用于治疗自身免疫性疾病的氢化异喹啉或氢化萘啶化合物的制作方法

用于治疗自身免疫性疾病的氢化异喹啉或氢化萘啶化合物
1.本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，尤其涉及可用于治疗系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的tlr7和/或tlr8和/或tlr9的拮抗剂。
技术领域
2.自身免疫性结缔组织病(ctd)包括典型的自身免疫综合征，诸如系统性红斑狼疮(sle)、原发性干燥综合征(psjs)、混合性结缔组织病(mctd)、皮肌炎/多发性肌炎(dm/pm)、类风湿关节炎(ra)和系统性硬化症(ssc)。除ra以外，对患者来说，没有真正有效且安全的疗法。sle代表典型的ctd，其患病率为20-150/100,000，并在不同器官引起广泛的炎症和组织损伤，从皮肤和关节的常见症状到肾、肺或心力衰竭。传统上，sle已使用非特异性抗炎药或免疫抑制剂进行治疗。但是，长期使用免疫抑制药物，例如，皮质类固醇仅部分有效，并伴有非预期毒性和副作用。贝利尤单抗是过去50年中唯一获得fda批准的用于狼疮的药物，尽管仅对部分sle患者具有适度延迟的疗效(navarra,s.v.等人，lancet 2011,377,721.)。其他生物制剂，诸如抗cd20 mab、抗特定细胞因子的mab或其可溶受体，在大多数临床研究中均失败了。因此，需要新型疗法，其在更大比例的患者群组中提供持续改善，并且对于在许多自身免疫以及自身炎症性疾病中的长期使用而言更安全。
3.toll样受体(tlr)是模式识别受体(prr)的重要家族，可以引发多种免疫细胞产生广泛的免疫应答。核内体tlr7、tlr8和tlr9作为天然的宿主防御传感器，可识别衍生自病毒、细菌的核酸；具体地，tlr7/tlr8和tlr9分别识别单链rna(ssrna)和单链cpg-dna。然而，trl7、trl8、trl9的异常核酸传感被认为是广泛的自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的关键节点(krieg,a.m.等人，immunol.rev.2007,220,251.jim
é
nez-dalmaroni,m.j.等人，autoimmun rev.2016,15,1.chen,j.q.等人，clinical reviews in allergy&immunology 2016,50,1.)。抗rna和抗dna抗体是sle的公认诊断标志，并且这些抗体可以将自身rna和自身dna两者传递至内体。自身rna复合物可以被tlr7和tlr8识别，而自身dna复合物可以触发tlr9活化。实际上，在sle(系统性红斑狼疮)患者中，自身rna和自身dna从血液和/或组织中的缺陷清除很明显。据报道，tlr7和tlr9在sle组织中被上调，并分别与狼疮性肾炎的慢性和活性有关。在sle患者的b细胞中，tlr7表达与抗rnp抗体的产生相关，而tlr9表达与il-6和抗dsdna抗体水平相关。一致地，在狼疮小鼠模型中，抗rna抗体需要tlr7，抗核小体抗体需要tlr9。另一方面，小鼠中tlr7或人tlr8的过度表达会促进自身免疫和自身炎症。此外，tlr8的活化特别有助于mdc/巨噬细胞的炎症性细胞因子分泌，嗜中性粒细胞胞外捕网过程(netosis)，th17细胞的诱导和treg细胞的抑制。除了描述的tlr9在促进b细胞自身抗体产生中的作用外，pdc中通过自身dna活化tlr9还会导致诱导i型ifn和其他炎症性细胞因子。考虑到pdc和b细胞两者中tlr9的这些作用，它们都是自身免疫性疾病发病机理的关键因素，而且在许多自身免疫性疾病患者中大量存在可轻易活化tlr9的自身dna复合物，在抑制tlr7和tlr8途径基础之上，它对于进一步阻断自身dna介导的tlr9途径可能具有额外益处。总之，tlr7、tlr8和tlr9途径代表了治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的新治疗靶点，针对这些疾病，不存在有效的不含类固醇和无细胞毒性的口服药物，并且从非常上游就抑
制了所有这些途径可能会带来令人满意的治疗效果。因此，我们发明了靶向和抑制tlr7、tlr8和tlr9的口服化合物，用于治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病。


技术实现要素：

4.本发明涉及具有式(i)的新型化合物，
[0005][0006]
其中
[0007]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0008]
r2为c
1-6
烷基；
[0009]r3a
为h或c
1-6
烷基；
[0010]r3b
为h或c
1-6
烷基；
[0011]
r4为(c
1-6
烷基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0012]
(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓基，
[0013]
(甲酰基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0014]
1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基，
[0015]
2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0016]
2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0017]
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基，
[0018]
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基，
[0019]
3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基，
[0020]
3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0021]
3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0022]
3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基，
[0023]
4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷基，
[0024]
4-氧代-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯基，
[0025]
4-哌啶基氮杂环丁烷基氧基，
[0026]
5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基，
[0027]
7-氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基，
[0028]
哌嗪基，
[0029]
哌嗪基c
1-6
烷氧基，
[0030]
哌啶基，
[0031]
哌啶基氧基，或
[0032]
吡咯烷基，
[0033]
其中
[0034]
哌嗪基未被取代或被(c
1-6
烷基)2氨基c
1-6
烷基、1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶基、c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷基咪唑基c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、吗啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯烷基羰基或吡咯烷基磺酰基取代，
[0035]
哌啶基被独立地选自卤素、氨基、氨基(羟基)哌啶基、氨基(c
1-6
烷氧基)吡咯烷基、氨基氮杂环丁烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、(c
1-6
烷基)2氨基、羟基、((c
1-6
烷基)2氨基)c
1-6
烷基和哌嗪基的取代基取代一次或两次，
[0036]
吡咯烷基被独立地选自卤素、氨基、羟基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基的取代基取代两次或三次；
[0037]
q和z独立地选自ch和n；
[0038]
y为ch；
[0039]
或其药学上可接受的盐。
[0040]
本发明的另一目的涉及式(i)或(ia)的新型化合物。它们的制备、基于根据本发明所述的化合物的药物及其制备以及式(i)或(ia)化合物作为tlr7和tlr8和tlr9拮抗剂的用途及用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的用途。式(i)或(ia)化合物显示出优异的tlr7和tlr8和tlr9拮抗活性。另外，式(i)或式(ia)的化合物还显示出良好的细胞毒性、光毒性、溶解性、hpbmc、人微粒体稳定性和sdpk特征，以及低cyp抑制作用。
[0041]
诺华公司(novartis)专利wo2018047081公开了与本发明的化合物具有相同吡唑并[3,4-b]吡啶基部分的化合物，然而基于诺华公司专利中公开的信息，4,5,6,7-四氢-1h-吡唑并[4,3-c]吡啶的中心双环核和用双环[2,2,2]辛烷/双环[1,1,1]戊烷部分的末端取代对于tlr7/8/9活性是必不可少的，这也被认为是与本发明的化合物相比的主要结构差异。另一方面，wo2018047081中的化合物中的大多数显示出较差的tlr9活性。遗憾的是，少数具有相对改善的tlr9活性的化合物(诸如具有最佳tlr9活性的n79(如实例79))仍具有较差的人肝微粒体稳定性(参见表5)并因此具有不令人满意的pk曲线。
[0042]
另一项诺华公司专利wo2019220390公开了化合物n8的多晶型物(如wo2018047081中的实例8)，该多晶型物被认为是其系列中的先导化合物并且被证明具有低得多的tlr9活性和类似的较差的人肝微粒体稳定性(参见表5)。
[0043][0044]
化合物n8(hpbmc tlr7/8/9拮抗剂ifnα测定ic
50
(μm)：0.004/0.166/4.28)
[0045][0046]
化合物n79(hpbmc tlr7/8/9拮抗剂ifnα测定ic
50
(μm)：0.004/0.136/0.064)
具体实施方式
[0047]
定义
[0048]
术语“c
1-6
烷基”表示含有1至6个，特别是1至4个碳原子的饱和、直链或支链烷基，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。特别地，“c
1-6
烷基”基团为甲基、乙基和正丙基。
[0049]
术语“c
1-6
烷氧基”表示c
1-6
烷基-o-。
[0050]
术语“氧基”表示-o-。诸如1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基的实例是指1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基-o-。
[0051]
术语“氧代”表示＝o。
[0052]
术语“卤素”和“卤基”在本文中可互换使用，表示氟、氯、溴或碘。
[0053]
术语“芳基”表示具有5至12个环原子的芳族烃单价或双环体系。芳基的实例包括但不限于苯基和萘基。芳基可进一步被取代基取代，这些取代基包括但不限于c
1-6
烷基；3,4,4a,5,7,7a-六氢-2h-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；1,4-二氮杂环庚烷基；被c
1-6
烷基取代的2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基-1,4-氧氮杂环庚烷基；被一个或两个独立地选自氨基和c
1-6
烷基的取代基取代的氮杂环丁烷基；未被取代或被c
1-6
烷基取代的哌嗪基；以及被一个或两个独立地选自氨基、c
1-6
烷氧基和卤素的取代基取代的吡咯烷基。
[0054]
术语“顺式”和“反式”表示分子或部分的相对立体化学。例如：实例17的原料(顺式-4-氧代-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-甲酸叔丁酯是指和的混合物；类似地，实例29
的原料(n-[3-羟基-4-哌啶基]氨基甲酸反式叔丁酯是指的混合物。显示相对立体化学的方式也适用于最终化合物。
[0055]
术语“药学上可接受的盐”表示在生物学上或其他方面不是不期望的盐。“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐两者。
[0056]“药学上可接受的酸加成盐”是指与无机酸和有机酸形成的那些药学上可接受的盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，所述有机酸可以选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、和水杨酸等。
[0057]
术语“药学上可接受的碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的示例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂(诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶和多胺树脂)的盐。
[0058]
术语“药物活性代谢物”表示通过特定化合物或其盐在体内的代谢产生的药理活性产物。进入人体后，大多数药物均是化学反应的底物，可能改变其物理性质和生物学效应。这些通常影响本发明化合物极性的代谢转化改变了药物在体内分布和从体内排泄的方式。然而，在某些情况下，药物代谢是治疗效果所必需的。
[0059]
术语“治疗有效量”是表示本发明的化合物或分子的量，当将其施用于受试者时，(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或疾患的一种
或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发作。治疗有效量取决于化合物，所治疗的疾病状态，所治疗疾病的严重程度，受试者的年龄和相对健康状况，施用途径和形式，主治医学或兽医的判断和其他因素。
[0060]
术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的活性药物成分和一起施用于有此需要的哺乳动物(例如人)的药学上可接受的赋形剂的混合物或溶液。
[0061]
tlr7和tlr8和tlr9的拮抗剂
[0062]
本发明涉及(i)，其是式(i)化合物，
[0063][0064]
其中
[0065]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0066]
r2为c
1-6
烷基；
[0067]r3a
为h或c
1-6
烷基；
[0068]r3b
为h或c
1-6
烷基；
[0069]
r4为(c
1-6
烷基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0070]
(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓基，
[0071]
(甲酰基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0072]
1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基，
[0073]
2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0074]
2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0075]
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基，
[0076]
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基，
[0077]
3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基，
[0078]
3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0079]
3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0080]
3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基，
[0081]
4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷基，
[0082]
4-氧代-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯基，
[0083]
4-哌啶基氮杂环丁烷基氧基，
[0084]
5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基，
[0085]
7-氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基，
[0086]
哌嗪基，
[0087]
哌嗪基c
1-6
烷氧基，
[0088]
哌啶基，
[0089]
哌啶基氧基，或
[0090]
吡咯烷基，
[0091]
其中
[0092]
哌嗪基未被取代或被(c
1-6
烷基)2氨基c
1-6
烷基、1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶基、c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷基咪唑基c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、吗啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯烷基羰基或吡咯烷基磺酰基取代，
[0093]
哌啶基被独立地选自卤素、氨基、氨基(羟基)哌啶基、氨基(c
1-6
烷氧基)吡咯烷基、氨基氮杂环丁烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、(c
1-6
烷基)2氨基、羟基、((c
1-6
烷基)2氨基)c
1-6
烷基和哌嗪基的取代基取代一次或两次，
[0094]
吡咯烷基被独立地选自卤素、氨基、羟基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基的取代基取代两次或三次；
[0095]
q和z独立地选自ch和n；
[0096]
y为ch；
[0097]
或其药学上可接受的盐。
[0098]
本发明的另一个实施例是(ii)具有式(ia)的化合物，
[0099][0100]
其中
[0101]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0102]
r2为c
1-6
烷基；
[0103]r3a
为h或c
1-6
烷基；
[0104]r3b
为h或c
1-6
烷基；
[0105]
r4为(c
1-6
烷基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0106]
(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓基，
[0107]
(甲酰基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0108]
1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基，
[0109]
2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0110]
2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0111]
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基，
[0112]
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基，
[0113]
3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基，
[0114]
3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0115]
3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0116]
3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基，
[0117]
4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷基，
[0118]
4-氧代-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯基，
[0119]
4-哌啶基氮杂环丁烷基氧基，
[0120]
5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基，
[0121]
7-氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基，
[0122]
哌嗪基，
[0123]
哌嗪基c
1-6
烷氧基，
[0124]
哌啶基，
[0125]
哌啶基氧基，或
[0126]
吡咯烷基，
[0127]
其中
[0128]
哌嗪基未被取代或被(c
1-6
烷基)2氨基c
1-6
烷基、1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶基、c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷基咪唑基c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、吗啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯烷基羰基或吡咯烷基磺酰基取代，
[0129]
哌啶基被独立地选自卤素、氨基、氨基(羟基)哌啶基、氨基(c
1-6
烷氧基)吡咯烷基、氨基氮杂环丁烷基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、(c
1-6
烷基)2氨基、羟基、((c
1-6
烷基)2氨基)c
1-6
烷基和哌嗪基的取代基取代一次或两次，
[0130]
吡咯烷基被独立地选自卤素、氨基、羟基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基的取代基取代两次或三次；
[0131]
q和z独立地选自ch和n；
[0132]
y为ch；
[0133]
或其药学上可接受的盐。
[0134]
本发明的进一步的实施例是(iii)根据(i)或(ii)所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中q为ch或n；z为ch或n；并且y为ch；条件是q和z不同时为n。
[0135]
本发明的进一步的实施例是(iv)根据(i)至(iii)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为(1-c
1-6
烷基哌嗪-2-基)c
1-6
烷氧基、(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓-1-基、(1-甲酰基哌嗪-2-基)c
1-6
烷氧基、1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基氧基、2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-基、2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基、3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基、3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-基、3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,
4-c]吡啶-2-基、4-氧代-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基、4-哌啶基氮杂环丁烷-3-基氧基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、7-氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基、哌嗪-1-基、1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶-7-基-哌嗪-1-基、(1-c
1-6
烷基咪唑-4-基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基、(羟基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基、c
1-6
烷基-哌嗪-1-基、(吗啉-2-基羰基)哌嗪-1-基、(c
1-6
烷基)2氨基c
1-6
烷基-哌嗪-1-基、哌啶-4-基羰基-哌嗪-1-基、吡咯烷-2-基羰基-哌嗪-1-基、吡咯烷-3-基磺酰基-哌嗪-1-基、(c
1-6
烷氧基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基、哌嗪-1-基c
1-6
烷氧基、哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基、(3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基)-1-哌啶基、3-氨基氮杂环丁烷-1-基-1-哌啶基、(4-氨基-3-羟基-1-哌啶基)-1-哌啶基、4-羟基-4-((c
1-6
烷基)2氨基)c
1-6
烷基-1-哌啶基、哌嗪-1-基-1-哌啶基、氨基-1-哌啶基、4-氨基-4-c
1-6
烷基-1-哌啶基、(c
1-6
烷基)2氨基-1-哌啶基、4-氨基-3-甲氧基-1-哌啶基、4-氨基-3-卤代-1-哌啶基、3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、3-氨基-4-卤代-吡咯烷-1-基或4-氨基-3-羟基-3-c
1-6
烷基-吡咯烷-1-基。
[0136]
本发明的进一步的实施例是(v)根据(i)至(iv)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、3-氨基氮杂环丁烷-1-基-1-哌啶基、4-氨基-3-c
1-6
烷氧基-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、(羟基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基、哌嗪-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基。
[0137]
本发明的进一步的实施例是(vi)根据(i)至(v)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、3-(羟基甲基)哌嗪-1-基、哌嗪-1-基或哌嗪-2-基甲氧基。
[0138]
本发明的进一步的实施例是(vii)根据(i)至(vi)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基。
[0139]
本发明的进一步的实施例是(viii)根据(i)至(vii)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基甲氧基。
[0140]
本发明的进一步的实施例是(ix)根据(i)至(viii)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3b
为h。
[0141]
本发明的进一步的实施例是(x)根据(i)至(ix)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3a
为c
1-6
烷基。
[0142]
本发明的进一步的实施例是(xi)根据(i)至(x)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3a
为甲基。
[0143]
本发明的进一步的实施例是(xii)根据(i)至(xi)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r2为甲基。
