拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用。
【背景技术】
[0002] 大多数色素障碍性皮肤病如雀斑、黄褐斑以及黑化病等发病机理尚不完全清楚， 其中黄褐斑治疗最为困难，且以面部的面颊、前额、上唇、鼻部和下颏等为好发区域，主要由 遗传因素、紫外线照射、妊娠、口服避孕药或抗癫痫药物引起。多见于东方中青年女性，在东 南亚其发病人数约占皮肤科就诊病人数的〇. 25~4%，孕妇中发病率为50~70%，口服避孕 药者发病率为8~29%，且部分患者分娩或停药后色斑还可持续存在，黄褐斑等色素沉着性 皮肤病由于影响患者的容貌，给患者带来很大的心理负担。但由于迄今为止其发病原因尚 未完全清楚，大多数色素障碍性皮肤病治疗的方法和药物的治疗效果都不尽人意，普遍存 在着治疗周期长，毒副作用大，病人依从性差，效果不稳定，疗效常因人而异等缺陷。因此寻 求毒副作用小、疗效确切的脱色剂成为科研工作者的努力方向。
[0003] 酪氨酸酶（Tyrosinase)是生物体黑色素合成的关键酶，兼有加氧酶和氧化酶的双 重功能，它能够把单酚催化成二酚，并把二酚氧化成醌；醌在非酶促条件下形成最终的反应 产物黑色素。酪氨酸酶抑制剂就是通过抑制酪氨酸酶活性从而抑制黑色素生成。酪氨酸酶 的异常过量表达可导致人体的色素沉着性疾病。因此酪氨酸酶抑制剂通过破坏酪氨酸酶活 性，从而达到减少皮肤中黑色素的目的，进而用于治疗目前常见的色素沉着疾病如雀斑、黄 褐斑、老年斑和黑色素瘤等，可广泛应用于医药和化妆品行业。
[0004] 由于酪氨酸酶在医药、日用化工领域的潜在应用前景，其活性研究成为研究的焦 点。目前，已有不少来源于化学合成和天然产物的酪氨酸酶抑制剂作为药品、化妆品（美白 齐IJ)、食品添加剂及生物杀虫齐IJ。氢醌、曲酸及其衍生物、壬二酸、乙二醇酸、维生素C及其衍 生物、烟酰胺等化学物质都可以抑制酪氨酸酶，也被广泛用于美白化妆品中。曲酸作为一种 酪氨酸酶抑制剂，由于其不稳定，且具有致癌和致过敏等毒副作用；氢醌化合物具有强烈的 酪氨酸酶抑制活性，但由于其可以诱导皮肤病及具有细胞毒性，许多国家已经禁止使用，且 有些酪氨酸酶抑制剂发挥作用时，需要借助汞（即水银）做催化剂。故现有的酪氨酸酶抑制 剂在抑制效果、稳定性或安全性等多方面均存在着不同程度的缺陷，因此继续寻找抑制效 果好、性质稳定、安全温和的酪氨酸酶抑制剂仍然具有十分重要的意义。
[0005] 随着酪氨酸酶抑制剂的不断开发与应用，以及"纯天然产品"回归主流的趋势下， 天然产物酪氨酸酶抑制剂的开发研究越来越得到重视。因此，从天然植物中寻找安全、有效 的酪氨酸酶抑制剂已成为当前医药和化妆品行业研究的趋向。
[0006] 拳参为寥科植物拳PolygonumbistortaL?的干燥根莖，别名曹河车、紫参、奸参、 山虾等，主要分布在河南、河北、吉林、山东、辽宁、四川等地。味甘涩，性凉，具有清热解毒、 止泻、镇惊息风、止血等功效，用于治疗赤痢、热泻、肺热咳嗽、痈肿、痔疮出血等。现代研究 表明拳参还具有抗氧化、抗炎、抗病毒、镇痛、抗衰老、降血脂等功效。
[0007] 至今为止，尚未发现拳参及其提取物具有抑制酪氨酸酶活性作用的研究与报道。
【发明内容】
[0008] 本申请的发明人在长期研究拳参的医药用途的过程中发现，拳参提取物对酪氨酸 酶活性具有显著的抑制作用。
[0009] 本发明的一个目的在于提供拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用。
[0010] 根据本发明，所述拳参提取物可用于制备预防和治疗色素沉着性疾病的药物或化 妆品。
[0011] 根据本发明，所述拳参提取物的制备是以乙醇为提取溶剂，从拳参中提取得到拳 参醇提取物。
[0012] 根据本发明，所述乙醇为体积分数为70%的乙醇。
[0013] 根据本发明，所述提取为加热回流提取，至少提取1次，每次提取时间为1~4h。
[0014] 根据本发明的优选实施例，所述提取为加热回流提取3次，每次提取时间为2h。
[0015] 根据本发明，所述拳参提取物的制备还包括大孔吸附树脂纯化的步骤。
[0016] 根据本发明，所述大孔吸附树脂纯化的步骤包括：采用大孔吸附树脂对拳参醇提 取物进行纯化，先用水洗脱，再用体积分数为30%~90%的乙醇依次洗脱，分别收集乙醇洗 脱液，减压浓缩，冷冻真空干燥。
[0017] 本发明的有益效果：在本申请的研究中发现，应用本发明的提取方法制备的拳参 提取物对酪氨酸酶均有较强的抑制作用，且该拳参提取物较现在世界上公认的美白剂曲酸 的抑制活性强、稳定性好，更无曲酸的致癌、致过敏等毒副作用，可作为一种新型潜在的预 防、治疗色素沉着性疾病药物或化妆品，对雀斑、黄褐斑、老年斑等皮肤色素沉着性疾病具 有一定的预防、改善及治疗的作用，在药物和化妆品领域具有广泛的应用前景。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本 发明而非用于限定本发明的范围。
