包含迷迭香提取物和乙酸视黄醇酯的透明质酸分解抑制剂的制作方法

本发明涉及具有优异的透明质酸酶抑制作用的透明质酸酶抑制剂。

背景技术：

近年来，与老化有关的研究进展。关于皮肤老化的原因，宏观上看年龄增长为重要的因素，但除此以外，也可举出由干燥、氧化、太阳光(紫外线)等带来的影响作为与皮肤老化有关的直接因素。作为皮肤老化的具体现象，已知以透明质酸为代表的粘多糖类的减少、胶原的交联反应、由紫外线带来的细胞损伤等。

其中，在β－d－n－乙酰葡糖胺与β－d－葡糖醛酸交替地结合的直链状的高分子多糖中，作为与硫酸软骨素等一起广泛存在于哺乳动物的结缔组织中的糖胺聚糖之一的透明质酸具有细胞间隙中的水分的保持、基于在组织内形成胶状基质的细胞的保持、组织的润滑性与柔软性的保持、对于机械阻碍等外力的抵抗、和细菌感染的防止等多种功能(参照非专利文献1)。此外，可以认为皮肤的透明质酸量随着年龄增长而减少，与此相伴，小皱纹、粗涩等皮肤老化出现。因此，作为这样的老化了的皮肤的改善剂，提出了多种配合有透明质酸的化妆品。然而这些以往的化妆品仅发挥皮肤表面的保湿效果，不能本质上改善老化肌肤。此外，最近还提出了多种配合有使皮肤中的透明质酸量上升的药剂的化妆品(参照专利文献1)，但现状是它们也没有达到明确地改善老化肌肤，进行治疗的效果。通过透明质酸的外用或透明质酸的产生促进剂的外用，不一定可以明确地改善老化肌肤，可以认为是因为，皮肤中的透明质酸的分解速度快。皮肤中的透明质酸，在生物体内合成的同时受到由作为其分解酶的透明质酸酶引起的酶解，因此有报告酶解速度快，皮肤中的透明质酸的半衰期为大约1天(参照非专利文献2)。透明质酸酶是广泛地分布于生物体中，连皮肤中也存在的酶，顾名思义分解透明质酸。因此，可以认为抑制促进透明质酸分解的透明质酸酶的活性，有助于制剂中使用的透明质酸的稳定性、涂敷于皮肤后的制剂的透明质酸和皮肤中存在的透明质酸的稳定性。此外，透明质酸酶作为炎症酶也是已知的，已知抑制其活性可抑制炎症，此外，在变态反应中也起抑制性作用。从以上那样的理由出发，为了维持皮肤的弹性和保湿性，防止皱纹、小皱纹、粗涩，维持具有湿润的年轻肌肤的状态，要求开发作为透明质酸分解酶的透明质酸酶的有效抑制剂。

迷迭香、百里香和蜜蜂花这样的唇形科植物的抽提物显示透明质酸酶的抑制活性、血小板凝集抑制作用，以及己糖胺酶游离抑制作用，并显示具有抗炎症作用(专利文献2)。在该文献中，虽然关于由迷迭香、百里香或蜜蜂花的任一种抽提的透明质酸酶抑制物质、它们的混合物、以及与其它抗变态反应剂的混合物有记载，但是对于发挥超过相加效果的协同效果那样的混合物没有任何记载。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平11－209261号公报

专利文献2：日本特开平8－333267号公报

非专利文献

非专利文献1：“bioindustry”，vol.8，p.346(1991)

非专利文献2：tammir.etal,.j.invest.dermatol.,97,126～130(1991)

技术实现要素：

发明所要解决的课题

本发明是鉴于上述情形而提出的，其目的在于提供安全并且可以简便使用的在人中具有透明质酸酶抑制作用的透明质酸酶抑制剂。

用于解决课题的方法

本发明人等为了解决上述课题，广泛地对于各种物质的透明质酸酶抑制作用进行了深入研究，结果令人惊讶地发现，在将已知透明质酸酶抑制作用的迷迭香的提取物、与未知透明质酸酶抑制作用的维生素a类并用的情况下，透明质酸酶抑制作用被大幅度增强，基于此完成本发明。

因此，本发明涉及以下的发明：

[1]一种透明质酸酶抑制剂，其包含迷迭香提取物和维生素a类。

[2]根据[1]所述的透明质酸酶抑制剂，上述维生素a类选自视黄醇、乙酸视黄醇酯、棕榈酸视黄醇酯。

[3]根据[1]或[2]所述的透明质酸酶抑制剂，上述维生素a类为乙酸视黄醇酯。

[4]一种皮肤问题的改善或预防用的皮肤外用剂，其包含[1]～[3]的任一项所述的透明质酸酶抑制剂，所述皮肤问题选自皮肤老化、皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮和特应性皮炎。