[0144]
本发明的进一步的实施例是(xiii)根据(i)至(xii)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0145]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0146]
r2为c
1-6
烷基；
[0147]r3a
为c
1-6
烷基；
[0148]r3b
为h；
[0149]
r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、3-氨基氮杂环丁烷-1-基-1-哌啶基、4-氨基-3-c
1-6
烷氧基-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、(羟基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基、哌嗪-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基；
[0150]
q为ch或n；
[0151]
z为ch或n；
[0152]
y为ch；
[0153]
条件是q和z不同时为n；
[0154]
或其药学上可接受的盐。
[0155]
本发明的进一步的实施例是(xiv)根据(i)至(xiii)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0156]
r1为h或甲基；
[0157]
r2为甲基；
[0158]r3a
为甲基；
[0159]r3b
为h；
[0160]
r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、3-(羟基甲基)哌嗪-1-基、哌嗪-1-基或哌嗪-2-基甲氧基；
[0161]
q为ch或n；
[0162]
z为ch或n；
[0163]
y为ch；
[0164]
条件是q和z不同时为n；
[0165]
或其药学上可接受的盐。
[0166]
本发明的进一步的实施例是(xv)根据(i)至(xiv)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0167]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0168]
r2为c
1-6
烷基；
[0169]r3a
为c
1-6
烷基；
[0170]r3b
为h；
[0171]
r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基；
[0172]
q为ch或n；
[0173]
z为ch；
[0174]
y为ch；
[0175]
或其药学上可接受的盐。
[0176]
本发明的进一步的实施例是(xvi)根据(i)至(xv)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0177]
r1为h或甲基；
[0178]
r2为甲基；
[0179]r3a
为甲基；
[0180]r3b
为h；
[0181]
r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基甲氧基；
[0182]
q为ch或n；
[0183]
z为ch；
[0184]
y为ch；
[0185]
或其药学上可接受的盐。
[0186]
本发明涉及(i’)，其是式(i)的化合物，
[0187][0188]
其中
[0189]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0190]
r2为c
1-6
烷基；
[0191]r3a
为h或c
1-6
烷基；
[0192]r3b
为h或c
1-6
烷基；
[0193]
r4为(c
1-6
烷基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0194]
(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓基，
[0195]
(甲酰基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0196]
1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基，
[0197]
2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0198]
2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0199]
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基，
[0200]
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基，
[0201]
3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基，
[0202]
3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0203]
3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0204]
3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基，
[0205]
4-氧代-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯基，
[0206]
4-哌啶基氮杂环丁烷基氧基，
[0207]
5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基，
[0208]
7-氧代-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷基，
[0209]
哌嗪基，其未被取代或被(c
1-6
烷基)2氨基c
1-6
烷基、1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷基咪唑基、羟基c
1-6
烷基、吗啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯烷基羰基或吡咯烷基磺酰基取代，
[0210]
哌嗪基c
1-6
烷氧基，
[0211]
哌啶基，其被独立地选自氨基(c
1-6
烷氧基)哌啶基、氨基(c
1-6
烷氧基)吡咯烷基、氨基氮杂环丁烷基、羟基、((c
1-6
烷基)2氨基)c
1-6
烷基和哌嗪基的取代基取代一次或两次，
[0212]
吡咯烷基，其被独立地选自氨基、羟基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基的取代基取代两次或三次；
[0213]
q、z和y独立地选自ch和n；
[0214]
或其药学上可接受的盐。
[0215]
本发明的另一个实施例是(ii')具有式(ia)的化合物，
[0216][0217]
其中
[0218]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0219]
r2为c
1-6
烷基；
[0220]r3a
为h或c
1-6
烷基；
[0221]r3b
为h或c
1-6
烷基；
[0222]
r4为(c
1-6
烷基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0223]
(c
1-6
烷基)2哌嗪-4-鎓基，
[0224]
(甲酰基哌嗪基)c
1-6
烷氧基，
[0225]
1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基氧基，
[0226]
2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0227]
2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0228]
3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基，
[0229]
3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基，
[0230]
3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基，
[0231]
3-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷基，
[0232]
3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基，
[0233]
3-氧代-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基，
吡咯烷-1-基、4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、3-(羟基甲基)哌嗪-1-基或哌嗪-2-基甲氧基。
[0248]
本发明的进一步的实施例是(vii’)根据(i’)至(vi’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基。
[0249]
本发明的进一步的实施例是(viii’)根据(i’)至(vii’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基甲氧基。
[0250]
本发明的进一步的实施例是(ix’)根据(i’)至(viii’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3b
为h。
[0251]
本发明的进一步的实施例是(x’)根据(i’)至(ix’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3a
为c
1-6
烷基。
[0252]
本发明的进一步的实施例是(xi’)根据(i’)至(x’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r
3a
为甲基。
[0253]
本发明的进一步的实施例是(xii’)根据(i’)至(xi’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物或其药学上可接受的盐，其中r2为甲基。
[0254]
本发明的进一步的实施例是(xiii’)根据(i’)至(xii’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0255]
r1为h或c
1-6
烷基；
[0256]
r2为c
1-6
烷基；
[0257]r3a
为c
1-6
烷基；
[0258]r3b
为h；
[0259]
r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基、4-氨基-3-羟基-吡咯烷-1-基、3-氨基氮杂环丁烷-1-基-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、(羟基c
1-6
烷基)哌嗪-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基；
[0260]
q为ch；
[0261]
z为ch；
[0262]
y为ch；
[0263]
或其药学上可接受的盐。
[0264]
本发明的进一步的实施例是(xiv’)根据(i’)至(xiii’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0265]
r1为h或甲基；
[0266]
r2为甲基；
[0267]r3a
为甲基；
[0268]r3b
为h；
[0269]
r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基、3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基、4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-1-哌啶基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基、3-(羟基甲基)哌嗪-1-基或哌嗪-2-基甲氧基；
[0270]
q为ch；
[0271]
z为ch；
[0272]
y为ch；
[0273]
或其药学上可接受的盐。
[0274]
本发明的进一步的实施例是(xv’)根据(i’)至(xiv’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0275]
r1为h；
[0276]
r2为c
1-6
烷基；
[0277]r3a
为c
1-6
烷基；
[0278]r3b
为h；
[0279]
r4为3-氨基-4-c
1-6
烷氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基c
1-6
烷氧基；
[0280]
q为ch；
[0281]
z为ch；
[0282]
y为ch；
[0283]
或其药学上可接受的盐。
[0284]
本发明的进一步的实施例是(xvi’)根据(i’)至(xv’)中任一项所述的式(i)或(ia)化合物，其中
[0285]
r1为h；
[0286]
r2为甲基；
[0287]r3a
为甲基；
[0288]r3b
为h；
[0289]
r4为3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基或哌嗪-2-基甲氧基；
[0290]
q为ch；
[0291]
z为ch；
[0292]
y为ch；
[0293]
或其药学上可接受的盐。
[0294]
本发明的另一个实施例为式(i)或(ia)化合物，其选自以下化合物：
[0295]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0296]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0297]
2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0298]
3-[4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
[0299]
3-[2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
[0300]
3-[4,4-二甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1,3-二氢异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
[0301]
4-哌啶基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮；
[0302]
吡咯烷-2-基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮；
[0303]
7-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶；
[0304]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0305]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]吡咯烷-3-胺；
[0306]
吗啉-2-基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮；
[0307]
4-[(二甲基氨基)甲基]-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌啶-4-醇；
[0308]
4-[(二甲基氨基)甲基]-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌啶-4-醇；
[0309]
(4r)-4-甲基-6-(3-甲基哌嗪-1-基)-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0310]
2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-酮；
[0311]
顺式-5-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-4-酮；
[0312]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2r)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0313]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2s)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0314]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-胺；
[0315]
2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
[0316]
(4r)-2-(1-乙基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0317]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-胺；
[0318]
(8ar)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-酮；
[0319]
(8as)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-酮；
[0320]
3-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮；
[0321]
(4r)-6-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]
吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0322]
1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]氮杂环丁烷-3-胺；
[0323]
反式-4-氨基-1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]哌啶-3-醇；
[0324]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(2r)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0325]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(2s)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0326]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(4-吡咯烷-3-基磺酰基哌嗪-1-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0327]
6-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-酮；
[0328]
3-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-酮；
[0329]
(3r,4r)-4-氨基-3-甲基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇；
[0330]
(4r)-4-甲基-6-[4-[(1-甲基咪唑-4-基)甲基]哌嗪-1-基]-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0331]
n,n-二甲基-2-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]乙胺；
[0332]
(4r)-6-(4,4-二甲基哌嗪-4-鎓-1-基)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉氯化物；
[0333]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(2-哌嗪-1-基乙氧基)-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0334]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0335]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(7r,8as)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0336]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2r)-1-甲基哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0337]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2s)-1-甲基哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉；
[0338]
(2s)-2-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲醛；
[0339]
反式-4-氨基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇；
[0340]
反式-4-氨基-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇；
7,8-二氢-5h-1,6-萘啶；
[0361]
2-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
[0362]
(3s,4r)-4-氟-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]吡咯烷-3-胺；
[0363]
8-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
[0364]
(8r)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-2-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶；
[0365]
(3s,4s)-3-甲氧基-1-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]哌啶-4-胺；
[0366]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶；
[0367]
(4r)-6-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶；
[0368]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(7r,8as)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶；
[0369]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-(2-哌嗪-1-基乙氧基)-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶；
[0370]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]吡咯烷-3-胺；
[0371]
2-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
[0372]
(3r,4r)-3-氟-1-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]哌啶-4-胺；和
[0373]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[(3r)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基]-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶；
[0374]
或其药学上可接受的盐。
[0375]
合成
[0376]
本发明的化合物可以通过任何常规方法制备。在以下方案和示例中提供了合成这些化合物及其原料的合适方法。除非另有说明，否则所有取代基，特别是r1、r2、r
3a
、r
3b
、r4、q、z和y如上文所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号均具有有机化学领域普通技术人员众所周知的含义。
[0377]
制备式(i)或式(ia)的化合物的一般合成路线如下所示。
[0378]
方案1
[0379][0380]
其中x为卤素；r5为r4或具有保护基团的r4，其中保护基团可以选自boc、cbz、酰基、磺酰基、烷基或芳基。
[0381]
式(ii)化合物与式(iii)化合物的偶联可以通过在高温，在碱(诸如dipea或csf)的存在下直接偶联来实现，以得到式(iv)化合物。随后，式(iv)化合物与r
4-h的偶联可以通过在buchwald-hartwig c-n或c-o键形成条件下(参考：acc.chem.res.1998,31,805-818；chem.rev.2016,116,12564-12649；topics in current chemistry,2002,219,131-209；以及其中引用的参考文献)使用催化剂(诸如ruphos pd g2、[pd(烯丙基)cl]2/jackiephos、pd[p(o-tol)3]2/cypf-t-bu)和碱(诸如cs2co3或t-buona)直接偶联来实现，以提供式(i)化合物。在一些实施例中，式(iv)化合物和r
5-h的偶联可以得到含有源自r
5-h的保护基团(例如boc或cbz)的产物，该保护基团将在获得最终的式(i)化合物之前被除去。并且在一些其他实施例中，具有末端仲胺的式(i)化合物被进一步引入酰基基团、磺酰基基团、烷基基团或芳基基团以得到最终的式(i)化合物。
[0382]
本发明的化合物可以以非对映体或对映体的混合物形式获得，它们可以通过本领域熟知的方法分离，例如，(手性)hplc或sfc。
[0383]
本发明还涉及制备式(i)或式(ia)的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0384]
a)使式(iv)化合物，
[0385][0386]
与r
5-h在催化剂和碱存在下形成buchwald-hartwig c-n或c-o键；
[0387]
其中
[0388]
在步骤a)中，催化剂可以为例如ruphos pd g2、[pd(烯丙基)cl]2/jackiephos、pd[p(o-tol)3]2/cypf-t-bu；碱可以为例如cs2co3或t-buona；
[0389]
根据上述方法生产的式(i)或(ia)的化合物也是本发明的目的。
[0390]
适应症和治疗方法
[0391]
本发明提供了可以用作tlr7和/或tlr8和/或tlr9拮抗剂的化合物，其抑制通过tlr7和/或tlr8和/或tlr9通路的活化以及相应的下游生物学事件，包括但不限于通过产生所有类型的细胞因子和各种形式的自身抗体介导的先天性和适应性免疫应答。因此，本发明的化合物可用于在表达此类受体的所有类型的细胞中阻断tlr7和/或tlr8和/或tlr9，所述细胞包括但不限于浆细胞样树突细胞、b细胞、t细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、角质形成细胞、上皮细胞。如此，该化合物可用作系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的治疗剂或预防剂。
[0392]
本发明提供了治疗或预防有需要的患者的系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法。
[0393]
另一实施例包括治疗或预防需要这种治疗的哺乳动物中系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的式(i)的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐。
