专利名称：：具有调血脂、降血糖作用的女贞叶分离物、分离方法及用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种女贞叶分离物，其分离方法及以他们作为有效成分制备的调血脂、降血糖药物。女贞系木樨科女贞属植物，其干燥果实即女贞子，为传统中药，功效为补肝肾、强腰，乌须、明目。女贞叶，《本草纲目》中所记载的功效为“除风散血、消肿定痛，治头目昏痛，诸恶疮肿”等；《贵州民间方药集》中有女贞叶“外敷止因伤出血，消炎消肿，治烫火伤；内服可止咳嗽，止吐血”的记载。七十年代国内有人对女贞叶的化学成分进行过研究，如1976.1《中草药通讯》刊出的侯遇成文“女贞叶化学成分的研究”，文中公开了从女贞叶的醇浸出物中，分离得两种针状结晶，经鉴定，其一为右旋甘露醇，为止咳的有效成分；其二为熊果酸(Ursolieacid)，作者未能指出其药理作用。至本发明之前，国内一些医疗单位如四川自贡市防治慢性气管炎协作组等主要利用女贞枝叶的水煎剂，治疗慢性气管炎。本发明的目的有二一是提供具有调血脂、降血糖作用的女贞叶分离物；二是提供以女贞叶分离物为主要成分制备的调血脂、降血糖药物。本发明以干燥的女贞叶为原料，经乙醇回流、提取，得乙醇浸膏，经沸水洗涤后，其水不溶物经醇溶、脱色、除醇等步骤，所得的一种淡黄白色粉末即为女贞叶分离物。下面详述从女贞叶中制备女贞叶分离物的实施例实施例称取干燥女贞叶50KG，装入多能提取罐中，加乙醇回流提取2次，第一次加乙醇6倍量，回流提取2小时，第二次加乙醇4倍量，回流提取1小时，合并2次滤液，回收乙醇至浸膏称重7.8KG。取浸膏于搪瓷罐中，加热蒸去剩余的乙醇，加水约为浸膏的25倍，煮沸洗涤15-20分钟，冷却后，置离心机甩干，得水不溶物，甩干，80℃烘干，称重2.2KG。取上述水不溶物2.2KG于多能提取罐中，加乙醇为水不溶物的50倍，加热回流使溶解，加0.5-1.0％活性炭，回流脱色30分钟，趁热过滤，将滤液除醇蒸于得淡黄白色粉末亦即女贞叶分离物。上述工艺摒弃了目前在植物药研究中对此类化合物提取分离过程中大量使用乙醚、苯、氯仿等对环境污染严重、生产不安全的一类有机溶剂，仅仅只采用乙醇和水，使操作方便安全，便于工业生产，对设备无特殊要求，无污染，质量稳定，平均得率高，女贞叶分离物中熊果酸的含量不低于70％。下面是用本发明的工艺制备的三批女贞叶分离物的收率与含量。</tables>经对上述女贞叶分离物，根据卫生部新药(中药)二类研制申报的有关要求，开展药理、毒理等方面的研究如下一、药效学研究1.调血脂试验研究(1)对实验性高脂血症大白鼠和家兔均有明显的降低TG，TC，LDL-C和VLDL-C(P＜0.01)和提高HDL-C(P＜0.01)的作用，并能降低实验性动物的动脉粥样硬化AI指数。(2)与安妥明对照组比较，原料药高剂量(1000MG/KG)药效优于安妥明，中剂量(500MG/KG)与安妥明药效相当。(3)对正常大白鼠和家兔的血脂水平无明显影响(P＞0.05)。2.降血糖试验研究(1)对链脲霉素(STZ)诱发的糖尿病大白鼠模型，三个不同剂量(250MG/KG，500MG/KG，1000MG/KG)均有明显的降血糖和减少饮水量，排尿量和尿糖的作用，三剂量呈现一定量效关系。低剂量组与降糖灵对照组比较药效相当，停药一星期后，仍维持一定的降血糖作用。(2)对四氧嘧啶诱发的糖尿病小白鼠模型三个不同剂量(30MG/KG，60MG/KG，100MG/KG)均有明显的降血糖，亦呈现一定量效关系。(3)对正常大小白鼠血糖水平无影响。二、一般药理学研究1.对神经系统作用以250，500，1000MG/KG的剂量对NIH种小白鼠灌胃给药，连续7天用Irwin分级法和光电计数法试验均证明对自主活动无明显影响。2.对心血管系统作用以250，500，1000MG/KG的剂量对SD种大白鼠灌胃给药，连续7天。麻醉后，记录其心率、心电图和血压与空白对照组比较没有明显差异。3.对呼吸系统作用大白鼠在麻醉情况下，先测定呼吸频率，一小时后灌胃，分别以原料药250，500，1000MG/KG剂量灌胃给药，继续测定在呼吸过程中呼吸频率，结果与给药前后基本一致。三、毒理研究1.大、小白鼠急性毒性试验大白鼠10只和小白鼠20只，雌雄各半，每只灌胃给予供试品0.5ML(即320MG/20G，相当16000MG/KG)，经观察给药14天内动物进食正常，体重增加，全部健全，14天后解剖全部动物，未发现主要器官心、肝、脾、肺、肾、肠等有肉眼可见的病变，因此认为本品基本无毒。2.大白鼠长期毒性试验取体重130-160G大鼠随机分成原料药的高、中1、中2、低四种剂量，降糖灵和空白对照组等六组。