一种异吲哚啉酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途的制作方法

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本发明属于医药领域，涉及已知异吲哚啉酮类化合物的新用途，具体涉及一种异吲哚啉酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。


背景技术：

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根据世界卫生组织2018年的统计，癌症是导致人类死亡的主要原因，严重威胁人类的生命健康。目前全世界恶性肿瘤的发病率和病死率正逐年增加，我国恶性肿瘤的病死率居世界首位，其中呼吸系统和消化系统恶性肿瘤是我国恶性肿瘤的主要死因。
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抗肿瘤治疗的方法主要包括手术治疗、化疗、放疗、免疫治疗、中医治疗等，而化疗是目前针对恶性肿瘤治疗的主要方法。化疗药物的主要类型包括细胞凋亡诱导剂、肿瘤细胞毒制剂、细胞衰老诱导剂、肿瘤耐药逆转剂、肿瘤化学预防剂以及肿瘤转移抑制剂等。
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抗肿瘤治疗之所以困难是由于化疗的疗效不确定，且不良反应显著，因此不断寻找新的化疗药物显得尤为重要。


技术实现要素：

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本发明的意图在于提供一种异吲哚啉酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
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技术方案如下：
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如下结构的异吲哚啉酮化合物用于制备抗卵巢癌的药物中的应用。
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一种抗卵巢癌的药物制剂，含有上述异吲哚啉酮化合物。
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优选地，上述药物制剂的剂型为片剂、胶囊、注射剂或口服液。
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技术效果：
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本发明发现，图1所示化学结构的两种异吲哚啉酮化合物对卵巢癌细胞具有较强的抑制活性，可以显著上调卵巢癌细胞中的caspase-3蛋白表达水平。本领域技术人员知道，caspase-3是细胞中关键的凋亡执行蛋白，在细胞凋亡中具有关键作用，caspase-3激活后可以引起细胞凋亡。该结果表明，该两种异吲哚啉酮化合物可以促进卵巢癌细胞凋亡。因此，该两种异吲哚啉酮化合物具有开发成抗卵巢癌药物的前景。
附图说明
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图1为异吲哚啉酮化合物a和异吲哚啉酮化合物b的化学结构式；
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图2为异吲哚啉酮化合物a、b对不同肿瘤细胞的ic
50
值；
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图3为westernblot凝胶成像结果图。
具体实施方式
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下面通过具体实施例和附图介绍本发明的实质性内容，但不作为本发明保护范围的限制。
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一、试验材料
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卵巢癌skov3细胞、白血病u937细胞和乳腺癌mcf-7细胞购自atcc。
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胎牛血清、rpmi 1640培养基购自thermo fisher scientific。
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cck-8试剂购自日本同仁。
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异吲哚啉酮化合物a、异吲哚啉酮化合物b的化学结构式如图1所示，纯度不低于98％。
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二、试验方法
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1、细胞培养
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卵巢癌skov3细胞、白血病u937细胞、乳腺癌mcf-7细胞分别用含10％胎牛血清的rpmi 1640培养基于37℃、5％co
2
饱和湿度条件下培养。取对数生长期细胞用于实验。
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2、cck-8法测定肿瘤细胞增殖
[0026]
取对数生长期的肿瘤细胞，胰酶消化后用完全培养基制成浓度为5
×
10
4
个/ml的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μl。试验分为药物组和空白对照组，每组(或每个药物浓度)设3个复孔。培养24h后，药物组分别用100μl含不同浓度异吲哚啉酮化合物a或异吲哚啉酮化合物b的培养基替换原培养基，空白对照组用100μl新鲜的完全培养基替换原培养基。继续培养48h后，每孔加入cck-8试剂10μl，继续孵育3h，用酶标仪于450nm波长处测定各孔吸光度值(od值)，按照公式计算不同浓度药物对肿瘤细胞的抑制率，采用graphpad prism 6.0软件计算半数抑制浓度(ic
50
)。
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抑制率＝(1－药物组od值/空白对照组od值)
×
100％。
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3、western blot检测凋亡相关分子caspase-3的表达水平
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取对数生长期的肿瘤细胞，胰酶消化后用完全培养基制成浓度为1
×
10
5
个/ml的细胞悬液，接种于24孔板中，每孔2ml。试验分为药物组和空白对照组，每组(或每个药物浓度)设3个复孔。培养24h后，药物组分别用2ml含2、5μm异吲哚啉酮化合物a或异吲哚啉酮化合物b的培养基替换原培养基，空白对照组用2ml新鲜的完全培养基替换原培养基。继续培养48h后，收集细胞，提取总蛋白，并测定蛋白浓度。取30μg总蛋白在10％分离胶及5％浓缩胶的sds-page上电泳，100v转膜90min，室温下5％脱脂奶粉封闭2h，按1:1000加入caspase-3、β-actin一抗，4℃孵育过夜。洗膜后按1:2000加二抗，室温孵育2h后ecl显影，凝胶成像系统分析条带灰度值。
[0030]
4、统计学方法
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数据用x
±
s表示，组间比较采用单因素方差分析，p＜0.05有统计学意义。
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三、试验结果
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异吲哚啉酮化合物a、b对不同肿瘤细胞的ic
50
测定结果如表1和图2所示，异吲哚啉酮化合物a和异吲哚啉酮化合物b对卵巢癌skov3细胞均具有优异的抑制活性，对白血病u937细胞和乳腺癌mcf-7细胞的抑制作用不明显(对乳腺癌mcf-7细胞ic
50
值大于50μm，对白
血病u937细胞ic
50
值接近50μm)。
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表1各药物对肿瘤细胞的半数抑制浓度
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western blot检测结果如图3所示，异吲哚啉酮化合物a和异吲哚啉酮化合物b均可以有效激活caspase-3，提高caspase-3蛋白表达水平，且具有剂量效果。
[0037]
综合上述结果，异吲哚啉酮化合物a和异吲哚啉酮化合物b对卵巢癌细胞具有较强的抑制活性，ic
50
值小于5μm，且可以显著上调卵巢癌细胞中的caspase-3蛋白表达水平。本领域技术人员知道，caspase-3是细胞中关键的凋亡执行蛋白，在细胞凋亡中具有关键作用，caspase-3激活后可以引起细胞凋亡。该结果表明，该两种异吲哚啉酮化合物可以促进卵巢癌细胞凋亡。因此，该两种异吲哚啉酮化合物具有开发成抗卵巢癌药物的前景。
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上述实施例和附图用于具体介绍本发明的实质性内容，但不作为本发明保护范围的限制。