专利名称：新的膦酰基羧酸的磷脂衍生物、其生产方法及其作为抗病毒药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及通式Ⅰ的新的膦酰基羧酸的脂衍生物及其酯，其互变异构体，其生理可耐受的无机或有机碱的盐，以及其生产方法和含这些化合物的药物，
其中R1是有9-13个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和的烷基链，R2可以是含有8-12个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和的烷基链，R3表示含有1-6个碳原子的直链或支链的烷基链，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基(thexyl)或苯基、胆碱、乙醇胺、肉碱、C5-C7-环烷基、苄基或下列基团之一
n是0、1或2，m表示0、1、2或3。
由于通式Ⅰ的化合物含有不对称碳原子，这些化合物的所有光学活性形式及外消旋混合物也是本发明的主题。
式Ⅰ化合物在下文还包括盐、互变异构体、酯、光学活性形式及外消旋混合物。
恶性肿瘤(癌、肉瘤、血液瘤)、炎症性疾病或自身免疫性疾病以及由病毒或反转录病毒引起的疾病如AIDS、ARC(AIDS相关的复合物)、巨细胞病毒(cytomegaly)感染、疱疹感染或肝炎的治疗除所用治疗物质的效力不足外，也常常会伴有极端的副作用。这种效果可以解释为所用药理学活性物质的体内选择性不够以及治疗范围有限。药理学活性物质的有利的体外药理学特性在体内条件下常常不会出现。
因此，数年来，一直试图通过修饰药理学活性物质的化学结构来提供就其治疗范围而言其特性有所改善的新物质。此外，给药的新药物形式常常随将活性物质具体运送到其作用位点的目的而发展，作用位点是药物将发挥其治疗作用的位点。在这种情况下，特别需要避免与健康细胞之间产生不利的相互作用。一种改善治疗范围的可能性是改变基本活性物质的物理特性，这样例如通过产生酸或碱加成盐或通过制备药理学安全的酯(例如脂肪酸酯；J.Pharm.Sci.79,531(1990))，可以对药理学活性物质稍加修饰以改善活性物质的溶解度或耐受性。通常将这些稍加化学修饰的化合物称为“前药”，因为它们与体液接触后或在肝(第一轮代谢)中几乎立即转变成治疗活性剂。本发明包括所述前药。
为了提高催化稳定性，已将核苷如ara-C和ara-A与磷脂进行了化学相连。与未修饰的核苷相比，相应的衍生物在体内有较低的毒性和较高的稳定性。但是吸收和细胞渗透几乎未受影响。[J.Med.Chem.32,367(1989),Cancer Res.37,1640(1977)and 41,2707(1981)]。从下列参考文献中可以了解核苷的其他磷脂衍生物在J.Biol.Chem.265,6112(1990)中描述了作为抗病毒药物的脂类核苷酸的生产和用途。但是，在这种情况下，只研究并合成了与已知的核苷如AZT和ddC以脂肪酸酯的结构结合的二肉豆蔻酰磷脂酰和二棕榈酰磷脂酰残基。
在J.Med.Chem.33,1380(1990)中描述了硫醚脂与胞苷二磷酸的核苷结合物，它们有抗肿瘤作用并可将其用于肿瘤学。
在Chem.Pharm.Bull.36,209(1988)中，描述了具有抗白血病活性的5’-(3-SN-磷脂酰)-核苷以及在转移酶活性的磷脂酶D的存在下，从适宜的核苷和磷酸胆碱合成它们的酶促合成法。
在Tetrahedron Lett.28,199(1987)和Chem.Pharm.Bull.36,5020(1988)中描述了脂类核苷酸的酶促合成。
WO 94/13324描述了用1-O-烷基-、1-O-酰基-、1-S-酰基-和1-S-烷基-sn-甘油基-3-磷酸酯作为脂类载体的口服有效的活性物质。
申请EP 418814和J.Med.Chem.34,1912(1991)描述了类异戊二烯氧膦基甲酸酯作为角鲨烯合成酶抑制剂。
在Biochem.Biophys.Res.Commun.171,458(1990)中，描述了抗反转录病毒Foscarnet与棕榈酰膦酰基甲酸酯的脂结合物，并在J.Med.Chem.20,660(1977)中说明了(己基氧基)-羟基氧膦基乙酸的抗HIV活性。
总之，发现将治疗药物的浓缩物转运到各靶器官或靶细胞的有效方法是非常有利的，在AIDS的情况下，是将药物运送到被认为是病毒复制的主要部位的免疫系统和淋巴系统的细胞内。
PFA(膦酰基甲酸)和PAA(膦酰基乙酸)对HSV1和2、流感病毒、HBV、VZV、EBV以及反转录病毒感染有良好的抗病毒活性。
在特定的情况下，PFA/PAA及其衍生物可以有效地替换核苷/作为核苷的有效补充，因为它们抑制广谱DNA和RNA聚合酶并以足够选择性抑制反转录病毒的RT。
PFA和PAA本身是有毒性的，因为它们与焦磷酸酯相似，可以在骨中积累。
本发明化合物还具有有价值的药理学特性。它们特别适用于治疗和预防由DNA病毒如单纯性疱疹病毒、人疱疹病毒、细胞肥大病毒、乳多泡病毒、水痘带状疱疹病毒、肝炎病毒或EB病毒、流感病毒或RNA病毒如Toga病毒或特别是反转录病毒如oncoviruses HTLV-Ⅰ和Ⅱ以及letiviruses visna和人免疫缺陷型病毒HIV-1和2引起的感染。
式Ⅰ化合物似乎特别适用于治疗人反转录病毒HIV感染的临床症状如持久性泛化的淋巴结病(PGL)、AIDS相关并发症(ARC)的前期和AIDS的完全临床像以及相关的CMV和HSV感染。
在J.Infect.Dis.172,225(1995)中描述了Foscarnet(膦酰基甲酸三钠盐/PFA)在患CMV视网膜炎的HIV患者中的抗病毒/抗反转录病毒作用。
Antiviral Res.26,1(1995)中描述了在鼠CMV中的抗病毒作用。
此外，在JAMA 273，1457(1995)中描述了将PFA用于治疗CMV视网膜炎。
