专利名称：9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及氨基酸保护剂9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的纯化工艺技 术领域，尤其是采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu) 的方法。
背景技术：
多肽药物和诊断试剂已引起我国的高度重视，我国制定的"十五"期间生物医药研究的重 点方向之一就是多肽药物和诊断试剂。如多肽疫苗、抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、细胞因子模 拟肽、抗菌性活性肽、用于心血管疾病的多肽以及诊断用多肽等，在未来几年里将会有大量 的多肽药物和试剂进入临床试验。部分将被批准生产销售。由于诸如胸腺肽a、抗艾滋病药 T-20等众多多肽药物的不断推出，以及它们在治疗病毒性感染、心血管疾病、抗肿瘤及艾滋 病等疾病的优良功效，且没有传统氯化、硝化、磺化等工艺生产的常用药物的副作用。因此， 多肽药物合成已成为最活跃的生化科技领域之一，也正成为世界各大制药公司研制与生产的 热门。
多肽是由氨基酸残基通过肽键连接成的一类化合物，多肽在化学合成中对氨基酸的保护 要求很高，因此，作为多肽合成最重要的氨基酸保护剂之一的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯 (FMOC-Osu)市场前景十分广阔。化学合成多肽一般需经四个步骤1、保护非反应性基团； 2、活化羧基；3、形成肽键；4、脱保护基团。1963年，R.B Merrifield创立了将氨基酸的末 端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次縮合氨基酸，延长肽链，合成蛋白质的固相合 成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的，克服了经典液相 合成法中每一步产物都需纯化的困难，奠定了自动化合成肽的基础，为此，Merrifield获得了 1984年诺贝尔化学奖。FMOC固相法由于在合成含有酸性条件下不稳定的氨基肽时，具有特 别优越之处，因而9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)作为提供FMOC基团最有效的 原料，近年来，得到了飞速发展。
9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)的合成方法很多，文献早有报道，但所得9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(FMOC-Osu)纯度不高，杂质多，不能直接用于多肽药剂的合成, 必须经过纯化。Lucas Lapatsanis等人在文献Synthesis Communication 72,671-674(1983)中阐述 了用石油醚重结晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。此法虽原料
易得，但需用大量溶剂，且重结晶时由于温度较高，易产生9-芴甲烯杂质，产品质量受到一 定影响。
Alenka Paquet等人在文献Can丄Chem.60，976-80(1982)中报导了用氯仿一乙醚重结晶纯化 9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。此法操作条件温和，产品纯度也高， 但乙醚挥发性强，损耗高，且使用极不安全，难以工业化生产。
发明内容
本发明提供的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)纯化工艺，其技术特征是 先用现有技术制备出9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液，再采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法，得到熔点147.2°C 148.2。C、杂质9-芴甲烯小于0.1%、纯度大于99%的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)。在 9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液中，按体积比加入去离子水，去离子水体积与9-芴甲氧 羰酰丁二酰亚胺酯溶液体积比为5 1 : 1，搅拌析晶，析晶温度为0 25'C，析晶时间为2小 时。过滤，用脂肪醇浸泡，脂肪醇为1 4个碳原子的脂肪醇，脂肪醇与FMOC-OSu较适宜 的体积重量比为2 1 : 1，浸泡时间为1 2小时，洗涤的温度为0 25。C，洗涤时间为1 2 小时，洗涤次数为2 3次，烘干后即得熔点147.2。C 148.2°C，杂质9-芴甲烯小于0.1%, 纯度大于99%的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)。所用脂肪醇回收后可 循环使用。
本发明所提供的FMOC-OSu纯化是在常温以下进行，不会带来高温重结晶过程易产生杂 质以及乙醚易挥发带来的不安全隐患，本发明工艺简单，条件温和，原料易得，所用的洗涤 溶剂对FMOC-OSu产品中各不纯物质均有较大溶解度，而对产品溶解度小，单个杂质含量低， 有效的控制了杂质9-芴甲烯的生成，使产品质量稳定，大大提高了产品的纯度和收率，纯化 所用的溶剂能完全循环使用，对环境友好，并且产品质量稳定，易于工业化生产，完全满足 多肽合成中保护氨基酸的要求。
图l是本发明的工艺流程图。 具体实施例
以下结合实施例，对本发明作进一步说明，但本发明不仅仅局限于以下的实施例。 实施例1:
在500ml三口瓶中加入含50g FMOC-OSu的溶液200mL，降温至0°C ，缓慢加入去离子水200mL，控制温度低于25'C,加完搅拌1小时，降温至10'C以下析晶，过滤。将滤饼加入 到250mL乙醇中，控温低于25'C搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.5%， 9-荷甲烯杂质小于0.1%,熔点147.5 M8.2。C。 实施例2:
