本发明涉及注射凝胶技术领域，具体为一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶与制备方法。
背景技术：
透明质酸，又叫玻璃酸，玻尿酸，是一种天然的多糖结构，由重复的d-葡萄糖醛酸和n-乙酰基葡萄糖通过β-1，3-糖苷键构成的双糖结构组成，广泛存在于动物细胞间质中，是肌肤水嫩的重要基础物质，具有强大的吸水性及特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，另外，透明质酸还可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂，与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。可注射凝胶在体内与修复组织之间嵌合性好，实现原位注射达到微创目的，成为软组织修复、重建、填充的热点。
目前所使用的透明质酸微球的注射凝胶内部的凝胶颗粒较大，在使用过程中凝胶之间的收缩性能不佳，大大降低了透明质酸微球的注射凝胶的弹力性能，且透明质酸微球的注射凝胶后续使用聚乳酸微球沉积逐渐加快，导致局部僵硬，使用效果不佳，不能满足使用需求。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶与制备方法，以解决上述背景技术中提出的目前所使用的透明质酸微球的注射凝胶内部的凝胶颗粒较大，在使用过程中凝胶之间的收缩性能不佳，大大降低了透明质酸微球的注射凝胶的弹力性能，且透明质酸微球的注射凝胶后续使用聚乳酸微球沉积逐渐加快，导致局部僵硬，使用效果不佳，不能满足使用需求的问题。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶，包括分子量为20万～300万道尔顿的透明质酸钠、纯水、三氟乙醇有机溶剂、左旋聚乳酸微球、1mol/l的盐酸纳溶液、100g～200g/l的己二酸二酰肼、300g～600g/l的1-羟基苯并三氮唑、75％的无水乙醇、2.5％的生理盐水、去离子水和的磷酸钠浓度为0.1mol/l的pbs缓冲液。
本发明还提供一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备方法，其制备方法如下：
步骤一：取3g～5g分子量为20万～300万道尔顿的透明质酸钠和95ml～97ml的纯水进行溶解，得到一定浓度的溶液a备用；
步骤二：向制备的溶液a中添加10l的三氟乙醇有机溶剂进行混合，在加入一定量的左旋聚乳酸微球进行反应，并对容器内部的溶液进行均匀搅拌一段时间，在通过静电纺获得具有交联功能的悬浊液b备用；
步骤三：将制备的悬浊液b转移到具有介电物质的容器，向容器中滴加1mol/l的盐酸纳溶液对溶液b的ph值进行调节，再向容器中添加0.1l的100g～200g/l的己二酸二酰肼和0.2l的300g～600g/l的1-羟基苯并三氮唑进行反应，对容器内部的溶液进行均匀搅拌一段时间后并静止一段时间得到胶体备用；
步骤四：；将制备的胶体放入到微粒粉碎机中，将胶体粉碎成凝胶颗粒，并使用筛选设备对凝胶颗粒进行筛选，得到满足使用需求的凝胶颗粒a；
步骤五：将制备的凝胶颗粒a先投放到75％的无水乙醇中进行浸泡，捞出后在投放到2.5％的生理盐水进行浸泡，浸泡完成后在将其捞出投放到去离子水中进行浸泡，借助75％的无水乙醇、2.5％的生理盐水和去离子水对凝胶颗粒进行浸泡、洗涤和抽提，从而除去未反应单体及其它杂质，多次进行重复浸泡，然后溶液透析纯化，冷冻干燥获得纯净的凝胶微球b备用；
步骤六：将冷冻干燥获得纯净的凝胶微球投放到磷酸钠浓度为0.1mol/l的pbs缓冲液中进行反复浸泡，即可得到凝胶颗粒c；
步骤七：将制备的凝胶颗粒c经过半脱水处理、高温高压灭菌处理后放入到储存装置中，再向储存装置中添加相应的添加剂即可得到含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶，注射凝胶需要冷冻保存。
优选的，所述步骤一中制备的溶液a浓度有三种，分别为3％、4％、5％.
