用新鲜的细胞培养液洗三遍，再用mtt法对细胞吸收值信号进行采集。

从图3可以观察到1mmm6cp-oet即可对b16f10细胞生长具有明显的抑制作用。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。