蛋白激酶抑制剂的制作方法

专利名称：蛋白激酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂及其治疗应用。此外，本发明涉及 预防和/或治疗任何类型的疼痛、炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、感染性疾病、心血管 疾病和神经变性疾病的方法，其包括给药有效量的至少一种细胞周期蛋白依赖性激酶的抑 制剂。
背景技术：
细期胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(“CDKs”)，构成在细胞中发挥多重作用的高度 保守的酶家族，例如细胞周期调节和转录控制(Science 1996，Vol. 274 1643-1677 ；Ann. Rev. Cell Dev. Biol.，1997，13 :261_291)。此家族中的一些成员，例如⑶K1、⑶K2、⑶K3、⑶K4和⑶K6调节细胞周期的不同 时期之间的过渡，例如从Gl中的静止期(有丝分裂和开始新一轮细胞分裂的DNA复制之间 的间隙)进展到S (DNA合成的活跃期)，或者从G2进展到M期，其间发生活跃的有丝分裂和 细胞分裂。此蛋白家族的其他成员(包括⑶K7、⑶K8和⑶K9)调节转录循环中的关键点， 而⑶K5在神经元和分泌细胞功能中发挥作用。⑶K复合物由调节性细胞周期蛋白亚基(如细胞周期蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3和 E)与催化性激酶亚基(如cdc2(⑶K1)、⑶K2、⑶K4、⑶K5和⑶K6)的结合形成。顾名思义， 为了磷酸化它们的靶底物，CDK显示出对细胞周期蛋白亚基的绝对依赖性，并且不同的激酶 /细胞周期蛋白对起到调节进程通过细胞周期的特定部分的作用。CDK9与其细胞周期蛋白配偶体(partner)(细胞周期蛋白Tl、T2a、T2b或K)结合 构成正性P-TEFb蛋白激酶复合物的催化部分，其在转录的延伸阶段期间通过磷酸化RNA聚 合酶II的最大亚基的羧基末端结构域(CTD)起作用。P-TEFb与正性转录因子Nf κ B及负 性转录因子配合作用，因此克服转录伸延的阻滞(Liu和Herrmann 2005)。已知细胞周期失调，是瘤细胞的主要特征之一，其与CDK及它们的调节蛋白的 遗传改变和异常紧密相关，表明CDK的抑制剂可能用作增殖性疾病如癌症的治疗剂。因 此，靶向⑶K的小分子抑制剂在癌症治疗中已成为广泛兴趣的焦点(Current Opinion in Pharmacology, 2003 (3) :362_370)。抑制细胞周期进程的能力表明CDK的小分子抑制剂作 为增殖性疾病如癌症的治疗剂的普遍作用。虽然细胞周期相关的CDK的抑制无疑是与肿瘤 学应用有关，但是，对于调节RNA聚合酶的CDK的抑制并非如此。最近，将CDK9/细胞周期 蛋白T功能的抑制与防止HIV复制相关联，因此，新的CDK生物学的发现继续揭示出CDK抑 制剂的新治疗适应证(Sausville，E. A. TrendsMolec. Med. 2002，8，S32-S37)，例如病毒感染 (W0 02/100401)。令人信服地，CDK抑制剂还可能用于治疗其他病症，其中例如免疫性疾病 和神经变性疾病。已描述了超过50种药理学⑶K抑制剂，其中一些具有潜在的抗肿瘤活性(Current Opinion in Pharmacology,2003(3) :362_370)。 在 Angew.Chem. Int. Ed. Engl. 2003, 42(19) =2122-2138中，可以找到关于已知⑶K抑制剂的全面综述。
在WO 2005/012262中，已报告了 2_苯胺基_4_苯基嘧啶衍生物作为细胞周期蛋 白依赖性激酶抑制剂用于治疗例如癌症的用途。此外，在W02005/012298中，已描述了用于 治疗癌症等的2-吡啶基氨基-4-噻唑基嘧啶衍生物。从WO 2005/005438中得知4，5- 二 氢-噻唑并、噁唑并和咪唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺作为蛋白激酶抑制剂的用途。此外， 在TO 02/081445和W002/074742中，已公开了用作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的吲 哚满酮衍生物和靛玉红衍生物。另外，在W02005/026129中，已描述了用于各种治疗应用的 CDK抑制剂。
可以将已知的⑶K抑制剂按照通常它们抑制⑶K的能力，或者按照它们对特定 ⑶K的选择性进行分类。例如，黄酮吡多(Flavopiridol)用作“泛”⑶K拮抗剂并且对特 定的 CDK 无特别的选择性(Current Opinion inPharmacology, 2003 (3) :362_370)。已知 嘌呤系 CDK 抑制剂例如奥罗莫星、roscovitine、purvanolols 和 CGP74514A 对 CDKl、CDK2 和⑶K5显示出较高的选择性，但是对⑶K4和⑶K6未显示出抑制活性(Current Opinion inPharmacology, 2003 (3) 362-370)。此外，已证明嘌呤系 CDK 抑制剂如 roscovitine 在神 经系统中可以发挥抗凋亡效应(Pharmacol Ther 2002,93 135-143)或者防止神经变性疾 病如阿尔茨海默病中的神经元死亡(BiochemBiophys Res Commun 2002(297) :1154_1158 ； Trends Pharmacol Sci 2002(23) :417_425)。考虑到靶向CDK对治疗病症如增殖性疾病、免疫性疾病、感染性疾病、心血管疾病 和神经变性疾病的巨大潜力，作为特定CDK的选择性抑制剂的小分子的开发成为理想的目 标。本发明提供新的细胞周期蛋白依赖性激酶例如CDK9的小分子抑制剂。适合地，所 述小分子抑制剂对抑制特定的CDK特别是CDK9表现出选择性。所述小分子抑制剂可能对 治疗病症例如增殖性疾病、免疫性疾病、神经变性疾病、感染性疾病和心血管疾病具有治疗 用途。此外，出乎预料地表明，本发明的小分子抑制剂在治疗炎性疾病和疼痛中发挥有利的 效力。目前的炎性疾病和任何类型的疼痛的治疗仅是部分地有效，并且许多还引起令人 虚弱或危险的副作用。例如，用于治疗严重疼痛的许多传统的镇痛药诱发令人虚弱的副作 用，如恶心、头晕、便秘、呼吸抑制和认知功能障碍(BrOwer，2000)。虽然已提供一系列获准的疼痛药物如非麻醉药型镇痛药、阿片类镇痛药、钙通道 阻滞药、肌肉松弛药和全身性皮质类固醇，但是，所述治疗仍然仅是经验性的，并且，虽然它 们可以缓解疼痛的症状，但是在大多数情况下它们不导致完全缓解。这也是因为对形成不 同类型的疼痛的潜在机制的了解仍非常有限。研究者仅刚刚开始理解用于传递各类型疼痛 的神经冲动的信号转导系统的复杂性和多样性。IfIigInternational Association for the Study of Pain (IASP), —
