专利名称：含生长激素的缓释组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种含生长激素缓释(release-controlled)组合物，它在动物体内半衰期长，无付用，本发明还涉及一种制备该组合物的方法。
大多数的具有生物活性的生长激素配方在活体内均有相对短的半衰期。为了提供足够高的生物作用及保持生长激素的生物活性延长，不得不大量和/或经常供药，这样可能会引起对给药动物严重的损伤。因此，一旦在活体内供给生长激素，即需要一个延长其效果并对动物又无害的用药方案。为了满足这种需要，已开发出各种生产具有滞延释放特性并降低给药频率或剂量的生长激素组合物的方法。
例如，美国专利4，985，440公开了一种含有一种过渡金属复合物，特别是一种锌一生长激素复合物的组合物，该组合物溶于蔬菜或矿物质油中，并与佐药和赋型剂混合成的一种油脂悬浮载体。这种方法很复杂，并且需要一金属或过渡金属复合的生长激素。例如，在严格的条件下，向生长激素溶液内加入氯化锌制得锌一生长激素复合物，但要经过多个步骤离心从含有这种复合物的悬浮液中洗去过量的氯化锌。然后最终得到的溶液需要进行冻干，提炼加工的全部过程即非常冗长乏味，又废时。
欧洲专利公开文献216，485号也描述了一种含有悬浮在诸如花生油的油脂中的锌一生长激素组合物。8mg该组合物和40mg生长激素示范性地向猪给药，只显示短短地9天药效。另外，该制备方法也与美国专利4，985，404号一样复杂。
美国专利4，863，736号披露一种制备含有生长激素颗粒可植入性的药丸的方法，这种药丸具有如，虫胶、蜂蜡和纤维素的聚合物部分屏障涂层。这种药丸控制生长激素在活体内的释放。同样，欧洲专利公开文献374，120号也提供一种在渗透设备中制备含生长激素的可植入性药剂的方法。欧洲专利公开文献246，540号也披露了一种制备合成含多肽和脂肪酸的可植入性药剂的方法。
另外，美国专利4，786，501号记载了一种制备可植入性药丸剂配方的方法，该方法包括混合生长激素，蔗糖和乙基纤维素，以及用多孔和无孔聚乙稀涂敷该混合物。美国专利4，761，289号也讨论了一种制备可植入性配方的方法，它包括混合生长激素和非水溶性的聚合物，加入一种非水溶性的溶剂并干躁。虽然这些可植入性配方具有保持疗效的作用，但它们需要经手术或特别的器械才能植入或给药;因此，需要相对复杂和不太方便的给药程序。
另外，欧洲专利公开文献193，917号披露一种组合物，它含有水分散性和水溶性的碳水化合物聚合物，以及一种具生物活性生长激素大分子。欧洲专利公开文献314，421号进一步公开了一种含分散在油脂内的一种多肽的组合物，它采用一种如右旋糖酐的碳水化合物聚合物作为支持物质。欧洲专利公开文献211，691号也报道了一种以几种蜂蜡作为支持物质含有分散在某种油脂中的多肽的组合物，但是它具有同上述那些欧洲专利公开文献193，917一样的缺点。在这些组合物中，动物体常常将右旋糖酐等碳水化合物聚合物视为抗原而引起反应，并且很敏感，因此不适合于长期使用。
韩国专利公开文献91-15302号描述了一种含有分散在生育酚内并配有延迟释放作用的动物生长激素的组合物。由于它的高粘度，这种组合物很难被注射使用，并具有在给药组织中滞留时间长的倾向，能引起对那一组织的损伤。
因此，本发明的目的在于提供制备一种生长激素组合物的方法，该组合物在动物活体内半衰期长，无付作用。
本发明的另一个目的在于提供一种采用本发明之方法制备的生长激素组合物。
按照本发明，将提供一种制备生长激素组合物的方法，它在活体内的释放是时间可控的，该方法包括如下步骤将卵磷脂和生长激素溶解在水溶液内，形成一种脂质体生长激素溶液;常规冷冻干躁条件下冷冻干躁所述的脂质体生长激素溶液;在生育酚衍生物中悬浮所述的冷冻干躁过的脂质体生长激素以制成本发明所述的新的组合物。
附图简要说明本发明还通过参考以下附图进一步加以理解，其中
图1和图2示出当将本发明之组合物注射给奶牛后，对牛奶产量的影响;
图3表示当本发明之新型组合物注射给生长期的猪后，其血清中猪生长激素的浓度;
图4所示将本发明之组合物注射给生长期的猪后，其血清中尿素氮的浓度;
图5示出将本发明之组合物注射给生长期的猪后，其血清中类胰岛素生长因子Ⅰ的浓度。
