本发明涉及抗体药物领域，特别是涉及一种高效价卵黄抗体复合粉剂的制备方法。
背景技术：
：卵黄抗体提取于新鲜鸡蛋的蛋黄，因为鸡蛋含水量高（平均值在70%以上）在储存过程中易受周围温度、湿度、储存方法及储存时间等的限制，易腐败变质。然而将卵黄抗体提取后进行处理得到粉状蛋黄粉，不但能阻止微生物生长又能减缓化学反应速度，有利于抗体的储存及运输。处理后得到的蛋黄粉使用更加简便，不仅可任意调节稀释倍数，控制抗体浓度，还能作为添加剂，添加于兽药中。特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附菌的细胞壁上，改变病原菌细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体还可黏附于细菌的菌毛上，使之不能与肠道黏膜上皮细胞结合；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些含有抗体的可变小肽(fab)很容易被肠道吸收，进入血液与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附于易感细胞而失去致病性。卵黄抗体作为一种廉价、易获得的抗体，目前已得到越来越广泛的应用。卵黄抗体的应用主要集中于疾病的防治。igy可作为口服剂或饲料添加剂用于有效的预防和治疗病原微生物引起的消化道疾病,在防治细菌性疾病方面也同样能起到较好的防治效果；而且也不会引起耐药性和药物残留等一系列问题。处理高效价蛋黄液体得到蛋黄粉的方法主要有冻干法和喷干法，其中喷干法得到的蛋黄粉效价损失较严重，不利于在实际中使用，选择冻干法得到蛋黄粉能最大程度保持其效价。传统方法对蛋黄液体进行冻干得到蛋黄粉不溶于水，呈一定粘稠状，这就限制了其在实际中的应用，特别是在兽药中的广泛应用。所以解决冻干蛋黄粉的水溶性意义特别重要，所制备的蛋黄粉在水中呈均一形态能扩宽其在兽药中的利用。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种高效价卵黄抗体复合粉剂的制备方法，通过在冻干前对高效价蛋黄做前处理，最终制得的蛋黄粉既能保持效价的稳定又能使其在水中呈均一形态。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种高效价卵黄抗体复合粉剂的制备方法，步骤如下：（1）获得腺病毒、新城疫、禽流感三种病毒并对其进行灭活，制备待免疫鸡只的疫苗；（2）选取200多日龄的母鸡进行三种疫苗免疫，第一次免疫注射疫苗剂量为0.5ml，期间间隔半月，进行第二次注射疫苗0.3ml，十天后，进行第三次注射疫苗0.3ml，此时收集对腺病毒、新城疫、禽流感病毒免疫过的三价高效价蛋黄；（3）对步骤（2）所得三价高效价蛋黄进行前处理：先用消毒剂进行鸡蛋表面消毒，后分离蛋清获得蛋黄，加等体积的水稀释蛋黄液，用60目筛子对其进行过滤获得蛋液；加蔗糖酯对蛋黄液进行乳化，在磁力搅拌器上处理1小时，然后添加可溶淀粉，用搅拌器搅拌均匀，最后添加三聚偏磷酸钠并搅拌均匀，分别得到处理后的蛋黄乳液；（4）用真空冷冻干燥机对步骤（3）处理得到的蛋黄乳液进行冻干，冻干结束后，对其进行粉碎，获得腺病毒、新城疫、禽流感病毒免疫后的蛋黄粉末。优选的方案是，步骤（3）所述蔗糖酯的重量为蛋黄液重量的1%。优选的方案是，步骤（3）所述可溶淀粉的添加量为蛋黄液重量的50%。优选的方案是，步骤（3）所述三聚偏磷酸钠的重量为蛋黄液重量的0.1%。优选的方案是，步骤（4）冻干压力为12mpa，冻干温度为-30℃。本发明的有益效果体现在：（1）本发明所制得三效价的蛋黄粉，能同时预防治疗腺病毒、新城疫、禽流感病毒引起的疾病，效价较未处理前没有丢失，效价保持在较优水平。（2）本发明冻干后所得复合蛋黄粉能在水中匀一存在，可以提高蛋黄粉的多样化利用，特别是兽药方面，提高蛋黄粉的多样化利用。