一种促进皮肤再生修复的护理液的制作方法

本发明属于皮肤再生修复
技术领域：
，尤其涉及一种促进皮肤再生修复的护理液。
背景技术：
：皮肤是人体表面面积最大的器官，约占人体表面积的70%。皮肤与人体的多种系统是相互联系的，其是一种具有多层结构的屏障性保护组织。皮肤具有维持机体体温相对恒定，保护机体免受病原菌的入侵，保持机体内电解质的动态平衡等功能。由于皮肤是人体的保护组织，因此容易受到损失，常见的损伤类型包括烫伤，创伤，烧伤等。皮肤的损伤修复是生物医学研究中的热点和难点，皮肤损伤修复的过程是一个十分复杂的过程，该过程通常又由四个阶段组成，分别是止血期、炎症期、增殖期和重塑期。因此，目前关于皮肤损伤修复的相关机制依然还不清楚。halocyntin是一种来源于海鞘的生物多肽，其由26个氨基酸组成，分子量大小为2733.1da，氨基酸序列为fwghiwnavkrvganalhgavtgals。目前，halocyntin多肽已知的功能是抑菌，而关于其在皮肤损伤修复中是否有效果尚未见报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种促进皮肤再生修复的护理液。为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：首先，本发明提供了halocyntin多肽在制备促进皮肤再生的护理液中的用途，所述halocyntin多肽的氨基酸序列为fwghiwnavkrvganalhgavtgals。其次，本发明提供了一种促进皮肤再生修复的护理液，所述护理液的核心成分为halocyntin多肽溶液。优选地，所述halocyntin多肽溶液中halocyntin多肽的含量为≥10μm。优选地，所述halocyntin多肽的氨基酸序列为fwghiwnavkrvganalhgavtgals。其次，本发明提供了halocyntin多肽在制备促进人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞增殖药物中的用途。优选地，所述halocyntin多肽的氨基酸序列为fwghiwnavkrvganalhgavtgals。优选地，所述halocyntin多肽的使用浓度为≥10μm。最后，本发明提供了halocyntin多肽在制备促进人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞迁移药物中的用途。优选地，所述halocyntin多肽的氨基酸序列为fwghiwnavkrvganalhgavtgals。优选地，所述halocyntin多肽的使用浓度为≥10μm。本发明的有益效果是：本发明通过实验首次发现halocyntin多肽能够有效的促进人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞的增殖和细胞迁移，并且能够有效的促进皮肤修复，因此可将其用于制备促进皮肤再生修复的护理液。附图说明图1不同浓度halocyntin多肽溶液对于人皮肤成纤维细胞增殖的影响；图210μmhalocyntin多肽在不同时间对于人微血管内皮细胞增殖的影响；图310μmhalocyntin多肽对于人皮肤成纤维细胞迁移的影响；图410μmhalocyntin多肽对于人微血管内皮细胞迁移的影响；图510μmhalocyntin多肽对于人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞迁移相关蛋白e-cadherin和n-cadherin蛋白表达的影响；图610μmhalocyntin多肽对于小鼠皮肤损伤修复的影响。具体实施方式为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。由于人体皮肤的再生和修复与人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞的增殖和迁移息息相关，因此本发明对halocyntin多肽对于人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞增殖和迁移的影响进行检测。实施例1检测halocyntin多肽是否能够促进人皮肤成纤维细胞hsf的增殖（1）将halocyntin多肽加入到dmem培养基中，制成1μm，2.5μm，5μm和10μm，20μm的halocyntin多肽溶液；（2）将2×104个hsf细胞接种于96孔板中，贴壁后分别添加0μm，1μm，2.5μm，5μm和10μm的halocyntin多肽溶液，培养72h后，使用mtt检测490nmod值，所得的实验结果如图1和表1所示。表1hsf细胞使用不同浓度的halocyntin多肽溶液处理后的od值细胞处理浓度od值0μm0.618±0.0171μm0.624±0.0192.5μm0.659±0.0185μm0.730±0.02110μm0.828±0.02320μm0.826±0.020从图1和表1中，可以看出，1μmhalocyntin多肽对于人皮肤成纤维细胞的增殖没有明显的效果，而2.5μmhalocyntin多肽可以一定程度的促进人皮肤成纤维细胞的增殖，而当halocyntin多肽浓度达到5μm时则可以显著的提高人皮肤成纤维细胞的增殖，且浓度在10μm时达到最优浓度。实施例2检测10μmhalocyntin多肽对于人微血管内皮细胞hmec增殖的影响（1）将将2×104个hmec细胞接种于96孔板中，贴壁后分别添加0μm和10μm的halocyntin多肽溶液，培养24h,48h,72h,96h后，使用mtt检测490nmod值，所得的实验结果如图2和表2所示。