在J.Med.Chem.37,2216(1994)中描述了抑制HIV-1复制的PFA-和PAA-2’,3’-二脱氧-3’-硫杂胞苷结合物，在J.Pharm.Sci.83,1269(1994)中描述了Foscarnet的酰氧基烷基酯。
但美国申请5194654和PCT申请WO 94/13682也是非常重要的参考文献。其中公开了膦酰基羧酸的脂类衍生物及其在脂质体中的应用，其中，膦酰基羧酸的脂类衍生物形成了特别稳定的脂质体复合物。尽管权利要求的范围很宽，但实际上1-O-烷基-sn-甘油基-3-膦酰基羧酸是该申请的核心，该物质可很好地掺入到脂质体的脂类双层中。所要求的烷基可包括2-24个碳原子。
但是仅记载了1-O-十八烷基-sn-甘油基-3-膦酰基甲酸酯(十八烷基-膦酰基甲酸酯)的实施例并给出了其抗病毒作用的数据。在所完成的研究和生产中证实该化合物是不稳定的。与所述专利申请相反，该化合物是以纯物质的溶液/悬浮液而非脂质体的形式使用。
在同样的条件下，本发明的式Ⅰ化合物是稳定的并具有明显的体外和体内(小鼠中的MCMV模型)优点。经口给药时，羧酸酯是特别稳定的，而且比相应的游离羧酸有更好的生物利用度。
就所用的饱和烷基的链长度而言，令人惊奇地发现结构与作用之间有密切的关系。只有当使用链长为10-13个碳原子的两个烷基时，才具有最佳效果。
因此，与WO 94/13682和US 5194654相比，本申请中所要求的化合物代表了一种意想不到的改进，尽管这些申请包含了这些化合物，但它们并不是本申请的核心，而且并未明确提到这些化合物或其名称，因此，它们的用途也就不是显而易见的。
式Ⅰ化合物是新的。除稳定性(以物质和溶液形式)改善外，所要求的化合物与已知脂类衍生物相比有更好的作用。
令人惊奇的是，与游离的药理学活性物质或未修饰的物质相比，式Ⅰ的药物活性物质有更宽的治疗范围。此外，提高了它们在体内的滞留时间、改善了通常认为是重要因素的药理学活性物质的生物利用度或膜通透性(如血-脑屏障、细胞膜等)。因此式Ⅰ化合物可作为药理学活性物质的载体系统(载体)。就其功能而言，可将式Ⅰ的结合物称为细胞内药物储备、药物靶向和药物传递系统。它们能够使药理学活性物质在经口给药后在细胞内释放出来，有利的是这种释放不会意想不到地发生在体细胞、器官或组织中，而是特异性地发生于含特定酶的那些细胞中。但是，特别意想不到的是裂解不是发生在通过体液如血液、血清或淋巴液或通过肝运输底物的过程中，而是发生在相应的靶细胞上或靶细胞中。这样可以避免通过肾排泄膦酰基羧酸或在肝中裂解结合物，以便可将大部分活性物质运输到相应的靶细胞内。如上所述，所述细胞主要是生理学或病理学激活的细胞，所述细胞是药理学活性物质施用的靶目标，如血白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和免疫淋巴系统的其他细胞种群。具体地说，它们是在相应疾病过程中有病理学或症状作用的激活的细胞(如巨噬细胞、粒细胞、淋巴细胞、白细胞、红细胞、单核细胞等)。此外，它们也是受病毒、细菌、真菌或其他微生物感染的细胞。
令人惊奇的是，还发现当将所述物质与很特异性的类脂样载体分子结合时，药理学活性膦酰基羧酸和其酯的治疗范围显著增大。用该方法制备的结合物可作为一种新的活性物质用于给药药物形式的生产。总的来说，结合会提高药物活性膦酰基羧酸的体内效果，因为通过所得药物运输系统将药理学活性物质定位于靶细胞内，因此药理学活性物质的效力和耐受力得以提高。这意味着，一方面可以减少待施用的药理学活性膦酰基羧酸的量，或另一方面以相同的有效量即可使药理学作用增强。
通过结合物的酶促水解而从结合物中释放药理学活性膦酰基羧酸。
式Ⅰ的结合物与未结合的药理学活性膦酰基羧酸和其酯相比有显著的优点。与药理学活性物质共价结合的特异性载体提高了很难再吸收的药理学活性物质的生物利用度，潜在毒性活性分子的耐受性，迅速清除的或代谢的药物的滞留时间以及膜通透性差(如血-脑，细胞等)的化合物的膜穿透能力。
在体内脂类部分的酶促裂解通常不发生于血清中，而只在细胞内。此外，具有其卵磷脂样结构的载体部分(对于所要求的效果是必需的)提高了生理学活性物质的穿透能力或膜通透性，并有积存效果。另外，认为脂类结合物的胃肠耐受性比纯生理学活性膦酰基羧酸的更好。脂类结合物在吸收过程中通过膜结合的穿透能力更好，因此，能更好地克服吸收障碍。这对于穿透如血-脑屏障也适用。
另外，由于结合物与原生质和组织蛋白质能够更好地结合，从而改善了体内分布。结合物主要通过正常的生物转化反应从硫醚(n=0)氧化成亚砜(n=1)，但由于亚砜和硫醚相比，其作用是等效的，因此，这种转化并不是一种缺点。药理学活性膦酰基羧酸从结合物中的缓慢释放可以使活性物质保持低水平，即在较长的时间内保持稳定，由此提高了效力和/或避免了毒副作用。以单磷酸酯形式释放的药理学活性物质由于其高亲水性而不再能穿透细胞。
总体来说，药理学活性物质的细胞和器官半衰期通过结合作用得以大大延长，主要是由于延长了结合物在生物体内的滞留时间。由于在血清和各种器官中没有裂解活性，因此，几乎未观察到或仅观察到很轻微的骨髓和器官毒性。特别有利的是式Ⅰ的结合物可特异性地在各种注靶器官、组织或细胞中积累。
可将式Ⅰ化合物作为活性成分用于生产治疗各种疾病的药物，所述疾病需要在细胞、器官或组织中保持高水平的药理学活性物质。代表“药物-储备-传递-靶向”的该系统的一个必需条件是对所进行的治疗作出反应的细胞要含有裂解酶以便活性物质第一步结合，随后在活性物质被裂解形成生理活性膦酰基羧酸的过程中将活性物质通过细胞膜运输到细胞内，活性物质的裂解或者基本上与跨细胞膜运输同时发生或此后部分地在细胞内。细胞内裂解主要是发生在其中裂解酶也位于细胞内的情况下。
适宜的靶细胞是例如免疫淋巴系统的细胞(如血白细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞)或感染的细胞。
