一种格拉司琼缓释微球及其制备方法与流程

本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种格拉司琼缓释微球及其制备方法。

背景技术：

化疗是目前治疗癌症的有效手段之一，但也伴随着较多毒副作用，如消化系统反应、骨髓抑制、脱发等。其中，化疗相关性恶心呕吐(cinv)是患者在化疗过程中一种最为常见的不良反应。严重的cinv可降低患者的化疗依从性。此外，cinv可产生一系列相关的并发症，如电解质紊乱、脱水等。患者免疫降低、营养不良、精神紧张焦虑，生活质量急剧下降，化疗疗效不佳。预防和减轻cinv是保证化疗顺利进行的重要手段之一。

格拉司琼(1-甲基-n-[内向-9-甲基-9-氮杂双环(3,3,1)壬烷-3-基]-1h-吲唑-3-甲酰胺)是一种高选择性5-ht3受体(5-羟色胺3受体)拮抗剂，适应症为用于放射治疗、细胞毒素类药物化疗引起的恶心和呕吐，其结构式如下式所示：。

格拉司琼对5-ht3受体的选择性极高，为其他5-ht受体(如5-ht1,5-ht1a,5-ht1b,5-ht1c,5-ht2)、α1受体，α2受体，β-肾上腺素受体、多巴胺d2受体，组胺h1受体和阿片类受体的1000倍。放疗、化疗及外科手术等因素可引起肠嗜铬细胞释放5-ht，5-ht可激活中枢或迷走神经的5-ht3受体而引起呕吐反射。格拉司琼选择性抑制中枢化学感受区及外周迷走神经末梢的5-ht3受体，具有良好的恶心呕吐控制机制。此外，格拉司琼是一种对成人和儿童有效且耐受良好的药物。

但格拉司琼半衰期较短，为4-6小时，不可避免的要多次服药，导致患者依从性下降，不利于预防延迟的cinv。在市场上，格拉司琼有多种药物形式，如片剂、胶囊等。然而，口服给药有许多缺点，如给药频率高以及因首过效应导致的生物利用度低。格拉司琼也可用作栓剂，其缺点是吸收不规律，易引起患者不适。此外，如果栓剂到达结肠，将经历首关消除，从而导致生物利用度低。

为提高患者顺应性，中国发明专利cn201511020714公开了一种含有格拉司琼的长效透皮贴剂，在改善专利cn200480003579和专利cn201310098182的缺陷后，仍然只能维持7日的持续释放。

因此，为进一步提高患者顺应性，需要提供一种更长效的缓释制剂。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种格拉司琼缓释微球及其制备方法，其制备方法简单快速，无突释现象，可以有效解决制剂释放时间短，患者顺应性差的问题。

为了实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

在一方面，本发明提供了一种格拉司琼缓释微球的制备方法，包括以下步骤：

(a)将格拉司琼和含疏水链段的可降解聚合物溶于有机溶剂中，得到含药聚合物溶液；

(b)在搅拌条件下，将所述含药聚合物溶液加至水相中，形成o/w型乳液，并去除乳液中的有机溶剂；其中，所述水相中含有稳定剂，所述稳定剂与水相的比例为0.1％～5％(w/v)；

(c)在搅拌条件下，将步骤(b)所得的分散体系加至水中进行固化，得到所述格拉司琼缓释微球。

进一步地，在步骤(a)中，所述含疏水链段的可降解聚合物选自丙交酯-乙交酯共聚物(plga)、聚乳酸(pla)、聚乳酸-聚乙二醇(pla-peg)和聚己内酯(pcl)中的一种或几种。

进一步地，在步骤(a)中，所述含疏水链段的可降解聚合物为丙交酯-乙交酯共聚物，其相对分子质量为5000～100000g/mol，其中，丙交脂与乙交酯的摩尔比为85:15～50:50。

优选地，plga相对分子质量为12000～90000g/mol，更优选为12000～21000g/mol。

优选地，plga丙交脂与乙交酯的摩尔比为75:25～50:50，更优选为75:25。

进一步地，在步骤(a)中，所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲基乙基酮和四氢呋喃中的一种或几种。

