专利名称：生理活性肽组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有生理活性的肽组合物，更具体地说，涉及含有生理活性肽，比如肽激素、生理活性蛋白质或酶蛋白质，并具有高度的制剂形态稳定性，以及在例如鼻部给药时具有改进的身体吸收性能的一种生理活性肽组合物。
由于其特定的生理活性，生理活性肽比如降钙素、胰岛素都是为了各种医学的用途而广泛而于治疗的聚合物。
然而，由于它们容易被消化系统内存在的蛋白酶分解，也由于其分子量高且具有极性，这些生理活性肽几乎完全不能被肠粘膜吸收。因此，它们不能口服给药，因而只能通过注射给药。注射给药不能说是值得推荐的方式，因为注射会引起病人注射点疼痛。此外，特别是当每隔一定间隔重复注身时，每次注射就重复一次这样的疼痛，对于病人来说，这经常很剧烈甚至难以忍受。因此，就有一种强烈的需求要开发出一种通过非注射途径，最好是能让病人自己能给药，在给药时更安全、简便，而且给药间隔较长的生理活性肽的给药方法。
作为生理活性肽的这种给药方法之一，比如为降钙素开发了用氟代烃作为喷射剂的呈悬浮液形式的气溶胶来进行鼻腔给药。作为另一种鼻部给药方法，有人建议过用一种喷雾剂作为一种可通过鼻部给药的液体制剂，这是一种将降钙素与作为吸收促进剂的表面活性剂一起配伍的制剂。再有，最近还提出过一些具有改进的吸收性的可鼻部给药的粉末制剂，它是在聚糖(如纤维素)的表面上吸附了降钙素而制成的。据认为，近来蓬勃发展的各种鼻部给药技术，作为像不适合口服给药的这类生理活性肽的给药方法基本上是占有优势的。由于在鼻腔的鼻板真粘膜中静脉丝发达，当通过鼻腔给药时，通过鼻腔的粘膜将生理活性肽吸收到人体的循环系统中；然而，至今所提出的可鼻部给药制剂并不令人满意，因为生理活性肽的吸收性不好，或有局部刺激，所以还没有商品化。
本发明的目的是提出一种可鼻部给药的组合物，使得比至今所提出的其它各种可鼻部给药的制剂具有更高的生物利用率和更少的刺激性来对不适合口服给药的生理活性肽进行鼻部给药。
作为对这样的可鼻部给药制剂进行广泛的研究以实现本发明目的的结果，本发明者发现，通过将生理活性肽(如降钙素或胰岛素)均匀地分散在至今还没有在可鼻部给药制剂中当载体而研究过的独特的载体中，并将其均匀地吸附在该载体上而制备的组合物可通过鼻腔途径给药，换句话说，这种组合物能够涂在鼻腔的粘膜上，使得产生临床的治疗效果。
换句话说，本发明人发现，通过涉及到将如降钙素之类的生理活性肽均匀地分散到一种独特的载体中并将所述的肽吸附到该载体上的技术，就能得到与标准注射给药法所得到的相同的或者更好的生物利用率。
本发明是这些发现的基础上完成的。
正如本说明书的前文所述，本发明的第一个目的是为可鼻部给药的组合物提供一种载体，更具体说，提供一种由平均粒度为20～250微米的羟基磷灰石细分散粒子组成的一种载体。
在该组合物中要含有的活性物质可包括所有可用来鼻部给药的活性物质；不过最好是生理活性肽。
本发明的第二个目的是提供一种生理活性肽组合物，更具体说是提供一种通过将生理有效数量的生理活性肽均匀地分散在平均粒径为20～250微米的羟基磷灰石中，并将所述肽均匀地吸附在其上而制备的组合物。
换句话说，本发明的最具体的目的是提供一种含有生理活性肽和羟基磷灰石的生理活性肽组合物，其中生理活性数量的所述生理活性肽被均匀地分散在平均粒度为20～250微米的羟基磷灰石中并均匀地被吸附在其上，该组合物呈粉末制剂的形式，可经鼻部给药。
在叙述优选的具体实例的过程中，本发明的其它目的、特点及优越性将变得显而易见。
本发明中使用的载体羟基磷在石是硬组织(如骨骼或牙根)中无机材料的主要组分，是至今被用作骨骼植入物的涂层物质。
然而，在此应注意到，至今还没有关于它可用作鼻部给药制剂载体的述评，而本发明人首次发现，羟基磷灰石可用作鼻部给药制剂的载体。