原料药的剂量——高剂量为7500MG/KG(相当于成人日用量250倍)，中1剂量为1500MG/KG(相当于成人日用量的50倍)，中2剂量为750MG/KG(相当于成人日用量的25倍)，低剂量为300MG/KG(相当于成人日用量的10倍)，降糖灵为75MG/KG(相当于成人日用量的25倍)，每组20只雌雄各半，进行了为期三个月的大鼠长期毒性试验研究，结果表明(1)本品高、中1、中2、低四组连续给药三个月内动物进食正常，体重增加。(2)对体内血象、肝、肾功能血糖、尿糖及尿常规皆无明显影响，恢复期亦未见延续性损害。(3)解剖大鼠未见主要器官心、肝、脾、肺、胃、肠有明显肉眼可见的病变，停药24小时及恢复期，各组重要器官心、肝、脾、肺、暖的脏器系数基本一致，无肿大或缩小的病变。(4)降糖灵组部分大鼠出现稀便的副作用。3.狗长期毒性试验本试验为期六个月选用杂种狗8条，均分给药组和空白对照组，每组四条雌雄各半，给药组以原料药900MG/KG的剂量(相当于临床成人日用量1500MG的30倍)以喂饲方法给药，每周给药6天，给药量随每月体重变化按规定剂量进行调整，试验表明(1)动物一般症状及体重观察，给药组动物精神、活动、毛发、粪便、饮食正常。至第4个月后，体重显著增长，空白组体重每月直线增长。(2)外周血象给药各期(1-6)对血红蛋白值无明显影响，白细胞计数及分类比值在正常范围内波动。(3)对暖功能影响原料药组的血清谷丙转氨酶值，尿素氮与空白对照组一致。恢复期亦无明显变化，血清碱性磷酸酶值，乳酸脱氢酶值，肌酐值均在正常范围。(4)大体观察与病理镜检试验后大体观察主要器官心、肝、脾、肺、肾、胃、肠解剖位置正常，无异位，反位，畸形，脾大或缩小和其它肉眼可见病变，病理镜检结果表明，无明显病理改变。综上试验结果，本品以900MG/KG长期服用无明显毒性反应和损害。以下是女贞叶分离物的质量标准1.性状淡黄白色粉末，气无味淡；2.鉴别(1)按三萜类化合物进行鉴别反应。(2)按中国药典规定的薄层色谱法，取原料药与熊果酸对照品溶液点于同一薄层板上进行层析对照，在相应位置显相同的玫瑰红色斑点，Rf值为0.75-0.85。3.检查按中国药典规定在105℃干燥恒重，减失重量不超过5％。4.含量测定采用香草醛—高氯酸比色法与熊果酸标准品曲线进行对照，测定原料药中熊果酸的含量。5.功能与主治本品可用于调整血脂异常及防治动脉粥样硬化，治疗II型糖尿病。6.用法与用量一天三次，一次300MG，8周为一疗程。7.贮藏置阴凉干燥处保存。8.有效期暂定二年。以上述女贞叶分离物为主要成分可按一般制剂方法制成胶囊剂、片剂、口服液等，下面详述制备胶囊剂实施例。实施例取女贞叶分离物5KG，置球形罐内，加乙醇20倍，加热使溶解，保温待用；称取聚乙二醇-600010KG，加热熔化，将上述女贞叶分离物醇溶液倒入已熔化的聚乙二醇-6000中，搅拌，共熔，回收乙醇，其共熔物冷却，固化，粉碎，过40目筛，装胶囊即得。该胶囊剂根据新药(中药)二类研制申请的有关要求，开展药理、毒理等研究，其结果与女贞叶分离物的试验结果一致。胶囊剂质量标准如下1.性状本品为胶囊剂，内容物为淡黄色粉末，气无、味淡。2.鉴别(1)取胶囊剂内容物粉末按三萜类化合物进行鉴别反应。(2)按中国药典规定的薄层色谱法，取内容物与熊果酸对照品溶液点于同一薄层板上进行层析对照，在相应位置显相同的玫瑰红色斑点，Rf值为0.75-0.85。3.检查应符合胶囊剂项下的有关各项规定(中国药典1990年版一部附录16页)4.含量测定采用香草醛-高氯酸比色法与熊果酸标准品曲线进行对照，测定胶囊剂中熊果酸的含量。5.功能与主治本品可用于调整血脂异常及防治动脉粥样硬化，治疗II型糖尿病。6.用法与用量一天三次，一次三粒，8周为一疗程。7.规格每粒囊重0.3G(含女贞叶分离物0.1G)，铝塑盒包装×30粒8.贮藏置阴凉干燥处保存。9.有效期暂定二年。权利要求1.一种药用女贞叶分离物，其特征是A.该女贞叶分离物中，熊果酸的含量不低于70％。B.与熊果酸对照品溶液点于同一薄层板上对照，在相应位置显相同的玫瑰红色斑点，Rf值为0.75-0.85；2.一种如权利要求1所述的女贞叶分离物的分离方法，其特征是女贞叶经乙醇回流、提取、除醇，得乙醇浸膏，经沸水洗涤后，其水不溶物经醇溶、脱色、除醇，即得。3.一种如权利要求1所述的药用女贞叶分离物在制药中的应用，其特征是该分离物主要用于制备具有调血脂、降血糖作用的药物。全文摘要一种具有调血脂、降血糖作用的女贞叶分离物，主要是以女贞叶为原料，经醇提、浸膏水洗、醇溶、脱色、除醇等步骤所制得的一种淡黄白色粉末，以此为主要成分可制成调血脂、降血糖的药物，经药理、毒理等实验表明该提取物及其制剂能调整血异常及防治动脉粥样硬化，治疗II型糖尿病。文档编号A61P3/00GK1158254SQ9610165公开日1997年9月3日申请日期1996年2月29日优先权日1996年2月29日发明者林美玉申请人:黄石市制药厂