进一步地，在步骤(a)中，所述格拉司琼与含疏水链段的可降解聚合物的重量比为1:2～1:100；优选为1:25～1:50。

进一步地，在步骤(a)中，所述含疏水链段的可降解聚合物占含药聚合物溶液总质量的0.5～20％；优选为1～15％，更优选为1～10％。当聚合物浓度过大时，容易在制备过程中析出，影响微球的制备。

进一步地，步骤(a)中的有机溶剂和步骤(b)中的水相的体积比为1:5～1:50。优选为1:10～1:40；更优选为1:10。

进一步地，在步骤(b)中，所述稳定剂选自聚乙烯醇(pva)、聚山梨酯20、聚山梨酯80(吐温80)、聚乙二醇和十二烷基硫酸钠的一种或几种。

优选地，稳定剂为pva和吐温80。pva与水相的比例优选为0.5％～2％(w/v)；更优选为1％(w/v)。吐温80与水相的比例优选为0.1％～0.3％(w/v)；更优选为0.1％(w/v)。

进一步地，在步骤(b)中，搅拌速率为50-1000rpm；在步骤(c)中，搅拌速率为50-1000rpm。

在另一方面，本发明还提供了一种采用上述制备方法所制备的格拉司琼缓释微球，该微球的平均粒径为50～105μm，载药量为1％～3％，包封率为45％～70％。

进一步地，本发明制备的格拉司琼缓释微球，其中的药物可以缓慢释放一个月。

本发明通过将格拉司琼与含疏水链段的可降解聚合物溶于有机溶剂中，形成的油相加入水相中后，形成o/w乳液后，挥干溶剂，再用水进一步固化得到格拉司琼缓释微球。首先，格拉司琼为疏水性药物，与含疏水链段的可降解聚合物共溶于有机溶剂中，可以降低药物损失，提高载药量与包封率；其次，采用合理的搅拌速率，可以控制微球具有适宜的粒径；此外，用水进一步进行固化，有效提高微球的载药量与包封率，并使微球更加坚硬，避免微球的收集过程中发生变形，微球形态良好。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明的制备方法简单快速，所制备的格拉司琼缓释微球粒径适宜，形态圆整，包封率高，载药量良好且缓慢释放，没有突释现象，可缓慢释放一个月，有效提高患者顺应性。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1为实施例9制备的格拉司琼缓释微球的扫描电镜图(400×)；

图2为实施例9制备的格拉司琼缓释微球的体外释放曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至100ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例2

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至200ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例3

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至50ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例4

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至50ml含2％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例5

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至50ml含0.5％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例6

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至200ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至400ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例7

称取5mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至100ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至200ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例8

称取10mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至200ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至400ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例9

称取10mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至100ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至200ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例10

称取10mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至50ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至100ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例11

称取10mg格拉司琼和250mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝75:25,mw＝1.2wg/mol),溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至100ml含1％(w/v)pva和0.1％(w/v)吐温80的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至200ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例12

称取10mg格拉司琼和50mgplga(丙交脂与乙交酯的摩尔比＝50:50,mw＝6wg/mol),溶于10ml乙酸乙酯中，在搅拌条件下，将含药plga溶液加至50ml含5％(w/v)稳定剂聚山梨酯80的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发乙酸乙酯，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至100ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

实施例13

称取5mg格拉司琼和500mgpla(分子量为24300d)，溶于5ml二氯甲烷中，在搅拌条件下，将含药pla溶液加至250ml含1％(w/v)稳定剂pva的水相中，形成o/w乳剂，在室温下继续搅拌6h以挥发二氯甲烷，然后在搅拌条件下，将所得的分散体系加至500ml水中，固化8h。其中，搅拌速率为300-500rpm。静置，待悬浮物沉底后，移去上清液，用水洗涤三次，离心收集微球，冻干。