再者，本发明人进一步发现，可以用作本发明组合物载体的具有平均粒度为20-250微米的羟基磷灰石呈现出促进人体吸收生理活性肽的作用。
至今，人们一直认为，对于可鼻部给药的制剂，水溶性载体将有助于使活性物质得到良好的人体吸收性能。然而，本发明人发现，通过将活性物质均匀地分散在非水溶性载体(如羟基磷灰石)中，并使其均匀地吸附在其上就能得到有优异吸收性能的活性物质。
在本发明中使用的羟基磷灰石包括合成的羟基磷灰石和从生物体得到的羟基磷灰(生物羟基磷灰石)。可以从除去了有机物的动物骨骼或牙齿来制备生物羟基磷灰石。
通过将生理有效数量的生理活性肽均匀地分散在本发明的独特的载体中并使所述肽吸附在其上来制备符合本发明的生理活性肽组合物。
可用作符合本发明组合物的活性组分的生理活性肽可包括肽激素、生理活性蛋白质和酶蛋白质。
肽激素可以包括例如，甲状旁腺素(甲状旁腺激素)、降钙素、胰岛素、血管紧张肽、胰增血糖素、促骨酸激素、促胰液素、生长激素、催乳激素(促黄体激素)、促性腺激素、促甲状腺激素、促肾上腺激素、促黑素细胞激素、后叶加压素、催产素、促甲状腺激素释放激素、黄体生成激素释放激素、促肾上腺皮质激素、生长激素、促甲状腺激素(甲状腺刺激激素)、生长激素释放抑制因子、G-CSF、促红细胞生成素、超氧化岐化酶(SOD)等。
此外，干扰素、内白细胞素、尿激酶、溶菌酶、疫菌等也可以用作生理活性肽。
在这里要注意到，在本发明中要使用的生理活性肽并不限于上述的那些，任何可鼻部给药的生理活性肽部可配制成符合本发明的组合物。
在如上所述的这些生理活性肽当中，最好的是肽激素。此外，在肽激素当中，比较好的是降钙素、脂岛素和生长激素释放抑制因子，而特别好的是降钙素和胰岛素。
推荐用于符合本发明组合物的降钙素可以包括，例如鲑鱼降钙素、人体降钙素、猪降钙素、鸡降钙素、牛降钙素、鳗降钙素等。这些降钙素是天然存在的，由其来源抽提而得到，并已商品化。在此可注意到，鳗降钙素的稳定性高于人降钙素，而后者又高于鲑鱼降钙素，不过即使是这种稳定性较低的鲑鱼降钙素，当它被均匀地分散到并被吸附到符合本发明的独特载体上时，也可以是一种有高度生物利用率并能在血液中浓集的生理活性肽组合物。因此，降钙素最适合作为本发明的生理活性肽。
由此，符合本发明组合物的一种最好的形式就是一种呈粉状的生理活性肽组合物，它被配制成可鼻部给药的制剂，在该制剂中生理有效量的降钙素被均匀地分散在羟基磷灰石中并被吸附于其上。
此外，符合本发明组合物的另一种最好的形式也是一种呈粉状的生理活性肽组合物，它被配制成可鼻部给药的制剂，在该制剂中生理有效量的胰岛素被均匀地分散在羟基磷灰石中并被吸附于其上。
符合本发明组合物中要含有的生理活性肽的生理有效量可随着诸如所选用的活性物质、要治疗的疾病、所希望的给药次数、预期的疗效等因素而变化。当本发明的组合物通过鼻腔给药时，可以在将其生物利用率与其它含有同样活性物质的已知制剂进行比较的基础上确定该生理活性肽的生理有效量。
例如，当对糖尿病病人通过皮下给药给出胰岛素时，胰岛素的首次剂量一般为4～20个胰岛素单位，一般维持剂量为每天4～100单位，最大剂量为每天800单位。因此，当通过鼻部给药时，一般组合物给药剂量为4～100胰岛素就是合适的。
再有，当降钙素(如鲑鱼降钙素)通过肌内给药时，一般每天一次到每周三次，给药剂量约从50MRC单位(IU)至约100MRC单位(IU)。因此，当通过鼻部途径给药时，组合物的给药剂量为每天一次至每周3次，每次约50MRC单位至约400MRC单位是合适的，最好约100MRC单位至约200MRC单位。
符合本发明的生理活性肽组合物中生理活性肽的含量可以为制剂总重量的约0.005％至约30％，较好为约0.01％至约20％，更好为约0.1％至约5.0％。