附图说明
[0394]
图1实例1与蛋白质tlr8的共晶结构(仅示出了实例1的结构)，该共晶结构用于确定实例1和中间体a的手性构型。
[0395]
实例
[0396]
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
[0397]
缩写
[0398]
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
[0399]
本文使用的缩写如下：
[0400]
acn：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙腈
[0401]
binap:
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1,1'-联二萘-2,2'-二基)双(二苯基膦)
[0402]
boc2o：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二碳酸二叔丁酯
[0403]
cbzcl：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氯甲酸苄酯
[0404]
cypf-t-bu：
ꢀꢀꢀꢀ
[(r)-1-[(s)-2-(二环己基膦基)二茂铁基]乙基]二叔丁基膦
[0405]
dce：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯乙烷
[0406]
dea：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二乙胺
[0407]
dipea:
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n-二异丙基乙胺
[0408]
dma:
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基乙酰胺
[0409]
dmfdma:
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛
[0410]
dmso：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基亚砜
[0411]
edta：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸
[0412]
etoac or ea：
ꢀꢀ
乙酸乙酯
[0413]
fa：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲酸
[0414]
hlm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
人肝微粒体
[0415]
ic
50
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
半抑制浓度
[0416]
jackiephos：
ꢀꢀꢀ
双(3,5-双(三氟甲基)苯基)(2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基联苯-2-基)膦
[0417]
lcms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱－质谱
[0418]
dmem：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
dulbecco改良eagle培养基
[0419]
ms：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
质谱
[0420]
[pd(烯丙基)cl]2：氯化烯丙基钯(ii)二聚体
[0421]
pd[p(o-tol)3]2：双(三邻甲苯基膦)钯
[0422]
pe：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
石油醚
[0423]
prep-hplc：
ꢀꢀꢀꢀ
制备型高效液相色谱
[0424]
rt：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[0425]
ruphos pd g2： 氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(ii)第二代
[0426]
sfc：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
超临界流体色谱
[0427]
tea：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三甲胺
[0428]
tfa：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸
[0429]
tf2o：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟甲磺酸酐
[0430]
v/v：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
体积比
[0431]
一般实验条件
[0432]
使用以下仪器之一通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)biotage sp1系统和quad 12/25cartridge模块。ii)isco combi-flash色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)粒径：40-60μm；ii)cas登录号：硅胶：63231-67-4，粒径：47-60微米硅胶；iii)青岛海洋化学有限公司的zcx，孔：200-300或300-400。
[0433]
中间体和最终化合物在反相色谱柱上通过制备型hplc纯化，反相色谱柱使用xbridge
tm prep-c18(5μm,obdtm 30
×
100mm)色谱柱，sunfire
tm prep-c18(5μm,obd
tm 30
×
100mm)色谱柱，phenomenex synergi-c18(10μm,25
×
150mm)或phenomenex gemini-c18(10μm,25
×
150mm)。waters autop纯化系统(样品管理器2767，泵2525，检测器：micromass zq和uv 2487，溶剂系统：乙腈和0.1％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.1％fa在水中的溶液，或乙腈和0.1％tfa在水中的溶液)。或gilson-281纯化系统(泵322，检测器：uv 156，溶剂系统：乙腈和0.05％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.225％fa在水中的溶液；乙腈和0.05％hcl在水中的溶液；乙腈和0.075％tfa在水中的溶液；或乙腈和水)。
[0434]
为了进行sfc手性分离，中间体分离通过手性柱(daicel chiralpak ic,5μm,30
×
250mm)、as(10μm,30
×
250mm)或ad(10μm,30
×
250mm)，使用mettler toledo multigram iii系统sfc、waters 80q制备型sfc或thar 80制备型sfc，溶剂系统：co2和ipa(0.5％tea的ipa溶液)或co2和meoh(0.1％nh3·
h2o的meoh溶液)，背压100bar，在254或220nm处检测uv。
[0435]
使用lc/ms(waters
tm alliance 2795-micromass zq、shimadzu alliance 2020-micromass zq或agilent alliance 6110-micromass zq)获得化合物的lc/ms光谱，lc/ms条件如下(运行时间3或1.5分钟)：
[0436]
酸性条件i：a：0.1％tfa在h2o中的溶液；b：0.1％tfa在乙腈中的溶液；
[0437]
酸性条件ii：a：0.0375％tfa在h2o中的溶液；b：0.01875％tfa在乙腈中的溶液；
[0438]
碱性条件i：a：0.1％nh3·
h2o在h2o中的溶液；b：乙腈；
[0439]
碱性条件ii：a：0.025％nh3·
h2o在h2o中的溶液；b：乙腈；
[0440]
中性条件：a：h2o；b：乙腈。
[0441]
质谱(ms)：通常仅报告表示母体质量的离子，除非另有说明，否则所引用的质量离子为正质量离子(mh)
+
。
[0442]
使用bruker avance 400mhz获得nmr谱。
[0443]
微波辅助反应在biotage initiator sixty微波合成仪中进行。所有涉及对空气敏感的试剂的反应均在氩气或氮气气氛下进行。除非另有说明，否则试剂按原样购自商业供应商，未经进一步纯化。
[0444]
制备实例
[0445]
以下实例旨在说明本发明的含义，但绝不代表对本发明含义的限制：
[0446]
中间体a
[0447]
(4r)-6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
[0448][0449]
(4s)-6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉
[0450][0451]
将标题化合物与6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(中间体a和b的混合物，cas：73037-81-7，供应商:bepharm)通过手性sfc(梯度：在co2中的20％异丙醇(0.1％nh3h2o)，色谱柱：ig，250
×
20mm i.d.，5μm)分离。中间体a的构型通过实例1与蛋白质tlr8的共晶结构(图1)得到了证实。
[0452]
中间体c
[0453]
(8s)-2-氯-8-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶
[0454][0455]
根据以下方案制备标题化合物：
[0456][0457]
步骤1：制备6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶(化合物c2)
[0458]
将2-氯-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶盐酸盐(化合物c1，cas：766545-20-4，供应商:bepharm，40.0g，195.0mmol)悬浮在dcm(500ml)中。然后加入三乙胺(27.0ml，195.0mmol)并用乙酸(11.7g，195.0mmol)将ph调节至5。将苯甲醛(23.8ml，234.0mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(62.0g，292.5mmol)加入混合物中，将该混合物在25℃搅拌16小时。将所得溶液用5％nahco3水溶液(500ml)和盐水(300ml)洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(0％至20％)的梯度洗脱，以得到化合物c2(40.0g)，为淡黄色固体。ms：计算259(mh
+
)，测量259(mh
+
)。
[0459]
步骤2：制备6-苄基-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶(化合物c3)
[0460]
在-70℃在氮气下向6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶(化合物c2，35.0g，135.3mmol)在thf(350ml)中的溶液中加入二异丙基氨基锂(lda)在thf中的溶液(101.5ml，202.9mmol)，并将混合物在-70℃搅拌1小时。然后在-70℃将碘甲烷(11.0ml，175.9mmol)滴加到混合物中，在-70℃继续搅拌3小时。通过加入饱和氯化铵溶液(350ml)猝灭反应，用ea(150ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(10％至30％)的梯度洗脱，以得到化合物c3(23.0g)，为黄色油状物。ms：计算273(mh
+
)，测量273(mh
+
)。
[0461]
步骤3：制备2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物c4)
[0462]
向6-苄基-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶(化合物c3，23.0g，84.3mmol)在甲苯(115ml)中的溶液中加入1-氯乙基氯甲酸酯(11.0ml，101.2mmol)。将混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩以除去溶剂并将残余物溶解在甲醇(230ml)中，并且将混合物在80℃搅拌2小时。冷却至室温后，将混合物加入到二异丙醚(30ml)中。所得固体通过过滤被收集并用二异丙醚洗涤。
[0463]
将获得的固体和二碳酸二叔丁酯(23.9g，109.6mmol)在thf(115ml)和氢氧化钠水
溶液(1n，114.7ml，114.7mmol)中的混合物在25℃搅拌16小时。在减压下浓缩反应混合物以除去thf，用ea(100ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(0％至20％)的梯度洗脱，以得到化合物c4(20.7g)，为白色固体。ms：计算283(mh
+
)，测量283(mh
+
)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ＝7.36(d,j＝8.19hz,1h),7.15(d,j＝8.07hz,1h),4.83-4.36(m,2h),3.76-3.53(m,2h),3.06(br d,j＝4.52hz,1h),1.50(s,9h),1.33(d,j＝6.97hz,3h)。
[0464]
步骤4：制备(8s)-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物c5)
[0465]
将化合物c5(较快洗脱的)与2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物c4)通过手性sfc(梯度：在co2中的10％乙醇(0.1％nh3h2o)，色谱柱：ad，250
×
20mm i.d.，5μm)分离。ms：计算283(mh
+
)，测量283(mh
+
)。
[0466]
步骤5：制备(8s)-2-氯-8-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶(中间体c)
[0467]
向(8s)-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物c5，460mg，1.6mmol)在dcm(2.5ml)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(5ml)。将反应混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩。残余物直接用于下一步反应。ms：计算183(mh
+
)，测量183(mh
+
)。
[0468]
中间体d
[0469]
(8r)-2-氯-8-甲基-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶
[0470][0471]
根据以下方案制备标题化合物：
[0472][0473]
类似于中间体c的制备，通过使用(8r)-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物d1，与化合物c4分离的另一异构体(较慢洗脱的))代替(8s)-2-氯-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-甲酸叔丁酯(化合物c5)来制备标题化合物。获得为黄色油状物的中间体d并直接用于下一步反应。ms：计算183(mh
+
)，测量183(mh
+
)。
[0474]
中间体e
[0475]
(4r)-6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢-2,7-萘啶
[0476][0477]
根据以下方案制备标题化合物：
[0478][0479]
步骤1：制备n-[(4,6-二氯-3-吡啶基)甲基]-1-苯基-甲胺(化合物e2)
[0480]
在0℃向4,6-二氯吡啶-3-甲醛(化合物e1，cas：1060811-62-2，供应商:pharmablock，30.0g，170.5mmol)在甲醇(150ml)中的溶液中加入苄胺(28.0ml，255.7mmol)和乙酸(5.1g，85.2mmol)。在氮气气氛下在20℃将混合物搅拌3小时，并且随后再次冷却至0℃。将氰基硼氢化钠(16.1g，255.7mmol)加入溶液中。反应升温至20℃并在氮气下在20℃再搅拌15小时。然后将反应混合物用饱和nahco3水溶液淬灭，并浓缩。将混合物用ea(500ml)萃取三次。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到化合物e2(50.0g)，
为淡黄色油状物，该化合物直接用于下一步而不经进一步纯化。ms计算值267(mh
+
)；实测值267(mh
+
)。
[0481]
步骤2：制备3-[苄基-[(4,6-二氯-3-吡啶基)甲基]氨基]-3-氧代-丙酸甲酯(化合物e3)
[0482]
将n-[(4,6-二氯-3-吡啶基)甲基]-1-苯基-甲胺(化合物e2，30.0g，112.3mmol)在dcm(450ml)中的溶液冷却至0℃。在0℃将三乙基胺(100ml，561.5mmol)加入溶液中，随后滴加甲基丙二酰氯(15.6ml，146.0mmol)在dcm(50ml)中的溶液。允许反应升温至室温，并在氮气气氛下在25℃搅拌16小时。将混合物加入冰水(2000ml)中并用dcm(1000ml)萃取三次。将有机层用水、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(0％至25％)的梯度洗脱，以得到化合物e3(134.8g)，为淡黄色固体。ms：计算367(mh
+
)，测量367(mh
+
)。
[0483]
步骤3：制备2-苄基-6-氯-3-氧代-1,4-二氢-2,7-萘啶-4-甲酸甲酯(化合物e4)
[0484]
在0℃向3-[苄基-[(4,6-二氯-3-吡啶基)甲基]氨基]-3-氧代-丙酸甲酯(化合物e3，28.0g，73.4mmol)在dmf(800ml)中的经搅拌溶液中加入nah(7.3g，183.6mmol)(矿物油中60％w/w)。然后将所得混合物升温至120℃并在120℃在氮气气氛下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，然后在冰水浴下倒入饱和nh4cl水溶液(800ml)中。将混合物用ea(1500ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩，以得到化合物e4(20.0g)，为棕色固体。ms：计算331(mh
+
)，测量331(mh
+
)。
[0485]
步骤4：制备2-苄基-6-氯-4-甲基-3-氧代-1h-2,7-萘啶-4-甲酸甲酯(化合物e5)
[0486]
向2-苄基-6-氯-3-氧代-1,4-二氢-2,7-萘啶-4-甲酸甲酯(化合物e4，55.0g，166.3mmol)在acn(825ml)中的溶液中加入k2co3(57.5g，415.7mmol)。在20℃，将该混合物搅拌1小时。然后将mei(14.0ml，216.2mmol)加入混合物中并将反应物在70℃搅拌15小时。冷却至室温后，通过加入nh3·
h2o(300ml)来淬灭反应并将反应混合物在减压下浓缩以除去溶剂，用ea(500ml)萃取三次。将有机层经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(20％至35％)的梯度洗脱，以得到化合物e5(25.0g)，为淡棕色固体。ms：计算345(mh
+
)，测量345(mh
+
)。
[0487]
步骤5：制备2-苄基-6-氯-4-甲基-1,4-二氢-2,7-萘啶-3-酮(化合物e6)
[0488]
在100℃将2-苄基-6-氯-4-甲基-3-氧代-1h-2,7-萘啶-4-甲酸甲酯(化合物e5，10.0g，29.0mmol)在浓hcl(100.0ml)中的混合物加热15分钟。将反应混合物冷却并在5℃用饱和nahco3将ph调节至8至9。将混合物用ea(800ml)萃取三次。将有机层用水、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(5％至50％)的梯度洗脱，以得到化合物e6(22.0g)，为棕色油状物。ms：计算287(mh
+
)，测量287(mh
+
)。
[0489]
步骤6：制备2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e7)
[0490]
将2-苄基-6-氯-4-甲基-1,4-二氢-2,7-萘啶-3-酮(化合物e6，5.0g，17.4mmol)装入三颈烧瓶中并用氮气吹扫。在0℃经由插管将bh3·
thf(150.0ml，150mmol)(在thf中1m)滴加到烧瓶中。将反应物在20℃搅拌30分钟，并且随后在70℃搅拌15小时。冷却至室温后，将甲醇(100ml)滴加到反应溶液中。将混合物在20℃搅拌30分钟，然后滴加1n hcl(50ml)。将混合物在20℃搅拌30分钟并在70℃加热2小时，然后浓缩以除去有机溶剂。将残余物冷却至0℃并倒入冰水浴下的饱和nahco3水溶液中。将混合物用ea(50ml)萃取三次。有机层经
na2so4干燥、过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以得到化合物e7(2.0g)，为淡黄色固体。ms：计算273(mh
+
)，测量273(mh
+
)。
[0491]
步骤7：制备(4s)-2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e8)和(4r)-2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e9)
[0492]
将标题化合物与2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e7，6.4g)通过手性sfc(梯度：在co2中的5％至40％甲醇(0.05％dea)，色谱柱：chiralpak ad-3，50
×
4.6mm i.d.，3μm)分离。获得为淡黄色固体的(4s)-2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e8，较快洗脱的，2.8g)和(4r)-2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e9，较慢洗脱的，2.8g)。ms：计算273(mh
+
)，测量273(mh
+
)。
[0493]
步骤8：制备(4r)-6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢-2,7-萘啶(中间体e)
[0494]
在0℃向(4r)-2-苄基-6-氯-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶(化合物e9，2.8g，10.3mmol)和diea(5.4ml，30.9mmol)在dce(60ml)中的溶液中滴加1-氯乙基氯甲酸酯(4.4ml，40.7mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟，在1小时内升温至25℃，然后在70℃加热2小时。除去溶剂并加入甲醇(30ml)。将反应混合物在70℃加热2小时，然后浓缩，将残余物溶解在ea(50ml)和饱和nahco3水溶液(60ml)中。将混合物用ea(40ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥并且浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(0％至100％)和meoh/dcm(10％)的梯度洗脱，以得到中间体e(1.2g)，为淡棕色油状物。ms：计算183(mh
+
)，测量183(mh
+
)。
[0495]
实例1
[0496]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0497][0498]
根据以下方案制备标题化合物：
nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.5hz,1h),7.31(d,j＝8.4hz,1h),7.01(d,j＝2.2hz,1h),6.98(d,j＝8.6hz,1h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.19-5.04(m,1h),5.00-4.95(m,1h),4.09(s,3h),4.04(br dd,j＝4.6,16.3hz,1h),3.89(br dd,j＝6.7,12.2hz,1h),3.49-3.36(m,8h),3.34-3.28(m,1h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。立体中心的构型通过与蛋白质tlr8的共晶结构得到了证实。
[0506]
实例2
[0507]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0508][0509]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a来制备标题化合物。获得实例2(15mg)，为黄色固体。ms：计算377(mh
+
)，测量377(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.48(br s,1h),7.30(d,j＝8.2hz,1h),7.02-6.96(m,2h),6.71(s,1h),5.19-5.01(m,1h),5.01-4.91(m,1h),4.08(s,3h),4.07-3.97(m,1h),3.93-3.81(m,1h),3.47-3.42(m,4h),3.42-3.36(m,4h),3.29-3.24(m,1h),2.66(s,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0510]
实例3
[0511]
2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0512][0513]
类似于实例1的制备，通过使用6-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉(cas：226942-29-6，供应商:shuya)代替中间体a并在snar反应中用dipea代替csf来制备标题化合物。获得实例3
(35mg)，为黄色固体。ms：计算349(mh
+
)，测量349(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.51(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),7.30(d,j＝8.3hz,1h),7.02-6.95(m,2h),6.81(d,j＝7.3hz,1h),5.01-4.94(m,2h),4.08(s,3h),4.07-4.03(m,2h),3.46-3.41(m,4h),3.40-3.36(m,4h),3.33(br s,1h),3.17-3.11(m,2h)。
[0514]
实例4
[0515]
3-[4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
[0516][0517]
类似于实例1的制备，通过使用6-溴-4-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(cas：2227205-04-9，供应商:pharmablock)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(cas：173405-78-2，供应商:pharmablock)代替中间体a和1c来制备标题化合物。获得了为黄色胶状物的实例4(12mg)。ms：计算431(mh
+
)，测量431(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.58(s,1h),8.09(d,j＝7.5hz,1h),7.48-7.41(m,1h),7.40-7.26(m,2h),6.88(d,j＝7.5hz,1h),5.25-5.14(m,1h),5.07-4.97(m,1h),4.09(s,3h),4.07(br d,j＝6.7hz,1h),3.90(dd,j＝7.0,12.2hz,1h),3.55-3.42(m,4h),3.42-3.34(m,1h),3.27-3.21(m,4h),1.97-1.80(m,8h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0518]
