专利名称：卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状态的方法
技术领域：
本发明涉及一种卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状态的方法，属于兽医生物学领域。
背景技术：
家禽弱毒疫苗中污染外源病毒对养鸡禽业危害极大。其中最容易发生污染的是几种可通过鸡胚垂直传播的病毒(蛋传病毒)，如禽网状内皮增生病毒(REV)、禽白血病毒(ALV)、禽传染性贫血病毒(CAV)和呼肠孤病毒(ARV)。目前生产疫苗用的种毒都已经过严格检测，且一经检测就可用很多年，这已不是疫苗污染外源病毒的主要原因。大量生产的弱毒疫苗中上述蛋传病毒的主要污染来源乃是用于生产病毒疫苗的原材料的SPF鸡胚。如果在一批SPF鸡胚中有个别鸡胚带有上述蛋传病毒，就会使该批鸡胚生产的疫苗全部被某种外源病毒污染。因此应尽最大可能保障原材料SPF鸡胚来源于真正无上述几种蛋传病毒感染的SPF鸡场。近年来，随着养禽业的快速发展，各种疾病特别是经蛋传播的病毒感染日益严重，已经制约了养禽业的发展。各大公司早已经开始对祖代与父母代种鸡进行了病原状态的监控。同时，常用疫苗的污染愈来愈烈，如禽白血病病毒，即使在国外虽然已经实行了多年的净化，但疫苗污染一直在发生。提高疫苗质量成为首要任务，而生产活苗的SPF蛋的质量尤为重要，但生产上都是通过SPF鸡场提供的血清抗体水平检测合格，然后购买其鸡蛋。而该检测方法的应用，只要检测SPF鸡蛋就可以判断提供种蛋的鸡场的病原动态水平，这将大大节省人力与物力，并具有深刻的经济效益与社会效益。目前，为了检测SPF鸡场是否有REV、ALV、CAV和ARV等蛋传病毒感染，国内外都采用针对以上病毒抗体的ELISA检测试剂合来定期检测SPF鸡血清。由于SPF鸡场饲养的高度封闭性要求，对鸡群的血清采样只能由SPF鸡场饲养管理人员自行进行。但是，对于相应的SPF鸡胚作为原材料的疫苗生产厂家来说，目前普遍希望亲自对SPF鸡场的蛋传病毒感染状态作采样检测或委托有公信力的第三方采样监测，以保证结果的可信度。然而，SPF鸡场饲养高度封闭性的饲养要求又是不允许非本场饲养管理人员进入SPF鸡场的。考虑到鸡蛋中的卵黄抗体与血清抗体有一定的相关性，用检测卵黄抗体来替代血清抗体检测就成为对SPF鸡场做第三方检测的可选择方案。这一方案将可为SPF鸡胚的生产和需求双方都能接受。然而，迄今为上市场上供应的所有检测REV、ALV、CAV和ARV抗体的ELISA试剂合的操作程序都仅适用于血清样品。目前既没有适用于卵黄抗体检测的操作程序，更没有设定血清抗体与卵黄抗体间的相互关系。而不将这2方面标准化，就不能将检测卵黄抗体来替代血清抗体检测。
发明内容
本发明的目的是可由有资质的专业实验室作为中介机构，按疫苗厂家或其他用户的要求对用户指定的供货SPF鸡场提供的鸡胚作不同病毒的卵黄抗体检测。
该方法用于非疾病诊断目的，是用被检测鸡的鸡蛋中卵黄代替鸡血清作为被检样品，测定其中抗体水平达到评价种鸡群的病原感染状态，以达到评价该鸡群提供的种蛋作为生物实验和制备生物制品原材料的生物安全性。本发明的技术方案是使用病原抗体ELISA检测试剂盒，分别检测一一对应来自同一只鸡的血清与卵黄中的抗体水平，用SPSS Statistics 17. 0程序比较分析血清与卵黄抗体OD值的相关系数、获得针对ELISA检测卵黄抗体的最佳稀释倍数、血清中抗体OD值的相关系数和最佳稀释度卵黄与血清样品的阴阳性符合率。