按照本发明所述，生长激素溶液同卵磷脂在均质机中混合，然后采用常规的方法，将其悬浮在生育酚衍生物中获得本发明之组合物。许多类型的生长激素都能用于本发明，只要它们具备理想的生物活性即可。这种典型的生长激素包括牛生长激素，猪生长激素，羊生长激素等等。虽然本发明不要求采用金属一，或过渡金属-复合生长激素或者用低度氢化的修饰过的生长激素，但是这些种类的生长激素也可以使用。可以采用的生长激素也包括那些经过重组DNA技术从诸如大肠杆菌和酵母等缩主细胞中制得的生长激素，以及从牛、羊和猪等动物体脑重体中提取出来的天然生长激素。
可用于本发明的生育酚衍生物包括d1-α-生育酚，d1-α-乙酸生育酚，d1-α-琥珀酸生育酚，d1-α-磷酸生育酚，1-α-生育酚，1-α-乙酸生育酚，1-α-琥珀酸生育酚，1-α-磷酸生育酚，和β，ξ1，ξ2，一生育酚衍生物;优选是α-乙酸生育酚。生育酚衍生物维持如大鼠、小鼠、豚鼠、猪和牛等动物的正常的生殖作用;帮助防止动物肌肉发育缺陷;在活体内生长激素的缓释起到载体的作用。另外，生育酚衍生物在活体内防止不规则肌肉运动，或者增强肌肉的强度。生育酚还能防止鸡不规则肌肉运动，或使肌肉变硬，也可以预防水貂、猪或猫的脂肪组织炎。本发明组合物内采用的生育酚的量为占该组合物重量的85～99%，优选90～99%。
本发明采用的具有生物活性的生长激素同卵磷脂进行混合，其混合比为7∶3至8∶2(重量比)。假如生长激素的量少于低限(即70%重量)，它很难显示出生物活性。假如生长激素的量超过其上限(即80%重量)，则很难形成脂质体生长激素混合物。
存在于本发明组合物中的卵磷脂控制生长激素在动物体内的释放时间。典型地适合于本发明的卵磷脂包括磷脂酰胆碱，溶血磷脂(Lysophospholipid)，缩醛磷脂和鞘磷脂。
另外，可以加入合适的赋形剂和/或佐药以使本发明组合物能制成各种类型的剂型。
如上所述，在某些公知的组合物中，生长激素需要同金属或过渡金属，通过复杂的工艺包括渗析形成复合物形式，因为在活体内其溶解性必须比较低，目的是获得缓释效果。生长激素也可以超量给药，以造成开始的冲击效果。
相反，按本发明制备的组合物，包括一种悬浮在生育酚载体中的冷冻过的脂质体生长激素，当它向动物体给药时，不必采用那种复杂的程序，即可以缓释的方式释放出具有生物活性生长激素，提炼加工全部的配方组分和给药程序非常简单和经济，更重要的是，本发明组合物的配方显示出在活体内生长激素伴随着较低的初始释放或者突然冲击释放的一种高品质的释放型。
现有技术中采用的金属复合生长激素的配方中的金属或过渡金属可引起令人故虑的付作用，而本发明组合物无付作用。本发明所用的生育酚衍生物在活体中具有某种药理辅助作用，并具有减轻或者预防活体对本发明组合物的排斥作用。
以下将结合实施例进一步解释本发明，这些实施例不具有限制本发明范围的意图。
实施例1取(用重组DNA技术(株式会社乐喜)生产的牛生长激素溶液30.03mg/l)牛生长激素溶液300ml，同大豆中提取的L-α-磷脂酰胆碱IV-S(L-α-卵磷脂)3g在均质机内混合20分钟。将该溶液在5分钟、4℃下经过一微流体化仪(microfluidizer)将其倒入一烧瓶，在干冰-丙酮浴下快速冷冻至负70℃，然后冷冻干躁。将含有L-α-磷脂酰胆碱和牛生长激素的冷冻干躁后的粉末133.3mg在均质机中同1ml的α一生育酚均匀混合10分钟。
选用10头刚好为哺乳中期的豪斯顿(Holstein)奶牛做实验。每头牛每两周注入本发明的组合物共6次。其中5头牛为实验组，另5头牛不注射该组合物做为对照组。肩甲上部皮下注射该组合物。注射后，每天计量牛奶产量，平均每天产奶量见表1和图1。
实施例2按实施例1的方法制备本发明组合物，只是取333.5mg冷冻干躁后的牛生长激素与37.02mg卵磷脂同1ml的α-乙酸生育酚混合。
选12头哺乳中期的豪斯顿奶牛进行实验。每头牛每两周注入2ml该配方组合物的共6次。其中6头牛做为实验组，另6头牛为对照组。按实施例1中所述的相同的方法进行实验，其实验结果见表2和图2。
表1本发明组合物对每日产乳量的作用单位(kg)对照组注射组注射前21.5023.91第一次主射21.6627.75第二次注射21.8428.18第三次注射21.5128.10第四次注射20.7627.73第五次注射19.5928.06第六次注射18.5127.17第六次注射17.9423.45后的两周表2本发明组合物对每日产乳量的作用单位(kg)对照组注射组注射前26.1425.50第一次注射22.623.8第二次注射23.825.6第三次注射22.324.8第四次注射22.024.5第五次注射20.723.0第六次注射21.023.2第六次注射后18.919.3的两周实施例3按实施例1相同的方法制备猪生长激素组合物。选14头阉猪，每头重约60kg做实验。其中7头猪每三周每头猪注入本发明配方组合物1.5ml，共两次，另7头猪用做对照组不注射该组合物。注射后三周称量它们的体重和食料消耗量。计算喂食频率(FE，feedefficiencykg/day)。表3所示平均每天的增量数(ADG，averagedailygainkg/day)和喂食频率(FE＝食入量/体重增加量)。