（3）本发明所得蛋黄粉能耐酸，耐一定高温，且冻融对其效价没有影响，冻干蛋黄粉稳定性较优，能在常温下放置半年以上而不影响其效价。（4）本发明所得冻干粉无抗、无耐药性，安全绿色，符合现在对养殖业的发展需求。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明：实施例1一种高效价卵黄抗体复合粉剂的制备方法，步骤如下：（1）获得腺病毒、新城疫、禽流感三种病毒并对其进行灭活，制备待免疫鸡只的疫苗；（2）选取200多日龄的母鸡进行三种疫苗免疫，第一次免疫注射疫苗剂量为0.5ml，期间间隔半月，进行第二次注射疫苗0.3ml，十天后，进行第三次注射疫苗0.3ml，此时收集对腺病毒、新城疫、禽流感病毒免疫过的三价高效价蛋黄；（3）对步骤（2）所得三价高效价蛋黄进行前处理：先用消毒剂进行鸡蛋表面消毒，后分离蛋清获得蛋黄，加等体积的水稀释蛋黄液，用60目筛子对其进行过滤获得蛋液；加蔗糖酯对蛋黄液进行乳化，其中蔗糖酯的重量为蛋黄液重量的1%，在磁力搅拌器上处理1小时，然后添加可溶淀粉，其中可溶淀粉的添加量为蛋黄液重量的50%，用搅拌器搅拌均匀，最后添加三聚偏磷酸钠并搅拌均匀，其中三聚偏磷酸钠的重量为蛋黄液重量的0.1%，分别得到处理后的蛋黄乳液；（4）用真空冷冻干燥机对步骤（3）处理得到的蛋黄乳液进行冻干，冻干压力为12mpa，冻干温度为-30℃，冻干结束后，对其进行粉碎，获得腺病毒、新城疫、禽流感病毒免疫后的蛋黄粉末。试验例由本发明制备方法所得高效价卵黄抗体粉剂的相关试验研究：1、测冻干前与冻干后蛋黄粉效价变化：利用elisa方法在450nm下测蛋黄抗体复合粉的od值，得到其效价值。结果如表1所示：表1测冻干前与冻干后蛋黄粉效价变化由表1数据可知，冻干后蛋黄粉效价基本上与冻干前没有变化，说明冻干对蛋黄效价没有影响。2、验证蛋黄粉的水溶性：以5%的蛋黄粉加入水中，搅拌均匀，放置一段时间，观察到蛋黄粉以匀一形态存在于水中，没有絮状沉淀产生，验证了所制备的蛋黄粉具有良好的水溶性。3、高温、冻融、酸碱性对蛋黄复合抗体粉效价的影响：结果如表2-4所示。表2高温对蛋黄复合抗体粉的影响由表2数据可知，本发明方法制备得到的蛋黄复合抗体粉可以耐受80℃的高温。表3冻融对蛋黄复合抗体粉效价的影响由表3可知，不同冻融次数蛋黄复合抗体粉的效价基本没有变化，说明冻融对本发明所得蛋黄复合抗体粉效价没有影响。表4酸碱性对蛋黄复合抗体粉的影响由表4可知，ph值在4到9范围内，不同溶液的ph值对蛋黄效价的影响不大，基本保持稳定，由此说明，本发明所制得的蛋黄复合抗体份能耐受一定的酸碱性。4、蛋黄粉的稳定性：将蛋黄粉放置室温数月，并测不同时间下其效价变化，结果如表5所示。表5蛋黄粉的稳定性从蛋黄粉效价与存放时间的变化可以看出，蛋黄粉可以在室温下存放超过半年时间，同时蛋黄粉效价可以保持着较优水平。5、本发明制备的冻干粉，与喷干方法制得的喷干粉的效价比较，如表6所示。表6本发明冻干粉与喷干粉效价比较由表6可知，本发明方法制备的冻干粉对效价值保持较好，喷干对其效价值损失较大。6、三价卵黄抗体粉动物实验：用混合腺病毒、新城疫、禽流感病毒感染鸡只，反复感染鸡只使其得腺病毒、新城疫、禽流感病毒导致的复合症状（如心包积液，败血症），单独用腺病毒、新城疫、禽流感病毒疫苗所获得的冻干粉进行治疗，与本发明所得三价卵黄抗体冻干粉进行治疗，对照组不进行任何治疗，其它条件均相同，20天左右对实验鸡只进行解刨，观察鸡只得病情况。结果如表7所示。表7分组对照组腺病毒抗体粉新城疫抗体粉禽流感抗体粉本发明三价卵黄抗体粉治疗情况全得心包积液，败血症得败血症，未得心包积液未得败血症，得心包积液未得败血症，得心包积液治疗效果好鸡只死亡只数75651实验用鸡数量1010101010以上结果可以看出本发明三价复合抗体粉对感染鸡只的保护效果较好，鸡只死亡率较低，所制备的卵黄抗体粉产生了相应的效果。应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。当前第1页1 2 3