专利名称：两栖蓝素前体因子肽组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些肽的用途和含有这些肽的组合物。更具体地说，本发明涉及一些被称为CPF肽的肽及其类似物和衍生物的药物的用途和它的组合物。
用于本发明的一些CPF肽在文献中已有叙述，它包含下列顺序。
(1)GFGSFLGLALKAALKIGANALGGAPQQ(2)GLASFLGKALKAGLKIGAHLLGGAPQQ(3)GLASLLGKALKAGLKIGTHFLGGAPQQ(4)GLASLLGKALKATLKIGTHFLGGAPQQ(5)GFASFLGKALKAALKIGANMLGGTPQQ(6)GFGSFLGKALKAALKIGANALGGAPQQ(7)GFGSFLGKALKAALKIGANALGGSPQQ(8)GFASFLGKALKAALKIGANLLGGTPQQ上述顺序用氨基酸的单字母编码表示的。
在RichterK.Egger，R.，和Kreil(1986)J.Biol.Chem261，3676-3680;
Wakabayashi，T.，Kato，H.，andTachibaba，S.(1985)NucleicAcidsResearch13，1817-1828;Gibson，B.W.，Poulter，L.，Williams，D.H.，andMaggio，J.E，(1986)J.Biol.Chem261，5341-5349中能得到有关CPF肽的综述。
应该注意，先前公开的报道中未曾提及这些肽的作用。实际上，Kreil等人在最近的一篇论文中指出“这些肽是否具有生物活性目前尚不清楚。”(Vlasak，R.，Wiborg，O.，Richter，K.，Burgschwaiger，J.V.，andKreil，G.，(1987)Eur.J.Bichem.169，P.53)。
一方面，本发明提供了一种组合物，该组合物含有CPF肽和/或其生物活性类似物或衍生物以及一种药用载体。
另一方面，本发明提供了一种方法，该方法施用一种CPF肽和/或其生物活性类似物或衍生物来抑制一种或多种靶细胞的生长。
术语类似物和/或衍生物均包括所含的氨基酸多于或少于CPF肽的肽以及在CPF肽的氨基酸中有一种或多种变化的肽。
本文所说的CPF肽及其类似物和衍生物有时是指CPF肽的总称。
该CPF肽最好是一种包含下列碱性肽结构X的肽-R1-R1-R2-R2-R1-R1-R3-R1--R1-R1-R3-R1-R1-R4-R5-R1-其中R1是一种疏水氨基酸;
R2是一种疏水氨基酸或一种碱性亲水氨基酸;
R3是一种碱性亲水氨基酸;
R4是一种疏水或中性亲水氨基酸;和R5是一种碱性或中性亲水氨基酸。
在下文中用符号X表示上文的碱性结构。
疏水氨基酸是Ala，Cys，Phe，Gly，Ile，Leu，Met、Val、Trp、和Tyr。
中性亲水氨基酸是Asn，Gln，Ser和Thr。
碱性亲水氨基酸是Lys、Arg，和His。
该CPF肽可只含有上述的氨基酸或在氨基端和/或羧基端或氨基和羧基二端还含有附加的氨基酸。一般说来，该肽所含的氨基酸不多于40个。
包含上述碱性结构的CPF肽，在其氨基端最好有1-4个附加的氨基酸。
因此，可用下列结构式表示这些优选的肽Y-X-其中X是上述的碱性肽结构而Y是(ⅰ)R5-，或(ⅱ)R2-R5-;或(ⅲ)R1-R2-R5-;或(ⅳ)R2-R1-R2-R5;最好为甘氨酸-R1-R2-R5。
其中R1、R2和R5的规定如前。
碱性肽结构的羧基端也可有附加的氨基酸，其数目为1-13个。
在一种最佳方案中，该碱性结构在其羧基端有1-7个附加的氨基酸，其结构式可由下表示-X-Z其中X是上面规定的碱性肽结构，而Z是(ⅰ)R1-;或(ⅱ)R1-R5-;或(ⅲ)R1-R1-R4;或(ⅳ)R1-R1-R4-R4;或(ⅴ)R1-R1-R4-R4-R6;或
(ⅵ)R1-R2-R4-R4-R6-Gln;或(ⅶ)R1-R1-R4-R4-R6-Gln-Gln，其中R1和R4的规定如前所述，R6是脯氨酸或一种疏水氨基酸。
这些优选的肽可用如下结构式表示(Y)a-X-(Z)b其中X、Y和Z的规定如前所述，a是0或1，b是0或1。
作为用于本发明的类似CPF肽的一些典型例子，可以提及如下表示的肽(单字母氨基酸编码)G12S3LG4ALKA5LKIG678LGG9(10)QQ其中1＝F，L2＝G，A3＝F，L4＝K，L5＝A，G，T6＝A，T7＝H，N8＝A，M，F，L9＝A，S，T10＝P，L用数字标记的氨基酸的任意组合来得到一种碱性CPF肽结构或它的一种类似物或衍生物。
