Fty720在制备治疗干眼症药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物应用领域，涉及FTY720在制药中的新用途，具体涉及FTY720在 制备治疗干眼症药物中的用途，尤其是在制备治疗眼表疾病Sj5greri综合征药物中的新用 途，所述的FTY720对以SjSgren综合征为代表的眼表自身免疫性炎症具有免疫调控和抑制 作用。
【背景技术】
[0002] 研究报道，干眼症是主要的眼表疾病之一，该眼表疾病指多因素导致的泪 液异常和眼表炎症，其主要症状表现为眼表不适、视力影响、泪膜不稳定并眼表组织 的损害。其发病过程中同时合并泪膜渗透压升高和眼表炎症（Lemp，M.A. 2007.The definitionandclassificationofdryeyedisease:reportoftheDefinition andClassificationSubcommitteeoftheInternationalDryEyeWorkshop(2007). TheOcularSurface，5(2)，75-92.)。最近越来越多的研究表明，干眼症的发病机制非 简单的泪膜质与量的异常以及眼表组织和外分泌腺受损，而是T细胞介导的眼表组织和 腺体自身免疫性炎症（Schaumburg,C.S.，Siemasko,K.F.，DePaiva,C.S.，Wheeler,L. A. ,Niederkorn,J.Y. ,Pflugfelder,S.C. , &Stern,M.E. 2011.OcularsurfaceAPCsare necessaryforautoreactiveTcell-mediatedexperimentalautoimmunelacrimal keratoconjunctivitis.TheJournalofImmunology, 187 (7), 3653-3662. )〇Sjogren 综合征是一种典型的干眼症，病理上主要表现为泪腺和唾液腺等外分泌腺的自身免疫性 炎症（Lemp,M.A. 1995.ReportoftheNationalEyeInstitute/Industryworkshopon ClinicalTrialsinDryEyes.CLAOJ21:221-232. )〇
[0003] 由于干眼症的发生发展影响因素多，涉及面广，已经成为临床上常见的眼表疾病。 研究显示，诱发干眼症的因素包括眼表炎症，药物滥用，长期佩戴角膜接触镜、更年期、长期 使用电脑以及其他免疫因素等。目前，干眼症的主要治疗方法包括人工泪液，皮质类固醇激 素以及环保霉素A(CyclosporineA，CsA)等免疫抑制剂。但是，人工泪液仅是一种泪液替 代品，其本身无治疗作用；皮质类固醇激素及CsA等药物长期使用对眼表均有一定的毒副 作用，迄今为止，临床实践中尚无治疗干眼症的特效药物。因此，研发疗效好且长期使用无 明显局部及全身毒副作用的药物成为当下干眼症治疗中亟待解决的棘手问题。
[0004] FTY720是日本学者从冬虫夏草子囊菌培养液中提取出抗生素成分ISP-1， 经化学修饰后合成的一种新型的具有免疫调控作用的制剂，其分子量小于500道尔 (6)?(Fujita,T. ,K.Inoue,S.Yamamoto,T.Ikumoto,S.Sasaki,R.Toyama,K.Chiba,Y. Hoshino,andT.Okumoto. 1994.Fungalmetabolites.PartlLApotentimmunosuppressive activityfoundinIsariasinclairiimetabolite.JAntibiot(Tokyo)47:208-215. )〇 该制剂在结构上不同于现有技术的免疫抑制剂如CsA、他克莫司以及雷帕霉素等真菌多肽。 国内外研究结果显示，该制剂在治疗多发性硬化，抗器官移植排斥，减轻缺血再灌注损伤以 及诱导肿瘤细胞凋亡和防止转移等方面都显示出其具有独特的治疗效果。研究还显示该 制剂作为免疫调控剂具有如下优势：只将淋巴细胞滞留于周围淋巴器官，而对淋巴细胞正 常的增殖、迁徙和分化功能无影响，在缓解局部炎症的同时，不造成肌体全面的免疫抑制效 应。
[0005] 目前为止，国内外尚未见FTY720用于干眼症治疗的研究报道。本申请的发明人拟 提供FTY720在制备治疗干眼症药物中的新用途。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供FTY720在制药中的新用途，具体涉及FTY720在制备治疗干 眼症药物中的用途，尤其是在制备治疗眼表疾病SjSgren综合征药物中的新用途，所述的 FTY720对以Sj5gren综合征为代表的眼表自身免疫性炎症具有免疫调控和抑制作用。
[0007] 本发明进行了动物实验，分别进行活体观察和组织检测，结果证实，所述的FTY720 对以SjSgren综合征为代表的眼表自身免疫性炎症具有免疫调控和抑制作用。进一步的， 所述的FTY720可制成治疗SjSgren综合征为代表的眼表疾病的药物，尤其是制成特定使用 浓度范围的眼部滴剂。
