本发明涉及生物领域，特别涉及黄皮果或其果皮中降血糖成分的提取方法。
背景技术：
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。调查显示，全球糖尿病成人患者(20-79岁)从2000年的1.51亿，到2017年已达到4.25亿，增加近2倍。预计到2045年，糖尿病患者可能达到6.29亿。糖尿病已经成为严重危害我们健康的十大疾病之一。
目前治疗糖尿病的主要依靠药物治疗，常用的药物包括磺脲类药物、双胍类降糖药、α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素增敏剂、格列奈类胰岛素促分泌剂和胰岛素治疗。药物具有很多副反应和不良反应，例如恶心、呕吐、食欲下降、腹痛、腹泻等等，而且服用或者注射不方便，给病人带来很多痛苦和困扰，迫切需要进一步研制安全、有效、方便的降血糖产品。
黄皮作为南方特色水果之一，黄皮也具有很高的药用价值，黄皮的果、叶、根、种子均能入药，且为药食两用。黄皮的果实有行气、消食、化痰之功效，主治食积胀满，脘腹疼痛，疝痛，痰饮，咳喘。黄皮中酰胺类化合物具有保肝、抗老年痴呆症和抗脂质过氧化作用，但未见其降糖的相关报道，且黄皮上市时间有限，果实保鲜方面比较困难，因而在北方很少见到黄皮鲜果，应用面和时间不够广。且为了达到药效，需要一定量的黄皮，也会给患者带来不便。因此，将黄皮中的有效成分的提取出来，并制成方便易于携带和食用的产品，具有重要的现实意义。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种黄皮果或其果皮中降血糖成分的提取方法。本发明通过水提或者醇提将黄皮中的降血糖成分提取出来，制备成一种新型的产品，具有更加优异的降血糖能力和安全温和的特性，能够有效降低高血糖。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了黄皮中降血糖成分的提取方法，取黄皮粉碎后，经水提醇沉或醇提后，收集提取液，过滤；
所述水提醇沉具体为：取粉碎后的黄皮，加水加热回流提取，收集水提液，浓缩至料液比1:1，再缓慢加入乙醇进行醇沉，收集上清液过滤，获得醇沉液，浓缩；
所述醇提具体为：取粉碎后的黄皮与乙醇混合经加热回流提取，收集醇提液，过滤，浓缩；
所述水提取或所述乙醇提取独立为加热回流提取或超声提取；
所述加热回流提取的温度为70℃～100℃，时间为1.5h～3h，次数为3～4次；
所述超声提取的频率为60w/l，时间为1h～3h，次数为4～6次。
在本发明的一些具体实施方案中，所述水提醇沉中，粉碎后的黄皮与的水的质量比为1:(5～15)；所述水提液与乙醇的体积比为1:1；
所述醇提中粉碎后的黄皮与的乙醇的质量比为1:(5～10)；
所述醇提中乙醇的浓度为75％～95％；
所述水提醇沉浓度为50％～70％。
在本发明的一些具体实施方案中，所述过滤后还包括浓缩的步骤；所述浓缩温度为35℃～50℃，真空度50hpa～200hpa，浓缩至料液比1:1～1:1.3。
在本发明的一些具体实施方案中，所述浓缩后还包括冷冻干燥的步骤，所述真空冷冻干燥的温度为-50℃-10℃，真空度为1.3pa～13pa。
本发明还提供了所述的提取方法制得的提取物。
在上述研究的基础上，本发明还提供了所述的提取物在制备降血糖的药物、食品或饮品中的应用。
此外，本发明还提供了饮品，包括所述的提取物以及常用的辅料。
在本发明的一些具体实施方案中，所述辅料包括麦芽糊精、山梨糖醇和罗汉果粉；
以质量份计，所述饮品有如下组分制成：
本发明还提供了药物，包括所述的提取物以及药学上可接受的辅料。
本发明还提供了食品，包括所述的提取物以及食品中可接受的辅料。
本发明所述黄皮果或其果皮中的降血糖成分包括香豆素类和皂苷类成分。本发明通过水提或者醇提将黄皮果或其果皮中的降血糖成分提取出来，制备成一种新型的产品，具有更加优异的降血糖能力和安全温和的特性，能够有效降低高血糖。且将果皮变废为宝，具有重要的现实意义。
具体实施方式
本发明公开了一种黄皮果或其果皮中降血糖成分的提取方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的目的在于提供黄皮的降血糖成分，使得所述提取物具有更高的降血糖能力。
本发明的另一个目的是提供所述黄皮降血糖成分的提取方法以及所述黄皮降血糖产品中的相关应用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