义为与实际的或潜在的组织损伤相关的令人不愉快的感觉和情感经历，或者从这样的损伤 角度描述。具体地，疼痛可能表现为急性疼痛或慢性疼痛。急性疼痛持续时间短，典型地少于1个月，并且与暂时的病症相关。它是身体自 然的反应以使宿主察觉可能在短期内导致进一步损伤的生理的或生化的变化。当伤害性 刺激激活周围神经末梢中的高阈值机械性伤害感受器和/或温度伤害感受器，并且薄髓鞘 的(Αδ)和/或无髓鞘的(C)传入纤维中的诱发动作电位到达有知觉的大脑时，疼痛被感知到。所述伤害性刺激可以由损伤、手术、疾病、外伤或者痛苦的医学操作提供。当潜在的 起因已被治疗或治愈时，急性疼痛通常消失。但是，未缓解的急性疼痛可能导致慢性疼痛问 题，这可能导致长期住院、再入院、拜访门诊和急诊室以及更高的医疗费。与急性疼痛相比，慢性疼痛在初期损伤已治愈后长时间地持续，并且通常扩展至 身体的其他部分，伴有多种病理学的和精神病学的后果。慢性躯体疼痛由对周围组织的外 伤(如神经卡压、外科手术、癌症或关节炎)的炎性应答引起，它导致伤害感受器过分敏感 以及对正常的非伤害性刺激的强烈的灼痛反应(痛觉过敏)。慢性疼痛是连续的和复发性 的，并且其强度会从轻微到可能显著地降低生活质量的严重致残性疼痛之间变化。目前，用常规的镇痛药如NSAID类(布洛芬、萘普生)、Cox-2抑制剂(塞来昔布、 伐地考昔、罗非昔布)和阿片制剂(可待因、吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁)治疗慢性疼痛。 但是，对于大量的患者而言，这些药物不足以缓解疼痛。另一亚型的疼痛，炎性疼痛，可能表现为急性疼痛和慢性疼痛。炎性疼痛由伤害 性刺激如炎性介质(例如细胞因子如TNF a、前列腺素、P物质、缓激肽、嘌呤、组胺和5-羟 色胺)介导，它们在组织损伤、疾病或炎症及其他伤害性刺激(例如温度刺激、机械性刺激 或化学刺激)后被释放。此外，细胞因子和生长因子可以影响神经元表型和功能(Besson 1999)。这些介质被遍布于组织的末梢区域的伤害感受器(感觉感受器)检测到。所述伤 害感受器对伤害性刺激(如机械性刺激、温度刺激或化学刺激)敏感(若延长，所述伤害性 刺激会损伤组织(Koltzenburg 2000))。特别类型的所谓的C-伤害感受器代表不应答任何 水平的机械性刺激或温度刺激但仅在炎症存在下被激活的一类“寂静性”伤害感受器。目前的治疗尤其是炎性疼痛的方法针对抑制细胞因子(如IL1 0 )和抑制促炎的 TNFa。目前认可的抗细胞因子/抗TNFa治疗是基于降低血液中的TNF a循环的嵌合抗 体如英利昔单抗和依那西普。TNFa是诱导合成重要的酶如C0X-2、MMP、iN0S、cPLa2等的最 重要的炎性介质之一。但是，这些“生物制剂”的主要缺点在于它们的免疫原性可能性伴有 效力降低以及它们的动力学，其动力学导致大体地数字上完全或完全不地降低循环TNFa。 后者可能导致严重的免疫抑制副作用。一种不同形式的慢性疼痛，神经性(或神经原性)疼痛，起因于周围神经功能障碍 或中枢神经功能障碍，并且包括在病因学和部位上不同的各种病症。通常神经性疼痛的起 因是多样的，但是，具有周围神经损伤或中枢途径元件(component)损伤的共同症状。诱发 因素可能是代谢性神经损害、病毒性神经损害或机械性神经损害。据信，神经性疼痛由周围 神经系统、CNS或二者中异常的躯体感觉过程维持。神经性疼痛不直接与伤害感受器的刺 激相关，但是相反地，认为它例如起因于脊髓灰质(背侧角)中的突触后神经元上的谷氨酸 受体的过度敏感化。神经性疼痛与病症如糖尿病和疱疹后神经痛(带状疱疹)中的神经变性相关。神 经性疼痛病症是一些疾病和病症的后果，所述疾病和病症包括糖尿病、AIDS、多发性硬化、 残肢和截肢后幻痛、癌症相关的神经病、疱疹后神经痛、外伤性神经损伤、缺血性神经病、神 经压迫、中风、脊髓损伤。神经性疼痛的治疗仍然是主要的临床挑战，这部分地由于对参与形成和维持神经 性疼痛的机制理解不足。许多现有的镇痛药对治疗神经性疼痛无效，并且大多数现有的麻 醉性药物和非麻醉性药物不控制疼痛。目前临床实践包括使用一些药物类别来治疗神经
13性疼痛，例如抗惊厥药、三环抗抑郁药和全身性局部麻醉药。但是，这样的治疗的通常结果是部分的或不足的疼痛缓解，而且，在一些情况中，这些药物的副作用超过它们的临床有效 性。普遍认为传统的镇痛药对治疗神经性疼痛疗效差或无效。已进行的关于使用非留体类 抗炎药(NSAID)或阿片制剂来治疗神经性疼痛的临床研究很少，但是，在已进行的那些研 究中，结果似乎表明NSAID疗效差或无效并且阿片制剂仅在高剂量下有效。分析周围神经 性疼痛(PNP)的对照临床数据的综述(Pain，November，199773 (2)，123-39)报告，NSAID作 为PNP的镇痛药很可能无效并且无长期的数据来证实任何药物的镇痛有效性。可获得的镇痛药通常不足以缓解疼痛。虽然三环抗抑郁药和某些抗癫痫药例如加 巴喷丁、拉莫三嗪和卡马西平对一些患者有效，仍然非常需要治疗这些病症的有效药物。总之，非常需要治疗炎性疾病和疼痛、特别是治疗慢性炎性疼痛和神经性疼痛的 安全且有效的方法。定义除非特别限定，在整个说明书和权利要求书中，用语“烷基”意指Cp12烷基基团，适 合地指Ch6烷基基团，例如Ci_4烷基基团。烷基基团可以是直链或支链的。适合的烷基基 团包括例如，甲基、乙基、丙基(如正丙基和异丙基)、丁基(如正丁基、异丁基、仲丁基和叔 丁基)、戊基(如正戊基)、己基(如正己基)、庚基(如正庚基)和辛基(如正辛基)。用 语“烷”，例如，在用语“烷氧基”、“卤代烷基”和“硫烷基”中，应按照“烷基”的定义解释。示 例性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(如正丙氧基)、丁氧基(如正丁氧基)、戊氧基 (如正戊氧基)、己氧基(如正己氧基)、庚氧基(如正庚氧基)和辛氧基(如正辛氧基)。 示例性的硫烷基基团包括甲硫基-。示例性的卤代烷基基团包括氟烷基如CF3。除非特别限定，用语“烯基”意指C2_12烯基基团，适合地指C2_6烯基基团，例如C2_4 烯基基团，所述烯基在任何期望的位置处包含至少一个双键并且其不包含任何三键。烯基 基团可以是直链或支链的。示例性的包含一个双键的烯基基团包括丙烯基和丁烯基。示例 性的包含两个双键的烯基基团包括戊二烯基，如(1E，3E)-戊二烯基。除非特别限定，用语“炔基”意指C2_12炔基基团，适合地指C2_6炔基基团，例如C2_4 炔基基团，所述炔基在任何期望的位置处包含至少一个三键，并且也可以包含或可以不包 含一个或多个双键。炔基基团可以是直链或支链的。示例性的炔基基团包括丙炔基和丁炔 基。除非特别限定，用语“亚烷基”意指式-(CH2)n-的链，其中η是整数，如1-5。除非特别限定，用语“环烷基”意指C3,环烷基基团(即3-10个环碳原子)，更适 合地指C3_8环烷基基团，如c3_6环烷基基团。示例性的环烷基基团包括环丙基、环丁基、环戊 基、环己基、环庚基和环辛基。环碳原子的最适合数量是3-6。除非特别限定，用语“环烯基”意指C5,环烯基基团(即5-10个环碳原子)，更适 合地指C5_8环烯基基团，如c5_6环烯基基团。示例性的环烯基基团包括环戊烯基、环己烯基、 环庚烯基和环辛烯基。环碳原子的最适合数量是5-6。除非特别限定，用语“碳环基”意指任何这样的环系统，其中所有环原子均是碳，并 且其包含3-12个环碳原子，适合地包含3-10个碳原子，而且更适合地包含3-8个碳原子。 碳环基基团可以是饱和的或部分不饱和的，但不包括芳香性环或与芳香性环稠合的非芳香 性环。碳环基基团的实例包括单环环系统、双环环系统和三环环系统，特别是单环环系统和双环环系统。其他碳环基基团包括桥环系统(如双环[2.2. 1]庚烯基)。碳环基基团的具 体实例是环烷基基团。碳环基基团的进一步实例是环烯基基团。除非特别限定，用语“杂环基”意指其中一个或多个(如1个、2个或3个)环原子被 选自N、S和0的杂原子替代的碳环基基团。杂环基基团的具体实例是其中一个或多个(如 1个、2个或3个，特别是1个或2个，尤其是1个)环原子被选自N、S或0(特别是N或0) 的杂原子替代的环烷基基团(如环戊基或更特别地是环己基)。示例性的包含一个杂原子 的杂环基基团包括吡咯烷、四氢呋喃和哌啶，而且，示例性的包含两个杂原子的杂环基基团 包括吗啉和哌嗪。