[5]一种用于治疗透明质酸减少相关疾病的皮肤外用剂，其包含[1]～[3]的任一项所述的透明质酸酶抑制剂，所述透明质酸减少相关疾病选自特应性皮炎、干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病、骨关节病和烫伤。

[6]迷迭香提取物和维生素a类用于改善或预防透明质酸减少的应用。

[7]迷迭香提取物和维生素a类用于预防或改善皮肤问题、或者用于治疗透明质酸减少相关疾病的应用，所述皮肤问题为皮肤老化、皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等，所述透明质酸减少相关疾病为干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病、骨关节病、烫伤等。

[8]一种透明质酸酶抑制方法，其包括对患有透明质酸减少的对象施与迷迭香提取物和维生素a类。

[9]一种用于改善或预防透明质酸减少的美容方法或治疗方法，其包括对透明质酸减少的对象施与迷迭香提取物和维生素a类。

[10]根据[9]所述的美容方法或治疗方法，上述美容方法或治疗方法用于改善或预防皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等皮肤问题。

[11]一种透明质酸减少相关疾病的治疗方法，其包括对患有透明质酸减少的对象施与迷迭香提取物和维生素a类，所述透明质酸减少相关疾病为特应性皮炎、干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病、骨关节病、烫伤等。

[12]迷迭香提取物和维生素a类用于制造透明质酸酶抑制剂的应用。

[13]迷迭香提取物和维生素a类用于制造化妆品或药品的应用，所述化妆品或药品用于改善或预防老化、皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等皮肤问题。

[14]迷迭香提取物和维生素a类用于制造药品的应用，所述药品用于治疗特应性皮炎、干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病、骨关节病、烫伤等透明质酸减少相关疾病。

发明的效果

本发明的透明质酸酶抑制剂所包含的维生素a类，在单独使用的情况下，不发挥透明质酸酶抑制作用，或基本上不发挥，但在与迷迭香提取物一并使用的情况下，能够显著地增强迷迭香提取物所具有的透明质酸酶抑制作用，发挥改善或预防人皮肤的老化、皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等皮肤问题、或者改善或预防关节炎、牙龈炎、风湿病和骨关节病、烫伤等透明质酸减少相关疾病中的任一效果。

附图说明

图1为显示迷迭香提取物具有透明质酸酶抑制作用，但乙酸视黄醇酯不具有透明质酸酶抑制作用，另一方面通过迷迭香提取物与乙酸视黄醇酯的并用，迷迭香提取物的透明质酸酶抑制作用显著地增强了的图。

具体实施方式

在本发明中，所谓透明质酸酶，为通过切断糖苷键来分解透明质酸的酶的总称。透明质酸酶广泛地分布于动物组织，通过抑制其活性，可以期待在体内，特别是在皮肤、关节液等中提高透明质酸含量。被切断的糖苷键有时为葡糖苷酸键或n－乙酰氨基葡糖苷键。

在本发明中所谓透明质酸酶抑制剂，是指抑制透明质酸酶的透明质酸分解活性的药剂，通过该药剂，能够增加体内，特别是关节液、皮肤中的透明质酸含量。本发明的优选方式中，透明质酸酶抑制剂特别地包含迷迭香提取物和维生素a类。

已知，透明质酸在体内与弹性、保湿性、润滑性有关，随着老化而透明质酸含量降低，而且由于皮肤中的透明质酸的降低而产生皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩等症状。此外，已知透明质酸酶与炎症有关，还已知透明质酸酶的活化与特应性皮炎、痤疮相关。因此，通过本发明的透明质酸酶抑制剂，能够治疗、改善或预防老化、皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等皮肤问题、以及透明质酸减少相关疾病例如干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病和骨关节病、烫伤。

在本发明中，所谓迷迭香提取物，为来源于以地中海沿岸地区为原产地的唇形科迷迭香属的迷迭香(rosmarinusofficinalis)的抽提物，该植物的植物整体，特别是全植株、叶和花作为原材料被使用。已知迷迭香提取物具有抗菌性、抗氧化效果、抗炎症效果，报告了可以作为皮肤改善剂等防老剂、免疫刺激剂、抗糖尿病剂、抗骨质疏松症剂、抗肥胖剂、睡眠促进剂、抗中枢神经剂等药品使用。