黄皮中的降血糖成分，包括黄皮的水提物或醇提物。
所选提取物中，香豆素具有很好的抗肿瘤、抗菌、抗真菌、抗凝血作用、降血糖和预防骨质疏松的作用；皂苷类成分具有抗菌、解热、镇静、抗癌、降血糖、强身健体等功效。本发明依据黄皮中这两类成分具有降血糖能力来治疗高血糖。
作为优选，所述水提物和醇提物经加热煮沸提取或加热回流提取或超声提取获得。
同时，本发明还提供了所述黄皮中降血糖成分的提取方法，将黄皮捣碎后加入水或乙醇加热煮沸提取或加热回流提取或超声提取，乙醇提取液过滤后浓缩为浸膏，水提取物经过水提醇沉后过滤再浓缩为浸膏，获得所述中药组合物。
其中，作为优选，所述加水量或加乙醇量为四种药材总重的5-15倍；乙醇的浓度不限，可以优选为75％浓度和95％浓度。
作为优选，所述加热煮沸提取或加热回流提取均为提取3次，所述超声提取为4次；
作为优选，所述提取时间均为每次30～90min。
本发明所述黄皮中降血糖成分在对体外α-葡萄糖苷酶抑制活性和对2型糖尿病大鼠的影响试验中，相比市售药品阿卡波糖具有更好的降血糖能力。并且，在体外抗菌试验中也优于各处理组。同时，在对本发明黄皮为热带水果，无毒安全，制成固体饮料食用方便。
基于上述技术效果，本发明提供了所述黄皮中降血糖成分在制备治疗高血糖产品中的应用。
作为优选，所述产品为固体饮料。
此外，本发明还提供了一种固体饮料产品，包括本发明所述黄皮降血糖成分的提取物和辅料。
作为优选，所述辅料为麦芽糊精、山梨糖醇和罗汉果粉。
更优选地，固体饮料中各组分用量如下：
黄皮提取物50～70％，麦芽糊精5～20％，山梨糖醇10～40％，罗汉果粉1～10％。
在本发明的一些实施例中，各组分用量为：
黄皮提取物50％，麦芽糊精5％，山梨糖醇40％，罗汉果粉5％。
黄皮提取物60％，麦芽糊精20％，山梨糖醇10％，罗汉果粉10％。
黄皮提取物70％，麦芽糊精10％，山梨糖醇19％，罗汉果粉1％。
由以上技术方案可知，本发明选择黄皮制备出一种提取物以及含有该提取物的药物、食品或饮品，其对高血糖有很好的治疗效果，安全且食用方便。
本发明中，所述黄皮果包括皮、果和籽。
本发明提供的黄皮果或其果皮中降血糖成分的提取方法中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入5倍的水于100℃加热回流提取3次，每次提取1.5h，共4.5h。合并提取液过滤，取滤液，于50℃浓缩至料液比(本发明中所述“料液比”为固态的“料”的质量与作为浸提液的“液”的体积的比)为1:1，再加入同体积的浓度为55％(v/v)乙醇，进行醇沉，除去水中杂质，取乙醇提取液过滤，于45℃时浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-10℃，真空度为13pa，获得所述中药组合物。
实施例2：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入10倍的水于70℃加热回流提取4次，每次提取3h，共12h。合并提取液过滤，取滤液，于35℃浓缩至料液比(本发明中所述“料液比”为固态的“料”的质量与作为浸提液的“液”的体积的比)为1:1.2，再加入同体积的浓度为60％(v/v)乙醇，进行醇沉，除去水中杂质，取乙醇提取液过滤，于40℃时浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-50℃，真空度为1.3pa，获得所述中药组合物。
实施例3：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入15倍的水于100℃加热回流提取3次，每次提取3h，共9h。合并提取液过滤，取滤液，于40℃浓缩至料液比(本发明中所述“料液比”为固态的“料”的质量与作为浸提液的“液”的体积的比)为1:1.3，再加入同体积的浓度为65％(v/v)乙醇，进行醇沉，除去水中杂质，取乙醇提取液过滤，于8℃时浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-30℃，真空度为3pa，获得所述中药组合物。
实施例4：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入8倍的水于60w/l超声提取4次，每次提取3h，共12h。合并提取液过滤，取滤液，取醇提液过滤，于温度为40℃，真空度100hpa，浓缩至料液比为1:1.3，经真空冷冻干燥的温度为-10℃，真空度为1.3pa，获得所述中药组合物。