具体实施例方式一、血清与卵黄中抗体的检测血清与卵黄分别来自山东农业大学科教园地饲养的海兰褐蛋种鸡、山东某养殖场饲养的莱芜黑鸡以及SPF白来航鸡，所用血清与鸡蛋均一一对应并保存4°C待用。按常规方法分离血清，并分别按照REV、ARV、ALV-J、ALV-AB、CAV与IBDV抗体检测用ELISA试剂盒(购自IDEXX公司)的说明书进行操作；无菌取出卵黄后，稀释成不同浓度，再按照ELISA试剂盒检测血清的方法与步骤进行卵黄抗体的检测(除稀释比例不同，其他条件均一致)。血清与卵黄样品的检测均在同一时间同一块板同一条件下进行操作。二、针对不同病原的血清与卵黄中抗体检测结果的相关性分析血清和与卵黄中抗体水平的相关系数比较用SPSS Statistics 17. 0程序比较分析血清与卵黄抗体OD值的相关系数，从而获得针对血清样品的ELISA检测试剂盒检测卵黄中抗体的最佳稀释倍数。结果表明，用REV抗体试剂盒，卵黄以1 125、1 200,1 250,1 400和1 500稀释后，与血清样品OD值的相关系数分别为0. 923,0. 942,0. 912,0. 877和0. 794 (表1)。表1血清与卵黄中REV抗体水平的相关性比较结果
权利要求
1.一种卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状态的方法，其特征在于该方法用于非疾病诊断目的，是用被检测鸡的鸡蛋中卵黄代替鸡血清作为被检样品，测定其中抗体水平达到评价种鸡群的病原感染状态，以达到第三方评价该鸡群提供的种蛋作为生物实验和制备生物制品原材料的生物安全性。
2.如权利要求书1所述一种卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状态的方法，其特征在于该方法是使用病原抗体ELISA检测试剂盒，分别检测一一对应来自同一只鸡的血清与卵黄中的抗体水平，用SPSS Statistics 17.0程序比较分析血清与卵黄抗体 OD值的相关系数、获得针对ELISA检测卵黄抗体的最佳稀释倍数、血清中抗体OD值的相关系数和最佳稀释度卵黄与血清样品的阴阳性符合率。
3.如权利要求书1和2所述一种卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状态的方法，其特征在于该方法是分别用IDEXX公司的REV、REOV、ALV-J、ALV-AB、CAV以及IBDV 等6种病原抗体ELISA检测试剂盒，分别检测一一对应来自同一只鸡的血清与卵黄中的抗体水平，用SPSS Statistics 17.0程序比较分析血清与卵黄抗体OD值的相关系数，从而获得针对ELISA检测卵黄抗体的最佳稀释倍数分别为1 200、1 400,1 250,1 200、 1 20和1 500，与血清中抗体OD值的相关系数分别为0. 982、0. 939、0. 927、0. 993、0. 935 和0. 989 ；检测结果还表明，最佳稀释度卵黄与血清样品的阴阳性符合率为96% 100%。
全文摘要
本发明涉及一种卵黄抗体代替血清抗体评价种鸡群的病原感染状的方法。本发明是一一对应分别采集鸡的血清和鸡蛋，用IDEXX公司的REV、REOV、ALV-J、ALV-AB、CAV以及IBDV等6种ELISA试剂盒，分别检测血清与卵黄中的抗体水平，用SPSS Statistics 17.0程序比较分析血清与卵黄抗体OD值的相关系数，获得针对ELISA检测卵黄抗体的最佳稀释倍数与血清中抗体OD值的相关系数；检测结果还表明，最佳稀释度卵黄与血清样品的阴阳性符合率为96％～100％。本发明结果显示，IDEXX提供的检测血清样品用ELISA试剂盒对种鸡群不同病原的感染状态进行检测时，可以用卵黄代替血清样品，这表明通过检测卵黄抗体水平即可用来判断种鸡群的病原感染状态。
文档编号G01N33/569GK102565394SQ20121003061
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月13日 优先权日2012年2月13日
发明者孙淑红, 崔治中, 赵鹏, 郑明 申请人:北京信诺晶合生物科技有限公司, 山东农业大学