实例5
[0519]
3-[2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
[0520][0521]
类似于实例1的制备，通过使用6-氯-4-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(cas：73037-81-7，供应商:bepharm)代替中间体a、4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a以及3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(cas：173405-78-2，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例5(20mg)，为黄色固体。ms：计算445(mh
+
)，测量445(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.50(s,1h),7.52-7.46(m,1h),7.46-7.43(m,1h),7.41-7.35(m,1h),6.74(s,1h),5.24-5.12(m,1h),5.07-4.96(m,1h),4.13-4.01(m,4h),3.93-3.82(m,1h),3.59-3.50(m,4h),3.39-3.33(m,1h),3.27-3.19(m,4h),2.67(s,3h),2.00-1.93(m,4h),1.92-1.81(m,4h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0522]
实例6
[0523]
3-[4,4-二甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1,3-二氢异喹啉-6-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
[0524][0525]
类似于实例1的制备，通过使用6-溴-4,4-二甲基-2,3-二氢-1h-异喹啉盐酸盐(cas：1203684-61-0，供应商:bepharm)代替中间体a和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(cas：173405-78-2，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实
例6(19mg)，为黄色固体。ms：计算445(mh
+
)，测量445(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.66(s,1h),8.14(d,j＝7.5hz,1h),7.71(d,j＝2.0hz,1h),7.61-7.54(m,2h),6.98(d,j＝7.5hz,1h),5.28(s,2h),4.13(s,3h),3.97(s,2h),3.71-3.59(m,4h),3.31-3.23(m,4h),2.05(br t,j＝5.6hz,4h),1.96-1.89(m,4h),1.48(s,6h)。
[0526]
实例7
[0527]
4-哌啶基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮
[0528][0529]
根据以下方案制备标题化合物：
[0530][0531]
步骤1：制备4-哌啶基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮(实例7)
[0532]
向烧瓶中加入(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉盐酸盐(实例1的hcl盐，50mg，125μmol)、1-叔丁氧基羰基哌啶-4-甲酸(化合物7a，cas：84358-13-4，供应商:accela，43mg，188μmol)、edci(36mg，188μmol)、dipea(88μl，501μmol)和dcm(5ml)。将反应混合物在rt搅拌过夜。浓缩后，将混合物通过快速色谱
柱纯化，以ea(具有10％meoh)/pe(0％至70％)的梯度洗脱，以得到黄色油状物，将其再溶于dcm(5ml)和tfa(2ml)中并在室温搅拌2小时。浓缩后，将混合物通过反相快速色谱柱纯化，以acn/水(具有0.05％tfa)(0％至30％)的梯度洗脱，以得到实例7(30mg)，为黄色固体。ms：计算474(mh
+
)，测量474(mh
+
)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.27(d,j＝8.2hz,1h),6.99-6.93(m,2h),6.85(d,j＝7.3hz,1h),5.11(br dd,j＝1.3,16.7hz,1h),4.98-4.90(m,1h),4.08(s,3h),4.07-4.01(m,1h),3.88(br dd,j＝7.2,12.7hz,1h),3.81-3.73(m,4h),3.49-3.42(m,2h),3.26-3.17(m,4h),3.17-3.05(m,4h),2.02-1.89(m,4h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0533]
实例8
[0534]
吡咯烷-2-基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮
[0535][0536]
类似于实例7的制备，通过使用1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-甲酸(cas：59433-50-0，供应商:accela)代替1-叔丁氧基羰基哌啶-4-甲酸(化合物7a)来制备标题化合物。获得实例8(30mg)，为黄色固体。ms：计算460(mh
+
)，测量460(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.28(d,j＝8.6hz,1h),7.00-6.94(m,2h),6.84(d,j＝7.5hz,1h),5.11(br d,j＝15.8hz,1h),4.97-4.92(m,1h),4.70(dd,j＝7.5,8.6hz,1h),4.08(s,3h),4.05-4.02(m,1h),3.88(br dd,j＝6.9,12.5hz,1h),3.81(td,j＝5.2,8.0hz,2h),3.75-3.65(m,2h),3.50-3.40(m,1h),3.40-3.33(m,2h),3.28-3.22(m,4h),2.58-2.50(m,1h),2.15-2.04(m,2h),2.04-1.95(m,1h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0537]
实例9
[0538]
7-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶
[0539][0540]
根据以下方案制备标题化合物：
[0541][0542]
步骤1：制备7-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]-1,2,3,4-四氢-2,6-萘啶(实例9)
[0543]
将(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉盐酸盐(实例1的hcl盐，50mg，125μmol)、7-氯-3,4-二氢-1h-2,6-萘啶-2-甲酸叔丁酯(51mg，188μmol)、ruphos pd g2(10mg，13μmol)和cs2co3(163mg，501μmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的混合物充入n2，并将混合物加热至110℃过夜。冷却至室温后，将固体滤出并用ea(10ml)洗涤两次。将合并的有机溶剂浓缩并通过快速色谱柱纯化，以ea(具有10％meoh)/pe(0％至70％)的梯度洗脱，以得到黄色油状物，将其再溶于dcm(5ml)和tfa(2ml)中并在室温下搅拌2小时。浓缩后，将混合物通过反相快速色谱柱纯化，以acn/水(具有0.05％tfa)(0％至30％)的梯度洗脱，以得到实例9(51mg)，为黄色固体。ms：计算495(mh
+
)，测量495(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.5hz,1h),8.03(s,1h),7.30(d,j＝8.3hz,1h),7.17(br s,1h),7.04-6.97(m,2h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.20-5.05(m,
1h),5.01-4.94(m,1h),4.46(s,2h),4.09(s,3h),4.07-3.98(m,1h),3.89(br dd,j＝6.7,12.0hz,1h),3.85-3.73(m,4h),3.53(t,j＝6.3hz,2h),3.45-3.39(m,4h),3.37-3.33(m,1h),3.07(t,j＝6.2hz,2h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0544]
实例10
[0545]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0546][0547]
类似于实例1的制备，通过使用4-(4-哌啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(cas：205059-24-1，供应商:bepharm)代替化合物1c来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例10(5mg)。ms：计算446(mh
+
)，测量446(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.27(s,1h),8.09(d,j＝5.9hz,1h),7.17(d,j＝8.2hz,1h),6.91(s,2h),6.45(d,j＝6.0hz,1h),4.82(br s,1h),4.73-4.61(m,1h),3.99(s,3h),3.87-3.72(m,4h),3.22-3.13(m,1h),2.93(br t,j＝4.9hz,4h),2.76-2.60(m,6h),2.46-2.34(m,1h),2.00(br d,j＝12.3hz,2h),1.73-1.60(m,2h),1.38(d,j＝7.0hz,3h)。
[0548]
实例11
[0549]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]吡咯烷-3-胺
[0550][0551]
根据以下方案制备标题化合物：
[0552][0553]
步骤1：制备4-[(3r,4r)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]哌啶-1-甲酸苄酯(化合物11c)
[0554]
向4-氧代哌啶-1-甲酸苄酯(化合物11a，cas：19099-93-5，供应商:accela，270mg，1.16mmol)在乙醇(15ml)中的溶液加入n-[(3r,4r)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11b，cas：1932066-52-8，供应商:pharmablock，250mg，1.16mmol)和乙酸(33μl，
557μmol)。将混合物在50℃搅拌1小时。然后加入nabh3cn(cas：25895-60-7，供应商:accela，145mg，2.31mmol)。将混合物在50℃搅拌过夜。冷却至室温后，通过加入饱和nahco3(10ml)水溶液猝灭反应。将混合物通过ea(10ml)萃取三次，并将有机相用盐水(20ml)洗涤两次，经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以得到化合物11c(160mg)。ms：计算434(mh
+
)，测量434(mh
+
)。
[0555]
步骤2：制备n-[(3r,4r)-4-甲氧基-1-(4-哌啶基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11d)
[0556]
向4-[(3r,4r)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]哌啶-1-甲酸苄酯(化合物11c，160mg，369μmol)在meoh(15ml)中的溶液加入氢氧化钯(20％在碳上，用约50％水浸湿)(cas：12135-22-7，供应商:tci，52mg，369μmol)。将混合物用氢气冲洗并在室温搅拌2小时。将反应混合物过滤并浓缩，以得到粗化合物11d(110mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步。ms：计算300(mh
+
)，测量300(mh
+
)。
[0557]
步骤3：制备(3r,4r)-4-甲氧基-1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]吡咯烷-3-胺(实例11)
[0558]
类似于实例1的制备，通过使用n-[(3r,4r)-4-甲氧基-1-(4-哌啶基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11d)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例11(10mg)，为白色固体。ms：计算476(mh
+
)，测量476(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.26(s,1h),8.09(d,j＝5.9hz,1h),7.16(d,j＝8.2hz,1h),6.94-6.84(m,2h),6.44(d,j＝6.0hz,1h),4.81(s,1h),4.73-4.62(m,1h),3.99(s,3h),3.87-3.64(m,4h),3.58(td,j＝3.2,6.4hz,1h),3.35(s,3h),3.29-3.24(m,1h),3.21-3.13(m,1h),3.07(dd,j＝7.0,9.4hz,1h),2.93(dd,j＝6.5,10.5hz,1h),2.80-2.67(m,3h),2.33(dd,j＝6.1,9.5hz,1h),2.28-2.17(m,1h),2.00(br d,j＝11.9hz,2h),1.62(dt,j＝3.2,11.7hz,2h),1.38(d,j＝6.8hz,3h)。
[0559]
实例12
[0560]
吗啉-2-基-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]甲酮
[0561][0562]
类似于实例7的制备，通过使用4-叔丁氧基羰基吗啉-2-甲酸(cas：189321-66-2，供应商:accela)代替1-叔丁氧基羰基哌啶-4-甲酸(化合物7a)来制备标题化合物。获得实
例12(26mg)，为黄色固体。ms：计算476(mh
+
)，测量476(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.27(d,j＝8.3hz,1h),7.00-6.91(m,2h),6.84(d,j＝7.5hz,1h),5.17-5.03(m,1h),4.96-4.91(m,1h),4.80-4.76(m,1h),4.08(s,3h),4.07-3.82(m,7h),3.77-3.60(m,2h),3.49-3.42(m,1h),3.41-3.35(m,2h),3.35-3.32(m,2h),3.26-3.10(m,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0563]
实例13
[0564]
4-[(二甲基氨基)甲基]-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌啶-4-醇
[0565][0566]
类似于化合物1d的制备，通过使用4-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-4-醇二盐酸盐(cas：695145-47-2，供应商:j&k scientific)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例13(15mg)，为黄色固体。ms：计算435(mh
+
)，测量435(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.09(d,j＝7.5hz,1h),7.39(d,j＝8.4hz,1h),7.28-7.19(m,2h),6.87(d,j＝7.5hz,1h),5.21-5.11(m,1h),4.99(br d,j＝15.5hz,1h),4.13-4.02(m,4h),3.89(dd,j＝7.0,12.4hz,1h),3.62-3.53(m,2h),3.51-3.42(m,2h),3.38-3.32(m,1h),3.30-3.26(m,2h),3.01(s,6h),2.07-1.92(m,4h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0567]
实例14
[0568]
4-[(二甲基氨基)甲基]-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌啶-4-醇
[0569][0570]
类似于化合物1d的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a和4-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-4-醇二盐酸盐(cas：695145-47-2，供应商:j&kscientific)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例14(2mg)，为黄色固体。ms：计算449(mh
+
)，测量449(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.48(br s,1h),7.33-7.25(m,1h),7.11-7.00(m,2h),6.71(s,1h),5.16-5.04(m,1h),5.00-4.93(m,1h),4.11-3.96(m,4h),3.91-3.80(m,1h),3.52(br d,j＝12.5hz,2h),3.25(s,3h),3.00(s,7h),2.66(s,3h),2.00-1.79(m,5h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0571]
实例15
[0572]
(4r)-4-甲基-6-(3-甲基哌嗪-1-基)-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0573][0574]
标题化合物类似于实例1的制备，通过使用2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(cas:120737-78-2，供应商:accela)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例15(10mg)，为黄色固体。ms：计算377(mh
+
)，测量377(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.54(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.30(d,j＝8.4hz,1h),7.03-6.96(m,2h),6.83(d,j＝7.3hz,1h),5.16-5.06(m,1h),4.94(br d,j＝15.7hz,1h),4.08(s,3h),4.05-3.99(m,1h),3.84(br d,j＝15.3hz,3h),3.57-3.46(m,2h),3.35-3.32(m,1h),3.28(br s,1h),3.08-2.98(m,1h),2.81(dd,j＝10.6,13.1hz,1h),1.42(t,j＝6.9hz,6h)。
[0575]
实例16
[0576]
2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-3-酮
[0577][0578]
根据以下方案制备标题化合物：
[0579][0580]
将(4r)-6-氯-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉(化合物1b，70mg，224μmol)、3-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(化合物16a，cas：169206-67-1，供应商:pharmablock，85mg，336μmol)、jackiephos(cas：1160861-60-8，供应商:j&kscientific)(18mg，23μmol)、氯化烯丙基钯(ii)二聚体(cas：12012-95-2，供应商:sigma-aldrich)(9mg，23μmol)和cs2co3(219mg，671μmol)在甲苯(10ml)中的溶液在130℃搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物用ea(含10％meoh)(20ml)稀释。将混合物过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以meoh/dcm(0％至15％)的梯度洗脱，以得到中间体3-氧代-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯，将其与dcm(1ml)和tfa(2ml)混合。将混合物在室温搅拌1小时并随后浓缩。将残余物通过制备型hplc纯化，以得到实例16(60mg)，为淡黄色固体。ms：计算431(mh
+
)，测量431(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.09(d,j＝7.3hz,1h),7.69-7.69(m,1h),7.53-7.51(m,1h),7.41(d,j＝8.3hz,1h),6.86-6.86(m,1h),5.18(d,j＝15.8hz,1h),5.08-4.93(m,1h),4.14-4.04(m,4h),3.95-3.82(m,
3h),3.39-3.31(m,3h),3.29-3.20(m,2h),2.67(s,2h),1.98(br t,j＝5.1hz,4h),1.44(d,j＝6.8hz,3h)。
[0581]
实例17
[0582]
顺式-5-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1,2,3,3a,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-4-酮
[0583][0584]
类似于实例16的制备，通过使用顺式-4-氧代-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-甲酸叔丁酯(cas：1251003-89-0，供应商:pharmablock)代替化合物16a来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例17(12mg)。ms：计算403(mh
+
)，测量403(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.30(s,1h),8.12(d,j＝5.9hz,1h),7.72-7.64(m,1h),7.56-7.48(m,1h),7.37(d,j＝8.4hz,1h),6.49(d,j＝6.0hz,1h),4.96(br s,1h),4.77(s,1h),4.33-4.20(m,1h),4.01(s,3h),3.93-3.86(m,1h),3.85-3.75(m,2h),3.72-3.51(m,4h),3.29-3.22(m,3h),1.42(dd,j＝1.8,6.9hz,3h)。
[0585]
实例18
[0586]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2r)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0587][0588]
根据以下方案制备标题化合物：
[0589][0590]
向(4r)-6-氯-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉(化合物1b，100mg，320μmol)、(r)-3-(羟甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物18a，cas：278788-66-2，供应商：bepharm，104mg，480μmol)、双(三邻甲苯基膦)钯(cas：69861-71-8，供应商：alfa aesar，19mg，26μmol)和[(r)-1-[(s)-2-(二环己基膦基)二茂铁基]乙基]二叔丁基膦(cas：158923-11-6，供应商:sigma-aldrich，15mg，26μmol)在二噁烷(10ml)中的混合物加入naot-bu(138mg，1.44mmol)。将混合物充入氮气2分钟，然后在120℃加热过夜。冷却至室温后，通过加入饱和氯化铵水溶液(235μl，1.6mmol)将混合物淬灭。将混合物搅拌30分钟，并且随后经na2so4干燥并过滤。将滤液浓缩并将残余物通过快速色谱柱纯化，以meoh/dcm(0％至20％)的梯度洗脱，以得到中间体(3r)-3-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯，将其与dcm(1ml)和tfa(2ml)混合。将混合物在室温搅拌1小时并随后浓缩。将残余物通过制备型hplc纯化，以得到实例18(13mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.35(d,j＝8.4hz,1h),7.04(d,j＝2.2hz,1h),6.97(dd,j＝2.5,8.4hz,1h),6.85(d,j＝7.3hz,1h),5.14(d,j＝15.4hz,1h),4.97(d,j＝15.3hz,1h),4.36-4.21(m,2h),4.11-4.04(m,4h),3.94-3.80(m,2h),3.76-3.57(m,3h),3.51-3.32(m,4h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0591]
实例19
[0592]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2s)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3，4-二氢-1h-异喹啉
[0593][0594]
类似于实例18的制备，通过使用(s)-3-(羟甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(cas：
314741-40-7，供应商:bepharm)代替化合物18a来制备标题化合物。获得实例19(32mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.35(d,j＝8.4hz,1h),7.04(s,1h),6.98(br d,j＝8.3hz,1h),6.85(d,j＝7.5hz,1h),5.14(d,j＝15.4hz,1h),4.97(d,j＝15.3hz,1h),4.36-4.20(m,2h),4.12-4.02(m,4h),3.98-3.78(m,2h),3.76-3.58(m,3h),3.48-3.32(m,4h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0595]
实例20
[0596]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-胺
[0597][0598]
类似于实例1的制备，通过使用n-[(3r,4r)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11b)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例20(52mg)，为黄色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.50(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),7.23(d,j＝9.0hz,1h),6.78(d,j＝7.1hz,1h),6.65-6.57(m,2h),5.05(d,j＝15.2hz,1h),4.89(d,j＝15.2hz,1h),4.16-4.10(m,1h),4.07(s,3h),4.00(dd,j＝4.1,12.3hz,1h),3.93-3.81(m,3h),3.67(dd,j＝6.3,10.7hz,1h),3.50-3.44(m,4h),3.34-3.25(m,2h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0599]
