一种2,6-二(2-(三氟甲基)苯亚甲基)环己酮在药物制备中的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种式(i)的化合物(代号c66)或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防慢性肾脏病药物中的用途。

背景技术：

慢性肾脏病是当今高血压和高血脂患病人群的主要死亡和发病原因之一。慢性肾脏病的诱因很多，包括化学药物性的、先天性的以及并发性的。肾病的特征在于进行性肾小球硬化和肾组织氧化应激及自噬，其伴随蛋白尿和gfr下降，最后导致末期肾衰竭。

本发明人在多年的工作基础上，发现了式(i)的化合物(c66)能够有效治疗多种因素诱发的慢性肾脏病，尤其是长期高血脂或高angii患者的肾病，能够抑制高血脂或高angii诱导的肾脏损伤。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供了(2e,6e)-2,6-二(2-(三氟甲基)苯亚甲基)环己酮(式(i)的化合物，代号c66)的新的用途。

具体而言，本发明提供了式(i)的化合物(c66)或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防慢性肾脏病的药物中的用途。

优选本发明的用途是在制备用于治疗或预防慢性肾脏病的药物中的用途。

本发明还提供了式(i)的化合物(c66)或其药学上可接受的盐在制备用于改善慢性肾脏病的药物中的用途。

优选本发明的用途是在制备用于改善慢性肾脏病的药物中的用途。

肾病是由多种因素引起的，包括泌尿系统阻塞引起的肾病、高血脂引起的肾病、高血压引起的肾病、免疫系统紊乱导致的肾病、药物引起的肾脏疾病等。不同的原因导致的肾病的症状以及治疗方式都有所不同，作为优选，本发明所针对的肾病主要是由高血脂或高血压但不限于这两种致病因素诱发的。

优选在本发明的用途中，肾病的主要症状是肾小球硬化以及肾脏组织氧化应激和自噬。

优选在本发明的用途中，式(i)的化合物(c66)或其药学上可接受的盐是不在统计学上显著降低血脂或血压的。

本发明的用途中的药物含有有效剂量的式(i)的化合物(c66)。有效剂量可以是单位给药剂量形式(如，一片、一针、一丸或一剂)的药物中的含量，也可以是所需治疗/预防的患者的单位剂量(如，单位体重剂量)。药物制造商能够很容易地通过所需治疗/预防的患者群体的平均体重将所需治疗/预防的患者的单位体重剂量换算成单位给药剂量形式的药物中的含量，例如，成人患者的平均体重可以是60kg，因此通过平均体重乘以成人的单位体重剂量，即可得到用于成人的单位给药剂量形式的药物中的含量。在本发明中，患者可以是哺乳动物，如人、兔、狗或鼠。根据本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见fda、sfda等药品管理机构的指导意见，也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算.中国临床药理学与治疗学,2004，9(9):1069-1072”)可从实验动物的剂量推导出人的单位体重剂量。例如，对于常用的实验动物小鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为12：1；对于常用的实验动物大鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为6：1。在本发明中，有效剂量(以含量计)可以是10ug-1g优选是0.1mg-500mg，更优选是1mg-100mg。

本发明的用途中的药物通常还含有药学上可接受的载体。本文中使用的药学上可接受的载体指无毒的填充剂、稳定剂、稀释剂、佐剂或其他制剂辅料。例如，稀释剂、赋形剂，如水、生理盐水等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和/或皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙/镁、聚乙二醇等。另外，本发明的药物组合物还可以进一步含有其它辅料，如香味剂、甜味剂等。根据本领域的公知技术，可以根据治疗目的、给药途径的需要将药物组合物制成各种剂型，优选该组合物为单位给药剂量形式，如冻干剂、片剂、胶囊、粉剂、乳液剂、水针剂或喷雾剂，更优选该药物组合物为注射剂型(如，冻干粉针剂)或口服剂型(如，片剂、胶囊)。药物可以通过常规途径施用，特别是肠内，例如口服，例如以片剂或胶囊剂形式，或非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂形式，局部施用，例如以洗剂或凝胶剂，或以鼻剂或检剂形式。