杂环基基团进一步的具体实例是其中一个或多个(如1个、2个或3个， 特别是1个或2个，尤其是1个)环原子被选自N、S和0 (特别是N或0)的杂原子替代的 环烯基基团(如环己烯基基团)。这样的基团的实例是二氢吡喃基(如3，4_ 二氢-2H-吡 喃-2-基_)。除非特别限定，用语“芳基”意指C6_12芳基基团，适合地指C6,芳基基团，更适合地 指C6_8芳基基团。芳基基团包含至少一个芳香性环(如一个环、两个环或三个环)，但也可 以包含非芳香性的额外的环。含有一个芳香性环的典型芳基基团的实例是苯基。含有两个 芳香性环的典型芳基基团的实例是萘基。与c5_8碳环基(适合地，c5_6碳环基)稠合的苯基 (如茚满)也是芳基的实例。除非特别限定，用语“杂芳基”意指这样的芳基基团，其中一个或多个(如1个、2 个、3个或4个，适合地1个、2个或3个)环原子被选自N、S和0的杂原子替代，或者，意 指这样的5元芳香性环，其包含一个或多个(如1个、2个、3个或4个，适合地1个、2个或 3个)选自N、S和0的环原子。示例性的具有一个杂原子的单环杂芳基基团包括五元环 (如吡咯、呋喃、噻吩)；和六元环(例如吡啶，如吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)。 示例性的具有两个杂原子的单环杂芳基基团包括五元环(如吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异 噻唑、咪唑，例如咪唑-1-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基)；六元环(例如，哒嗪、嘧啶、吡嗪)。 示例性的具有三个杂原子的单环杂芳基基团包括1，2，3_三唑和1，2，4_三唑。示例性的 具有四个杂原子的单环杂芳基基团包括四唑。示例性的双环杂芳基基团包括吲哚(例如， 吲哚-6-基)、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异喹啉、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、喹唑啉和嘌 呤。与杂环基稠合的苯基(例如苯并-1，3-间二氧杂环戊烯-5-基、2，3_ 二氢苯并1，4 二 噁英-6-基)也是杂芳基的实例。适合地，所述一个或多个杂原子是芳香性环的成员。除非特别限定，用语“_烷基碳环基”意指通过亚烷基部分例如CV4亚烷基部分相 连的碳环基基团。除非特别限定，用语“_烷基杂环基”意指通过亚烷基部分例如CV4亚烷基部分相 连的杂环基基团。除非特别限定，用语“_烷基芳基”意指通过亚烷基部分例如CV4亚烷基部分相连 的芳基基团。除非特别限定，用语“_烷基杂芳基”意指通过亚烷基部分例如C1-4亚烷基部分相 连的杂芳基基团。术语“卤素(halogen)”或“卤素(halo)”包括氟(F)、氯(Cl)和溴(Br)0术语“氨基”意指基团-NH2。立体异构体
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要求保护的化合物的所有可能的立体异构体均包括在本发明内。在本发明的化合物具有至少一个手性中心的情况中，相应地，它们可能作为对映体存在。在所述化合物具有两个或多个手性中心的情况中，它们又可能作为非对映体存在。 应理解所有这样的异构体及其混合物均包括在本发明范围内。制备和分离立体异构体在用于制备本发明的化合物的方法产生立体异构体的混合物的情况中，通过常规 技术例如制备色谱可以分离这些异构体。所述化合物可以制备成外消旋的形式，或者，通过 对映体选择性(enantiospecific)合成或者通过拆分可以制备单一的对映体。例如，通过 标准技术，例如，通过与旋光性的酸如(-)_ 二对甲苯酰基-d-酒石酸和/或(+)-二对甲苯 酰基-1-酒石酸形成盐来形成非对映体对，然后进行分步结晶和游离碱再生，可以将所述 化合物拆分成它们的对映体成分。通过形成非对映的酯或酰胺，然后进行色谱分离和除去 手性助剂，也可以拆分所述化合物。或者，使用手性HPLC柱可以拆分所述化合物。药学可接受的盐鉴于游离化合物与它们的盐或溶剂合物形式的化合物之间的紧密关系，在本文中 无论何时提及化合物，也意指相应的盐、溶剂合物或多晶型物，条件是在这种情况下这样是 可能的或适合的。溶剂合物一些所述化合物可以与水形成溶剂合物(即水合物)或与常见有机溶剂形成溶剂 合物，并且这样的溶剂合物也意图包括在本发明的范围内。所述化合物，包括它们的盐，还 可以它们的水合物形式得到，或者包含用于它们的结晶的其他溶剂。式(I)的化合物及其适用于医学的生理学上的官能团衍生物的盐和溶剂合物是 其中抗衡离子或缔合的溶剂是药学可接受的那些。但是，具有非药学可接受的抗衡离子或 缔合的溶剂的盐和溶剂合物也在本发明范围内，例如，在其他化合物及它们的药学可接受 的盐和溶剂合物的制备中用作中间体。本发明的适合的盐包括与有机酸和无机酸或有机碱和无机碱形成的那些盐。药 学可接受的酸加成盐包括由以下酸形成的那些盐，所述酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、 柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、对氨基苯磺 酸、琥珀酸、草酸、富马酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、谷氨酸、天冬氨酸、草酰乙酸、甲磺酸、 乙磺酸、芳基磺酸(例如对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸或萘二磺酸)、水杨酸、戊二酸、葡糖 酸、丙三羧酸、肉桂酸、取代的肉桂酸(例如，被苯基、甲基、甲氧基或卤素取代的肉桂酸，包 括4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸)、抗坏血酸、油酸、萘甲酸、羟基萘甲酸(例如1-羟 基-2-萘甲酸或3-羟基-2-萘甲酸)、萘丙烯酸(例如萘-2-丙烯酸)、苯甲酸、4-甲氧基 苯甲酸、2-羟基苯甲酸或4-羟基苯甲酸、4-氯苯甲酸、4-苯基苯甲酸、苯丙烯酸(例如1， 4-苯二丙烯酸)、羟乙磺酸、高氯酸、丙酸、乙醇酸、羟乙磺酸、扑酸、环己烷氨基磺酸、糖精 酸和三氟乙酸，特别是盐酸。药学可接受的碱盐包括铵盐、碱金属盐如钠和钾的那些盐、碱 土金属盐如钙和镁的那些盐，以及与有机碱如二环己基胺和N-甲基-D-葡糖胺形成的盐。本发明的化合物的所有药学可接受的酸加成盐形式均意图包括在本发明的范围 内。多晶型物晶形
此外，所述化合物的一些晶形可作为多晶型物存在，并因此意图包括在本发明内。前药本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药。通常这样的前药会是所述 化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。因此，在这些情况 中，本发明的治疗方法，术语“给药”应包括用要求保护的化合物中的一种或多种的前药形 式来治疗所述各种病症，但是在向个体给药后所述前药形式在体内转化成上述化合物。例 如，在“Design of Prodrug", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985 中，描述了选择和制备适合 的前药衍生物的常规方法。保护基在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反 应基团可能是必需的和/或期望的。