实例21
[0600]
2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
[0601][0602]
类似于实例1的制备方法，通过使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(cas：1251005-61-4，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例21(45mg)，为黄色固体。ms：计算405(mh
+
)，测量405(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.53(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.22(d,j＝8.2hz,1h),6.83(d,j＝7.5hz,1h),6.52-6.44(m,2h),5.12-5.01(m,1h),4.96-4.88(m,1h),4.08(s,3h),4.06-3.99(m,3h),3.95(dd,j＝4.0,5.8hz,2h),3.83-3.74(m,3h),3.53(s,2h),3.29-3.23(m,3h),1.41(d,j＝7.0hz,3h)。
[0603]
实例22
[0604]
(4r)-2-(1-乙基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0605][0606]
根据以下方案制备标题化合物：
[0607][0608]
步骤1：制备4-氯-1-乙基-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物22b)
[0609]
向4-氯-1h-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物22a，cas：29274-28-0，供应商:bepharm，500mg，3.26mmol)在dmf(20ml)中的溶液加入cs2co3(1.59g，4.88mmol)。将混合物冷却至0℃，然后滴加碘乙烷(cas：75-03-6，供应商:j&k scientific，609mg，3.91mmol)。加入后，将混合物缓慢升温至室温并搅拌5小时。将混合物倒入冰水(20ml)中，然后用ea(20ml)萃取两次。有机层经na2so4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea/pe(10％至15％)的梯度洗脱，以得到化合物22b(400mg)。ms：计算182(mh
+
)，测量182(mh
+
)。
[0610]
步骤2：制备(4r)-2-(1-乙基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉(实例22)
[0611]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1-乙基-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物22b)代替化合物1a来制备标题化合物。获得实例22(45mg)，为黄色固体。ms：计算377(mh
+
)，测量377(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.58(s,1h),8.07-8.07(m,1h),7.31(d,j＝8.3hz,1h),7.03-6.96(m,2h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.18-5.06(m,1h),4.96(br d,j＝15.5hz,1h),4.47(q,j＝7.2hz,2h),4.10-3.98(m,1h),3.95-3.86(m,1h),3.49-3.37(m,8h),3.35-3.31(m,1h),1.51(t,j＝7.3hz,3h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0612]
实例23
[0613]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-胺
[0614][0615]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a和n-[(3r,4r)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11b)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例23(45mg)，为黄色固
a]吡嗪-7-甲酸叔丁酯(合成过程参考专利us20150252057a1)代替化合物16a来制备标题化合物。获得实例25(29mg)，为黄色固体。ms：计算418(mh
+
)，测量418(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.09(d,j＝7.5hz,1h),7.65(d,j＝2.0hz,1h),7.46(dd,j＝2.3,8.4hz,1h),7.40-7.35(m,1h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.16(br d,j＝15.5hz,1h),5.06-4.92(m,1h),4.17-4.04(m,7h),3.87(dd,j＝7.2,12.3hz,1h),3.75-3.67(m,1h),3.55(dd,j＝2.7,12.3hz,1h),3.42(dd,j＝3.2,12.5hz,1h),3.37-3.32(m,1h),3.30-3.26(m,1h),3.15-3.05(m,2h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0624]
实例26
[0625]
3-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮
[0626][0627]
类似于实例16的制备，通过使用2-氧代-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(cas：169206-55-7，供应商:bepharm)代替化合物16a来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例26(20mg)。ms：计算433(mh
+
)，测量433(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.09(d,j＝7.2hz,1h),7.65(d,j＝2.1hz,1h),7.52-7.47(m,1h),7.44-7.39(m,1h),6.84(d,j＝7.3hz,1h),5.23-5.12(m,1h),5.06-4.96(m,1h),4.11-4.01(m,6h),3.88(dd,j＝7.0,12.4hz,1h),3.48-3.33(m,5h),2.35-2.24(m,2h),2.22-2.13(m,2h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0628]
实例27
[0629]
(4r)-6-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0630][0631]
与实例1的制备类似，通过使用3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(cas：201162-53-0，供应商:bepharm)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例27(64mg)，为黄色固体。ms：计算389(mh
+
)，测量389(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.29(d,j＝8.3hz,1h),6.94-6.83(m,3h),5.15-5.06(m,1h),4.94(br d,j＝15.5hz,1h),4.49(br d,j＝2.1hz,2h),4.09(s,3h),4.06-3.99(m,1h),3.89(dd,j＝6.8,12.4hz,1h),3.35(br d,j＝12.7hz,2h),3.30-3.26(m,1h),3.13(br d,j＝12.6hz,2h),2.32-2.23(m,2h),2.11-2.04(m,2h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0632]
实例28
[0633]
1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]氮杂环丁烷-3-胺
[0634][0635]
类似于实例11的制备，通过使用n-(氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(cas：91188-13-5，供应商:bepharm)代替化合物11b来制备标题化合物。获得实例28(8mg)，为黄色固体。ms：计算432(mh
+
)，测量432(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.5hz,1h),7.27(d,j＝8.3hz,1h),7.04-6.93(m,2h),6.85(d,j＝7.3hz,1h),5.16-5.06(m,1h),4.94(br d,j＝14.9hz,1h),4.60-4.51(m,2h),4.44-4.34(m,3h),4.09(s,3h),4.07-3.99(m,1h),3.91-3.81(m,3h),3.50-3.41(m,1h),3.30-3.25(m,1h),2.84(br t,j＝11.6hz,2h),2.13(br d,j＝12.3hz,2h),1.66(dq,j＝4.1,11.7hz,2h),1.42(d,j＝
7.0hz,3h)。
[0636]
实例29
[0637]
反式-4-氨基-1-[1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-4-哌啶基]哌啶-3-醇
[0638][0639]
类似于实例11的制备，通过使用n-[3-羟基-4-哌啶基]氨基甲酸反式叔丁酯(cas：859854-66-3，供应商:pharmablock)代替化合物11b来制备标题化合物。获得实例29(8mg)，为黄色固体。ms：计算476(mh
+
)，测量476(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.27(d,j＝8.3hz,1h),7.03-6.95(m,2h),6.85(d,j＝7.5hz,1h),5.11(br d,j＝15.9hz,1h),4.96(br s,1h),4.09(s,3h),4.06-3.82(m,5h),3.75-3.62(m,2h),3.48(tt,j＝3.6,12.1hz,1h),3.30(br s,3h),3.07-2.97(m,1h),2.87(br t,j＝11.7hz,2h),2.36(br dd,j＝3.6,14.4hz,1h),2.29-2.17(m,2h),2.05-1.86(m,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0640]
实例30
[0641]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(2r)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0642][0643]
类似于实例18的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a来制备标题化合物。获得实例30(29mg)，
为白色固体。ms：计算407(mh
+
)，测量407(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.48(s,1h),7.34(d,j＝8.4hz,1h),7.03(d,j＝2.3hz,1h),6.97(dd,j＝2.4,8.4hz,1h),6.71(s,1h),5.11(br d,j＝14.9hz,1h),5.00-4.90(m,1h),4.35-4.21(m,2h),4.12-4.01(m,4h),3.97-3.87(m,1h),3.84-3.69(m,2h),3.68-3.58(m,2h),3.51-3.26(m,4h),2.66(s,3h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0644]
实例31
[0645]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(2s)-哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0646][0647]
类似于实例18的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a、(s)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(cas：314741-40-7，供应商:bepharm)代替化合物18a来制备标题化合物。获得实例31(23mg)，为白色固体。ms：计算407(mh
+
)，测量407(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.48(s,1h),7.34(d,j＝8.4hz,1h),7.04(d,j＝2.3hz,1h),6.97(dd,j＝2.5,8.4hz,1h),6.71(s,1h),5.16-5.07(m,1h),5.00-4.90(m,1h),4.36-4.22(m,2h),4.12-4.01(m,4h),3.98-3.89(m,1h),3.85-3.72(m,2h),3.69-3.60(m,2h),3.50-3.32(m,4h),2.66(s,3h),1.43(d,j＝6.8hz,3h)。
[0648]
实例33
[0649]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(4-吡咯烷-3-基磺酰基哌嗪-1-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0650][0651]
根据以下方案制备标题化合物：
[0652][0653]
将(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉盐酸盐(实例1的hcl盐，30mg，75μmol)、3-氯磺酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(化合物33a，cas：935845-20-8，供应商:bide pharmatech，30mg，113μmol)和tea(52μl，376μmol)在dcm(10ml)中的混合物在室温搅拌2小时。浓缩后，将混合物通过快速色谱柱纯化，以ea(具有10％meoh)/pe(0％至100％)的梯度洗脱，以得到黄色油状物，将其再溶于dcm(10ml)和tfa(2ml)中并在室温搅拌2小时。浓缩后，将混合物通过反相快速色谱柱纯化，以acn/水(具有0.05％tfa)(0％至30％)的梯度洗脱，以得到实例33(16mg)，为黄色固体。ms：计算496(mh
+
)，测量496(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.07(d,j＝7.3hz,1h),7.27(d,j＝8.3hz,1h),6.98(s,1h),6.95(d,j＝8.0hz,1h),6.85(d,j＝7.3hz,1h),5.11(br d,j＝15.2hz,1h),4.96(br s,1h),4.18(td,j＝6.9,13.8hz,1h),4.09(s,3h),4.08-4.01(m,1h),3.88(dd,j＝6.8,12.3hz,1h),3.74-3.62(m,2h),3.57-3.47(m,6h),3.45-3.34(m,1h),3.29-3.26(m,4h),2.52-2.42(m,2h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0654]
实例34
[0655]
6-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-酮
[0656][0657]
类似于实例16的制备，通过使用6-氧代-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸叔丁酯(cas：1234616-51-3，供应商:pharmablock)代替化合物16a来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例34(84mg)。ms：计算403(mh
+
)，测量403(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.09(d,j＝7.5hz,1h),7.66(d,j＝1.8hz,1h),7.53-7.48(m,1h),7.45-7.40(m,1h),6.87(d,j＝7.5hz,1h),5.23-5.13(m,1h),5.03(br s,1h),4.29-4.19(m,6h),4.14-4.05(m,4h),3.88(dd,j＝7.2,12.5hz,1h),3.38-3.32(m,1h),3.04(s,2h),1.44(d,j＝6.8hz,3h)。
[0658]
实例35
[0659]
3-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-酮
[0660][0661]
类似于实例16的制备，通过使用2-氧代-1-氧杂-3,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸叔丁酯(cas：1642899-83-9，供应商:sigma-aldrich)代替化合物16a来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例35(8mg)。ms：计算419(mh
+
)，测量419(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.09(d,j＝7.3hz,1h),7.66(d,j＝1.8hz,1h),7.53-7.47(m,1h),7.46-7.41(m,1h),6.86(d,j＝7.3hz,1h),5.22-5.13(m,1h),5.01(br d,j＝15.5hz,1h),
4.35-4.27(m,2h),4.12-4.04(m,4h),3.89(dd,j＝7.2,12.4hz,1h),3.81(dd,j＝1.7,13.1hz,1h),3.68-3.61(m,1h),3.58-3.52(m,2h),3.40-3.34(m,1h),2.65-2.55(m,1h),2.45-2.35(m,1h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0662]
实例36
[0663]
(3r,4r)-4-氨基-3-甲基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇
[0664][0665]
类似于实例1的制备，通过使用n-[(3r,4r)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(合成过程参考专利wo2019233941a1)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例36(41mg)，为黄色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.53(s,1h),8.06(d,j＝7.5hz,1h),7.22(d,j＝9.0hz,1h),6.82(d,j＝7.3hz,1h),6.58-6.53(m,2h),5.12-5.02(m,1h),4.92(br s,1h),4.08(s,3h),4.05-3.99(m,1h),3.85(td,j＝5.3,10.6hz,2h),3.67(dd,j＝2.9,5.8hz,1h),3.59(d,j＝10.4hz,1h),3.49(dd,j＝2.9,10.7hz,1h),3.36(d,j＝10.4hz,1h),3.30-3.24(m,1h),1.49(s,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0666]
实例37
[0667]
(4r)-4-甲基-6-[4-[(1-甲基咪唑-4-基)甲基]哌嗪-1-基]-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0668][0669]
根据以下方案制备标题化合物：
[0670][0671]
步骤1：制备(4r)-4-甲基-6-[4-[(1-甲基咪唑-4-基)甲基]哌嗪-1-基]-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉(实例37)
[0672]
将(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-异喹啉盐酸盐(实例1的hcl盐，50mg，125μmol)、4-(氯甲基)-1-甲基-咪唑盐酸盐(cas：17289-30-4，供应商:bepharm，21mg，125μmol)和碳酸钾(87mg，627μmol)在乙腈(5ml)中的混合物加热至80℃过夜。冷却至室温后，将固体滤出并用ea(10ml)洗涤两次。将合并的混合物浓缩并通过制备型hplc纯化，以得到实例37(1.5mg)，为淡黄色固体。ms：计算457(mh
+
)，测量457(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.27(s,1h),8.09(d,j＝6.0hz,1h),7.55(s,1h),7.17(d,j＝8.2hz,1h),7.05(s,1h),6.90-6.85(m,2h),6.45(d,j＝6.0hz,1h),4.84-4.82(m,1h),4.74-4.66(m,1h),3.99(s,3h),3.85-3.73(m,2h),3.72(s,3h),3.56(s,2h),3.23-3.15(m,5h),2.74-2.64(m,4h),1.38(d,j＝7.0hz,3h)。
[0673]
实例38
[0674]
n,n-二甲基-2-[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-1-基]乙胺
[0675][0676]
类似于实例37的制备，通过使用2-溴-n,n-二甲基-乙胺氢溴酸盐(cas：2862-39-7，供应商:accela)代替4-(氯甲基)-1-甲基-咪唑盐酸盐(化合物37a)来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例38(2.5mg)。ms：计算434(mh
+
)，测量434(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.27(s,1h),8.09(d,j＝5.9hz,1h),7.18(d,j＝8.2hz,1h),6.91-6.86(m,2h),6.44(d,j＝6.0hz,1h),4.84(d,j＝15.0hz,1h),4.69(d,j＝14.9hz,1h),3.99(s,3h),3.86-3.71(m,2h),3.20(br d,j＝5.1hz,5h),2.71-2.64(m,4h),2.62-2.54(m,4h),2.31(s,6h),1.38(d,j＝7.0hz,3h)。
[0677]
实例39
[0678]
(4r)-6-(4,4-二甲基哌嗪-4-鎓-1-基)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉氯化物
[0679][0680]
类似于实例37的制备，通过使用碘甲烷(cas：74-88-4，供应商:sinopharm)代替4-(氯甲基)-1-甲基-咪唑盐酸盐(化合物37a)并将反应温度从80℃改为室温来制备标题化合物。获得实例39(3mg)，为黄色固体。ms：计算值391(m-cl-)，实测值391(m-cl-)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.70-8.40(m,1h),8.08(br s,1h),7.40-7.25(m,1h),7.11-6.98(m,2h),6.95-6.83(m,1h),5.33-5.10(m,1h),5.05-4.89(m,1h),4.30-4.04(m,4h),3.96-3.82
(m,2h),3.69-3.63(m,3h),3.60(br d,j＝5.5hz,3h),3.40-3.23(m,7h),3.20-3.04(m,1h),1.53-1.36(m,3h)。
[0681]
实例40
[0682]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-(2-哌嗪-1-基乙氧基)-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0683][0684]
类似于实例18的制备，通过使用4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(cas：77279-24-4，供应商:bepharm)代替化合物18a来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例40(22mg)。ms：计算407(mh
+
)，测量407(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.32(d,j＝8.4hz,1h),6.98(d,j＝2.4hz,1h),6.93(dd,j＝2.6,8.4hz,1h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.19-5.08(m,1h),5.03-4.92(m,1h),4.31(t,j＝5.0hz,2h),4.12-4.03(m,4h),3.83(dd,j＝7.5,12.3hz,1h),3.49-3.42(m,4h),3.35-3.31(m,7h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0685]
实例41
[0686]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0687][0688]
根据以下方案制备标题化合物：
[0689][0690]
步骤1：制备4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物41b)
[0691]
在室温向1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇二盐酸盐(化合物41a，cas：1537465-19-2，供应商:bepharm，200mg，873μmol)在dcm(4ml)和水(0.4ml)中的溶液加入三乙胺(600μl，4.3mmol)和二碳酸二叔丁酯(243μl，1.05mmol)。将所得溶液在室温搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea(具有10％meoh)/pe(80％至100％)的梯度洗脱，以得到化合物41b(200mg)。ms：计算257(mh
+
)，测量257(mh
+
)。
[0692]
步骤2：制备(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-3,4-二氢-1h-异喹啉(实例41)
[0693]
类似于实例18的制备，通过使用4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(化合物41b)代替化合物18a来制备标题化合物。获得了为绿色固体的实例41(13mg)。ms：计算433(mh
+
)，测量433(mh
+