实施例5：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入10倍的水于60w/l超声提取6次，每次提取1h，共6h。合并提取液过滤，取滤液，取醇提液过滤，于温度为45℃，真空度110hpa，浓缩至料液比为1:1，经真空冷冻干燥的温度为-20℃，真空度为3pa，获得所述中药组合物。
实施例6：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入12倍的水于60w/l超声提取5次，每次提取1.5h，共7.5h。合并提取液过滤，取滤液，取醇提液过滤，于温度为50℃，真空度120hpa，浓缩至料液比为1:1.1，经真空冷冻干燥的温度为-30℃，真空度为5pa，获得所述中药组合物。
实施例7：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入8倍的75％乙醇于85℃加热回流提取3次，每次提取90min。合并提取液过滤，取滤液，于温度为35℃，真空度80hpa条件下浓缩至无溶剂的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-50℃，真空度为8pa，获得所述中药组合物。
实施例8：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入10倍的85％乙醇于80℃加热回流提取3次，每次提取1.5h。合并提取液过滤，取滤液，于温度为40℃，真空度90hpa条件下浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-20℃，真空度为13pa，获得所述中药组合物。
实施例9：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入12倍的95％乙醇于75℃加热煮沸提取4次，每次提取1.5h，共6h。合并提取液过滤，取滤液，于温度为45℃，真空度100hpa条件下浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-10℃，真空度为15pa，获得所述中药组合物。
实施例10：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入10倍的95％乙醇在频率为60w/l的条件下超声提取6次，每次提取30min，共3h。合并提取液过滤，取滤液，于温度为45℃，真空度10pa条件下浓缩至无乙醇的浸膏，经-50℃冷冻干燥，获得所述中药组合物。
实施例11：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入15倍的90％乙醇在频率为60w/l的条件下超声提取4次，每次提取30min，共2h。合并提取液过滤，取滤液，于温度为40℃，真空度100hpa条件下浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-20℃，真空度为1.3pa，获得所述中药组合物。
实施例12：本发明所述黄皮中降血糖成分的提取
取黄皮捣碎后加入20倍的85％乙醇在频率为60w/l的条件下超声提取6次，每次提取30min，共3h。合并提取液过滤，取滤液，于温度为35℃，真空度70hpa条件下浓缩至无乙醇的浸膏，经真空冷冻干燥的温度为-30℃，真空度为13pa，获得所述中药组合物。
实施例13：本发明所述固体饮料
实施例1黄皮提取物50％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉10％。
实施例14：本发明所述固体饮料
实施例2黄皮提取物60％，麦芽糊精15％，山梨糖醇20％，罗汉果粉5％。
实施例15：本发明所述固体饮料
实施例3黄皮提取物70％，麦芽糊精10％，山梨糖醇18％，罗汉果粉2％。
实施例16：本发明所述固体饮料
实施例4黄皮提取物70％，麦芽糊精5％，山梨糖醇5％，罗汉果粉10％。
实施例17：本发明所述固体饮料
实施例5黄皮提取物59％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉1％。
实施例18：本发明所述固体饮料
实施例6黄皮提取物50％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉10％。
实施例19：本发明所述固体饮料