[0008] 本发明将FTY720稀释后以眼用滴剂的方式小鼠眼部给药，治疗后的NOD小鼠 Sj5greri综合征的炎症表现明显缓解，泪液质与量明显改善，泪膜破裂时间明显延长，泪液 和眼表组织中的致炎因子及MMP水平显著降低。本发明中，确定FTY720滴剂在小鼠眼表 组织的最佳使用浓度在〇. 〇〇5%-〇. 05%之间，与传统免疫抑制剂相比，达到同等甚至更优疗 效，FTY720治疗浓度明显降低，该浓度FTY720给药2月后未见小鼠眼部明显毒副作用。
[0009] 本发明以业内公认的具有典型Sj5gren综合征特点的非肥胖糖尿病小鼠 (non-obesediabetesMice，N0Dmice)为模型。选取10周龄雄性NOD小鼠168只，随机分为 7 组，每组 24 只，分别为 0? 5%FTY720 组、0? 05%FTY720 组、0? 005%FTY720 组、0? 001%FTY720 组、0. 05%CsA组、生理盐水组和阳性对照组。使用生理盐水将FTY720分别稀释成0. 5%、 0. 05 %、0. 005 %、0. 001%的FTY720水溶液，CsA使用生理盐水稀释成0. 05%的水溶液，以 上药物给药方法均为小鼠双眼点滴，设置生理盐水组和阳性对照组24只。FTY720各组、 0. 05%CsA组以及生理盐水组均为每天3次给药，给药时间分别为上午8点± 1小时，中午12 点±1小时和下午5点±1小时，空白组不作任何干预。观察时间窗分别为药物干预后2 周，1个月和2个月。活体观察指标包括泪膜破裂时间（break-uptest，BUT)，酚红绵线试验 (phenolredcottonthreadtest,PRCTT)检查，同时收集小鼠泪液标本，酶联免疫吸附试 验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测白介素I3 (interleukin-lbeta, IL-IP)水平。小鼠处死后，收集结膜和泪腺组织标本，免疫组织化学检测细胞间粘附分子 I(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)和白细胞共同抗原（leucocytecommon antigen,LCA)在各组的表达水平，明胶酶谱法检测各组角膜组织基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP)水平。实验结果显示：FTY720各组与0? 05%CsA组的BUT和酚红棉 线湿润长度在2周、1个月和2个月的观察窗逐渐提高，其中2周观察窗上升最明显，生理盐 水组和阳性对照组的BUT和酚红棉线湿润长度随着时间延长逐渐下降。印迹细胞学检查示 药物干预各组的上皮细胞和杯状细胞的数目均较治疗前有明显提高，核浆比例改善，细胞 核深染，生理盐水组和阳性对照组未见改善。ELISA检测显示，各干预组中除了 0. 5%FTY720 组IL-13水平明显上调之外，其余各组皆显著下降，生理盐水组和阳性对照组IL-13水平 随时间延长逐渐升高。免疫组织化学检查可见生理盐水组和阳性对照组的眼表组织中炎 症细胞浸润明显，ICAM-I表达持续升高，经药物干预后，炎症细胞显著减少，ICAM-I表达下 调。明胶酶谱法结果显示，MMP-2和MMP-9在阳性对照组、生理盐水组和0. 5%FTY720表达 水平明显上调，与之相比，FTY720其余低浓度治疗组和CsA组的MMP-2和MMP-9表达水平显 著降低。以上各干预组中，0. 005%FTY720组的总体疗效好于其他FTY720组以及0. 05%CSA 组（p〈0. 05)。
[0010] 本发明实验结果还显示，〇. 5%FTY720组治疗1周后可见小鼠眼表组织充血水肿， 0. 001%FTY720疗效相对较弱，FTY720的治疗浓度在0. 005%-0. 05%之间的疗效最佳。结果 明确界定了FTY720在NOD小鼠SjSgren综合征上的最佳浓度范围，为该药的进一步临床研 究打下了坚实基础。
[0011] 本发明提供了FTY720治疗以SjSgren综合征为代表的干眼症的新用途，为FTY720 治疗以SjSgren综合征为代表的干眼症治疗提供了有价值的药物选择，进一步为眼表免疫 性炎症治疗提供了新的治疗策略和治疗思路。
【附图说明】：
[0012] 图1是ELISA法比较各组泪液中IL-IP的水平，
[0013]其中，*:FTY720 低剂量治疗组（0? 05%, 0? 005%and0. 001%)以及 0? 05%CsA与阳性 对照和生理盐水组比较：P〈〇. 01;
[0014] #:阳性对照组和生理盐水组与0? 5%FTY720组比较：P〈0. 01;F:FTY720。
[0015] 图2是结膜组织免疫组化各组ICAM-I的表达水平比较，
[0016] 其中显示：与阳性对照组和生理盐水组比较，ICAM-I的表达水平在FTY720各组及 0. 05%CsA均明显下降。
[0017] 图3是结膜组织免疫组化各组LCA表达水平比较。
[0018] 其中显示：在阳性对照组及生理盐水组，结膜下可见大量白细胞浸润，与之相比， FTY720及CsA治疗后，LCA阳性的白细胞数量明显减少。
[0019] 图4是明胶酶谱法检测各组角膜MMP的水平变化，
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