该CPF肽和/或它的类似物和/或衍生物是离子通道形成肽。离子通道形成肽或离子载体是能增加离子穿过天然或合成脂质膜的渗透性的一种肽。Christensen等人在PNASVol.85P5072-76(July1988)中叙述指出了一个肽是否具有离子通道性能、因而是不是一种离子载体的分类研究法。用于本发明的一种离子通道形成肽是用Christensen等人的方法测定具有离子通道形成性能的一种肽。
一般来说，该CPF肽和/或其类似物或其衍生物通常是水溶性的，在中性PH的水中，其浓度至少可达到20mg/ml。而且，这些肽是非溶血性的;即，在有效浓度下它们不会破坏血细胞。此外，这种肽的结构使肽分子具有屈曲性。将该肽放在水中时，它不会呈现一种两亲(既亲水又亲油)的结构。当该肽碰到一种油质表面或膜时，该肽链本身会折叠成一种杆状结构。
可将抑制靶细胞生长的有效量的CPF肽和/或它的类似物或衍生物给一个宿主如，人或非人的动物施用。因此，该CPF肽和/或它的类似物或其衍生物可用作抗菌剂、抗病毒剂、抗生素、抗肿瘤剂、杀精子剂，还具有其它的生物活性功用。
这里所用的术语“抗菌的”意思是指本发明的多肽可抑制、阻止或破坏微生物如细菌、真菌、病毒或类似物的生长或增生。
这里所用的术语“抗生的”意思是指用于本发明的多肽产生不利于细胞、组织或有机体正常的生物功能的作用，包括在与该多肽接触时使之死亡或破坏以及抑制该生物体系的生长或增生。
这里所用的术语“杀精子的”意思是指用于本发明的多肽能抑制、阻止或破坏精子的游动性。
这里所用的术语“抗病毒的”意思是指用于本发明的多肽能抑制、阻止或破坏病毒的生长或增生。
这里所用的术语“抗肿瘤的”意思是指该多肽能抑制肿瘤的生长或破坏肿瘤。
本发明的多肽对许多微生物，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、真菌、原生动物门等均具有宽范围的有效抗菌活性。本发明的多肽为对多肽敏感的生物体引起的微生物感染提供了治疗或控制方法，该治疗方法包括对易受微生物感染或与微生物感染有关的宿主有机体或组织施用抗菌剂量的至少一种多肽。
由于该多肽的抗菌特性，它们还可用作易受微生物污染材料的消毒剂或防腐剂。
可将该CPF肽和/或它的衍生物或类似物与一种无毒的药用载体或赋形剂如，一种填充剂、无毒的缓冲剂或生理盐溶液结合施用，可局部或全身使用该药用化合物，并且可以任何合适的形式如一种液体、固体、半固体、注射溶液、片剂、软膏、洗液、糊剂、或胶囊等形式使用。该多肽组合物还可与辅剂、蛋白酶抑制剂、或相容性药物相结合使用，如果这样的结合对控制由有害的微生物，包括原生动物门病毒等引起的感染是令人希望的或有利的话。
可对一种宿主，尤其是一种动物施用本发明的肽，其用量为一个有效的抗生物量和/或抗肿瘤量和/或抗病毒量和/或抗菌剂量和/或一个抗杀精子剂量。
根据其用途，本发明的一种组合物将含有有效抗菌剂量和/或有效抗杀精子剂量和/或有效抗病毒剂量和/或有效抗肿瘤剂量和/或有效抗生物剂量的一种或多种具有该活性的上述肽。
当该肽被用于局部组合物中时，其用量一般至少为0.1%(重量)。在大多数情况下，该肽的用量不必大于1.0%(重量)。
在全身使用该组合物时(包括肌内、静脉内，腹膜内)，该活性肽的用量应达到至少约含肽5μg/ml的血清浓度，一般该肽的血清浓度无需超过500μg/ml。血清液浓度最好约为100μg/ml。可以在待全身施用的一种组合物中以1-约10mg/Kg的剂量加入该肽来达到这样一些血清浓度。一般，施用该肽的剂量无需超过100mg/Kg。
通过下列实例将进一步说明本发明;但是不能由此而限制本发明的范围。
表Ⅰ说明肽GFGSFLGLALKAALKIGANALGGAPQQ〔CPF(Ⅰ)〕和肽GFASFLGKALKAALKIGANLLGGTPQQ〔CPF(Ⅱ)〕的抗菌活性。
表Ⅱ表明CPF(Ⅰ)和CPF(Ⅱ)对一些细菌和真菌的菌株的最小抑制浓度。
表Ⅲ列出了对几种不同的原生动物门产生物理破坏时所需要的CPF(Ⅰ)和CPF(Ⅱ)的最小有效浓度。在每种情况下该肽均引起渗透膨胀。
表Ⅰ肽的抗菌活性肽在E.Coli的菌苔上的抑制区(mm)(50μg肽)CPF(Ⅰ)15CPF(Ⅱ)15