为了便于理解，本发明引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，其全文内容均纳入本文进行参考。以下将通过具体的实施例和附图对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是部分示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见了。

附图说明：

图1式(i)的化合物(c66)对肥胖小鼠体重、葡萄糖耐受和血脂的影响。

图2式(i)的化合物(c66)对肥胖小鼠肾脏功能和病理损伤的改善效果。

图3式(i)的化合物(c66)对肥胖小鼠肾脏氧化应激和自噬的改善效果。

图4式(i)的化合物(c66)对高血压小鼠体重、血压、肌酸酐和尿素氮的影响。

图5式(i)的化合物(c66)对高血压小鼠肾脏损伤和氧化应激的改善效果。

具体实施方式：

本发明在以下的实施例中进一步说明。这些实施例只是为了说明的目的，而不是用来限制本发明的范围。

实施例1本发明的化合物不影响小鼠体重、葡萄糖耐受和血脂水平。

将c57l/b6小鼠随机分为3组，每组6只，分别为：

空白对照组(con组)：健康c57l/b6小鼠；

高脂对照组(hfd)：高脂饮食喂养小鼠，自由饮水，不给药，喂养16周；

化合物治疗组(hfd+c6610mg/kg)：高脂饮食喂养小鼠8周后，高脂喂养的同时在第9周以10mg/kg/day的剂量给鼠灌胃给药式(i)的化合物(c66)，连续给药8周。

期间测定各组鼠的体重(bodyweight)。结果如图1a所示，治疗组小鼠体重水平与hfd组没有差异性，这表明，式(i)的化合物(c66)不影响高脂饮食引起的小鼠体重变化。

在实验结束前2天，小鼠空腹12h后，口服1g/kg葡萄糖，并且在口服葡萄糖后0、15、30、60、90和120min时检测小鼠血糖水平，绘制曲线，结果如图1b显示，给予式(i)的化合物(c66)后对高血脂引起的葡萄糖耐受没有缓解作用。

在给药8周后，处死小鼠，称重，收集血液，采用生化分析仪检测血清中甘油三酯(tg)、总胆固醇(tch)和高密度脂蛋白(hdl-c)的含量，结果如图1c-e显示，给予式(i)的化合物(c66)后对高脂饮食诱导的tg和tch升高以及hdl-c下降没有明显的缓解作用。

这表明，式(i)的化合物(c66)对高血脂诱导的体重增加、葡萄糖耐受和血脂水平升高无影响，也就是其治疗效果与其降脂效果无关。

实施例2本发明的化合物明显改善高血脂小鼠肾脏功能和病理损伤

按照实施例1分组并进行试验，在给药8周后，处死小鼠，收集血液，检测血清中肌酸酐(serumcreatinine)、尿素氮(bun)和白蛋白(alb)的含量。血清肌酐、尿素氮和白蛋白的含量是肾病发展的一个重要指标，临床上一般通过检测血清中肌酐的含量表征肾病的严重程度。图2a-c显示，高血脂明显增加血清肌酐、尿素氮和白蛋白的含量，而在治疗组中，口服化合物(i)可以显著地减低血清肌酐、尿素氮和白蛋白的升高(p<0.05)。

按照实施例1分组并进行试验，给药8周后，处死各组小鼠，取肾脏组织，以4％福尔马林液固定、石蜡包埋、5μm切片后进行苏木素&伊红(h&e)染色并镜检。结果如图2d所示，疾病对照组小鼠肾组织有明显脂质堆积、肾小球硬化、肿大和基底膜增厚以及炎症细胞浸入；而同时给予式(i)的化合物后，明显改善了各治疗组的小鼠肾组织的损伤、炎症细胞浸润和肾小球膜基质扩张等症状。这表明，式(i)的化合物(c66)能够阻止由于高血脂而引起的肾脏组织功能和病理损伤。