另一方面，当符合本发明的生理活性肽组合物所含作为载体的羟基磷灰石的含量为制剂总重量的70～99.995％，较好为80～99.99％，更好为95～99.9％时，它能达到很高的鼻吸收程度。
为了配制符合本发明生理活性肽组合物的粉末制剂，可以将生理活性肽与载体在研钵中通过加压和剪切力进行混合成为最终混合物。用作载体的羟基磷灰石具有约20～约250微米，最好是约30～约60微米的平均粒度。另一方面，该生理活性肽最好被粉碎化至尽可能最小的颗粒，平均粒度小于20微米，最好小于10微米。
用本发明的组合物，按照如下所述的方法可以制造可鼻部给药的制剂。更具体说，当用鲑鱼降钙素或鳗鱼降钙素作为生理活性肽时，将生理有效量的降钙素与含有例如约1％的明胶作为稳定剂和含有例如约0.1～0.5％，较好约0.38％的天冬氨酸的pH值为4.5～5.5的水溶液混和，然后将得到的混合物冷冻干燥。然后在大约55％的相对湿度下将得到的粉末状混合物与羟基磷灰石拌和，这样就得到了含有均匀地吸附在羟基磷灰石上的生理活性肽的可鼻部给药组合物的细粉末。
为防止在给药前生理活性肽的活性损失，可在此后将可鼻部给药的组合物装入低脂型胶囊中并以适当的形式包装，最好是结合了铝包装与泡罩包装的密封形式。
应该注意到，其它生理活性肽(例如胰岛素)也可以用与上述基本相同的方法处理以藉此得到组合物。
作为如下所述的试验结果，我们发现，被试制剂的均匀湿度最好约为55％。这将在后面叙述。
由符合本发明生理活性肽组合物的试验例所呈现的特定效果在后面指出。
试验例1以胰岛素作为生理活性肽，以2.5毫克/每只兔(即每只兔5胰岛素单位(IU))的数量配合平均粒度为30～60微米的载体羟基磷灰石制备粉末状可鼻部给药的组合物。
将得到的组合物一次通过鼻部给6只新西兰雄兔给药。
在给药后的0、15、30、60、120和180分钟测量平均血糖下降值并以百分数(％)表示。
为进行比较，以2IU/兔的剂量通过皮下给6只新西兰雄兔注入胰岛素，并在给药后0、60、120、240和360分钟测量平均血糖下降值，以百分数(％)表示。
下面表1列出了平均血糖下降值。
表1平均血糖下降值
如从如上表1所表明，可以发现，对于通过鼻途径达到胰岛素更好的吸收，羟基磷灰石是有效的。
试验例2以鲑鱼降钙素作为生理活性肽，以每25毫克200MRC(IU)的含量与平均粒度为40～45微米的载体羟基磷灰石配合制备粉末状可鼻部给药组合物。
以25毫克的剂量将得到的组合物通过鼻部一次投给6位健康男性成年人，在投药前及投药后5、10、15、20、30、45、60、90、120和180分钟从每位受试成人身上采血(2.5毫升)。用标准RIA测量仪测量每份所采血样中鲑鱼降钙素的浓度。
下面表2列出了血液中鲑鱼降素浓度的变化。
表2血液中鲑鱼降钙素浓度(pg/ml)
<p>如上面表2中可明显地发现，此粉末状组合物表明了降钙素被血液吸收的程度很高，因而羟基磷灰石对实现降钙素更好的吸收是有效的。
试验例3以鲑鱼降钙素作为生理活性肽，以每25毫克200MRC(IU)的含量与载体羟基磷灰石配合制备成粉末状可鼻部给药组合物。
得到的组合物一次以25毫克的剂量通过鼻部对6位健康男性成年人给药，在给药前及给药后的5、10、15、20、30、45、60、90、120和180分钟从每位受试成人身上采血(2.5毫升)。用标准RIA测试仪测量每份所采血样中鲑鱼降钙素的浓度。
下面表3列出了血液中鲑鱼降钙素浓度的变化。
表3血液中鲑鱼降钙素的浓度(pg/ml)<
<p>从上面表3中可明显看出，为实现通过鼻腔更好地吸收降钙素，羟基磷灰石是有效的，在鼻部给药后很短时间降钙素浓度就达到最高值。
试验例4将平均粒度约40微米的羟基磷灰石(200毫克)与平均粒度约15微米的鲑鱼降钙素(5200MRC(IU)/毫克)混合，并在4℃下在玛瑙研钵中粉碎。