这可以通过常规的保护基实现，例如，在Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J. F. W. McOmie, Plenum Press, 1973 ；禾口 T. W. Greene&P. G. M. ffuts,Protective Groups inOrganic Synthesis, John Wiley&Sons, 1991 中所述的那 些保护基，这些参考文献通过援引完全纳入本文。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶 段可以除去保护基。如在本文中使用的，术语“组合物”意图包括包含治疗有效量的要求保护的化合物 的产品，以及直接地或间接地由要求保护的化合物的组合产生的任何产品。发明概述本发明涉及细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，并且涉及用于治疗和/或预防任 何类型的疼痛、炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、感染性疾病、心血管疾病和神经变性疾 病的方法和组合物，包括向有此需要的个体给药有效量的至少一种细胞周期蛋白依赖性 激酶(cdk，⑶K)的抑制剂。如本发明所述，提供抑制剂化合物，其是通式I的化合物 或其药学可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有的互变异构体和立体异 构体，其中A 是 N，并且 B 是 CH、C (C1^4 烷基)或 C (NH2)，或者A是CH、C ((V4烷基)或C (NH2)，并且B是N ；Ra是H或甲基；R1 选自CV8 烷基；
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-NR6R7 ；CV6 烷基-NR6R7 ；R20 ；-C1^6 烷基-R20 ；-CV6 烷基-C (O)OR4 ；CV6 烷基-C (O)R4 ；-NR10- (C1^6 烷基)-NR6R7 ；-NRlt1-(Ch 烷基)-R20 ；-NR10- (C1^6 烷基)-C (0) OR4 ；-NR10R20 ；0-((V6 烷基)-NR6R7 ；-0_((ν6 烷基)_R20 ；-0- ((V6 烷基)-C (0) OR4 ；-OR20 ；CV6 烷基-OR20 ；CV6 烷基-SR20 ；C1-C6 烷基-NRiqR20 ；((V6 烷基)-0- ((V6 烷基)-R20 ；((V6 烷基)-S- ((V6 烷基)-R20 ；C (0) R20 ；其中烷基部分可以是直链或支链的，并且可以被选自卤素、甲氧基、乙氧基、NR6R7 或含氮杂环的一个或多个取代基取代；R4表示H或Ch-烷基；R6和R7各自独立地选自H、C1^6烷基、羟基_C2_6烷基；R10表示H或Cp4烷基；R2tl选自芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，并且可以被一个或多个选自以下的取代基 取代CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基，其中任何一个可以被一个或多个卤素或OH取代基取 代；R21、-Ch 烷基-R21 ；OR21、烷基)R21、SR21、SOR21, SO2R21、C(O)R21, C1^4 烷 基-OR21、-0(C2_6烯基)、-0(C2_6炔基)，其中任何一个可以被一个或多个卤素或OH取代基 取代；OR22、-SR22、-SOR22-SO2R22、-C (0) R22、-C (0) OR22、-C1^4 烷基-O-R22、-C1^4 烷基-O-CV4 烷基-O-R2^Ch 烷基-C (O)R22A-CV4 烷基-C (O)R22^NR11C(O) OR22、NR11C (O)R22、-SO2-NR11R12、-C(O) -NR11R12、-C^4 烷基-C (0) -NR11R12,-NH-SO2R15,-N (C1^4 烷基)_S02R15、_ ((^4 烷基)NR"R12、 NR11R12, -((V6烷基)NR"R12、硝基、卤素、氰基和羟基；并且当R2°是碳环基或杂环基、或者其 中芳香性环与非芳香性环稠合的芳香性基团时，R20还可以被氧代取代；R21选自芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，并且可以被一个或多个如下定义的取代基 取代；
当R21是芳基或杂芳基基团时，它可以被一个或多个选自以下的取代基取代其中 苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代当R21是碳环或杂环基团时，它可以被选自甲基、氧代或卤素的一个或多个取代基 取代；R22是氢或任选地被卤素或羟基取代的Cp6烷基；R11和R12各自独立地表示选自H或Cy烷基的取代基，或者，Rn和R12连接起来从 而它们一起形成3-8元非芳香性环；R15表示H或Cp4烷基；R2 表示 H、CV6 烷基或 NH2 ；各个R3独立地表示选自以下的取代基(；_6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、CV6卤代烷 基、任选地被甲基、氧代或卤素取代的c3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟 甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基、-C1^6烷基-0H、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟 甲氧基或三氟甲氧基取代的-Cy烷基苯基、CV6烷氧基-、C1^6烯基氧基、C3_6炔基氧基_、 (V6卤代烷氧基-、-o-c3_8环烷基、-O-CV4烷基-c3-8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、 卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-0-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟 甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-CV4烷基苯基、-S(CV6烷基)、-SCKCV6烷基)、-SO2CV6烷 基、-S02C3_8 环烷基、-SO2-NR31R32、-C (0) C1^6 烷基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷 基、-C (0) -NR31R32、-CV4 烷基-O-CV4 烷基、-C1^ 烷基-O-Ch4 烷基 _0H、-C1^4 烷基-O-C1^ 烷 基-O-C1-4 焼基、-C1-4 焼基—O-C3-7 环焼基、-C1-4 焼基—C (0) C1^ 焼基、-C1-4 焼基—C (0) 0Ηλ—C^4 烷基-C (0) OCh 烷基、-Ch 烷基-C (0) -NR31R32, -NH-SO2R33, -N (C1^4 烷基)_S02R33、- (C1^4 烷 基)NR31R32、-NR31R32,-(C1^6 烷基)NR31R32、硝基、卤素、氰基、羟基；R31和R32各自独立地表示选自H、C1^4烷基或Ch卤代烷基的取代基，或者，R31和 R32连接起来从而它们一起形成3-8元非芳香族环；R33表示H或C1—4烷基；χ表示在0-4范围内的、在苯环上的独立地选择的R3取代基的数量。与通式(I)的那些相似的一些化合物是现有技术中已知的。