500ml三口瓶中中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0。C，控制温度低于25 'C，缓慢加入去离子水200mL，加完搅拌l小时，降温至10'C以下析晶，过滤，将滤饼加入 250mL异丙醇中，控温低于25'C搅拌1小时，过滤，用少量异丙醇洗涤，滤饼干燥，得45g FMOC-OSu，纯度99.2%， 9-芴甲烯杂质小于0.1%，熔点147.2 148.1°C 。
实施例3:
500Lml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50gFMOC-OSu溶液200mL，降温至0。C，缓慢 加入去离子水200mL，控制温度小于25t:，加完搅拌1小时，降温至10'C以下析晶，过滤。 将滤饼加入回收的250mL乙醇中，控温低于25。C搅袢1小时，过滤，用少量乙醇洗涤，滤饼 干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.7%， 9-荷甲烯杂质小于0.1%，熔点147.5 148.2°C 。
实施例4:
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0。C，缓慢 加入去离子水200mL，控制温度小于25'C，加完搅拌1小时，降温至1(TC以下析晶，过滤。 将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25。C搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤， 滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.5%， 9-芴甲烯杂质小于0.1%，熔点147.2~148.2°C。
实施例5:
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0。C，缓慢 加入去离子水400mL，控制温度小于25'C，加完搅拌1小时，降温至1(TC以下析晶，过滤。 将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25'C搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤， 滤饼干燥，得46gFMOC-OSu，纯度99.8%， 9-芴甲烯杂质小于0.1%，熔点147.8 148.2。C。
实施例6:
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至(TC，缓慢 加入去离子水200mL，控制温度小于15。C，加完搅拌1小时，降温至1(TC以下析晶，过滤。 将滤饼加入二次回收的250mL乙醇中，控温低于25。C搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤， 滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.6%， 9-芴甲烯杂质小于0.1%，熔点147.6 148.2°C。
实施例7:
500ml三口瓶中搪瓷反应釜中，加入含50g FMOC-OSu溶液200mL，降温至0°C ，缓慢 加入去离子水200mL，控制温度小于25'C，加完搅拌l小时，降温至1(TC以下析晶，过滤。 将滤饼加入二次回收的500mL乙醇中，控温低于25'C搅拌1小时，过滤，用少量乙醇洗涤， 滤饼干燥，得46g FMOC-OSu，纯度99.7%， 9-芴甲烯杂质小于0.1%，熔点147.7 148.2°C 。
权利要求
1、9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯纯化工艺，其特征在于，先用现有技术制备出9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液，再采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的方法，在9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯粗品溶液中，按体积比加入去离子水，去离子水体积与9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯溶液体积比为5～1∶1，搅拌析晶，析晶温度为0～25℃，析晶时间为1～2小时，过滤，用脂肪醇浸泡洗涤，浸泡时间为1～2小时，洗涤时间为1～2小时，洗涤的温度为0～25℃，洗涤次数为2～3次，烘干后即得熔点147.2℃～148.2℃，杂质9-芴甲烯小于0.1％，纯度大于99％的精品9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯。
2、 根据权利要求l所述的19-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯纯化工艺，其特征在于所述的脂 肪醇为1 4个碳原子的脂肪醇，脂肪醇与9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的体积重量比为2 1:1。
3、 根据权利要求1所述的9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯的纯化工艺，其特征在于纯化所用 溶剂脂肪醇循环使用。
全文摘要
本发明公开了一种采用去离子水低温析晶纯化9-芴甲氧羰酰丁二酰亚胺酯(简称FMOC-OSu)的方法。本发明所提供的FMOC-Osu纯化工艺简单，条件温和，原料易得且能完全循环使用，收率高，易于工业化生产。精制纯化的产品纯度高，单个杂质含量低，有效的控制了9-芴甲烯杂质生成，使产品质量稳定，完全能满足多肽合成中保护氨基酸的要求。
文档编号C07D207/00GK101096356SQ20071003430
公开日2008年1月2日 申请日期2007年1月24日 优先权日2007年1月24日
发明者徐建兵, 杨兴武, 涂昌位, 臧阳陵, 邓志谋 申请人:湖南化工研究院