令人惊奇的是，发现式Ⅰ的化合物还在病毒特异性的DNA或RNA转录水平抑制DNA或RNA的复制。该物质可通过抑制反转录酶来影响反转录病毒的繁殖(参见Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,1911,1986,and Natrue 325,773,1987)。对HIV(免疫缺陷型疾病AIDS的病因)的抑制作用具有特别的治疗意义。现在已将3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(DE-A-3608606)用于治疗AIDS患者的AIDS。但是3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷对骨髓的毒副作用使约50％的受治疗患者都需要输血。通式Ⅰ化合物没有这些缺点。在药理学相关剂量下它们具有抗病毒作用而没有细胞毒性。
可将本发明化合物和其药物制剂与其他药物联用以治疗和预防上述感染。含有可用于治疗和预防HIV感染或伴有这种病的疾病的其他药物的例子是3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷、2’,3’-二脱氧核苷如2’,3’-二脱氧胞苷、2’,3’-二脱氧腺苷和2’,3’-二脱氧肌苷、无环核苷(如无环鸟苷)、非核苷RT抑制剂、蛋白酶抑制剂如Invirase、干扰素如干扰素α、β、γ、细胞因子和白细胞介素(如白细胞介素16)、趋化因子如MIP1α、MIP1β、CC1、肾排泄抑制剂如丙磺舒、核苷运输抑制剂如双嘧啶氨醇以及免疫调节剂如白细胞介素Ⅱ或刺激因子如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF、neutropoetin)、thrombopoetin和thrombopoetin-样因子。可将本发明的化合物和其他药物分开给药或同时给药，并可以以单一或两种制剂，或在不同的时间给药以便达到协同效果。
认为羧基和膦酸基的碱金属、碱土金属和铵盐是式Ⅰ化合物可能的盐。锂、钠和钾盐是优选的碱金属盐。镁和钙盐是特别优选的碱土金属盐。本发明的铵盐是指含有铵离子的盐，所述铵离子可被1-4个碳原子的烷基和/或芳烷基(优选苄基)取代最多达四次。在这种情况下，所述取代基可以相同或不同。
认为膦酰基羧酸脂类衍生物的羧酸酯是药理学可接受的酯，而且含有苄基、胆碱、乙醇胺、肉碱、C5-C7环烷基或含有1-6个碳原子的直链或支链烷基，特别是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、叔丁基、新戊基或叔己基的酯是优选的。甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基和苄基是特别优选的。
脂类膦酰基羧酸酯在体外与相应的游离羧酸一样有效。但是在体内只有当经口给药时，才有显著的优点。
式Ⅰ化合物的羧酸酯在酸性介质中通过脱羧带来的降解作用较低，因此，它们的生物利用度得到提高。因此，与相应的游离羧酸相比，给药剂量降低了数倍。另外，如当克服了血脑屏障并通过细胞膜进入靶细胞时，膜通透性得到提高。由于在体内首先通过酯酶裂解羧酸酯，因此，在血清中的半衰期延长。
式Ⅰ中的R1优选表示直链C10-C12烷基。R1具体代表癸基、十一烷基、十二烷基或十三烷基。
n优选是0或1。
R2优选表示直链C9-C12烷基。
R2具体代表癸基、十一烷基或十二烷基。
所要求的通式Ⅰ的结合物中，优选的偶联的膦酸及其酯是下列酸和其酯-膦酰基甲酸-膦酰基乙酸-膦酰基丙酸特别优选的脂类部分是n=0和组合R1=癸基/R2=十二烷基，R1=十一烷基/R2=十一烷基或R1=十二烷基/R2=癸基，和另外R1=十一烷基/R2=癸基，R1=十三烷基/R2=癸基，R1=十二烷基/R2=十一烷基。
通式Ⅰ的化合物可通过如下方法制备1．在任选取代的芳基磺酰氯的存在下，于有机碱中或在碱的存在下于惰性有机溶剂中，将通式Ⅱ的化合物
其中R1、R2和n具有上述的含义，与通式Ⅲ的化合物反应
其中m具有上述含义并且R3代表上述酯残基之一，任选地，随后通过用碱皂化的方法将羧酸酯转变成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性盐；或者2．从式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯制得混合酸酐，然后将其与式Ⅱ的醇在碱存在下于惰性有机溶剂中反应或直接在碱中反应，然后随需要将羧酸酯用碱皂化；或者3．将其中R表示氢的式Ⅲ的膦酰基羧酸与式Ⅱ的醇在碱和任选取代的芳基磺酰氯的存在下反应，如需要，可将其转变成生理上可接受的盐；或者4．将其中R表示氢的式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯的混合酸酐与式Ⅱ的醇在碱和任选地惰性有机溶剂的存在下反应，然后任选地将该结合物转变成生理相容性盐；或者5．将通式Ⅳ的膦酸二酰氯与通式Ⅱ的醇在碱中以1∶1的摩尔比进行反应，
其中所述膦酸二酰氯根据Bhongle等(Synthetic Commun。17,1071(1987))的方法，将膦酸二-三甲基硅烷基酯与草酰氯反应制得或者6．按照Tetrahedron Letters，33卷(49):7473-7474的方法，用草酰氯将式Ⅲ的化合物转变成式Ⅳ的膦酸二酰氯，随和将该膦酸二酰氯与式Ⅱ的醇在碱的存在下以1∶1的摩尔比进行反应。将形成的膦酸单酰氯中间体皂化生成半酯，然后用碱皂化将该羧酸酯转变成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性盐。
可视需要将膦酰基羧酸脂类衍生物的游离酸转变成所需的酯。
式Ⅱ化合物及其制备方法记载于实施例和EP-0545699。