例如，EP1679309(0no Pharmaceutical)，其涉及抗应激药物以及适应证如帕金森病、精神分裂症、心肌梗死。EP 1679309公开了与本发明的化合物相似的一些化合物；但是，这些化合物与其中A表示N并 且B表示CH或C(Ci_4烷基)的本发明的更适合的化合物不同，因为它们的构型是其中对应 于本发明的A的原子表示CH并且对应于本发明的B的原子表示N。WO 2004/084824(Merck)涉及作为钠通道阻滞药的联芳基取代的6元杂环。适应 证包括慢性和神经性疼痛，以及其他病症包括CNS病症。W02004/084824公开了与所述本 发明的更适合的化合物相似的化合物，但是未公开其中A表示N并且B表示CH或C ((V4烷 基)的化合物的合成方法。WO 2002/094825 (Banyu Pharmaceutical)涉及 NPY 激动剂和适应证，包括循环性 疾病、中枢疾病、代谢性疾病、性功能障碍和生殖功能障碍、消化疾病、呼吸疾病等。此文件 中公开的化合物不同于本发明的那些化合物，因为WO 2002/094825涉及这样的化合物，其 中R1(如本申请定义)是包含经螺环交点(junction)连接至末端双环的哌啶环的三环系统。
WO 2005/103022 (Transtech Pharma)涉及作为黑皮质素受体调节剂的取代的噻唑和嘧啶衍生物。适应证包括癌症和心血管疾病。WO 2005/103022公开了与本发明的化合 物相似的一些化合物；但是，这些化合物不同于所述本发明的更适合的化合物，因为这些化 合物具有A表示CH并且B表示N (如本申请定义)，而所述本发明的更适合的化合物具有A 表示N并且B表示CH或CKh烷基)。FR 2878247 (Galderma Research&Development)涉及新化合物及其在化妆品组合 物或药物组合物中的用途，所述化合物调节Y亚型受体的过氧化物酶体增殖物激活性受 体类型。适应证大多是皮肤病症，但是也包括与脂代谢相关的疾病如肥胖症，和炎性病症如 关节炎，以及癌症。FR 2878247公开的与本申请的化合物很相似的实例不同于所述本发明 的更适合的化合物，因为这些化合物具有A表示CH并且B表示N(如本申请定义)，而所述 本发明的更适合的化合物具有A表示N并且B表示CH或C((V4烷基)。WO 2001/62233 (F Hoffmann La Roche)涉及腺苷受体调节剂。适应证尤其包括阿 尔茨海默病、帕金森病、精神分裂症和疼痛。WO 2001/62233公开了与本发明的化合物相似 的一些化合物；但是，这些化合物不同于所述本发明的更适合的化合物，因为这些化合物具 有A表示CH并且B表示N (如本申请定义)，而所述本发明的更适合的化合物具有A表示N 并且B表示CH或Cd4烷基)。在本发明的一个方面，在通式(I)的化合物中A 是 N，并且 B 是 CH、C((V4 烷基)或 C(NH2),或者A是CH、C((V4烷基)或C(NH2)并且B是N ；R1 选自:CV8 烷基；CV8卤代烷基； 芳基；杂芳基；(3_12碳环基；杂环基；-CV6烷基-芳基；-CV6烷基-杂芳基；-CV6烷基-碳环基；-(V6烷基-杂环基；-CV6 烷基-C (O)OH;-CV6 烷基-C (0) OC1^4 烷基； -NI^Ch 烷基-芳基；-NI^Ch烷基-杂芳基；-NI^Ch烷基-碳环基；-NR^h烷基-杂环基；-NR^C^e 烷基-C (0) 0H ；-NR^C^e 烷基-C (0) OCH 烷基；-NR1Q 芳基；-NR1Q 杂芳基；-NR1Q 碳环基；-NR1Q 杂环基； -OCk烷基-芳基；-OCh烷基-杂芳基；-OCh烷基-碳环基；-OCh烷基-杂环基；-OCh 烷基 _C(0)0H;-OCh 烷基 _C (0) OCH 烷基；-0 芳基;-0杂芳基；-0碳环基；和-0杂环基；其中任何上述芳基和杂芳基可以任选地被独立地选自以下的一个或多个基团取 代cv6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、Cm卤代烷基、任选地被甲基、氧代或卤素取代的C3_8环烷 基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基-Cm烷基-0H、 其中苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-Ch烷基苯 基、(V6烷氧基-、(V6烯基氧基、c3_6炔基氧基-、(V6卤代烷氧基-、-o-c3_8环烷基、-o-c^烷 基-c3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-0-苯 基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-Cy烷基苯 基、-s (CV6 烷基)、-so 和_6 烷基)、-SO^^e 烷基、-S02c3_8 环烷基、-S02-NRnR12, -C (0) 烷 基、-c (0) C3_8 环烷基、-c (0) OH、-c (0) OC^e 烷基、-C (0) -NR"R12、-CV4 烷基-O-C^ 烷基、焼基"O-C^4焼基_0H、"C^4焼基"O-C^4焼基"O-C^4焼基、"C^4焼基_0_C3—7环焼基、"C^4 烷基-C (0) C1^6 烷基、-Cp4 烷基-C (0) 0H、-C卜4 烷基-C (0) OC1^4 烷基、-CV4 烷基-C (0) -NR11R12 、-NH-SO2R15, -N (Ch 烷基)-SO2R15, - (C1^4 烷基)NR11R12, NR11R12, - (C1^6 烷基)NR"R12、硝基、卤 素、氰基和羟基；并且其中任何上述碳环基和杂环基可以任选地被独立地选自以下的一个或多个基团取代=CV6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、C1^6卤代烷基、任选地被甲基、氧代或卤素取代 的c3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的苯 基、-Ch6烷基-0H、其中苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲 氧基取代的-CV4烷基苯基、CV6烷氧基-、CV6烯基氧基、c3_6炔基氧基-、CV6卤代烷氧 基-、-0-C3_8环烷基、-O-Ch烷基-c3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、 氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-0-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧 基或三氟甲氧基取代的-O-Ch烷基苯基、-S((V6烷基)、-SCKCV6烷基)、-SO2Ch6^ 基、-S02C3_8 环烷基、-SO2-NR11R12、-C (0) C1^6 烷基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷 基、-C (0) -NR11R12, -CV4 烷基-O-CV4 烷基、-C1^ 烷基-O-Ch4 烷基 _0H、-C1^4 烷基-O-C1^ 烷 基-O-C1-4 焼基、-C1-4 焼基—O-C3-7 环焼基、-C1-4 焼基—C (0) C1^ 焼基、-C1-4 焼基—C (0) 0Ηλ—C^4 烷基-C(O)OCh4 烷基、-C^ 烷基-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15, -N((^4 