本发明的迷迭香提取物可以通过常规方法获得，例如可以将植物与抽提溶剂一起浸渍或加热回流后，过滤，浓缩来获得。作为抽提溶剂，只要是通常抽提所用的溶剂，就可以任意使用，可以分别单独或组合使用例如水、甲醇、乙醇、丙二醇、1,3－丁二醇、甘油等醇类、含水醇类、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳、丙酮、乙酸乙酯、己烷等有机溶剂等。还可以直接使用由上述溶剂抽提而得的抽提液，或者也可以使用将浓缩而成的提取物通过吸附法例如离子交换树脂除去了杂质的物质，或利用多孔聚合物(例如アンバーライトxad－2)的柱进行吸附后，用甲醇或乙醇溶出，浓缩而得的物质。此外，还可以使用干燥得到的物质。此外，还可使用利用分配法，例如水/乙酸乙酯抽提得到的抽提物等。

这样地获得的上述植物或其抽提物都具有优异的透明质酸酶抑制作用。从用于直接适用于皮肤的化妆品或药品例如皮肤外用剂等观点出发，优选使用低刺激性的溶剂例如水、1,3－丁二醇、甘油等抽提得到的抽提物，优选使用例如1,3－丁二醇的50质量％水溶液。

在将上述植物或其抽提物配合于化妆品或药品中而使用的情况下，在化妆品或药品总量中，作为干燥重量，优选以0.00001～0.1质量％来配合，更优选以0.00005～0.01质量％，进一步优选以0.0001～0.001质量％来配合。

已知如果维生素a类不足，则发生夜盲症、佝偻病，并已知在皮肤中，发生皮肤、粘膜的角质化，皮肤的异常干燥，色素沉积等，虽然为了对皮肤治疗痤疮、促进皮肤更新而使用过，但对于可以增强透明质酸酶抑制作用，没有任何记载和暗示。作为维生素a类，包含视黄醇、视黄醛、视黄酸等维生素a群及其前体、衍生物例如乙酸视黄醇酯、棕榈酸视黄醇酯、全反式视黄酸、视黄酸甲酯、视黄酸乙酯、视黄酸视黄醇酯等中的1种或2种以上成分。从适用于皮肤的观点出发，优选为视黄醇、乙酸视黄醇酯、棕榈酸视黄醇酯，特别优选为乙酸视黄醇酯。

本发明中使用的维生素a类的配合量只要可以增强迷迭香提取物的透明质酸酶抑制效果，就没有特别限制，例如作为化妆品或药品整体，只要通常为0.000001～0.01质量％，优选为0.000005～0.001质量％，特别优选为0.00001～0.0001质量％即可。

迷迭香提取物与维生素a类的配合比只要为可以增强迷迭香提取物的透明质酸酶抑制效果的范围即可，例如可以为相对于迷迭香提取物1质量份，以维生素a类0.01质量份～5质量份使用，可以更优选以0.05～1质量份，进一步优选以0.1～0.5质量份使用。

维生素a类通常不具有透明质酸酶抑制作用，因此在与迷迭香提取物并用的情况下，如果使迷迭香提取物所具有的透明质酸酶抑制作用增强，则可以说发挥了超过相加的协同效果。例如，维生素a类即使具有透明质酸酶抑制作用，其作用也弱，另一方面，在与迷迭香提取物并用的情况下，大幅度增强迷迭香提取物所具有的透明质酸酶抑制作用，因此发挥了超过相加的协同效果。

本发明的透明质酸酶抑制剂还可以配合在化妆品、药品中。因此，除了迷迭香提取物和维生素a类以外，此外根据需要，在不损害本发明的效果的范围内，可以根据需要适宜配合通常化妆品、药品等中使用的有效成分和/或赋形剂，例如保湿剂、抗氧化剂、油分、紫外线防御剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、甘油、透明质酸等基剂、ph调节剂粉末成分、紫外线吸收剂、稳定剂、抗菌剂、香料、色料、水、各种皮肤营养剂等。

此外，还可以适宜配合乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多磷酸钠、偏磷酸钠、葡糖酸等多价螯合剂、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯等防腐剂、咖啡因、丹宁、维拉帕米、凝血酸及其衍生物、甘草抽提物、光甘草定、木瓜的果实的热水抽提物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸及其衍生物或其盐等药剂、维生素c、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸等美白剂、葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖等糖类等。

此外，配合有本发明的透明质酸酶抑制剂的化妆品或药品可以为适用于外皮的化妆品、准药品等皮肤外用剂，可适用溶液系、增溶系、乳化系、粉末分散系、水－油二层系、水－油－粉末三层系、软膏、化妆水、凝胶、气溶胶等任意的剂型。