[0019] 实施例1、拳参不同提取物的制备方法
[0020] 1. 1、拳参醇提取物的制备
[0021] 取拳参药材粗粉50g，加10倍量70%乙醇回流提取三次，每次2h，过滤，合并滤液， 滤液减压浓缩回收乙醇，得浸膏，将浸膏冷冻真空干燥，即得拳参醇提取物。
[0022] 1. 2、拳参30%、60%和90%乙醇洗脱部位提取物的制备
[0023] 取拳参药材粗粉50g，加500ml70%乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，收集滤液，减 压浓缩回收乙醇，浓缩至100ml，即得每Iml浓缩液相当于0. 5g生药粗粉的拳参醇提取溶 液。
[0024] 采用DlOl型大孔吸附树脂对拳参醇提取溶液进行纯化，上柱药液的浓度为每Iml 药液相当于〇. 5g生药，且药液pH为7,上柱中药材量与树脂量的比例为1:6,吸附速率为 3Bv/h;在洗脱过程中，先用水洗脱6Bv，水洗脱速率为6Bv/h;接着用6Bv浓度为30%、60%和 90%的乙醇依次洗脱，洗脱速率均为3Bv/h，分别收集30%、60%和90%的乙醇洗脱液，再将收 集到的30%、60%和90%的乙醇洗脱液进行减压浓缩回收乙醇，得浸膏，并将浸膏冷冻真空干 燥，即得拳参30%、60%和90%乙醇洗脱部位提取物。
[0025] 实施例2、拳参不同提取物对酪氨酸酶抑制的活性分析
[0026] 实验材料：酪氨酸酶、曲酸、L-DOPA均购自Sigma公司。
[0027] 受试药物：拳参不同提取物(实施例1制备的样品)，溶解于DMSO中，制备得60mg/ mL母液；曲酸溶解于DMSO中，制得15mg/mL母液。
[0028] 实验方法：96孔板中每孔加入25iiL20iig/mL酪氨酸酶及25iiL待测样品，混匀， 25°C孵育IOmin后，每孔加入50iiL6mML-DOPA启动反应，25°C避光孵育5min，于475nm处 读取吸光度值(每孔均做空白对照〈以缓冲液代替酪氨酸酶〉以扣除提取物颜色对吸光度 值的影响)。
[0029] 实验结果如表1和表2所示。
[0030] 表1、30iig/mL浓度下不同拳参提取物对酪氨酸酶的抑制效果
[0031]
【主权项】
1. 拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用。
2. 如权利要求1所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，用于 制备预防和治疗色素沉着性疾病的药物或化妆品。
3. 如权利要求1或2所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所 述拳参提取物的制备是以乙醇为提取溶剂，从拳参中提取得到拳参醇提取物。
4. 如权利要求3所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所述 乙醇为体积分数为70%的乙醇。
5. 如权利要求3所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所述 提取为加热回流提取，至少提取1次，每次提取时间为1~4h。
6. 如权利要求5所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所述 提取为加热回流提取3次，每次提取时间为2h。
7. 如权利要求3所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所述 拳参提取物的制备还包括大孔吸附树脂纯化的步骤。
8. 如权利要求7所述的拳参提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，其特征在于，所述 大孔吸附树脂纯化的步骤包括：采用大孔吸附树脂对拳参醇提取物进行纯化，先用水洗脱， 再用体积分数为30%~90%的乙醇依次洗脱，分别收集乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻真空干 燥。
【专利摘要】本发明公开了一种拳参提取物的新用途，本发明所述拳参提取物是以拳参为原料，用乙醇提取制备，并经大孔吸附树脂纯化得到。本发明的拳参提取物的新用途是该提取物具有较好的酪氨酸酶活性抑制作用，可用于制备预防和治疗色素沉着性疾病的药物或化妆品。
【IPC分类】A61K8-97, A61P17-00, A61K36-704, A61Q19-02
【公开号】CN104771456
【申请号】CN201410017256
【发明人】王滔, 王永兵, 肖功胜, 宗伟英, 雷辉, 沈雯, 席晓荣
【申请人】中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康产业创新中心
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2014年1月15日