实施例3本发明的化合物明显改善高血脂小鼠肾脏氧化应激和自噬

按照实施例1分组并进行试验，给药8周后，处死各组小鼠，取肾脏组织，以4％福尔马林液固定、石蜡包埋、5μm切片后进行3-nt和lc3免疫组化染色并镜检。结果如图3a和3d所示，疾病对照组小鼠肾组织有明显的氧化应激标记物3-nt的表达和自噬小体的形成，而同时给予式(i)的化合物后，明显改善了治疗组的小鼠肾组织的氧化应激和自噬。取肾脏组织匀浆后，采用trizol试剂提取总mrna，并且用rt-qpcr实验进行检测发现，高血脂显著升高肾脏组织中氧化应激相关指标nrf-2(图3b)和nqo-1(图3c)及自噬相关指标lc3(3e)和beclin1(3f)的mrna表达，而给予式(i)的化合物后，显著抑制了高血脂引起的肾脏组织中nrf-2、nqo-1和lc3、beclin1的基因表达。这表明，式(i)的化合物(c66)能够阻止由于高血脂而引起的肾脏组织氧化应激和自噬，从而缓解肾脏损伤。

实施例4本发明的化合物不影响小鼠血压和体重水平但是明显降低血清肌酐和尿素氮

将c57bl/6小鼠随机分为3组，每组6只，分别为：

空白对照组(con组)：健康鼠；

疾病对照组(angii组)：利用angii皮下微泵注射(1000ng/kg/min)，不给药，连续4周；

治疗组(angii+c6610mg/kg组)：利用angii皮下微泵注射(1000ng/kg/min)，不给药，连续4周，在致病第15天后以10mg/kg/day的剂量给鼠灌胃给药式(i)的化合物(c66)，连续给药2周。

期间测定各组鼠的体重和血压。结果如图4a和图4b所示，治疗组小鼠体重和血压水平与angii组没有明显差异性，这表明，式(i)的化合物(c66)不影响高血压小鼠的体重和血压，其治疗效应不受血压值的影响。在给药2周后，处死小鼠，收集血液，检测血清中肌酸酐(serumcreatinine)和尿素氮(bun)的含量。血清肌酐和尿素氮的含量是肾病发展的一个重要指标，临床上一般通过检测血清中肌酐的含量表征肾病的严重程度。图4c和4d显示，高血压明显增加血清肌酐和尿素氮含量，而在各治疗组中，口服化合物(i)可以显著地减低血清肌酐和尿素氮的升高(p<0.05)。这些数据表明高血压对肾脏有危害，但是给予式(i)的化合物后可显著降低高血压诱导的肾损伤，式(i)的化合物对由于高血压而引起的肾脏病变有治疗作用，防止肾脏实质性病变。

实施例5本发明的化合物明显改善高血压小鼠肾脏病变和氧化应激

按照实施例4分组并进行试验，给药2周后，处死各组鼠，取肾脏组织，以4％福尔马林液固定、石蜡包埋、5μm切片后进行苏木素&伊红(h&e)和3-nt免疫组化染色并镜检。结果如图5a-b所示，疾病对照组小鼠肾组织有明显的结构异常(包括，肾小球硬化、肿大和基底膜增厚，以及炎症细胞浸入严重)和氧化应激，而同时给予式(i)的化合物后，明显改善了各治疗组的小鼠肾组织的损伤、炎症细胞浸润、肾小球膜基质扩张和氧化应激等症状。取肾脏组织匀浆后，采用trizol试剂提取总mrna，并且用rt-qpcr实验进行检测发现，高血压显著升高肾脏组织中氧化应激相关指标nrf-2(图5c)和nqo-1(图5d)的mrna表达，而给予式(i)的化合物后，显著抑制了高血压引起的肾脏组织中nrf-2和nqo-1的基因表达。这表明，式(i)的化合物(c66)能够阻止由于高血压而引起的肾脏损伤和氧化应激的恶化。