用于治疗例如病毒感染的含有式Ⅰ化合物的药物可以以液体或固体的形式经肠或胃肠外给药。在这种情况下，常用的给药剂型可以是例如片剂、胶囊、糖衣丸、糖浆、溶液剂或悬浮液。优选使用水作为注射溶媒，在水中可以含有注射液常用的添加剂如稳定剂、增溶剂和缓冲剂。所述添加剂可以是例如酒石酸盐或柠檬酸盐缓冲剂，乙醇，螯合剂如乙二胺四乙酸及其无毒的盐，用于调节粘度的高分子聚合物如液体聚环氧乙烷。必须将用于注射液的载体灭菌并优选将其填充到安瓿内。固体载体是例如淀粉、乳糖、山梨糖醇、甲基纤维素、滑石、高度分散的硅酸、高分子脂肪酸如硬脂酸、明胶、琼脂、磷酸钙、硬脂酸镁、动物和植物脂、固体高分子聚合物如聚乙二醇等。用于口服施用的适宜制剂可任选地含有矫味剂和甜味剂。
原则上，可将式Ⅰ化合物经口、气管内、直肠、鼻、阴道内、舌、静脉内、动脉内、肌肉内、皮内或皮下给药。剂量取决于各种因素，例如给药方式、物种、年龄以及各自的状态。本发明化合物的给药量通常为0.1-1000mg/天/kg体重、优选2-800mg/天/kg体重、最佳为30-250mg/天/kg体重。优选将每日剂量分2-5次给药，每次施用1-2片活性物质含量为0.5-3000mg的片剂。该片剂还可以是缓释片剂，通过这种方法，可以将每日的给药次数减少至1-3次。缓释片剂的活性物质含量可以是20-5000mg。活性物质还可以以连续输注的方式施用，通常适宜的剂量为每日5-10000mg。
除实施例中所提到的化合物和将权利要求中所述的取代基的各种含义进行组合所得到的化合物之外，本发明还包括如下的式Ⅰ化合物1．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羟基-氧膦基-甲酸2．(3-十二烷基亚磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸3．(3-十二烷基磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸4．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸5．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸6．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸7．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸8．(3-十一烷基亚磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸9．(3-十一烷基磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸10．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸11．(3-癸基巯基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸12．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸13．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸14．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸15．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸16．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸17．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羟基-氧膦基-丙酸18．(3-十二烷基亚磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸19．(3-十二烷基磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸20．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸21．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸22．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸23．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸24．(3-十一烷基亚磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸25．(3-十一烷基磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸26．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸27．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸28．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸29．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸30．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸31．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸32．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-丙酸33．