从此粉状混合物中分离并降去未吸附在羟基磷灰石上的鲑鱼降钙素，并测量吸附在其上的鲑鱼降钙素的数量。对不同试样重复该过程一次。
对每个试样，在玻璃器皿中精确称量约10毫克该粉状混合物，并在此混合物中加入含有1％的牛血清白蛋白(BSA的0.1M醋酸水溶液使总量达100毫升。然后用鲑鱼降钙素RIA法测定鲑鱼降钙素的量。结果列于下面表4中。
表4<
上面表4表明，用羟基磷灰石作为载体能显示出对生理活性肽(即降钙素)在其上的高度吸收效果。
粉末制剂1在含有1％的明胶和0.38％和为稳定剂的天门冬氨酸的pH值为4.5～5.5的水溶液中溶解鲑鱼降钙素(3毫克/3000～3500MRC)，将得到的混合物溶液冷冻干燥。然后在玛瑙研钵中将该冷冻干燥的混合物与200毫克羟基磷灰石掺混10分钟，再加入300毫克羟基磷灰石。所得到的混合物在55％的湿度下搅拌20分钟。再加入497克羟基磷灰石，在55％的湿度下将此混合物混和30分钟，由此得到1000毫克粉末状组合物。
用于制剂的羟基磷灰石的平均粒度为50微米。
以上述基本上相同的方法制备含鳗鱼降钙素的粉末制剂，所不同的是用鳗鱼降钙素代替鲑鱼降钙素。
粉末制剂2在玛瑙研钵中将胰岛素(200IU)与200毫克羟基磷灰石掺混10分钟，再加入300毫克羟基磷灰石。所得到的混合物在55％的湿度下搅拌20分钟。在55％的湿度下再加入497毫克羟基磷灰石掺混30分钟，得到1000毫克本发明的粉末状组合物。
用于制剂的羟基磷灰石平均粒度为15微米。
如上所述符合本发明的生理活性肽组合物使得不大可能或难于口服的生理活性肽能以高的吸收率经鼻部给药，并且无刺激。
特别是当含有分散在载体羟基磷灰石上的降钙素或胰岛素之类的生理活性肽的粉末状组合物通过鼻途径给药，即涂于鼻腔粘膜上时，此生理活性肽被很好地吸收入人体，显示出高度的临床效果。
权利要求
1.一种含有生理活性肽和羟基磷灰石的生理活性肽组合物，其中生理有效量的所述生理活性肽均匀地分散在所述羟基磷灰石中并均匀地吸附在其上，所述羟基磷灰石的平均粒度为20～250微米。
2.如权利要求1的生理活性肽组合物，其中羟基磷灰石的平均粒度为30～60微米。
3.如权利要求1或2的生理活性肽组合物，其中还含有天门氨酸作为稳定剂。
4.如权利要求1的生理活性肽组合物，其中所述生理活性肽是肽激素、生理活性蛋白质或酶蛋白质。
5.如权利要求1的生理活性肽组合物，其中所述生理活性肽是降钙素，而且所述降钙素均匀地分散在平均粒度为20～250微米的羟基磷灰石中，并被均匀地吸附于其上。
6.如权利要求1的生理活性肽组合物，其中所述生理活性肽是胰岛素，而且所述胰岛素均匀地分散在平均粒度为20～250微米的羟基磷灰石中，并被均匀地吸附于其上。
7.如权利要求1～6中任何一项的生理活性肽组合物，其中所述组合物是呈粉状可鼻部给药的。
8.如权利要求3的生理活性肽组合物，其中所述组合物是呈粉状可鼻部给药的。
9.如权利要求6的生理活性肽组合物，其中所述组合物是呈粉状可鼻部给药的。
10.如权利要求7的生理活性肽组合物，其中所述组合物是呈粉状可鼻部给药的。
11.含有生理活性物质的可鼻部给药组合物所用的一种载体，其中所述载体是平均粒度为20～250微米的羟基磷灰石细分散颗粒。
12.如权利要求11中的载体，其中羟基磷灰石的平均粒度为30～60微米。
13.如权利要求11或12的载体，其中生理活性物质是生理活性肽。
全文摘要
一种含有均匀地分散在一种独特载体中并均匀地吸附于其上的生理活性肽的生理活性肽组合物。该生理活性肽组合物含有生物有效量的、均匀地分散在羟基磷灰石中并被均匀地吸附于其上的生物活性肽。该组合物是呈粉状可鼻部给药的。
文档编号A61K9/14GK1120458SQ94117170
公开日1996年4月17日 申请日期1994年10月19日 优先权日1993年10月19日
发明者柳川明 申请人:有限会社多特