烷基)_S02R15、-(C1^4 烷 基)NR"R12、-NR11R12,-^烷基)NR"R12、硝基、卤素、氰基、羟基和氧代；R2 表示 H、CV6 烷基或 NH2 ；R3表示选自以下的取代基=Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、CV6卤代烷基、任选地 被甲基、氧代或卤素取代的C3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或 三氟甲氧基取代的苯基、-CV6烷基-0H、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基 或三氟甲氧基取代的-CV4烷基苯基、C1^6烷氧基-、CV6烯基氧基、c3_6炔基氧基-、CV6卤 代烷氧基-、-0-C3_8环烷基、-O-Ch烷基-C3-8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲 基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲 氧基或三氟甲氧基取代的-O-Ch烷基苯基、-S((V6烷基)、-SO((V6烷基)、-SO2CH烷 基、_S02C3_8 环烷基、-SO2-NR31R32、-C (0) C1^6 烷基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷 基、-C (0) -NR31R32、-CV4 烷基-O-CV4 烷基、-C1^ 烷基-O-C^4 烷基-OH、-C1^4 烷基-O-C1^ 烷 基-O-C1-4 焼基、-C1-4 焼基—O-C3-7 环焼基、-C1-4 焼基—C (0) C1^ 焼基、-C1-4 焼基—C (0) ΟΗλ-C^4 烷基-C (0) OCh 烷基、-Ch 烷基-C (0) -NR31R32, -NH-SO2R33, -N (C1^4 烷基)_S02R33、- (C1^4 烷 基)NR31R32、-NR31R32,-(C1^6 烷基)NR31R32、硝基、卤素、氰基、羟基；R4和R5独立地表示H或Cb4-烷基；R6和R7各自独立地选自H、C1^6烷基、羟基_C2_6烷基-；R10表示H或Ch烧基；R11和R12各自独立地表示选自H或Cy烷基的取代基，或者，Rn和R12连接起来从 而它们一起形成3-8元非芳香性环；R15表示H或Ch烷基；R31和R32各自独立地表示选自H、C1^4烷基或Cy卤代烷基的取代基，或者，R31和 R32连接起来从而它们一起形成3-8元非芳香性环；R33表示H或Ch烧基；
χ表示在0-4范围内的、在苯环上的独立地选择的R3取代基的数量；m表示1-4的整数；并且η表示2-4的整数。发明详述在通式(I)的化合物中，通常情况是，A是N并且B是CH、C(Ch烷基)或C(NH2)， 并且这样的化合物本身构成本发明的独立的方面。在本申请的适合的化合物中，独立地或以任意组合的方式Ra 是氢；B 是 CH 或 CV4 烷基；R2是氢或Ch烷基，R3是卤素、C1^6烷氧基、-O-Ch烷基苯基(如1_0_苄基)或"O-C1^4烷基_C3_8环 烷基；并且χ 是 1 或 2。在通式(I)的甚至更适合的化合物中，独立地或以任意组合的方式，B是CH;R2是氢或甲基，尤其是氢；并且R3是卤素、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、苄氧基或-OCH2环丙基。当χ是1时，R3最适合表示Cp6烷氧基、-O-Ch烷基苯基或-O-C^4烷基_C3_8环烷 基，典型地表示甲氧基或乙氧基基团，尤其是甲氧基。当χ是2时，R3基团之一可以是甲氧基、乙氧基、-异丙氧基、苄氧基或(1-环丙 基)甲氧基，更典型地是甲氧基或乙氧基基团，而且最适合地是甲氧基基团，并且另一个R3 基团典型地是卤素，尤其是氟。当R3是Cp6烷氧基、-O-CV4烷基苯基或-O-Ch烷基_C3_8环烷基时，优选地它是在 苯环2-位上的取代基。当R3表示卤素时，卤素适合地是在苯环3-位、4-位或5-位上的取代基。在通式(I)的化合物中，适合的R1基团的实例包括-C1-C6 烷基；-R20 ；-C(O)R20;-C1-C6 烷基-R20，其中所述烷基基团任选地被商素、甲氧基、乙氧基、-NR6R7或含氮杂环基环取代；-C1-C6 烷基-OR20 ；- (C1-C6 烷基)-0- (C1-C6 烷基)-R20 ；-C1-C6 烷基-NRiciR20 ；-C1-C6 烷基-SR20 ；-NR10R20 ；-NR6R7 ；-NR10- (C1-C6 烷基)-NR6R7 或-NRici-(Cp6 烷基)-C (O)OH;其中R6、R7、Rici和R2ci如上定义。
当R1表示-Ci-C；烷基时，具体实例是叔丁基。当R1表示R2°或NRWR2°时，R2°可以是任何取代的或未取代的碳环基、杂环基、芳基 或杂芳基基团。在R1是取代的碳环基基团的情况中，在一些特别适合的化合物中，取代基 可以在将所述碳环基基团连接至分子其余部分的同一原子上。在R1表示C(0)R2°的情况中，R2°典型地是芳基或杂芳基基团、或杂环基基团，所述 芳基或杂芳基基团可以是未取代的或如上定义地被取代。适合地，R2°是苯基或6元杂环基 基团如哌啶基。相似地，当R1表示(「(；烷基-R2°时，R20也适合地是任选地如上所述地被取代的 芳基、杂芳基或杂环基基团。在其中R1 表示 C「C6 烷基-OR20、- (CrC6 烷基)_0_ (CrC6 烷基)-R20、C「C6 烷 基-NPI^或Ci-Ce烷基-SR2°的化合物中，R2°通常是任选地如上所述地被取代的芳基或杂
芳基基团。当R2°表示杂环基时，R2°适合地是包含独立地选自氧、硫或氮的一个或两个杂原子 的5元或6元杂环基环。一些适合的杂环基环包含一个氮原子、硫原子或氧原子。备选的适 合的杂环基环包含一个或两个氮原子，其中特别适合的是包含单个氮原子的杂环基环。具 体的杂环基R2°部分的实例包括哌啶基(例如哌啶-3-基-和哌啶-4-基-)、吡咯烷基、四 氢吡喃基和四氢噻喃基。所述杂环基环可以是未取代的，或者被任何之前所述的杂环基的 取代基取代，但是，适合地被一个或多个取代基例如一个、两个、三个或四个取代基取代。所 述取代基可以独立地选自氧代、-Ch烷基、-CH烷基-0-C^烷基、-C (0) Ci_4烷基、-C (0) 0(V4 烷基、卤素和-Ch烷基R21，其中这些取代基的具体实例是氟、氧代、甲基、乙基、异丙基、异 丁基、-(CH2) 2-O-CH3、- (CH2) 3-O-CH3、-C (o) o-叔丁基、-CH2-苯基。当R2°表示碳环基时，它典型地是环烷基基团，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己 基，尤其是环己基。所述碳环基环可以是未取代的，或者被任何之前所述的碳环基的取代基 取代，但是，最适合地被一个或多个-Cm烷基、氧代、-NH2、-NHC (0) 烷基、-NHC (0) 烷 基、-C (0) NH2、任选地取代的芳基或杂芳基基团取代。更适合地，所述碳环基环可以是未取代的，或者被一个或多个取代基取代，所述取 代基选自-NH2 ； -NHC (0) Ci_4烷基；-NHC (0) 烷基；-C (0) NH2、任选地取代的苯基，例如 4-氯苯基或4-甲氧基苯基；或者任选地取代的吡啶基，例如4-吡啶基。当R2°表示芳基时，芳基的实例包括萘基和苯基，特别是任选地被一个或多个取代 基取代的苯基。这些芳基基团的典型的取代基包括-NH-SOfH烷基、Ci_4烷基、-0((V4烷 基)、其中R12如上定义的-NHR12、芳基、杂芳基、硝基和卤素。