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羟基-氧膦基-乙酸34．(3-十二烷基亚磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸35．(3-十二烷基磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸36．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸37．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸38．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸39．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸40．(3-十一烷基亚磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸41．(3-十一烷基磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸42．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸43．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸44．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸45．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸46．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸47．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸48．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸49．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯50．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯51．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯52．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯53．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯54．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸甲酯55．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯56．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯57．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯58．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯59．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯60．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸甲酯61．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯62．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯63．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯64．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯65．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯66．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸乙酯67．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯68．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯69．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯70．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯71．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯72．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸乙酯73．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯74．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯75．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯76．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯77．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯78．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸异丙酯79．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯80．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯81．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯82．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯83．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯84．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸异丙酯85．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯86．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯87．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯88．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯89．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯90．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯91．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸新戊酯92．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸新戊酯93．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸新戊酯94．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸新戊酯95．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸新戊酯96．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸新戊酯97．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯98．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯99．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯100．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯101．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯102．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-甲酸苄酯103．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯104．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯105．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯106．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯107．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯108．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羟基-氧膦基-乙酸苄酯实施例1R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基-羟基-氧膦基-甲酸二钠盐(DMDOP-PFA)和甲酯DMDOP-PFA-OMe将18.2ml膦酰基甲酸三甲酯溶于140ml二氯甲烷中，然后在搅拌下与72.5ml溴代三甲硅烷混合。将混合物在室温搅拌2小时，蒸发，将残余物加入甲醇中并将该溶液再次蒸发，如此重复两次。将残余物加入30毫升无水吡啶中并与48.7g R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙-1-醇的溶液混合。将该混合物蒸发至干，搅拌下将残余物与47.1g 2,4,6-三-异丙基-苯磺酰氯和150毫升无水吡啶混合。最初的粘稠悬浮液在约30分钟后变稀，将其在室温下搅拌25小时。
抽滤出沉淀并用少量吡啶洗涤。搅拌下将滤液与150毫升水混合，将该混合物在室温下搅拌30分钟，蒸发并与乙醚混合。滤除再次析出的沉淀，将乙醚滤液与0.5N HCl一起摇出。将乙醚相用水充分洗涤，干燥并蒸发。
将残余物(84.2g)通过硅胶色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇/冰乙酸(9∶0.5∶0.5)洗脱。将含有产物的馏份蒸发浓缩。得到45.4g相应的R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羟基-氧膦基甲酸甲酯(DMDOP-PFA-OMe)。