表3平均每天增量和喂食频率对照组注射组第一个三周ADG0.940.97之后FE3.553.33第二个三周ADG0.810.96之后FE4.283.31实施例4按实施例1相同的方法制备猪生长激素配方组合物。用6头阉猪进行实验，每头猪重约60kg。其中3头猪每头注入1.5ml的该组合物。另外3头猪不注射组合物做对照组。测量血清猪生长激素浓度(PST)，血清尿素氮(BUN)浓度和类胰岛素生长因子Ⅰ浓度。
其测得结果见表4、图4和图5
表4血清PST浓度，BUN和类胰岛素生长因子Ⅰ的浓度血清PSTIGF-IBUN血清PSTIGF-IBUN天(ng/ml)(ng/ml)(mg/dl)(ng/ml)(ng/ml)(mg/dl)01.4334314.51.4444115.011.5230615.73258914.531.1530817.446.911358.061.4235615.08.3010186.0101.4435119.83.1069216.5141.4635419.71.0250619.0211.8034823.31.1043817.7如上表所见，按本发明的方法制备的组合物当给动物供药时具有较长的半衰期，而无副作用，由于它的粘性低适合用注射剂，并适合连续使用。该组合物很易给药不必用手术或特别的器械。另外，其制法非常简单和经济。
有关上述本发明特殊实施方案的描述应被视为本领域普通现本人员可以对其进行修改和变化，但也落入本发明权利要求限定保护范围之内。
权利要求
1.制备含生长激素的缓释组合物的方法，它包括如下步骤将生长激素同卵磷脂均匀混合制成一混合物；将该混合物溶解在水溶液内形成脂质体生长激素溶液；在常规冷冻条件下，冷冻干躁所述的脂质体生长激素溶液；并在生育酚衍生物中悬浮所述的冷冻后的脂质体生长激素制成缓释组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述的生长激素选自牛生长激素、猪生长激素和羊生长激素。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述的生长激素是经重组DNA技术制备得到的。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述的生育酚选自dl-α-生育酚，dl-α-乙酸生育酚，dl-α-琥珀酸生育酚，dl-α-磷酸生育酚，1-α-生育酚，1-α-乙酸生育酚，1-α-琥珀酸生育酚，1-α-磷酸生育酚，和β，ξ1，ξ2，-生育酚衍生物。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述的生育酚衍生物是dl-α-乙酸生育酚。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述的卵磷脂选自磷脂酰胆碱，溶血磷脂(Lysophospholipid)，缩醛磷脂和鞘磷脂。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述的生长激素与卵磷脂的重量混合比为7∶3至8∶2。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述的冷冻干躁后的脂质体生长激素的量按组合物总重量计为1%至15%，而生育酚衍生物的量为85%至99%。
9.一种按权利要求1所述的方法制备的生长激素缓释组合物。
10.如权利要求9所述的组合物还含有赋形剂和/或佐药。
全文摘要
本发明涉及一种缓释的生长激素组合物，在动物体内半衰期长而无副作用，还涉及其制法，包括混合生长激素和卵磷脂制成一混合物，在水溶液中溶解该混合物制成一种脂质体生长激素溶液，冷冻该溶液，在生育酚衍生物中悬浮该冷冻后的脂质体生长激素，制成上述的缓释组合物。
文档编号A61K9/127GK1087277SQ93101680
公开日1994年6月1日 申请日期1993年2月24日 优先权日1992年11月27日
发明者金南中, 赵兴洙, 宋孟锡, 李炳建 申请人:株式会社乐喜