优选的，所述步骤二中的反应温度为50℃～80℃，搅拌的速率为200r/min～300r/min，且搅拌时间为10min～20min。
优选的，所述步骤三中ph的值为4.8～5.2，反应温度为20℃～100℃，搅拌的速率为200r/min～300r/min，搅拌时间为6h～10h，静止时间为8h～10h。
优选的，所述步骤四中微粒粉碎机的粉碎孔径和筛选设备的筛网孔径大小均为100um～200um。
优选的，所述步骤七中半脱水处理采用离心脱水的方式，离心时间2min～5min，离心速度为1000r/min～1500r/min，高温高压灭菌处理采用紫外线照射的方式，紫外线的强度为70uw/cm2～100uw/cm2，照射时间为2h～3h。
与现有技术相比，本发明提供了一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶与制备方法，具备以下有益效果：
1、该含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶的颗粒大小出于亚微米级，亚微米的凝胶能够有效模仿细胞外基质，而且性能上具有细胞外基质的性能，具有良好的细胞粘附性、扩增、迁移、分化等功能，便于注射，可塑性、塑形维持长久性，且具有抗皱、修复等功能，提高了注射凝胶的使用效果。
2、该含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶通过75％的无水乙醇、2.5％的生理盐水、去离子水和pbs缓冲液的使用，将凝胶颗粒反复的投放到75％的无水乙醇、2.5％的生理盐水、去离子水和pbs缓冲液中进行浸泡，使得凝胶颗粒多次进行先溶胀后收缩，在收缩过程中可以将其它为反应的溶剂清理，提高了凝胶颗粒的纯净度，减少后续使用残留的溶剂会进行其它反应，提高了使用的安全性能。
3、该含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶可以通过更换微球材料和交联剂来调节注射凝胶的制备结果，可以有效的改变辅助功效，满足一些次要需求，而使用紫外线进行照射杀菌消毒，可以对注射凝胶预先具备一定的紫外线照射抗性，从而在后续使用时紫外线照射降低不良反应的发生，提高了使用的稳定性。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备方法，其制备方法如下：
步骤一：取3g透明质酸钠和97ml的纯水进行搅拌溶解，得到3％浓度的透明质酸钠溶液；
步骤二：向3％浓度的透明质酸钠溶液中添加10l的三氟乙醇有机溶剂进行混合，并加入15g的左旋聚乳酸微球进行搅拌反应，反应温度设定为65℃，搅拌的速率设定为200r/min，且搅拌时间设定为15min，搅拌反应完成后对溶液进行静电纺处理，纺丝参数控制在电压5kv、喷口孔径0.2mm、溶液流速0.5ml/h、环境温度20℃、接收板与喷口间距5cm，得到具有交联功能的悬浊液；
步骤三：将悬浊液转移到具有介电物质的容器，再向容器中滴加1mol/l的盐酸纳溶液对悬浊液进行ph值调节，ph值调节到5，再向容器中添加0.1l的200g/l的己二酸二酰肼和0.2l的600g/l的1-羟基苯并三氮唑进行搅拌反应，反应温度设定为50℃，搅拌的速率设定为300r/min，搅拌时间设定为8h，在反应完成后将容器中的悬浊液进行静置处理，静置时间设定为10h，可以得到凝胶胶体；
步骤四：将凝胶胶体放入到微粒粉碎机中进行粉碎处理，将凝胶胶体粉碎成凝胶颗粒，将凝胶颗粒放入到筛选设备中对筛选设备进行筛选，将不合格的筛选设备剔除，微粒粉碎机的粉碎孔径和筛选设备的筛网孔径大小均设定为150um，可以得到直径小于150um的凝胶颗粒；
步骤五：将合格的凝胶颗粒投放到75％的无水乙醇中浸泡，2h后捞出转移到2.5％的生理盐水再次进行浸泡，2h后捞出转移到去离子水浸泡2h，经过75％的无水乙醇、75％的无水乙醇和去离子水可以对凝胶颗粒进行浸泡、洗涤和抽提，从而除去未反应单体及其它杂质，重复浸泡2次即可，将凝胶颗粒透析纯化后在冷冻干燥即可获得纯净的凝胶微球；
步骤六：将凝胶微球投放到磷酸钠浓度为0.1mol/l的pbs缓冲液中进行反复浸泡，浸泡时间设定为5h后捞出即可得到新的凝胶微球；
步骤七：将凝胶微球投入到离心机中进行脱水处理，离心时间设定为4min，离心速度设定为1500r/min，将凝胶微球取出转移到高温高压灭菌箱中，采用紫外线的强度为80uw/cm2的紫外线照射凝胶微球2h后转移到储存装置中即可完成含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备，并采用冷冻保存。
实施例二
一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备方法，其制备方法如下：