表2hmec细胞使用10μm的halocyntin多肽溶液处理后不同时间的od值细胞处理时间0μm10μm24h0.218±0.0110.246±0.01348h0.320±0.0230.422±0.02872h0.542±0.0310.758±0.03696h0.645±0.0260.875±0.039从表2和图2中可以看出，在24h,48h,72h和96h时，使用10μmhalocyntin多肽溶液处理的细胞的od值均明显高于oμmhalocyntin多肽溶液处理的细胞，说明使用halocyntin多肽溶液同样能够有效的促进人微血管内皮细胞的增殖。实施例3检测10μmhalocyntin多肽对于人皮肤成纤维细胞的细胞迁移能力的影响（1）将hsf细胞使用无血清培养基饥饿12h；（2）胰酶消化后，分别使用含0μmhalocyntin多肽的无血清dmem培养基和含0μmhalocyntin多肽的无血清dmem培养基重悬细胞，将1×105细胞接种于transwell上室；（3）在transwell下室加入含10%血清的dmem培养基，培养24h后，取出transwell小室进行染色后，清洗后于显微镜下选取5个不同视野进行拍照和统计，实验结果如图3所示。从图中可以看出，使用10μmhalocyntin多肽处理后的hsf细胞穿过transwell小室的数量明显增多，且效果十分显著，说明使用halocyntin多肽溶液能够有效的促进人皮肤成纤维细胞的迁移能力。实施例4检测10μmhalocyntin多肽对于人微血管内皮细胞hmec细胞的细胞迁移能力的影响（1）将hmec细胞使用无血清培养基饥饿12h；（2）胰酶消化后，分别使用含0μmhalocyntin多肽的无血清dmem培养基和含0μmhalocyntin多肽的无血清dmem培养基重悬细胞，将1×105细胞接种于transwell上室；（3）在transwell下室加入含10%血清的dmem培养基，培养24h后，取出transwell小室进行染色后，清洗后于显微镜下选取5个不同视野进行拍照和统计，实验结果如图4所示。从图中可以看出，使用10μmhalocyntin多肽处理后的hmec细胞穿过transwell小室的数量明显增多，且效果十分显著，说明使用halocyntin多肽溶液同样能够有效的促进人微血管内皮细胞的迁移能力。实施例5检测10μmhalocyntin多肽对于hsf细胞和hmec细胞中e-cadherin和n-cadherin蛋白表达的影响（1）将hsf细胞和hmec细胞接种于6孔培养板中，分别使用0μm和10μm的halocyntin多肽溶液处理48h；（2）处理结束后，弃去上清，使用预冷的pbs清洗细胞，加入ripa裂解液处理细胞，使用细胞刮刀刮取细胞，置于冰上裂解30min；（3）待细胞充分裂解之后，4℃12000g离心取上清，使用bca试剂盒测定蛋白浓度；（4）计算出蛋白浓度之后，根据浓度加入适量裂解液蛋白样品浓度一致；（5）根据样品体积加入5×sds上游缓冲液，置于100℃水浴处理5min；（6）按照比例配置聚丙烯酰胺凝胶，放置半小时凝固之后，将配置好的胶安装至电泳槽中，拔出梳子后，倒满电泳缓冲液，进行上样；（7）盖上电泳槽，调整电泳仪为恒压80v，待蛋白marker进入分离胶之后，调整电压为120v，直至电泳结束；（8）电泳结束后，将胶取出，去除浓缩胶，安装电转夹，放置冰块后，盖好盖子进行电转；（9）电转结束之后，将pvdf膜从电转槽中取出，放置到5%的脱脂奶粉封闭液中，室温摇床上封闭2h；（10）封闭结束后，在摇床上，使用tbst缓冲液清洗pvdf膜3次，每次10min，按照抗体说明书，配置一抗，4℃摇床上孵育过夜；（11）回收一抗，摇床上使用tbst缓冲液清洗pvdf膜3次，孵育2抗2h，孵育结束后，摇床上tbst缓冲液清洗pvdf膜3次；（12）在pvdf膜上滴加事先配置的显影液，进行显影，结果如图4所示。从图中可以看出，10μm的halocyntin多肽溶液能够有效的促进hsf细胞和hmec细胞中促迁移蛋白n-cadherin的蛋白表达，并能够有效的抑制抑迁移蛋白e-cadherin，说明halocyntin多肽可能通过调控e-cadherin和n-cadherin来调控来促进皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞的迁移。实施例6检测10μmhalocyntin多肽溶液对于皮肤修饰修复的影响（1）将10只小鼠分成2组，分别为0μmhalocyntin多肽溶液组和10μmhalocyntin多肽溶液组（无菌水配置）；（2）对小鼠进行全身麻醉之后，在固定小鼠四肢，使用手术剪适量的减去小鼠背部的毛发，之后使用脱毛膏对小鼠背部进行脱毛；（3）脱毛完成后，在小鼠背部剪一个直径约8-10mm的圆孔；（4）分别每天在小鼠的伤口处涂抹0μmhalocyntin多肽溶液和10μmhalocyntin多肽溶液，并在处理0,5,10天时进行拍照，实验结果如图6所示。从图中可以看出，使用10μmhalocyntin多肽处理后，伤口的愈合速度明显快于对照组，说明halocyntin多肽能够具有促进伤口愈合的效果，因此将其用于制备促进皮肤再生修复的护理液。综上所述，halocyntin多肽能够通过促进人皮肤成纤维细胞和人微血管内皮细胞的增殖和迁移来促进伤口的愈合，因此，可将其用于制备促进皮肤再生修复的护理液。当前第1页12