特别适合的取代基包括氟、氯、 甲基、甲氧基、乙氧基、-nh2、-NH-SO2CH3、-CH2C(O)OH、杂芳基和硝基。R2°的杂芳基取代基的 实例是四唑基。在通式(I)的化合物中，当R2°表示杂芳基部分时，它典型地是单环杂芳基基团或 双环杂芳基基团。通常，单环杂芳基基团R2°包含5元或6元环系统，而双环基团包含与另 一 5元或6元环稠合的5元或6元环。双环基团包括与不饱和的杂环基环稠合的苯基以及 与任选地包含一个或多个额外的杂原子的不饱和环稠合的杂芳基部分。这些杂芳基基团的适合的取代基如上所述，但是在特别适合的化合物中的取代基 的实例包括Ci_4烷基，尤其是甲基或乙基；商素，例如氟、氯或溴；或者-(c「c4烷基)-0-R21或者R21，其中R21是未取代的苯基或杂芳基，尤其是未取代的杂芳基。特别适合的单环杂芳基基团R2°包括包含一个或两个氮原子的6元杂芳基环，例如吡啶和嘧啶 ；包含1-4个杂原子的5元杂芳基环，例如噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、三唑、四唑、异噁 唑、噁唑、噻唑和咪唑。特别适合的双环杂芳基基团R2°包括氮杂吲嗪、喹啉、异喹啉及其部分饱和的衍生 物，例如二氢喹啉酮、四氢喹啉和与5元碳环基基团稠合的吡啶基。除了以上列举的取代基 之外，这些部分饱和的双环基团可以任选地被氧代取代。当R1是-NR6R7或者-NRiq- (C1-C6烷基)-NR6R7时，通常情况是R6和R7各自独立地为 氢或C1-C4烷基，更特别地为氢或甲基。此类R1基团的具体实例是NH2和NRw (CH2) 2N (CH3) 2。当R1 是-C1-C6 烷基-NR1CIR2CI、-NR10R20, -NR10- (C1-C6 烷基)-NR6R7 或-NRici- (C1^6 烷 基)-C (0) OH时，通常情况是Rw为氢或甲基，但更特别地为氢。本发明的具体化合物的实施例列于表1和表2中。表1

34表2
述方法包括 (a)将一种式⑴的化合物转化成另一种式⑴的化合物。在步骤(a)中，示例性的转化反应包括 烷基化反应例如N-烷基化反应(如将基团R1 =哌啶转化成R1 = N-甲基哌啶)·酰基化(例如当R1表示哌啶时将哌啶的NH基团转化成NC (0) CH3) 除去保护基(例如通过使用TFA，从其中R1是哌啶并且其中哌啶的氮被例如Boc 保护的通式(I)的化合物得到其中R1是哌啶基的通式(I)的化合物) 酯水解(例如将乙酯转化得到相应的酸，如将R1表示NHC (Me) 2C (0) OEt转化成R1 表示 NHC (Me) 2C (0) OH)·当R2°表示苯基时在拉尼镍存在下，通过氢将R2°上的-NH2取代基还原成R2°上 的-NO2取代基·将胺基与甲磺酰氯偶联 其中式(I)的化合物具有为-C^4烷基-0_R2°的R1或为-CV4烷基_NH_R2°的R1 从R1 = -C1^4 烷基-L5 至 R1 = -C1^4 烷基-0_R2° 或 R1 = -C1^4 烷基-NH-R2q 的示例 性转化反应可以包括任选地在碱的存在下，使其中R1是-CV4烷基-L5并且其中L5表示适 合的离去基(例如氯)的式⑴的化合物与式R2tl-OH或R2tl-NH2的化合物反应。或者，本发明提供用于制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(b)使式A的化合物或其被保护的衍生物 其中Ajj1Aa和R2如通式(I)中定义，并且X是交叉偶联反应的适合的取代基，与式B的化合物或其被保护的衍生物反应 其中R3和χ如通式⑴中定义，并且Y是交叉偶联反应的适合的取代基；其中X和Y表示交叉偶联反应的适合的取代基，并且被选择用来相互反应。
在步骤(b)中，示例性的交叉偶联反应包括Suzuki偶联反应。例如，X可以表示卤 素(如Cl)并且Y可以表示硼酸或硼酸酯基团(如Β(0Η)2)。典型的Suzuki偶联条件是 在三苯基膦的存在下，在饱和碳酸钠溶液和1，4_ 二氧六环中，用醋酸钯(II)作为催化剂， 在加热回流下，使硼酸与相应的氯代偶联对应物(partner)反应。式A的化合物可以由式C的化合物 其中R1如通式⑴中定义并且L1是离去基；和式D的化合物合成 其中A、B、Ra和R2如关于通式⑴所定义并且X如上关于式A所定义。在有机溶剂(如二氯甲烷)中，适合地进行式C的化合物与式D的化合物的反应。 所述反应适合地在高温下进行。在步骤(b)中，示例性的L1取代基包括卤素(如Cl)。当L1是氯时，式C的化合 物可以由相应的羧酸通过与亚硫酰氯反应来制备。通式C和通式D的化合物是已知的并且易于得到，或者可以通过已知方法合成。或者，本发明提供用于制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(c)使式E的化合物或其被保护的衍生物 其中R1如通式(I)中定义，并且L4表示适合的离去基；与式F的化合物或其被保护的衍生物反应 其中Ra、R2、R3、x、A和B如通式(I)中定义。在步骤(c)中，示例性的L4取代基包括卤素(如Cl)和OC (0) OC1^4烷基(如OC (0) 0异丁基)。当L4表示氯时，可以在有机溶剂(如二氯甲烷)中，适合地进行式E的化合物与 式F的化合物的反应。所述反应可以在亲核催化剂(如二甲基氨基吡啶)存在下适合地进 行。当L4表示OC (O)OCy烷基时，可以在有机溶剂(如四氢呋喃)中，适合地进行式E 的化合物与式F的化合物的反应。式E的化合物(其中L4表示OC(O)OCy烷基)可以通过相应的羧酸与氯甲酸烷基 酯的反应来合成。所述反应可以适合地在有机溶剂(如四氢呋喃)中进行。所述反应可以 在额外的试剂例如N-甲基-啉的存在下适合地进行。这样的式E的化合物(其中L4表示 OC (O)OC^4烷基)可以原位制备。式E的化合物(其中L4是氯)可以由相应的羧酸通过与亚硫酰氯反应来制备，并 且可以任选地原位制备。式E的其他化合物易于得到，或者可以通过已知的方法合成。通过与关于式A的化合物和式B的化合物之间的反应所描述的相似的交叉偶联反 应(如通过Suzuki反应)，可以由如上定义的式B的化合物与如上定义的式D的化合物合 成式F的化合物。或者，本发明提供用于制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(d)通过以下方法制备式⑴的化合物，其中R1是通过氮原子与式⑴的主要羰 基相连的部分(如R1= -NR10- ((V6烷基)_R2°或-NRwR2tl,或者含氮杂环基并且其中R1通过所述 杂环基环的氮原子与式(I)的主要羰基相连)，所述方法包括使相应的胺或其被保护的衍生物与式G的化合物或其被保护的衍 生物反应 其中Ra、R2、R3、x、A和B如关于通式⑴所定义，并且L2表示适合的离去基。在步骤(d)中，示例性的L2取代基包括OPh或OCh烷基。所述反应可以适合地在非极性有机溶剂(如甲苯)中进行。所述反应可以适合地 在高温下，优选地在微波条件下进行。式G的化合物可以由如上定义的式F的化合物与式H的化合物合成 其中L3表示适合的离去基(如Cl)，并且L2如上关于式G所定义。适合的反应条件包括在碱(如DIPEA)存在下，在有机溶剂(如二氯甲烷)中，氯 甲酸苯酯(式N的化合物)与式F的化合物反应。式H的化合物是公知的并且易于得到，或者可以由易于得到的原料通过已知的方 法来制备。或者，本发明提供用语制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(e)使如上定义的式F的化合物或其被保护的衍生物与式J的化合物 其中R1如关于通式(I)所定义，在适合的偶联剂如HATU或HBTU存在下反应。所述反应适合地在高温下进行。所 述反应可以适合地在有机溶剂(例如二氯甲烷或乙腈)中进行，并且可以适合地在碱(例 如DIPEA)存在下进行。式J的化合物是已知的并且易于得到，或者可以由易于得到的原料通过已知的方 法制备。