表Ⅱ合成肽的抗菌活性谱有机体最小抑制浓度(μg/ml)CPF(Ⅰ)CPF(Ⅱ)E.Coli10-5010-50P.aeruginosa50-10050-100S.pyogenes100-200100-200S.cervisiae100-200100-200C.albicans50-10050-100表-Ⅲ原生动物对合成肽的敏感性最小破坏浓度(μg/ml)CPF(Ⅰ)CPF(Ⅱ)P.caudatum1010T.pyriformis1010A.castellani22表Ⅳ抗癌细胞的活性(μg/ml)CPF(Ⅰ)CPF(Ⅱ)VeroCells250250EhrlichAscites250250
(Legend)细胞在含有10%小牛血清的MEM中生长。将肽直接加到装有细胞合生菌台的小孔中，在37℃培育30分钟，记录下通过台盼(Trypan)蓝的渗透性测得被杀死的细胞大于90%的浓度。
根据上述教导，本发明可作很多改进和变更，因此在不超出权利要求范围的情况下，本发明可以不同于具体描述过的方式被实施。
权利要求
1.一种组合物，含有至少一种肽和一种药用载体，该肽是一种CPF肽或它的生物活性类似物或衍生物。
2.按权利要求1的组合物，其特征为该肽包含下列碱性结构X-R1-R1-R2-R2-R1-R1-R3-R1--R1-R1-R3-R1-R1-R4-R5-R1其中R1是一种疏水氨基酸;R2是一种碱性亲水氨基酸或一种疏水氨基酸;R3是一种碱性亲水氨基酸;R4是一种疏水或中性亲水氨基酸，而R5是一种碱性或中性亲水氨基酸。
3.按权利要求2的组合物，其特征为该肽包含下列结构Y-X-其中X是权利要求2的碱性肽结构;而Y是R5-;R2-R5-;R1-R2-R5-或R2-R1-R2-R5。
4.按权利要求2的组合物，其特征为该肽包含下列碱性结构-X-Z-其中X是权利要求2的碱性肽结构而Z是R1;R1-R1;R1-R1-R4;R1-R1-R4-R4;R1-R1-R4-R4-R6;R1-R1-R4-R4-R6-Gln;orR1-R1-R4-R4-R6-Gln-Gln，其中R6是脯氨酸或一种疏水氨基酸。
5.按权利要求1的组合物，其特征为该肽包含下列碱性结构(Y)a-X-(Z)b其中Y和Z如前面权利要求3和4中的规定，a是0或1，而b是0或1。
6.按权利要求1的组合物，其特征是所说的CPF肽或其生物活性类似物或其衍生物以一个抑制一种靶细胞生长的有效量存在于其中。
7.按照权利要求1的组合物，其特征是其中的肽具有下列结构G12S3LG4ALKA5LKIG678LGG9(10)QQ其中1＝F，L2＝G，A3＝F，L4＝K，L5＝A，G，T6＝A，T7＝H，N8＝A，M，F，L9＝A，S，T10＝P，L
8.一个抑制一种靶细胞生长的方法，包括;以抑制一种靶细胞生长的有效量施用至少一种CPF肽或其类似物或其衍生物。
9.按权利要求8的方法，其特征为所说的施用是对一种动物宿主施用有效的抗肿瘤剂量。
10.按权利要求8的方法，其特征为所说的施用是对一种动物宿主施用有效的抗病毒剂量。
11.按权利要求8的方法，其特征为所说的施用是对一种动物宿主施用有效的抗菌剂量。
12.按权利要求8的方法，其特征为所说的施用是对一种动物宿主施用有效的抗生物剂量。
13.按权利要求8的方法，其特征为所说的施用是对一种动物宿主施用有效的抗杀精子剂量。
14.按权利要求8的方法，其特征为该肽包含下列碱性结构X-R1-R1-R2-R2-R1-R1-R3-R1--R1-R1-R3-R1-R1-R4-R5-R1其中R1是一种疏水氨基酸;R2是一种碱性亲水氨基酸或一种疏水氨基酸;R3是一种碱性亲水氨基酸;R4是一种疏水或中性亲水氨基酸而R5是一种碱性或中性亲水氨基酸。
15.按权利要求14的方法，其特征为该肽包含下列结构Y-X-其中X是权利要求14的碱性肽结构，和Y是R5-;R2-R5-;R1-R2-R5-or R2-R1-R2-R5
16.按权利要求14的方法，其特征为该肽包含下列碱性结构-X-Z-其中X是权利要求14的碱性肽结构，而Z是R1;R1-R1;R1-R1-R4;R1-R1-R4-R4;R1-R1-R4-R4-R6;R1-R1-R4-R4-R6-Gln;orR1-R1-R4-R4-R6-Gln-Gln，其中R6是脯氨酸或一种疏水氨基酸。
17.按权利要求8的方法，其特征为该肽包含下列碱性结构(Y)a-X-(Z)b其中Y和Z的规定如前，a是0或1和b是0或1。
全文摘要
CPF肽和/或类似物或衍生物可用作一种药物。这些肽具有抗生和/或抗病毒和/或抗肿瘤和/或抗杀精子活性。
文档编号A61P31/04GK1043874SQ89108590
公开日1990年7月18日 申请日期1989年10月21日 优先权日1988年10月21日
发明者迈克尔·沙斯洛夫 申请人:麦盖宁科学有限公司