)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.55(s,1h),8.08(d,j＝7.5hz,1h),7.39-7.33(m,1h),6.89(d,j＝2.4hz,1h),6.87-6.80(m,2h),5.25-5.17(m,1h),5.16-5.10(m,1h),4.96(br d,j＝15.7hz,1h),4.73(br dd,j＝6.4,11.9hz,2h),4.33(br d,j＝9.4hz,2h),4.12-4.02(m,4h),3.85(dd,j＝7.3,12.4hz,1h),3.65-3.54(m,3h),3.36-3.32(m,1h),3.07(dt,j＝2.6,13.1hz,2h),2.31(br d,j＝13.3hz,2h),1.82-1.71(m,2h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0694]
实例42
[0695]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(7r,8as)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0696][0697]
类似于实例18的制备，通过使用(7r,8as)-7-羟基-八氢吡咯并[1,2-a]哌嗪-2-甲酸叔丁酯(cas：1204603-42-8，供应商:pharmablock)代替化合物18a来制备标题化合物。获得实例42(25mg)，为白色固体。ms：计算419(mh
+
)，测量419(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.5hz,1h),7.31(d,j＝8.4hz,1h),6.89(d,j＝2.3hz,1h),6.88-6.82(m,2h),5.13(br d,j＝15.2hz,1h),5.08-5.00(m,1h),4.97-4.93(m,1h),4.15-4.02(m,4h),3.88-3.79(m,2h),3.57(br d,j＝11.0hz,1h),3.42(br d,j＝12.8hz,1h),3.37-3.27(m,2h),3.18(dt,j＝3.7,12.4hz,1h),2.98-2.82(m,2h),2.73(dt,j＝3.1,12.3hz,1h),2.63(dd,j＝4.4,10.4hz,1h),2.21-2.12(m,1h),2.09-1.99(m,1h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0698]
实例43
[0699]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2r)-1-甲基哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0700][0701]
根据以下方案制备标题化合物：
[0702][0703]
向(3r)-3-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(来自实例18的中间体，90mg，183μmol)在乙醇(15ml)中的溶液加入多聚甲醛(cas：30525-89-4，供应商:tci化成工业，28mg，933μmol)和3滴乙酸。将混合物密封并在50℃搅拌1小时，然后加入nabh3cn(cas：25895-60-7，供应商:accela，23mg，365mmol)。将混合物在50℃搅拌过夜。冷却至室温后，通过加入饱和nahco3(10ml)水溶液来猝灭混合物。将混合物通过ea(10ml)萃取三次，并将合并的有机相经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱柱纯化，以ea(具有10％meoh)/pe(50％至100％)的梯度洗脱，以得到中间体(3r)-4-甲基-3-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯，将其与dcm(1ml)和tfa(2ml)混合。将混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩。将残余物通过反相快速色谱柱纯化，以得到实例43(5mg)，为淡黄色固体。ms：计算407(mh
+
)，测量407(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.35(d,j＝8.4hz,1h),7.04(d,j＝2.3hz,1h),6.97(dd,j＝2.6,8.4hz,1h),6.86(d,j＝7.3hz,1h),5.14(br d,j＝15.4hz,1h),4.97(br d,j＝15.7hz,1h),4.44(dd,j＝3.4,11.2hz,1h),4.32-4.25(m,1h),4.12-4.03(m,4h),3.83(dd,j＝7.5,12.4hz,1h),3.77-3.68(m,1h),3.63-3.42(m,5h),3.35-3.31(m,1h),3.26-3.16(m,1h),2.83(s,3h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0704]
实例44
[0705]
(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-6-[[(2s)-1-甲基哌嗪-2-基]甲氧基]-3,4-二氢-1h-异喹啉
[0706][0707]
类似于实例43的制备，通过使用(3s)-3-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(来自实例19的
中间体)代替(3r)-3-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(来自实例18的中间体)来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例44(18mg)。ms：计算407(mh
+
)，测量407(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.56(s,1h),8.08(d,j＝7.3hz,1h),7.34(d,j＝8.3hz,1h),7.03(d,j＝2.4hz,1h),6.96(dd,j＝2.6,8.4hz,1h),6.86(d,j＝7.5hz,1h),5.14(br d,j＝15.3hz,1h),4.96(br d,j＝15.4hz,1h),4.40(dd,j＝3.9,11.0hz,1h),4.26(dd,j＝2.8,10.9hz,1h),4.11-4.05(m,4h),3.83(dd,j＝7.5,12.3hz,1h),3.68(br d,j＝12.3hz,1h),3.55(br d,j＝13.3hz,1h),3.51-3.32(m,5h),3.16-3.03(m,1h),2.76(s,3h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0708]
实例45
[0709]
(2s)-2-[[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]氧基甲基]哌嗪-1-甲醛
[0710][0711]
在实例19的制备型hplc纯化(0.1％甲酸作为添加剂)期间获得了标题化合物。获得淡黄色固体状的实例45(10mg)。ms：计算421(mh
+
)，测量421(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.72-8.40(m,1h),8.15(d,j＝9.2hz,1h),8.09(br d,j＝6.0hz,1h),7.36(br s,1h),7.08(br s,1h),7.04-6.98(m,1h),6.88(br d,j＝7.3hz,1h),5.33-4.91(m,2h),4.56-4.43(m,1h),4.42-4.35(m,1h),4.28(dd,j＝6.1,10.8hz,1h),4.16-4.06(m,4h),4.04-3.94(m,1h),3.89-3.68(m,2h),3.64-3.50(m,2h),3.36-3.31(m,2h),3.24-3.16(m,1h),1.45(br d,j＝6.2hz,3h)。
[0712]
实例46
[0713]
反式-4-氨基-1-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇
[0714][0715]
类似于实例1的制备，通过使用n-(4-羟基吡咯烷-3-基)氨基甲酸反式叔丁酯(cas：870632-89-6，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例46(10mg)，为黄色固体。ms：计算379(mh
+
)，测量379(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.53(s,1h),8.06(d,j＝7.3hz,1h),7.23(d,j＝8.9hz,1h),6.82(d,j＝7.5hz,1h),6.63-6.56(m,2h),5.13-5.03(m,1h),4.95-4.87(m,1h),4.50-4.43(m,1h),4.08(s,3h),4.02(br dd,j＝3.8,12.1hz,1h),3.88-3.80(m,2h),3.78-3.73(m,2h),3.48-3.42(m,1h),3.30-3.22(m,2h),1.43(d,j＝7.0hz,3h)。
[0716]
实例47
[0717]
反式-4-氨基-1-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]吡咯烷-3-醇
[0718][0719]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a、n-(4-羟基吡咯烷-3-基)氨基甲酸反式叔丁酯(cas：870632-89-6，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例47(10mg)，为黄色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.45(br s,1h),7.22(d,j＝8.8hz,1h),6.68(s,1h),6.62-6.56(m,2h),5.09-4.98(m,1h),4.94-4.88(m,1h),4.49-4.44(m,1h),4.08(s,3h),4.04-3.93(m,1h),3.83(dd,j＝5.9,10.5hz,2h),3.78-3.72(m,2h),3.48-3.41(m,1h),3.33-3.22(m,2h),2.65(s,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0720]
实例48
[0721]
2-[(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-异喹
啉-6-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
[0722][0723]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(cas：1251005-61-4，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例48(27mg)，为黄色固体。ms：计算419(mh
+
)，测量419(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.36(s,1h),7.11(d,j＝8.2hz,1h),6.59(s,1h),6.45-6.35(m,2h),4.94(br d,j＝14.7hz,1h),4.85-4.78(m,1h),4.01-3.89(m,6h),3.87-3.82(m,2h),3.73-3.64(m,3h),3.43(s,2h),3.19-3.12(m,3h),2.55(s,3h),1.31(d,j＝7.0hz,3h)。
[0724]
实例49
[0725]
[4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-2-基]甲醇
[0726][0727]
与实例1的制备类似，通过使用2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(cas：205434-75-9，供应商:accela)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例49(7mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.28(s,1h),8.09(d,j＝5.9hz,1h),7.19(d,j＝8.1hz,1h),6.97-6.83(m,2h),6.45(d,j＝5.9hz,1h),4.96-4.89(m,1h),4.75-4.67(m,1h),4.00(s,3h),3.89-3.74(m,2h),3.68-3.50(m,4h),3.23-3.09(m,2h),3.03-2.93(m,2h),2.80-2.70(m,1h),2.48(t,j＝11.0hz,1h),1.39(d,j＝6.8hz,3h)。
[0728]
实例50
[0729]
[(2r)-4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-2-基]甲醇
[0730][0731]
类似于实例1的制备，通过使用(2r)-2-(羟甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(cas：169448-87-7，供应商:bepharm)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例50(10mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.28(s,1h),8.10(d,j＝5.9hz,1h),7.20(d,j＝8.2hz,1h),6.96-6.86(m,2h),6.46(d,j＝6.0hz,1h),4.88-4.83(m,1h),4.76-4.66(m,1h),4.00(s,3h),3.88-3.72(m,2h),3.68-3.53(m,4h),3.24-3.14(m,2h),3.08-2.96(m,2h),2.77(dt,j＝2.9,11.6hz,1h),2.52(dd,j＝10.7,11.4hz,1h),1.39(d,j＝7.0hz,3h)。
[0732]
实例51
[0733]
[(2s)-4-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]哌嗪-2-基]甲醇
[0734][0735]
类似于实例1的制备方法，通过使用(2s)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(cas：1030377-21-9，供应商:accela)代替化合物1c来制备标题化合物。获得实例51(5mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.28(s,1h),8.10(d,j＝5.9hz,1h),7.20(d,j＝8.2hz,1h),6.95-6.87(m,2h),6.46(d,j＝6.0hz,1h),4.88-4.83(m,1h),4.75-4.67(m,1h),4.00(s,3h),3.88-3.76(m,2h),3.68-3.56(m,4h),3.23-3.14(m,2h),3.08-2.98(m,2h),2.83-2.74(m,1h),2.57-2.49(m,1h),1.39(d,j＝7.0hz,3h)。
[0736]
实例52
[0737]
2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-酮
[0738][0739]
类似于实例16的制备，通过使用8-氧代-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(cas：1251009-03-6，供应商:pharmablock)代替化合物16a来制备标题化合物。获得实例52(5mg)，为白色固体。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.29(s,1h),8.11(d,j＝5.7hz,1h),7.60(s,1h),7.45(br d,j＝8.3hz,1h),7.40-7.30(m,1h),6.48(d,j＝5.9hz,1h),4.95(br s,1h),4.82-4.74(m,1h),4.07-3.94(m,5h),3.89(br dd,j＝4.0,12.1hz,1h),3.82-3.72(m,1h),3.53-3.40(m,4h),3.28-3.21(m,1h),2.88-2.68(m,2h),2.30-2.15(m,2h),1.42(br d,j＝6.8hz,3h)。
[0740]
实例53和实例54
[0741]
(5s)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-酮和(5r)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-酮
[0742][0743]
将标题化合物通过实例52的手性sfc(梯度：在co2中的50％甲醇(0.1％nh3h2o)，色谱柱：ay，250
×
20mm，5μm)进行分离。
[0744]
获得了为绿色固体的实例53(较快洗脱，36mg)。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.54(s,1h),8.09(d,j＝7.2hz,1h),7.66(d,j＝2.0hz,1h),7.52-7.46(m,1h),7.44-7.39(m,1h),6.82(d,j＝7.2hz,1h),5.21-5.12(m,1h),5.03-4.95(m,1h),4.10-4.02(m,5h),3.99-3.94(m,1h),3.87(dd,j＝7.1,12.5hz,1h),3.52-3.47(m,2h),3.46-3.38(m,2h),3.37-3.32(m,1h),2.87-2.80(m,1h),2.78-2.70(m,1h),2.31-2.17(m,2h),1.44(d,j＝6.8hz,3h)。
[0745]
获得了为黄色固体的实例54(较慢洗脱，46mg)。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.09(d,j＝7.3hz,1h),7.67(d,j＝2.0hz,1h),7.49(d,j＝2.2hz,1h),7.45-7.39(m,1h),6.86(d,j＝7.3hz,1h),5.23-5.13(m,1h),5.07-4.97(m,1h),4.11-4.05(m,4h),4.05-3.94(m,2h),3.89(dd,j＝7.2,12.5hz,1h),3.52-3.47(m,2h),3.43(d,j＝7.3hz,2h),3.38-3.32(m,1h),2.87-2.71(m,2h),2.30-2.16(m,2h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0746]
实例55
[0747]
顺式-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮
[0748][0749]
类似于实例16的制备，通过使用3-氧代-2,3a,4,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-甲酸顺式叔丁酯(化合物55a)代替化合物16a来制备标题化合物。类似于化合物41b的制备，通过使用顺式-1,2,3a,4,5,6,7,7a-八氢吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮(cas：868551-69-3，供应商:pharmablock)代替化合物41a来制备化合物55a。获得实例55(10mg)，为白色固体。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.29(s,1h),8.11(d,j＝5.9hz,1h),7.67(dd,j＝1.8,11.7hz,1h),7.47(dt,j＝2.1,8.1hz,1h),7.33(d,j＝8.4hz,1h),6.48(d,j＝5.9hz,1h),4.96-4.90(m,1h),4.80-4.70(m,1h),4.08-3.97(m,4h),3.92-3.85(m,1h),3.81-3.72(m,1h),3.50-3.38(m,2h),3.27-3.19(m,1h),2.97-2.86(m,2h),2.74-2.52(m,3h),1.89-1.78(m,1h),1.50-1.36(m,4h)。
[0750]
实例56和实例57
[0751]
(3as,7as)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮和(3ar,7ar)-2-[(4r)-4-甲基-2-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-3,4-二氢-1h-异喹啉-6-基]-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮
[0752][0753]
将标题化合物通过实例55的手性sfc(梯度：在co2中的40％异丙醇(0.1％nh3h2o)，色谱柱：od，250
×
20mm，5μm)进行分离。
[0754]
获得了为绿色固体的实例56(较快洗脱，16mg)。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.10(d,j＝7.2hz,1h),7.74(d,j＝2.0hz,1h),7.58(dd,j＝2.2,8.3hz,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),6.86(d,j＝7.3hz,1h),5.23-5.14(m,1h),5.01(br d,j＝15.7hz,1h),4.15(dd,j＝5.5,10.0hz,1h),4.11-4.03(m,4h),3.90(dd,j＝7.1,12.5hz,1h),3.81(d,j＝13.4hz,1h),3.57(d,j＝10.0hz,1h),3.40-3.31(m,3h),3.18-3.11(m,1h),3.03(dt,j＝2.7,13.0hz,1h),2.82(qd,j＝6.1,11.9hz,1h),2.16-2.05(m,1h),1.75-1.61(m,1h),1.46(d,j＝7.0hz,3h)。
[0755]
获得了为绿色固体的实例57(较慢洗脱，26mg)。ms：计算417(mh
+
)，测量417(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.57(s,1h),8.10(d,j＝7.3hz,1h),7.76(d,j＝1.8hz,1h),7.56(dd,j＝2.1,8.3hz,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),6.86(d,j＝7.3hz,1h),5.24-5.13(m,1h),5.02(br d,j＝15.7hz,1h),4.15(dd,j＝5.4,10.0hz,1h),4.13-4.04(m,4h),3.94-3.77(m,2h),3.56(d,j＝10.0hz,1h),3.41-3.31(m,3h),3.14(br t,j＝6.0hz,1h),3.03(dt,j＝2.6,13.0hz,1h),2.82(qd,j＝6.0,11.9hz,1h),2.18-2.06(m,1h),1.77-1.62(m,1h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0756]
实例58
[0757]
1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]哌啶-4-胺
[0758]
[0759]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a、中间体c代替中间体a、n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(cas：73874-95-0，供应商:accela)代替化合物1c并将buchwald偶联反应条件从ruphos pd g2、cs2co3、1,4-二噁烷变为pd2(dba)3、binap、naot-bu、甲苯来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例58(15mg)。ms：计算392(mh
+
)，测量392(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.18(s,1h),7.46(d,j＝8.7hz,1h),6.76(d,j＝8.7hz,1h),6.39(s,1h),4.69(d,j＝10.9hz,2h),4.49(br d,j＝12.8hz,2h),4.04-3.92(m,4h),3.74(br d,j＝7.0hz,1h),3.37(br s,1h),3.13(br d,j＝4.5hz,1h),2.94(br t,j＝13.0hz,2h),2.54(s,3h),2.06(br d,j＝10.9hz,2h),1.63(br dd,j＝3.8,12.1hz,2h),1.41(d,j＝7.0hz,3h)。
[0760]
实例59
[0761]
4-甲基-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]哌啶-4-胺
[0762][0763]
类似于实例58的制备，通过使用n-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(cas：163271-08-7，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例59(16mg)，为白色固体。ms：计算406(mh
+
)，测量406(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.18(s,1h),7.42(d,j＝8.7hz,1h),6.70(d,j＝8.7hz,1h),6.42-6.36(m,1h),4.76-4.61(m,2h),4.01-3.92(m,4h),3.80-3.67(m,3h),3.55-3.45(m,2h),3.17-3.07(m,1h),2.53(s,3h),1.68-1.55(m,4h),1.39(d,j＝7.0hz,3h),1.21(s,3h)。
[0764]
实例60
[0765]
n,n-二甲基-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]哌啶-4-胺
[0766][0767]
类似于实例58的制备，通过使用n,n-二甲基哌啶-4-胺(cas：50533-97-6，供应商:accela)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯而无需boc脱保护反应来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例60(7mg)。ms：计算420(mh
+
)，测量420(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.16(s,1h),7.40(d,j＝8.6hz,1h),6.68(d,j＝8.7hz,1h),6.36(s,1h),4.75-4.60(m,2h),4.49-4.39(m,2h),4.03-3.90(m,4h),3.72(dd,j＝6.8,12.8hz,1h),3.10(br d,j＝4.6hz,1h),2.86-2.71(m,2h),2.52(s,3h),2.40(br s,1h),2.30(s,6h),1.94(br d,j＝12.5hz,2h),1.53-1.42(m,2h),1.38(d,j＝7.0hz,3h)。
[0768]
实例61
[0769]
4-[(二甲基氨基)甲基]-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]哌啶-4-醇
[0770][0771]
类似于实例58的制备，通过使用4-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-4-醇二盐酸盐(cas：695145-47-2，供应商:j&k scientific)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯而无需boc脱保护反应来制备标题化合物。获得实例61(15mg)，为白色固体。ms：计算450(mh
+
)，测量450(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.18(s,1h),7.42(d,j＝8.6hz,1h),6.70(d,j＝8.7hz,1h),6.38(s,1h),4.76-4.61(m,2h),4.04-3.92(m,6h),3.75(dd,j＝6.7,12.7hz,1h),3.37-3.32(m,2h),3.16-3.07(m,1h),2.57-2.51(m,3h),2.38-2.30(m,8h),1.70-1.60(m,4h),1.40(d,j＝7.0hz,3h)。