作为配合有本发明的透明质酸酶抑制剂的化妆品，可举出例如化妆水、乳液、霜(cream)、美容液、面膜等面部化妆品、粉底、口红、眼影等彩妆化妆品、防晒剂、芳香化妆品、毛发用化妆品、浴用剂等，但不限于此。

此外，本发明的透明质酸酶抑制剂除了经皮施与以外，还可以通过经口施与、其它非经口施与(例如，经粘膜、舌下、肌肉内、关节内或皮下施与)来施与。因此，本发明的透明质酸酶抑制剂，除了配合在防止由透明质酸量降低引起的皱纹、肌肤粗糙、干燥肌肤、粗涩、痤疮、特应性皮炎等皮肤问题的皮肤外用所用的化妆品或药品中以外，还可以配合在防止由老化引起的人体的透明质酸量降低的食品、针对透明质酸分解异常增强的症状特别是牙龈炎、风湿病和骨关节病、关节炎的预防治疗、烫伤的初期治疗等的透明质酸异常分解疾病治疗剂等药物组合物中。在使用本发明的透明质酸酶抑制剂作为药物组合物的情况下，其剂型没有特别限制，可以根据施与途径等进行适宜选择。例如，作为适于经口施与的制剂，可举出片剂、胶囊剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、可溶液体制剂、糖浆剂等，作为适于非经口施与的制剂，可举出注射剂、点滴剂、栓剂、吸入剂、经皮吸收剂、经粘膜吸收剂、贴剂等。注射剂可以用于关节内注射、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、点滴等的任一种。

本发明还涉及用于改善或预防透明质酸减少的美容方法或治疗方法，其包括对透明质酸减少的对象涂敷迷迭香提取物和维生素a类。本发明的美容方法或治疗方法中，迷迭香提取物与维生素a类可以同时涂敷，也可以空开时间分别涂敷。所谓美容方法，不仅为个人进行的方法，而且在提供与美容有关的商品时，作为与顾客对应的化妆品的处方被提供，由医师以外的化妆品销售员、美容师来提供。

所谓透明质酸减少的对象，是指除了随着年龄增长而透明质酸减少的对象以外，患有特应性皮炎、干燥肌肤、关节炎、牙龈炎、风湿病、骨关节病、烫伤等透明质酸减少相关疾病的对象。

实施例

接下来，举出实施例进一步详细地说明本发明，但本发明的技术范围不受其任何限定。另外，配合量都为质量％。

制造例：迷迭香抽提液的制造

相对于将迷迭香的叶10kg切细了的物质，添加50质量％的1,3－丁二醇水溶液，在室温浸渍7～10天。浸渍后，过滤以除去不需要物，将滤液进一步在低温处培育7～10天。培育后进行过滤以除去不需要物，从而取得迷迭香提取物bg。

实施例：透明质酸分解抑制试验

将50μl的透明质酸酶溶液(1mg/ml)(シグマアルドリッチジャパン株式会社)放入至微管中，添加评价药剂50μl，在37℃培育10分钟。作为评价药剂，使用迷迭香提取物bg(丸善制药(株))、乙酸视黄醇酯(ビーエーエスエフジャパン(株))、迷迭香提取物bg和乙酸视黄醇酯，对于对照而言，代替评价药剂而添加水。迷迭香提取物bg以透明质酸钠水溶液添加后的终浓度以干燥重量计为0.000165质量％的方式添加，乙酸视黄醇酯以透明质酸钠水溶液添加后的终浓度为0.0000516质量％的方式添加。培育后，添加1mg/ml透明质酸钠溶液(株式会社资生堂，分子量110～160万)400μl，进一步在37℃培育10分钟后，添加50μl的氢氧化钠水溶液(0.2m)，停止反应。将该溶液煮沸3分钟后，用流水冷却，添加10％p－dmab(二甲基氨基苯甲醛)溶液(ナカライテスク株式会社)300μl，在37℃培育20分钟。恢复至室温后，每次100μl分次转移至96孔板中，使用powerscanht(dsファーマバイオメディカル株式会社)测定od585nm。将对照的吸光度设为100得到的结果示于图1中。由图1示出，迷迭香提取物单独具有透明质酸酶抑制作用，另一方面，乙酸视黄醇酯不发挥透明质酸酶抑制作用，但是在将迷迭香提取物与乙酸视黄醇酯并用的情况下，可以增强迷迭香提取物所具有的透明质酸酶抑制作用。