实施例7黄皮提取物60％，麦芽糊精15％，山梨糖醇20％，罗汉果粉5％。
实施例20：本发明所述固体饮料
实施例8黄皮提取物70％，麦芽糊精10％，山梨糖醇18％，罗汉果粉2％。
实施例21：本发明所述固体饮料
实施例9黄皮提取物70％，麦芽糊精5％，山梨糖醇5％，罗汉果粉10％。
实施例22：本发明所述固体饮料
实施例10黄皮提取物59％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉1％。
实施例23：本发明所述固体饮料
实施例11黄皮提取物50％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉10％。
实施例24：本发明所述固体饮料
实施例12黄皮提取物60％，麦芽糊精15％，山梨糖醇20％，罗汉果粉5％。
实施例25：本发明所述固体饮料
实施例13黄皮提取物70％，麦芽糊精10％，山梨糖醇18％，罗汉果粉2％。
实施例26：本发明所述固体饮料
实施例14黄皮提取物70％，麦芽糊精5％，山梨糖醇5％，罗汉果粉10％。
实施例27：本发明所述固体饮料
实施例15黄皮提取物59％，麦芽糊精20％，山梨糖醇20％，罗汉果粉1％。
实施例28：对2型糖尿病大鼠的影响
实验动物：spf级健康雄性sd大鼠，6～8周龄，体质量(140±20)g。
试验药物:本发明实施例1～12制得的提取物以及实施例13～27制得的固体饮料；对比组：盐酸二甲双胍片。
造模：大鼠喂养高糖高脂饲料4周后，对大鼠注射stz制备2型糖尿病模型：造模前大鼠禁食不禁水12h，将stz溶解于柠檬酸-柠檬酸钠溶液中，对大鼠进行腹腔注射，大鼠stz的注射剂量为50mg/kg。1周后测定大鼠空腹血糖，血糖值≥9mmol/l作为模型大鼠。
分组给药：将糖尿病大鼠随机分为89组：模型组(蒸馏水，等体积)，二甲双胍组(盐酸二甲双胍片，0.1g/kg)，本发明提供的提取物或固体饮料的高、中、低剂量组(10g/kg，5g/kg，1g/kg)，每组8只；另取8只正常大鼠作为空白组(蒸馏水，等体积)。连续灌胃给药28d，1次/d，给药期间空白组大鼠饲喂维持饲料，其余各组均饲喂高糖高脂饲料。所有大鼠禁食不禁水8h，剪尾尖取血，血糖仪测定空腹血糖值。结果如表1所示。
表1本发明提供的提取物或固体饮料对2型糖尿病大鼠fbg的影响(n＝8，mmol/l)
注：与空白组同期比较，*p<0.01；与模型组同期比较，△p<0.01；与本组治疗前比较，▲p<0.01。
本发明所述固体饮料高、中、低剂量组(10g/kg，5g/kg，1g/kg)及阳性药二甲双胍组，均对糖尿病大鼠具有较好的降血糖作用(p<0.01)，其中本发明提供的提取物或固体饮料高、中剂量组比对照组效果更优。
实施例29：体外α-葡萄糖苷酶抑制活性试验
试验药物:本发明提供的提取物或固体饮料；对比组：阿卡波糖。
试剂：阿卡波糖、α-葡萄糖苷酶、对硝基苯-α-葡萄糖苷(pnpg)、α-葡萄糖苷酶、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、无水乙醇、二甲基亚砜和碳酸钠。
方法：：0.1mmol/l的磷酸钾缓冲液(ph值6.8)0.5ml，再加入10mg/lα-葡萄糖苷酶100μl，0.5ml样品溶液，混匀，37℃恒温15min后，加入2.5mmol/lpnpg0.5ml，混匀后37℃恒温15min，最后加入1ml0.2mol/l的na2co3溶液终止反应，于405nm波长下测od值，重复3次，取平均值。实验重复3次。以阿卡波糖为阳性对照，分别检测不同质量浓度(0.05g/ml、0.1g/ml和0.5g/ml)的本发明实施例5固体饮料对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，按(公式1)计算出抑制率，并计算其ic50值。结果如下表2所示。
酶活性抑制率＝[a空白-(a样品-a背景)]/a空白×100％(公式1)
a空白：不加待测样品，只加入待测样品的溶剂，进行反应后的吸光值
a样品：加入待测样品反应后的吸光值
a背景：只加待测样品反应后的吸光值
表2本发明固体饮料的体外α-葡萄糖苷酶抑制活性试验效果
注：与阿卡波糖比较，*p<0.05；#p<0.01。
上述实验结果表明，本发明固体饮料有明显的α-葡萄糖苷酶抑制活性作用，抑制效果均显著好于阳性对照组阿卡波糖(p<0.01，p<0.05)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。