[0772]
实例62
[0773]
(8s)-8-甲基-6-(1-甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-2-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶
[0774][0775]
类似于实例58的制备，通过使用4-氯-1-甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1a)代替4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物1c)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例62(16mg)。ms：计算364(mh
+
)，测量364(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.60(s,1h),8.12(d,j＝7.3hz,1h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),6.92(d,j＝7.5hz,1h),6.89(d,j＝8.7hz,1h),5.19-5.02(m,2h),4.22(dd,j＝4.2,12.9hz,1h),4.12(s,3h),3.96(dd,j＝7.5,13.0hz,1h),3.91-3.83(m,4h),3.36(br d,j＝5.4hz,4h),3.31-3.26(m,1h),1.46(d,j＝7.0hz,3h)。
[0776]
实例63
[0777]
(3r,4r)-4-甲氧基-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]吡咯烷-3-胺
[0778][0779]
类似于实例58的制备，通过使用n-[(3r,4r)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11b)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例63(50mg)，为白色固体。ms：计算408(mh
+
)，测量408(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.15(s,1h),7.37(d,j＝8.6hz,1h),6.39-6.32(m,2h),4.70(d,j＝15.0hz,1h),4.59(d,j＝14.9hz,1h),3.97(s,3h),3.90-3.73(m,4h),3.67(dd,j＝6.0,10.5hz,1h),3.53-3.49(m,1h),3.46(dd,j＝2.6,10.9hz,1h),3.42(s,3h),3.30-3.26(m,1h),3.15-3.07(m,1h),2.52(s,3h),1.38(d,j＝7.0hz,3h)。
[0780]
实例64
[0781]
(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-2-(4-哌啶基氧基)-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶
[0782][0783]
类似于实例58的制备，通过使用4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(cas：109384-19-2，供应商:accela)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例64(18mg)，为白色固体。ms：计算393(mh
+
)，测量393(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.53(s,1h),7.70(d,j＝8.4hz,1h),6.83-6.75(m,2h),5.42(tt,j＝3.1,6.3hz,1h),5.20-5.08(m,1h),5.07-5.00(m,1h),4.23(br dd,j＝4.1,13.0hz,1h),4.11(s,3h),3.94(dd,j＝7.5,12.9hz,1h),3.43(br s,2h),3.32-3.23(m,3h),2.69(s,3h),2.32-2.21(m,2h),2.13(ddd,j＝3.3,7.1,10.6hz,2h),1.47(d,j＝7.0hz,3h)。
[0784]
实例65
[0785]
(3s,4s)-3-甲氧基-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]哌啶-4-胺
[0786][0787]
类似于实例58的制备，通过使用半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(cas：2253105-33-6，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例65(30mg)，为白色固体。ms：计算422(mh
+
)，测量422(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.17(s,1h),7.43(d,j＝8.6hz,1h),6.72(d,j＝8.6hz,1h),6.37(s,1h),4.83-4.61(m,3h),4.29-4.18(m,1h),4.02-3.93(m,4h),3.71(ddd,j＝2.6,7.1,12.7hz,1h),3.52(s,3h),3.17-3.07(m,1h),2.99-2.83(m,2h),2.78-2.69(m,1h),2.56-2.46(m,4h),1.95-1.86(m,1h),1.50-1.35(m,4h)。
[0788]
实例66
[0789]
(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-2-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶
[0790][0791]
类似于实例58的制备，通过使用哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物1c)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例66(45mg)，为白色固体。ms：计算378(mh
+
)，测量378(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.52(s,1h),7.65(d,j＝8.7hz,1h),6.91(d,j＝8.7hz,1h),6.78(s,1h),5.16-5.01(m,2h),4.24-4.14(m,1h),4.11(s,3h),4.02-3.92(m,1h),3.92-3.85(m,4h),3.40-3.34(m,4h),3.32-3.25(m,1h),2.68(s,3h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0792]
实例67
[0793]
(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶
[0794][0795]
类似于实例58的制备，通过使用1-甲基哌嗪(cas：109-01-3，供应商:tci)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯而无需boc脱保护反应来制备标题化合物。获得实例67(7mg)，为黄色固体。ms：计算392(mh
+
)，测量392(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.52(s,1h),7.63(d,j＝8.6hz,1h),6.89(d,j＝8.6hz,1h),6.77(s,1h),5.08(br s,2h),4.58(br s,2h),4.25-4.17(m,1h),4.11(s,3h),3.97-3.87(m,1h),3.63(br d,j＝1.1hz,2h),3.32-3.12(m,5h),2.98(s,3h),2.68(s,3h),1.45(d,j＝7.0hz,3h)。
[0796]
实例68
[0797]
2-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
[0798][0799]
类似于实例58的制备方法，通过使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(cas：1251005-61-4，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例68(13mg)，为白色固体。ms：计算420(mh
+
)，测量420(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.10(s,1h),7.36(d,j＝8.6hz,1h),6.29(s,1h),6.26(d,j＝8.4hz,1h),4.71-4.64(m,1h),4.57-4.50(m,1h),3.92-3.80(m,6h),3.74(dt,j＝3.5,8.6hz,3h),3.62-3.55(m,2h),3.09-3.01(m,1h),2.90(s,2h),2.75-2.67(m,2h),2.44(s,3h),1.28(d,j＝7.0hz,3h)。
[0800]
实例69
[0801]
(3s,4r)-4-氟-1-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]吡咯烷-3-胺
[0802][0803]
类似于实例58的制备，通过使用n-[(3s,4r)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(cas：1033718-89-6，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例69(39mg)，为白色固体。ms：计算396(mh
+
)，测量396(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.32(s,1h),7.53(d,j＝8.6hz,1h),6.54(s,1h),6.48(d,j＝8.6hz,1h),5.58-5.41(m,1h),4.91(br s,1h),4.82-4.74(m,1h),4.19-4.09(m,2h),4.09-3.99(m,4h),3.95-3.76(m,3h),3.62-3.53(m,1h),3.25-3.17(m,1h),2.60(s,3h),1.44(d,j＝7.0hz,3h)。
[0804]
实例70
[0805]
8-[(8s)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-2-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
[0806][0807]
类似于实例58的制备方法，通过使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(cas：1251011-05-8，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例70(14mg)。ms：计算420(mh
+
)，测量420(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.40(s,1h),7.50(d,j＝8.7hz,1h),6.74(d,j＝8.6hz,1h),6.66(s,1h),5.04-4.94(m,1h),4.88(br d,j＝16.5hz,1h),3.99(s,8h),3.86(br dd,j＝7.1,13.0hz,1h),3.79-3.73(m,3h),3.72-3.67(m,1h),3.44-3.37(m,2h),3.19-3.14(m,1h),2.56(s,3h),1.35(d,j＝7.0hz,3h)。
[0808]
实例72
[0809]
(8r)-6-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-8-甲基-2-哌嗪-1-基-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶
[0810][0811]
类似于实例58的制备，通过使用中间体d代替中间体c和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物1c)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得淡黄色固体状的实例72(8mg)。ms：计算378(mh
+
)，测量378(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.21(s,1h),7.48(d,j＝8.6hz,1h),6.71(d,j＝8.6hz,1h),6.41(s,1h),4.77-4.65(m,2h),4.05-3.96(m,4h),3.78(dd,j＝6.7,12.8hz,1h),3.59-3.48(m,4h),3.20-3.10(m,1h),3.01-2.91(m,4h),2.56(s,3h),1.42(d,j＝7.0hz,3h)。
[0812]
实例73
[0813]
(3s,4s)-3-甲氧基-1-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]哌啶-4-胺
[0814][0815]
类似于实例1的制备，通过使用4-氯-1,6-二甲基-吡唑并[3,4-b]吡啶(cas：19867-78-8，供应商:pharmablock)代替化合物1a、中间体e代替中间体a、半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(cas：2253105-33-6，供应商:pharmablock)代替化合物1c来制备标题化合物。获得了为黄色固体的实例73(23mg)。ms：计算422(mh
+
)，测量422(mh
+
)。
[0816]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.52(s,1h),8.18(s,1h),7.28(s,1h),6.74(s,1h),5.20(br d,j＝15.4hz,1h),4.82-4.72(m,1h),4.42-4.31(m,1h),4.13(s,4h),3.84(br dd,j＝8.0,12.3hz,1h),3.60(s,3h),3.53-3.40(m,2h),3.38-3.32(m,2h),3.31-3.20(m,1h),2.96(dd,j＝10.3,13.1hz,1h),2.70(s,3h),2.31-2.20(m,1h),1.84(dq,j＝4.4,12.6hz,1h),1.52(d,j＝6.9hz,3h)。
[0817]
实例74
[0818]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-哌嗪-1-基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶
[0819][0820]
类似于实例73的制备，通过使用哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物1c)代替半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得了为黄色固体的实例74(19mg)。ms：计算378(mh
+
)，测量378(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.50(s,1h),8.19(s,1h),6.97(s,1h),6.72(s,1h),5.12(br d,j＝15.2hz,1h),4.95-4.90(m,1h),4.12-4.04(m,4h),3.88-3.76(m,5h),3.38-3.30(m,5h),2.67(s,3h),1.46(d,j＝6.8hz,3h)。
[0821]
实例75
[0822]
(4r)-6-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶
[0823][0824]
类似于实例73的制备，通过使用4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸叔丁酯(cas：674792-08-6，供应商:accela)代替半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例75(1.2mg)，其为白色固体。ms：计算404(mh
+
)，测量404(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.22(s,1h),8.06(s,1h),6.74(s,1h),6.38(s,1h),4.81(s,1h),4.73-4.67(m,1h),4.01(s,3h),3.88(dd,j＝4.3,12.2hz,1h),3.75-3.64(m,1h),3.58-3.51(m,2h),3.41(s,2h),3.26-3.16(m,1h),3.06-3.00(m,2h),2.56(s,3h),1.43(d,j＝7.0hz,3h),0.66(s,4h)。
[0825]
实例76
[0826]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[[(7r,8as)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶
[0827][0828]
类似于实例58的制备，通过使用中间体e代替中间体c和(7r,8as)-7-羟基-八氢吡咯并[1,2-a]哌嗪-2-甲酸叔丁酯(cas：1204603-42-8，供应商:pharmablock)代替n-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例76(14.5mg)，其为淡黄色固体。ms：计算434(mh
+
)，测量434(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.39(br s,1h),8.06(s,1h),6.74(s,1h),6.62(s,1h),5.55-5.38(m,1h),5.04(br d,j＝15.0hz,1h),4.00(s,4h),3.94(dd,j＝6.5,11.6hz,1h),3.65-3.54(m,2h),3.44(td,j＝2.7,13.2hz,2h),3.37-3.21(m,4h),3.12-2.97(m,2h),2.91(br dd,j＝3.8,11.6hz,1h),2.57(s,3h),2.29-2.19(m,1h),2.18-2.06(m,1h),1.35(d,j＝6.8hz,3h)。
[0829]
实例77
萘啶-3-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
[0839][0840]
类似于实例73的制备，通过使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(cas：1251005-61-4，供应商:pharmablock)取代半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例79(4.0mg)，其为白色固体。ms：计算420(mh
+
)，测量420(mh
+
)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.21(s,1h),8.01(s,1h),6.43(s,1h),6.37(s,1h),4.80(s,1h),4.74-4.66(m,1h),4.03-3.98(m,5h),3.91(dd,j＝4.3,12.0hz,1h),3.85(d,j＝8.8hz,2h),3.75-3.68(m,2h),3.64(dd,j＝7.5,12.1hz,1h),3.26-3.17(m,1h),3.02(s,2h),2.86-2.78(m,2h),2.56(s,3h),1.44(d,j＝6.9hz,3h)。
[0841]
实例80
[0842]
(3r,4r)-3-氟-1-[(5r)-7-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-5-甲基-6,8-二氢-5h-2,7-萘啶-3-基]哌啶-4-胺
[0843][0844]
类似于实例73的制备，通过使用n-[(3r,4r)-3-氟-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(cas：1523530-29-1，供应商:pharmablock)取代半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例80(22.3mg)，其为淡黄色固体。ms：计算410(mh
+
)，测量410(mh
+
)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.50(s,1h),8.17(s,1h),7.11(s,1h),6.73(s,1h),5.15(br d,j＝15.2hz,1h),4.83-4.72(m,2h),4.64(dt,j＝5.2,9.8hz,1h),4.37(br d,j＝12.4hz,1h),4.11(s,4h),3.81(br dd,j＝7.9,12.3hz,1h),3.66-3.56(m,1h),3.45-3.35(m,1h),3.23-3.02(m,2h),2.69(s,3h),2.35-2.19(m,1h),1.82(dq,j＝4.4,12.6hz,1h),1.49(d,j＝6.9hz,3h)。
[0845]
实例81
[0846]
(4r)-2-(1,6-二甲基吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-甲基-6-[(3r)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基]-3,4-二氢-1h-2,7-萘啶
[0847][0848]
类似于实例73的制备，通过使用(2r)-2-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(cas：1023301-73-6，供应商:pharmablock)取代半草酸盐n-[(3s,4s)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯来制备标题化合物。获得实例81(11.1mg)，为黄色固体。ms：计算422(mh
+
)，测量422(mh
+
)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ＝8.51(s,1h),8.20(s,1h),7.00(s,1h),6.83-6.71(m,1h),5.13(br d,j＝15.2hz,1h),4.99-4.95(m,1h),4.50-4.37(m,2h),4.18-4.04(m,4h),3.84-3.72(m,2h),3.69-3.58(m,2h),3.51(br s,4h),3.40-3.35(m,1h),2.74-2.65(m,3h),3.32-3.17(m,3h),1.48(d,j＝6.9hz,3h)。
[0849]
实例82
[0850]
为了确定式(i)和(ia)的化合物在hek293-blue-htlr-7/8/9细胞测定中的活性，进行以下检测。
[0851]
hek293-blue-htlr-7细胞测定：
[0852]
稳定的hek293-blue-htlr-7细胞系购自invivogen(cat.#:hkb-htlr7,san diego,california,usa)。这些细胞最初设计用于通过监测nf-κb活化来研究人tlr7刺激。将seap(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个nf-κb和ap-1结合位点融合的ifn-β最小启动子的控制下。通过用tlr7配体刺激hek-blue htlr7细胞使nf-κb和ap-1活化以诱导seap。因此，在配体(诸如r848(resiquimod))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被tlr7拮抗剂降低。使用quanti-blue
tm
试剂盒(cat.#:rep-qb1,invivogen,san diego,ca,usa)在640nm波长下测定细胞培养上清液seap报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
[0853]
在含有4.5g/l葡萄糖、50u/ml青霉素、50mg/ml链霉素、100mg/ml normocin、2mm l-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的dulbecco's modified eagle培养基(dmem)的96孔板中以170μl的体积将hek293-blue-htlr7细胞以个细胞/ml的密度孵育，在上述dmem中，在最终dmso存在的条件下以1％的最终稀释度添加20μl供试化合物和10μl的20um r848，在37℃的co2培养箱中进行20小时的培养。然后将每个孔中的20μl上清液与180μl quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在下读取吸光度。tlr7活化导致下游nf-κb活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估tlr7拮抗剂。
[0854]
hek293-blue-htlr-8细胞测定：
[0855]
稳定的hek293-blue-htlr-8细胞系购自invivogen(cat.#:hkb-htlr8,san diego,california,usa)。这些细胞最初设计用于通过监测nf-κb活化来研究人tlr8刺激。将seap(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个nf-κb和ap-1结合位点融合的ifn-β最小启动子的控制下。通过用tlr8配体刺激hek-blue htlr8细胞使nf-κb和ap-1活化以诱导seap。因此，在配体(诸如r848)的刺激下孵育20小时，报告基因表达被tlr8拮抗剂降低。使用quanti-blue
tm
试剂盒(cat.#:rep-qb1,invivogen,san diego,ca,usa)在640nm波长下测定细胞培养上清液seap报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
[0856]
在含有4.5g/l葡萄糖、50u/ml青霉素、50mg/ml链霉素、100mg/ml normocin、2mm l-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的dulbecco's modified eagle培养基(dmem)的96孔板中以170μl的体积将hek293-blue-htlr8细胞以个细胞/ml的密度孵育，在上述dmem中，在最终dmso存在的条件下以1％的最终稀释度添加20μl供试化合物和10μl的60um r848，在37℃的co2培养箱中进行20小时的培养。然后将每个孔中的20μl上清液与180μl quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在下读取吸光度。tlr8活化导致下游nf-κb活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估tlr8拮抗剂。
[0857]
hek293-blue-htlr-9细胞测定：
[0858]
稳定的hek293-blue-htlr-9细胞系购自invivogen(cat.#:hkb-htlr9,san diego,california,usa)。这些细胞最初设计用于通过监测nf-κb活化来研究人tlr9刺激。将seap(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个nf-κb和ap-1结合位点融合的ifn-β最小启动子的控制下。通过用tlr9配体刺激hek-blue htlr9细胞使nf-κb和ap-1活化以诱导seap。因此，在配体(诸如odn2006(cat.#:tlrl-2006-1,invivogen,san diego,california,usa))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被tlr9拮抗剂降低。使用quanti-blue
tm