TLC(硅胶)∶Rf=0.3(乙酸/丙酮/冰乙酸/水10∶4∶0.5∶0.5)Rf=0.69(二氯甲烷/甲醇8∶2)
为了将羧酸甲酯皂化，将5g上面得到的产物溶于70毫升四氢呋喃并与6.7ml 2N NaOH混合。将其搅拌4小时，然后放置过夜。将反应混合物用2-乙基己酸调至pH8并蒸发。将残余物与丙酮一起搅拌，将沉淀出的产物抽滤。得到4.1g酸，熔点为242-246℃(分解)。
TLC(硅胶)∶Rf=0.31(异丙醇/乙酸丁酯/水/浓氨水10∶6∶3∶1)13C-NMR(D2O):COOH(d,175ppm,JP-C=231.4Hz)实施例2R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基-羟基-氧膦基-乙酸二钠盐(DMDOP-PAA)和甲酯DMDOP-PAA-OMe类似于实施例1，用蜡状的膦酰基乙酸三甲酯和(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙-1-醇制得标题化合物，熔点358-360℃(分解)。
DMDOP-PAA:
TLC(硅胶)∶Rf=0.53(正丁醇/冰乙酸/水2∶1∶1)Rf=0.07(二氯甲烷/冰乙酸/水9∶0.5∶0.5)DMDOP-PAA-OMeTLC(硅胶)∶Rf=0.6(正丁醇/冰乙酸/水2∶1∶1)Rf=0.1(二氯甲烷/冰乙酸/水9∶0.5∶0.5)实施例3体外确定骨髓毒性(CFU-GM试验)按Seidel和Kreja(Seidl,H．和J.Kreja,L.,Blut 47,139-145,1983)所述完成CFU-GM试验。在含0.8％甲基纤维素、20％马血清、10-4M α硫代甘油的Iscove培养基中培养Balb/c小鼠的骨髓细胞(1×105细胞/ml)，然后在每只动物静脉内注射50μg内毒素(马流产沙门氏菌；Sigma,Deisenhofen,Germany)后4小时，从Balb/c小鼠中得到最佳体积(12.5或25μl)的内毒素激活的小鼠血清。将菌落培养6天后，将其用2-(对-碘代苯基)-3-(对-硝基苯基)-5-苯基四唑盐酸盐水合物(INT,Sigma)染色，然后用自动图像处理仪(Artek 982 B,Biosys GmbH,Karben,Germany)计数。
表1说明与细胞生长抑制剂顺铂(Cis-DDP)和阿霉素相比，从数个浓度依赖性试验得到了膦酰基甲酸、DMDOP-PFA、膦酰基乙酸、DMDOP-PAA、(3-十八烷氧基-2-羟基)-丙氧基-羟基-氧膦基甲酸乙酯(OOHP-PFAE)和(3-十八烷氧基-2-羟基)-丙氧基-羟基-氧膦基甲酸(OOHP-PFA)的IC50浓度。从表中可以看出，DMDOP-PFA和DMDOP-PAA在达到100μg/ml的最高试验浓度时，对粒细胞/单核细胞系列的骨髓干细胞也没有毒性。这种情况也见于膦酰基甲酸，但与DMDOP-PFA和DMDOP-PAA相比，膦酰基乙酸以及结合物OOHP-PFAE和OOHP-PFA毒性较高。
表Ⅰ在CFU-GM试验中Cis-DDP、阿霉素、膦酰基甲酸(Foscarnet)、DMDOP-PFA、膦酰基乙酸、DMDOP-PAA、OOHP-PFAE和OOHP-PFA的IC50值(μg/ml)
a平均值±SEM；n，以浓度依赖方式，一式两份或三份完成的试验数。实施例4在小鼠巨细胞病毒(MCMV)模型中经口服处理后的生物利用度用8×105PFU(噬菌斑形成单位)皮下处理雌性Balb/c小鼠。动物存活率以下列顺序提高未处理的＜Foscarnet处理的＜DMDOP-PFA处理的＜DMDOP-PFA-OMe。
权利要求
1．式Ⅰ膦酰基羧酸的新的磷脂衍生物
其中R1是有9-13个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和的烷基链，R2可以是含有8-12个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和烷基链，R3表示含有1-6个碳原子的直链或支链烷基链，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基或苯基、胆碱、乙醇胺、肉碱、C5-C7-环烷基、苄基或下列基团之一
n是0、1或2，m表示0、1、2或3，其互变异构体、光学异构体和外消旋体，其前体和其生理可耐受的无机或有机碱盐。
2．根据权利要求1的式Ⅰ化合物，其中R1代表癸基、十一烷基、十二烷基或十三烷基。
3．根据权利要求1或2的式Ⅰ化合物，其中R2代表癸基、十一烷基或十二烷基。
4．根据权利要求1至3任一项的式Ⅰ化合物，其中n代表0或1。
5．根据权利要求1至4任一项的式Ⅰ化合物，其中m代表0、1或2。
6．根据权利要求1至5任一项的式Ⅰ化合物，其中R3代表甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基或苄基。
7．含有权利要求1至6之一中要求的至少一种式Ⅰ化合物以及常用的药物辅剂和载体的药物组合物。
8．权利要求1至6之一中要求的至少一种式Ⅰ化合物用于生产治疗自身免疫疾病、肿瘤、炎症、病毒或反转录病毒疾病的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及通式Ⅰ的新的氧膦基羧酸脂类衍生物及,其互变异构体,其生理上可耐受的酯,其生理上可耐受的无机或有机碱盐,以及其生产方法和含这些化合物的药物,其中各符号的含义见说明书。
文档编号A61P31/14GK1209133SQ96180011
公开日1999年2月24日 申请日期1996年12月16日 优先权日1995年12月15日
发明者H·兹尔赫, D·赫尔曼, H·G·奥皮茨, G·兹梅尔曼 申请人:曼海姆泊灵格股份公司