测试例1：微球粒径

取实施例1～13制备的微球适量，分成三份，各用适量0.1％的吐温80水溶液混悬，各超声5s(防止微球静电吸附发生聚集)，用激光粒度分布仪测定微球粒径，结果见表1，所得的微球粒径(特指中位径)范围在40～105μm之间，适合注射使用。且实施例6～13中的微球为在水中进一步固化所得到，其粒径为50～105μm。

表1不同实施例的微球粒径

测试例2：微球形态

取实施例9制备的微球适量，用扫描电镜测定微球形态，结果见图1。由图1可见，格拉司琼缓释微球粒度较为均一，微球圆整，形态良好，其间有些碎片状物，可能是因为plga析出时沉淀过快所致的不成型。

测试例3：微球载药量与包封率

分别称取实施例1-11制备的格拉司琼缓释微球10mg，加入3ml甲醇，振摇1min，离心(4000rpm，3min)，收集上清液，重复步骤3次，合并上清液，离心，取上清液，hplc分析，可求得游离药物量，进一步换算为微球的包封率。

在离心所得的残留物中加2ml乙腈，超声使残留物溶解，加入6ml甲醇，振摇，离心(9250rpm，10min)，取上清液，hplc分析，可求得微球的载药量。结果见表2。载药量与包封率的计算公式如下：

表2不同实施例的载药量与包封率

实施例6和实施例8，实施例7和实施例9的结果比较显示，当格拉司琼与可降解聚合物的比例小时，格拉司琼的包封率明显得到提高，这是因为当聚合物比重大时，在形成乳剂乃至析出固化时，因比例优势更容易将格拉司琼包裹在聚合物的沉淀物中，因此，包封率得到提高。

实施例1、2、3和实施例8、9、10的结果比较显示，当油相与水相的比例为1:10时，得到的格拉司琼缓释微球的载药量与包封率均为最高，这可能是因为油相与水相的比例在1:10时，生成的o/w乳剂更加稳定，因此在挥发溶剂聚合物析出乃至最后的加水固化过程中，格拉司琼稳定地保持在乳剂中，载药量与包封率相应提高。

实施例1和实施例7，实施例2和实施例6的结果比较显示，当制备格拉司琼缓释微球时，最后加水固化可以使微球硬化(未加水固化的微球在高速率离心下聚集成较软的块状物)，并使格拉司琼的载药量与包封率得到提高。这可能是因为未实施加水固化的微球比较软，在用水洗涤的过程中，格拉司琼有所损失所致。

实施例3、实施例4、实施例5的结果比较显示，当稳定剂pva的浓度为1％(w/v)时，格拉司琼缓释微球的载药量与包封率最高，这可能与乳剂的稳定情况有关，pva既是稳定剂也是乳化剂，当用量小时，乳化剂分子不足以覆盖整个油水界面，界面张力达不到最低，乳剂不稳定，用量过大，虽然得到了稳定的乳液，但是可能会引起泡沫增多，影响乳剂质量，对聚合物析出包裹药物成球的过程可能会造成一定的影响。

实施例9与实施例11的结果比较显示，当在pva水相中加入0.1％的吐温80后，格拉司琼缓释微球的载药量与包封率得到明显提高，这是因为与生成的格拉司琼缓释微球的粒径大小有关。

测试例4：微球的体外释放曲线

将2.38g磷酸氢二钠、0.19g磷酸氢二钾和8.0g氯化钠溶解于1000ml水中，加入0.1％(w/v)吐温80，得到释放介质pbs-吐温80溶液。

称取实施例9制备的格拉司琼缓释微球约10mg，用4mlpbs-吐温80溶液混悬，恒温37℃摇床(100rpm)，分别于4h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d、15d、17d、20d、22d、24d、27d取样，上清液用于hplc分析，剩下微球用新鲜介质重新混悬继续放样，计算累积释放百分率，绘制累积释放百分率-时间的释放曲线图，结果见图2，从图中可以格拉司琼缓慢从微球中释放出来，没有突释，释放曲线平缓，可持续释放一个月。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。