试剂盒(cat.#:rep-qb1,invivogen,san diego,california,usa)在640nm波长下测定细胞培养上清液seap报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
[0859]
hek293-blue-htlr9细胞以细胞/ml的密度以170μl的体积，在96孔板中在含有4.5g/l葡萄糖、50u/ml青霉素、50mg/ml链霉素、100mg/ml normocin、2mm l-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的dulbecco's modified eagle培养基(dmem)中孵育,其中在1％的最终的dmso存在下于连续稀释液中添加20μl测试化合物和10μl的20um odn2006的以上dmem溶液，在37℃的co2培养箱中孵育20小时。然后将每个孔中的20μl上清液与180μl quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在处读取吸光度。tlr9活化导致下游nf-κb活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估tlr9拮抗剂。
[0860]
式(i)或式(ia)的化合物具有人tlr7和/或tlr8抑制活性(ic
50
值)《0.5μm。此外，某些化合物还具有人tlr9抑制活性《0.5μm。表2显示了本发明化合物的活性数据。
[0861]
表2.本发明化合物在hek293-blue-htlr-7/8/9细胞测定中的活性
[0862][0863]
[0864][0865]
实例83
[0866]
herg通道抑制测定：
[0867]
herg通道抑制测定是一种高度灵敏的测量，可鉴定表现出与体内心脏毒性相关的herg抑制作用的化合物。将herg k
+
通道克隆到人体内，并在cho(中国仓鼠卵巢)细胞系中稳定表达。cho
herg
细胞用于膜片钳(电压钳，全细胞)实验。电压模式刺激细胞以活化herg通道并传导i
kherg
电流(herg通道的快速延迟向外整流钾电流)。细胞稳定几分钟后，以0.1hz(6bpm)的刺激频率记录i
kherg
的振幅和动力学。此后，将测试化合物以增加的浓度加入制剂中。对于每种浓度，都试图达到稳态效果，通常在3-10分钟内达到此效果，此时施加下一个最高浓度。记录每种药物浓度下i
kherg
的振幅和动力学，并将其与对照值进行比较(以100％计)。(参考文献：redfern ws,carlsson l,davis as,lynch wg,mackenzie i,palethorpe s,siegl pk,strang i,sullivan at,wallis r,camm aj,hammond tg.2003；relationships between preclinical cardiac electrophysiology,clinical qt interval prolongation and torsade de pointes for a broad range of drugs:
evidence for a provisional safety margin in drug development.cardiovasc.res.58:32-45,sanguinetti mc,tristani-firouzi m.2006；herg potassium channels and cardiac arrhythmia.nature 440:463-469,webster r,leishman d,walker d.2002；towards a drug concentration effect relationship for qt prolongation and torsades de pointes.curr.opin.drug discov.devel.5:116-26)。
[0868]
herg的结果在表3中给出。安全比(herg ic
20
/ec
50
)》30表示通过抑制tlr7/8/9通路与潜在的herg相关心脏毒性来区分药理学的充分安全窗。根据herg ic
20
/tlr7/8/9ic
50
的计算(以下作为评估herg责任的早期选择性指标)，显然参比化合物er-887258、er-888285、er-888286、r1和r2与本发明的化合物相比，具有更窄的安全窗。
[0869]
表3.herg和安全比结果
[0870][0871][0872]
实例84
[0873]
基于人pbmc细胞的测定
[0874]
与hek报告细胞系不同，人外周血单核细胞(pbmc)代表血液中的主要人免疫细胞，其主要由淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞组成。这些细胞表达tlr7、tlr8或tlr9，并因此是对相应配体刺激的自然应答者。这些tlr一经活化，pbmc在体外和体内都会分泌相似的细胞因子和趋化因子，因此，tlr7/tlr8/tlr9拮抗剂在人pbmc中的体外效能可很容易地转化为其在体内的药效学应答。
[0875]
通过密度梯度(ficoll-paquetm plus，ge healthcare life sciences)从新鲜抽取的肝素化锂(锂肝素加采血管(lithium heparin plus blood collection tube)，bd )健康供体全血中分离人外周血单核细胞(pbmc)。简而言之，在带有多孔屏障
的50ml锥形管(leucosep管，greiner bio-one)中，用25ml pbs(不含ca
2+
、mg
2+
)稀释50ml血液，其中15.5ml ficoll-paque在旋转后置于下层。在制动器处于关闭位置的情况下，将试管在800
×
g(1946rpm)离心20分钟，然后从血沉棕黄层中收集pbmc。然后将细胞在pbs中洗涤两次，并通过在室温下将其悬浮于2ml(红细胞裂解缓冲液，alfa aesar)中5至10分钟来裂解红细胞。在pbs中进行最终洗涤后，将pbmc以2
×
106细胞/ml的最终浓度重悬浮于补充有10％胎牛血清(sigma)的含glutamaxtm(gibco)的rpmi-1640培养基中，并以150μl/孔(3
×
105细胞/孔)在组织培养物处理的圆底96孔板(corning incorporated)中接种。将在100％dmso中溶解并连续稀释的拮抗剂化合物(本发明的化合物)添加到细胞中(重复两次)，以得到最终浓度为1％的dmso(v/v)。将pbmc用拮抗剂化合物在37℃，5％co2下孵育30分钟，然后按如下方式(指示最终浓度)在每孔48μl完全培养基中添加各种tlr激动剂：对于tlr9为1μm的cpg odn 2216(invivogen)，对于tlr8为1μg/ml的orn 06/lyovec(invivogen)，以及对于tlr7和tlr8为1μg/ml的r848(invivogen)。将pbmc在37℃下用5％co2孵育过夜。收集细胞培养上清液，并根据制造商推荐的方案(ebioscience，thermofisher scientific)通过luminex测定(procartaplextm multiplex immunoassay，invitrogen)或elisa程序评估各种人类细胞因子的水平。另用细胞活力测定(celltitercell viability assay，promega)检查细胞的活力。
[0876]
表4.hpbmc结果
[0877]
实例编号hpbmc/tlr9 ic
50
(μm)10.39630.43440.26550.15690.326180.365190.395230.240280.271310.214410.286470.290500.475580.277630.430650.371730.340740.250
[0878]
实例85
[0879]
人微粒体稳定性测定
[0880]
人微粒体稳定性测定用于早期评估人肝微粒体中供试化合物的代谢稳定性。
[0881]
将人肝微粒体(cat.no.:452117,corning,usa；cat.no.:h2610,xenotech,usa)在37℃下于100mm磷酸钾缓冲液(ph 7.4)中预孵育10分钟。通过添加nadph再生系统来引发反应。最终的孵育混合物在100mm磷酸钾缓冲液(ph 7.4)中含1μm供试化合物、0.5mg/ml肝微粒体蛋白、1mm mgcl2、1mm nadp、1单位/ml异柠檬酸脱氢酶和6mm异柠檬酸。在37℃下孵育0、3、6、9、15和30分钟后，将300μl冷乙腈(包括内标)添加到100μl孵育混合物中以终止反应。沉淀和离心后，通过lc-ms/ms测定样品中残留的化合物量。还制备并分析了零和30分钟无nadph再生系统的对照。通过上述测定进行检测，本发明的化合物显示出良好的人肝微粒体稳定性，结果示如下表5所示。
[0882]
表5.人肝微粒体对本发明化合物的稳定性
[0883]
[0884][0885]
实例86
[0886]
3t3体外光毒性测定
[0887]
光毒性被定义为在皮肤第一次暴露于某些化学物质并随后暴露于光之后引起的毒性反应，或者是类似的在系统性施用化学物质后通过皮肤照射引起的毒性反应。本研究中使用的测定旨在通过使用balb/c 3t3小鼠成纤维细胞的简单体外细胞毒性测定来检测化学物质的光毒性潜力。该测试的原理是比较在暴露或不暴露于无毒剂量的uva-光下进行测试时化学物质的细胞毒性。细胞毒性表示为细胞生长速率的剂量依赖性降低，该降低取决于处理后一天对活性染料中性红的吸收。
[0888]
1.方法
[0889]
制备储备溶液和测试物品的剂量
[0890]
即将开始暴露于细胞之前，称重少量物质并在dmso中新鲜配制。将该原液或适当的dmso稀释液加入细胞悬液中，以获得所需的最终浓度。所有溶液通常在eppendorf瓶盖中制备，使用后丢弃。
[0891]
参比物质
[0892]
氯丙嗪(hcl)(sigma，批次/批号：120m1328v)，测试浓度：300μg/ml，溶剂：pbs/3％dmsouv吸收光谱的测量
[0893]
用lambda-2光谱光度计(perkin elmer)在240nm和400nm之间记录吸收光谱本身或用uv-a或uv-b预照射的吸收光谱。
[0894][0895]
光毒性的测定
[0896]
对于该研究，改进的borenfreund和puerner的中性红吸收(nru)分析(borenfreund,e,puerner ja.toxicity determined in vitro by morphological alterations and neutral red absorption.toxicology lett.1985；24:119-124.)根据invittox方案第78号(ergatt/frame data bank of in vitro techniques in toxicology.invittox protocol no 78.3t3 nru phototoxicity assay.march 1994)进行了调整，以检查测试物品的可能的光毒性潜力。该测定基于中性红染料向培养的鼠成纤维细胞的溶酶体中的主动吸收。因为已知溶酶体膜是许多光毒性化合物的作用部位，所以该测定法可以提供潜在的光毒性损伤的量度。
[0897]
制备细胞培养物
[0898]
在37℃在6％co2的潮湿气氛中将鼠成纤维细胞克隆a 31(atcc编号ccl 163，第108代)在含有sdmem(杜贝克氏基本必需培养基，其中补充有10％小牛血清、2mm l-谷氨酰胺、100单位/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素)的175cm2组织培养级烧瓶中培养。在细胞接近汇合之前，通过胰蛋白酶消化将它们从烧瓶中移出。在用于测定之前，在体积为100μl的sdmem中将细胞以1
×
104个细胞/孔的浓度转移到96孔微量滴定板中，并使其附着24小时。
[0899]
暴露于测试物品
[0900]
为了与鼠成纤维细胞一起孵育，将测试物品稀释在pbs/3％dmso中(详细浓度见结果)。
[0901]
将培养基(杜贝克氏改良伊格尔培养基(dmem)，glutamax(gibco ref 21885-025)，10％胎牛血清(fbs)(gibco ref 10270-106)，100iu/ml青霉素和100μg/ml链霉素(gibco ref 15140-122))从孔中移出，并且将鼠成纤维细胞用pbs洗涤。然后加入100μl含测试物品的pbs/3％dmso，并将靶细胞在37℃用6％co2孵育1小时。
[0902]
uv暴露
[0903]
对于每个测试物品，按照表6制备微量滴定板。将“uva板”暴露于约5j/cm2的uva光下，将“深色板”置于黑暗中，作为细胞毒性对照。含有盐酸氯丙嗪的板作为阳性对照。uv通量使用uv计量器(dr.rm21)测量。
[0904]
uv照射后，将测试物品从孔中取出(用pbs的一个洗涤步骤)，并替换为sdmem。然后将靶细胞在37℃在6％co2中孵育过夜。
[0905]
表6. 96孔微量滴定板设置
[0906][0907]
96孔微量滴定板的制备如下：
[0908]
每块板含有带有细胞和溶剂但没有测试物品的孔，这些测试物品未与中性红溶液(0％标准品-s1)一起孵育，或用中性红(100％标准品-s2)染色以计算标准细胞活力曲线。标有u01-u08的孔包含不同的测试物品浓度。
[0909]
中性红吸收
[0910]
将要使中性红(nr)染色溶液的新鲜制备如下：
[0911]
·
将0.4％的储备水溶液避光并在使用前过滤以除去nr晶体。
[0912]
·
然后在sdmem中制备1:40稀释的储备溶液，并添加到细胞中。
[0913]
孵育后，待测孔中装有100μl含有中性红的sdmem。将靶细胞与nr在37℃在6％co2中孵育3小时。
[0914]
中性红吸收测量
[0915]
从靶细胞中去除未掺入的中性红，并用至少100μl pbs洗涤孔。然后加入150μl中性红脱附溶液(1％冰醋酸，50％乙醇水溶液)以定量萃取所掺入的染料。在微量滴定板振荡器上剧烈振荡至少10分钟后，直到从细胞中提取出中性红并形成均匀溶液为止，使用spectramax plus微量滴定板读数器(molecular devices)测量所得有色溶液在540nm的吸收。
[0916]
细胞活力的计算
[0917]
用softmax pro软件包(molecular devices)计算细胞活力。首先根据以下公式使用程序的线性曲线拟合选项，计算两点标准曲线(0％和100％活力)：
[0918]
y＝a+(b
×
x)
[0919]
(a＝线的y截距；b＝线的斜率；
[0920]
0％细胞活力＝含溶剂但无测试物品和中性红的细胞；
[0921]
100％细胞活力＝含溶剂和中性红但无测试物品的细胞)
[0922]
通过这种方式，计算与浓度增加的测试化学品一起孵育的细胞的活力。氯丙嗪(hcl)作为实验的阳性对照。
[0923]
ic
50
值的计算
[0924]
所有计算均使用softmax pro分析软件包进行(分子器件-有关详细信息，请参见：
[0925]
http://www.mbl.edu/jbpc/files/2014/05/softmax_pro_user_guide.pdf)
[0926]
光毒性区分因子的计算
[0927]
为了评估光毒性潜力，比较在有和没有uv暴露下确定的ic
50
值。
[0928]
因子＝ic
50
(-uv)/ic
50
(+uv)
[0929]
为区分光毒性和非光毒性测试化学品，应用了＞5的截断因子(liebsch m,spielmann h,balls m,brand m,b,dupuis j,holzh
ü
ter hg,klecak g,l.eplattenier h,lovell w,maurer t,moldenhauer f,moore l,pape w,pfannenbecker u,potthast jm,de silva o,steiling w,willshaw a.first results of the ec/colipa validation project.in vitro phototoxicity testing.in:in vitro skin toxicology:irritation,phototoxicity,sensitization；vol.10.alternative methods in toxicology,-eds.rougier a,maibach hi,goldberg am；mary ann liebert publ.:new york,usa 1994,pp.243-251)。
[0930]
即使在最高测试浓度下对鼠成纤维细胞也没有细胞毒性的测试物品，但在uv暴露后显示出细胞活力的强烈剂量依赖性下降，也被认为具有光毒性(spielmann h,balls m,dupuis j,pape wjw,pechovitch g,silva deo,holzh
ü
tter,hg,clothier r,desolle p,gerberick f,liebsch m,lowell ww,maurer t,pfannenbecker u,potthast jm,csato m,sladowski d,steiling w,brantom p.the international eu/colipa in vitro phototoxicity validation study:results of phase ii(blind trial).部分1:the 3t3 nru phototoxicity test.toxicology in vitro 1998,12:305-327)。
[0931]
测试结果如下所示，本发明的化合物显示出非常好的光毒性。
[0932]
表7.本发明化合物的3t3测试结果
[0933]
实例编号光毒性因子ic
50
(uv-a)(μg/ml)31》100201》100631》100
[0934]
实例87
[0935]
胚胎干细胞测试
[0936]
体外小鼠胚胎干细胞测试(mest)测定是罗氏实施的常规测定。最初的est是由horst spielmann和他的团队于1997年基于源自小鼠129株的囊胚衍生的永久胚胎小鼠esc(mesc)d3细胞系作为用于胚胎毒性筛选的体外模型而开发的，并通过了欧洲替代方法验证中心(ecvam)的验证。
[0937]
我们进一步优化和修改了该方法，允许将测定应用于药物化合物。
[0938]
生物学终点和终点度量：
[0939]
代表分化细胞的3t3成纤维细胞的细胞毒性(生长抑制)和物质处理10天后未分化胚胎干细胞(d3)的细胞毒性充当两个测定终点。这是通过以下方式来确定的：使用存在于活细胞的完整线粒体中的脱氢酶，以将黄色可溶性底物3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(mtt)转化为深蓝色的不溶性甲产物，该甲产物被隔离在细胞内并在溶解细胞膜后使用吸光度读数器(570nm)定量检测。
[0940]
第三个终点是在治疗10天后抑制es细胞分化为心肌，即心肌细胞。通过显微镜来评估该细胞的跳动。
[0941]
材料和试剂
[0942]
mesc细胞：es-d3[d3](crl-1934
tm
)
[0943]
小鼠成纤维细胞：balb/3t3克隆a31(ccl-163
tm
)
[0944]
balb/c 3t3细胞克隆a31：美国菌种保藏中心(atcc)目录号ccl-163
[0945]
es-d3(d3)：美国菌种保藏中心(atcc)目录号crl-1934
[0946]
m-lif：sigma，目录号l5158-5ug
[0947]
neaa(100x)：gibco，目录号11140-035
[0948]
台盼蓝0.04％：gibco，目录号t10282
[0949]
mtt：tocris bioscience，目录号5224/500
[0950]
5-氟尿嘧啶：sigma，目录号f-6627-5g
[0951]
青霉素/链霉素：gibco，目录号15140-122
[0952]
pbs(-cacl2/-mgcl2)：gibco，目录号14190-094
[0953]
fcs：hyclone，目录号sh30070.03
[0954]
具有葡萄糖、谷氨酰胺、nahco3的dmem：gibco，目录号41966-029
[0955]
方法
[0956]
准备工作
[0957]
介质和终点测定溶液
[0958]
培养基：
[0959]
[0960][0961]
将17.5μlβ-me加入到25ml的pbs
[0962]
在4℃储存最长1周
[0963]
fcs
[0964]
通过水浴(37℃)一次解冻fcs，并制成100ml、50ml和25ml的等分部分。
[0965]
避免多次解冻
[0966]
在-20℃储存
[0967]
mtt-溶液
[0968]
5mg mtt/ml pbs
[0969]
使用来自millipore的无菌过滤器并制成8ml和4ml的等分部分
[0970]
在-20℃储存
[0971]
mtt-解吸溶液
[0972]
20％sds溶于1:1的水/dmf中，用乙酸将ph值调节至4.5
[0973]
测试化合物
[0974]
储备溶液：200mm
[0975]
溶剂：100％dmso
[0976]
分化测定
[0977]
第0天
[0978]
1)针对d3细胞用胰蛋白酶0.05％edta进行细胞传代。
[0979]
2)组装细胞悬浮液：在50ml falcon管中用18ml介质(针对每次测试)将细胞稀释至2.5
×
104/ml。
[0980]
3)准备培养皿(pd)：将5-10ml无菌dulbecco pbs(gibco)加入到每个培养皿底部，分布于整个培养皿。
[0981]
4)eppendorf管中的测试化合物的稀释系列：将5μl的化合物(1:400稀释)和5μl对照溶液(dmso)加入2ml细胞悬浮液，涡流。
[0982]
5)在培养皿中制备悬滴：涡流管，用自动吸移管吸取悬浮液并多次将20μl液滴分配到培养皿的盖子上，以同心圆液滴的方式总共加入2ml(约100滴)；快速而平稳地转动盖子并装上pd；在37℃/5％co2孵育3天。
[0983]
第3天
[0984]
1)14ml pp管中的化合物的稀释系列
[0985]
6个管用于浓缩；填充有5ml测定介质
[0986]
1个管用于dmso(溶剂对照)，填充有5ml测定介质
[0987]
2)eppendorf管中的化合物的稀释系列
[0988]
加入12.5μl的化合物(1:400稀释)和12.5μl对照溶液，涡流
[0989]
3)将胚状体转移到细菌培养皿中
[0990]
小心地转动pd盖子，检查液滴是否被真菌污染
[0991]
用5ml制备好的溶液冲洗液滴数次
[0992]
转移到细菌培养皿中
[0993]
在37℃/5％co2孵育3天
[0994]
第5天
[0995]
1)50ml管中的化合物的稀释系列
[0996]
6个管用于浓缩；填充有25ml测定介质
[0997]
1个管用于dmso(溶剂对照)，填充有25ml介质
[0998]
2)1.5ml管中的化合物的稀释系列
[0999]
加入62.5μl的化合物(1:400稀释)和对照溶液(dmso)，涡流
[1000]
3)准备96孔板
[1001]
每种化合物2个板，参见化合物板布局
[1002]
在所有96孔中加入220μl介质/化合物/溶剂混合物
[1003]
从低浓度开始
[1004]
4)吸移胚状体
[1005]
目视控制培养皿中的胚状体
[1006]
使用25μl吸头，在每个孔中吸取一个胚状体
[1007]
目视检查板以确保每个孔中存在至少一个胚状体
[1008]
在37℃/5％co2孵育3天
[1009]
第10天
[1010]
针对跳动的心肌细胞用显微镜观察每个孔
[1011]
测定介质和dmso对照物应显示至少80％的跳动心肌细胞(参见验收标准)
[1012]
细胞毒性测定
[1013]
为所有物质制备浓度为0.2mol/l的储备溶液。将测试物质在dmso溶液中稀释。
[1014]
第0天
[1015]
1)为d3和3t3细胞系制备细胞悬浮液
[1016]
2)3t3细胞为2.5
×
104个细胞/ml，d3细胞为1.5
×
104个细胞/ml
[1017]
3)将200μl介质吸移到96孔多孔板的外孔(空白)中
[1018]
4)将50μl细胞悬浮液加入到96孔多孔板的剩余内孔(样品)中
[1019]
5)在37℃/5％co2孵育2小时以使细胞贴壁
[1020]
6)吸移测试物质或dmso对照物，在5ml管中形成2ml介质和6.67μl测试物质的浓度
[1021]
7)将150μl/孔的溶液加入到样品孔中(总共200μl/孔)
[1022]
8)在37℃/5％co2孵育3天
[1023]
第3天、第5天和第7天
[1024]
1)通过将5μl的测试物质(或dmso对照物)(1:400)加入到ml管中来稀释2ml的介质(3t3或d3细胞培养基)
[1025]
2)在不损坏底部细胞层的情况下，用真空泵去除介质
[1026]
3)将200μl的经稀释测试物质(和dmso对照物)加入到适当的样品孔中
[1027]
孵育：
[1028]
第3天：在37℃/5％co
2 2天
[1029]
第5天：在37℃/5％co
2 2天
[1030]
第7天：在37℃/5％co
2 3天
[1031]
第10天
[1032]
在光学显微镜下初步目视观察细胞变化、物质沉淀或其他任何影响
[1033]
mtt-测量：
[1034]
1)通过将4ml mtt加入到40ml dmem中并预热至37℃来形成最终mtt溶液
[1035]
2)通过小心丢弃介质而从96孔板中去除介质
[1036]
3)使用多壁吸移器将200μl的mtt溶液加入到每个孔中
[1037]
4)将板在37℃/5％co2孵育3小时
[1038]
5)将mtt解吸溶液预热至37℃
[1039]
6)小心去除mtt溶液
[1040]
7)将130μl的mtt解吸溶液加入到每个孔中，并将板在培养箱中在37℃孵育30分钟，然后将板放在板振荡器上至少2-3小时
[1041]
8)在570nm处测量板读取器上的吸收率
[1042]
验收标准
[1043]
分化终点：需要总测定中有至少80％的跳动心肌细胞才认可为有效测定
[1044]
细胞毒性终点：
[1045]
dmso对照物和pos对照物的可接受范围以及对d3的od值(约1.8-2.2)和3t3的od值(0.8-1.0)的确定应在它们的适当范围内
[1046]
数据分析
[1047]
分化终点：
[1048]
确定跳动心肌细胞的总数(每孔至少一个跳动心肌细胞＝一个正计数，每孔无跳动心肌细胞＝负计数)，归一化为阳性dmso对照物
[1049]
细胞毒性终点：
[1050]
确定空白的od 570的平均值(值表示染料对塑料材料的粘附力和介质的残留量)。从样品值减去该值并继续使用经校正的值进行计算。
[1051]
确定经处理的样品孔的od 570的平均值。确定溶剂对照孔的od 570平均值被设定为100％。存活率以归一化为dmso溶剂对照物的％来计算。
[1052]
预测模型
[1053]
将酶标仪生成的光密度(od570)的数据文件复制到excel电子表格中。自动计算平均od值、标准偏差和存活率。可以从电子表格中的浓度-响应曲线以图形方式计算来自测定的以下终点：
[1054]
ic50 d3-50％的d3细胞已死亡时的测试物质的浓度
[1055]
ic50 3t3-50％的3t3细胞已死亡时的测试物质的浓度。
[1056]
id50 d3-d3细胞到收缩性心肌细胞的分化减少50％时的测试物质的浓度。
[1057]
将来自细胞毒性测定的d3和3t3细胞的ic50值以及d3分化测定的id50输入到从scholz等人1999a使用的经修改预测模型开发的统计评估中：
[1058][1059]
d12_3《0.5表示“负”[1060]
d12_3》0.6表示“正”[1061]
0.5与0.6之间的预测评分被标记为边界结果。
[1062]
不确定的结果也是可能的，例如，在溶解度将测试的剂量范围限制到无法针对一条或多条剂量响应曲线确定ic50或id50值的程度(withlow等人2007)的情况下
[1063]
表8.针对本发明的化合物的mest结果
[1064]
实例编号预测评分d12_3180.11190.05200.49630.43
[1065]
实例88
[1066]
雄性wister-han大鼠的单剂量药代动力学(pk)研究
[1067]
通过对雄性wister-han大鼠(供应商：beijing vital river laboratory animal technology co.,ltd)的单剂量pk研究，评估了选定化合物的药代动力学特性。简而言之，两组动物以2mg/kg静脉内施用(iv，推注)或以10mg/kg口服施用(po，通过管饲法)单剂量的相应的化合物。在给药后5min(仅对于iv)、15min、30min、1h、2h、4h、7h和24h时，经由颈静脉收集血样(大约150μl)。将血样置于含有edta-k2抗凝剂的管中，并且在4℃下以3000rpm的转速离心15min以从样品中分离血浆。离心后，将所得血浆转移至干净的管，以用于用lc/ms/ms来进行生物分析。使用非区室分析来计算药代动力学参数。基于iv给药后的血浆浓度-时间曲线来获得分布体积(vss)、半衰期(t
1/2
)和清除率(cl)。从po剂量后的实验观察来直接记录峰值浓度(c
max
)。使用线性梯形法则来计算血浆浓度-时间曲线下面积(auc
0-最后
)，直至最后可检测浓度。基于iv和po给药后的剂量归一化auc
0-最后
来计算生物利用度(f)。
[1068]
药物的vss代表药物在身体组织而不是血浆中分布的程度。vss与分布到组织中的药物量成正比。vss越高表明组织分布的量越大。
[1069]
在表9中给出了在iv和po施用后pk参数的结果。
[1070]
表9.针对本发明的化合物的pk参数
[1071]