步骤一：取4g透明质酸钠和96ml的纯水进行搅拌溶解，得到4％浓度的透明质酸钠溶液；
步骤二：向4％浓度的透明质酸钠溶液中添加10l的三氟乙醇有机溶剂进行混合，并加入20g的左旋聚乳酸微球进行搅拌反应，反应温度设定为65℃，搅拌的速率设定为200r/min，且搅拌时间设定为15min，搅拌反应完成后对溶液进行静电纺处理，纺丝参数控制在电压5kv、喷口孔径0.2mm、溶液流速0.5ml/h、环境温度20℃、接收板与喷口间距5cm，得到具有交联功能的悬浊液；
步骤三：将悬浊液转移到具有介电物质的容器，再向容器中滴加1mol/l的盐酸纳溶液对悬浊液进行ph值调节，ph值调节到5，再向容器中添加0.1l的200g/l的己二酸二酰肼和0.2l的600g/l的1-羟基苯并三氮唑进行搅拌反应，反应温度设定为50℃，搅拌的速率设定为300r/min，搅拌时间设定为8h，在反应完成后将容器中的悬浊液进行静置处理，静置时间设定为10h，可以得到凝胶胶体；
步骤四：将凝胶胶体放入到微粒粉碎机中进行粉碎处理，将凝胶胶体粉碎成凝胶颗粒，将凝胶颗粒放入到筛选设备中对筛选设备进行筛选，将不合格的筛选设备剔除，微粒粉碎机的粉碎孔径和筛选设备的筛网孔径大小均设定为150um，可以得到直径小于150um的凝胶颗粒；
步骤五：将合格的凝胶颗粒投放到75％的无水乙醇中浸泡，2h后捞出转移到2.5％的生理盐水再次进行浸泡，2h后捞出转移到去离子水浸泡2h，经过75％的无水乙醇、75％的无水乙醇和去离子水可以对凝胶颗粒进行浸泡、洗涤和抽提，从而除去未反应单体及其它杂质，重复浸泡2次即可，将凝胶颗粒透析纯化后在冷冻干燥即可获得纯净的凝胶微球；
步骤六：将凝胶微球投放到磷酸钠浓度为0.1mol/l的pbs缓冲液中进行反复浸泡，浸泡时间设定为5h后捞出即可得到新的凝胶微球；
步骤七：将凝胶微球投入到离心机中进行脱水处理，离心时间设定为4min，离心速度设定为1500r/min，将凝胶微球取出转移到高温高压灭菌箱中，采用紫外线的强度为80uw/cm2的紫外线照射凝胶微球2h后转移到储存装置中即可完成含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备，并采用冷冻保存。
实施例三
一种含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备方法，其制备方法如下：
步骤一：取5g透明质酸钠和95ml的纯水进行搅拌溶解，得到5％浓度的透明质酸钠溶液；
步骤二：向5％浓度的透明质酸钠溶液中添加10l的三氟乙醇有机溶剂进行混合，并加入15g的左旋聚乳酸微球进行搅拌反应，反应温度设定为65℃，搅拌的速率设定为200r/min，且搅拌时间设定为15min，搅拌反应完成后对溶液进行静电纺处理，纺丝参数控制在电压5kv、喷口孔径0.2mm、溶液流速0.5ml/h、环境温度20℃、接收板与喷口间距5cm，得到具有交联功能的悬浊液；
步骤三：将悬浊液转移到具有介电物质的容器，再向容器中滴加1mol/l的盐酸纳溶液对悬浊液进行ph值调节，ph值调节到5，再向容器中添加0.1l的200g/l的己二酸二酰肼和0.2l的600g/l的1-羟基苯并三氮唑进行搅拌反应，反应温度设定为50℃，搅拌的速率设定为300r/min，搅拌时间设定为8h，在反应完成后将容器中的悬浊液进行静置处理，静置时间设定为10h，可以得到凝胶胶体；
步骤四：将凝胶胶体放入到微粒粉碎机中进行粉碎处理，将凝胶胶体粉碎成凝胶颗粒，将凝胶颗粒放入到筛选设备中对筛选设备进行筛选，将不合格的筛选设备剔除，微粒粉碎机的粉碎孔径和筛选设备的筛网孔径大小均设定为150um，可以得到直径小于150um的凝胶颗粒；
步骤五：将合格的凝胶颗粒投放到75％的无水乙醇中浸泡，2h后捞出转移到2.5％的生理盐水再次进行浸泡，2h后捞出转移到去离子水浸泡2h，经过75％的无水乙醇、75％的无水乙醇和去离子水可以对凝胶颗粒进行浸泡、洗涤和抽提，从而除去未反应单体及其它杂质，重复浸泡2次即可，将凝胶颗粒透析纯化后在冷冻干燥即可获得纯净的凝胶微球；
步骤六：将凝胶微球投放到磷酸钠浓度为0.1mol/l的pbs缓冲液中进行反复浸泡，浸泡时间设定为5h后捞出即可得到新的凝胶微球；
步骤七：将凝胶微球投入到离心机中进行脱水处理，离心时间设定为4min，离心速度设定为1500r/min，将凝胶微球取出转移到高温高压灭菌箱中，采用紫外线的强度为80uw/cm2的紫外线照射凝胶微球2h后转移到储存装置中即可完成含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶制备，并采用冷冻保存。
综上所述，实施例二中制备出来的含有亚微米级透明质酸微球的注射凝胶后续的使用效果相对较佳。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。