或者，本发明提供用于制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(f)使式K的化合物 其中R2、R3、χ、A和B如关于通式⑴所定义，并且Z表示交叉偶联反应的适合的 取代基(如氯)与式L的化合物 其中R1和Ra如关于通式(I)所定义，在偶联反应例如Buchwald型偶联反应的适合条件下，例如在适合的催化剂和碱 的存在下(如在Pd (PPh3) 4、Xantophos和碳酸铯的存在下)反应。式K和式L的化合物是已知的且易于得到，或者从易于得到的原料通过已知的方 法制备。例如，式K的化合物可以通过交叉偶联反应(如通过Suzuki偶联反应)制备。或者，本发明提供用于制备式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方法，所述方 法包括(g)通过使如上定义的式F的化合物与下式的化合物反应R20N = C = 0 或 R20- (C1^6 烷基)-N = C = O其中R2tl如关于通式⑴所定义，例如R2tl表示杂芳基基团如吡啶，来制备式⑴的 化合物，其中R1是-NHR2q或-NH- (C1^6烷基)-R2°。所述反应适合地在碱(例如三乙胺)的存在下进行。某些中间体化合物是新的并且做为本发明的方面要求保护。在本发明的优选的实施方案中，式I的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂抑制 选自下组的 CDK :CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDKlO、CDKll、 CrkRS(Crk7, CDC2相关的蛋白激酶7)、CDKLl (细胞周期蛋白依赖性激酶样1) ；KKIALRE、 ⑶KL2 (细胞周期蛋白依赖性激酶样2)、KKIAMRE,⑶KL3 (细胞周期蛋白依赖性激酶样3)、NKIAMRE、类似于细胞周期蛋白依赖性激酶样1的⑶KL4、⑶C2L1 (细胞分裂周期2样1)、 PITSLRE B、CDC2L1(细胞分裂周期2样1)、PITSLRE A、CDC2L5 (细胞分裂周期2样5)、 PCTKl (PCTAIRE 蛋白激酶 1)、PCTK2 (PCTAIRE 蛋白激酶 2)、PCTK3 (PCTAIRE 蛋白激酶 3)或 PFTKl (PFTAIRE 蛋白激酶 1)。
所述抑制剂还可以抑制选自上组的多于一种的细胞周期蛋白依赖性激酶。在本发明的特定的优选实施方案中，式I的化合物抑制CDK9。在本发明的进一步的实施方案中，式I的化合物选择性地抑制一种或多种CDK，而 对其他酶或蛋白基本上不具有抑制效力。在优选的实施方案中，这样的抑制性化合物对特定的CDK显示出增加的选择性。 如在本文中使用的，“增加的选择性”意指，对选自上述CDK组的特定CDK，所述抑制性化合 物至少10-100倍地更具选择性。在本发明的优选实施方案中，对特定的CDK，所述抑制性化 合物20-90倍地更具选择性。在特定的优选实施方案中，对特定的CDK，所述抑制性化合物 30-80倍地更具选择性。在特定的优选实施方案中，式I的化合物对CDK9较之对其他CDK显示出增加的选择性。如在本文中使用的，术语“抑制(inhibiting) ”或“抑制(inhibition) ”意指化合 物至少部分地下调、减小、降低、压制、灭活或抑制细胞周期蛋白依赖性激酶的细胞功能，即 细胞周期蛋白依赖性激酶的活性或其表达的能力。此外，术语“细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂”意指能够下调、降低、压制或者调节 细胞周期蛋白依赖性激酶的数量和/或活性的任何化合物或化合物组。抑制所述激酶可 以通过任意的本领域已知的各种机制实现，所述机制包括但不限于，直接与所述激酶多肽 结合，使所述激酶变性或者将其灭活，或者抑制编码所述激酶的基因的表达(例如转录至 mRNA，翻译至新生多肽，和/或最终对成熟蛋白进行多肽修饰)。此外，细胞周期蛋白依赖性 激酶抑制剂还可以干扰在CDK依赖性途径中作用于CDK下游的分子的表达、修饰、调节或激 活。通常激酶抑制剂可以是蛋白质、多肽、核酸、小分子或其他化学实体。具体地，激酶抑制 剂还包括靶向细胞周期蛋白依赖性激酶的单克隆或多克隆抗体。在优选的实施方案中，所述细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂选自由如本文公开的 式I表示的化合物。治疗用途式I的化合物是细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。因此，预期它们具有停止或 恢复控制异常分裂细胞中的细胞周期的能力。因此，表明式I的化合物会证明可用于治疗 和/或预防增殖性疾病如癌症。已知⑶K在凋亡、增殖、分化和转录中发挥作用，因此，式I的化合物还可用于治疗 除增殖性疾病以外的疾病，例如感染性疾病、免疫性疾病、神经变性疾病和心血管疾病。此外，式I的化合物还显示出乎预料的镇痛功效和抗炎功效。因此，在优选的实施方案中，式I的化合物可以用于治疗任何类型的疼痛的方法 和/或药物组合物，所述疼痛包括慢性疼痛、神经性疼痛和/或炎性疼痛。在进一步优选的实施方案中，式I的化合物可以用于治疗炎性病症的方法和/或 药物组合物。
在特别优选的实施方案中，用于治疗疼痛或治疗炎性病症的式I的化合物对CDK9 较之对其他CDK显示出增加的选择性。疼痛从实施例可见，向患有神经损害的小鼠给药式I的CDK抑制剂产生痛觉减退 (hypoalgesic)效应，特别是在炎性疼痛和神经性疼痛的鼠科动物模型中。意外地发现抑制细胞周期蛋白依赖性激酶与介导痛觉减退效应有关。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及治疗任何类型的疼痛的方法，所述方法包 括给药有效量的式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。具体地，式I的化合物可以用 于治疗慢性疼痛、神经性疼痛和/或炎性疼痛。在特别优选的实施方案中，用于治疗任何类 型的疼痛的式I的化合物对CDK9较之对其他CDK显示出增加的选择性。CDK9在疼痛的产生中的作用可能是基于以下作用机制细胞周期蛋白Tl和CDK9 均刺激TNFa的基础的启动子活性。TNFa是控制炎性遗传网络的表达的促炎细胞因子 和疼痛介质。对于细胞TNF受体应答的介导，细胞核因子-κ B(NFkB)途径至关重要。 TNFa引发它募集至细胞因子基因，同时Nf κ B与p_TEFb复合物相互作用来刺激基因转录 (Barboric M 等，2001)。此外，已表明⑶K9是作为TNFa受体复合物的成员的TRAF2的结合配偶体 (MacLachlan等，1998)，同时最近已确认促炎IL6受体复合物的亚基GP130是CDK9的另一 潜在的结合配偶体(Falco等，2002)。作为在TNF α和白细胞介素信号转导中以及在Nf κ B 介导的若干基因(如作为疼痛介质的细胞因子)的表达中的关键角色，因此可以认为CDK9 是治疗任何类型的疼痛例如炎性疼痛的主要靶点(参见图2)。为了治疗神经性疼痛，药理作用必须穿越血脑屏障(BBB)发生在中枢神经系统 (CNS)中。小胶质细胞，作为CNS中的主要免疫细胞，例如，当激活时，释放各种有害因子如 细胞因子(TNFa、ILli3、IL6)及其他促炎分子(Huwe 2003)。小胶质细胞被TNF α受体或 Toll-样受体的刺激激活，并且信号转导受I κ激酶(IKK)和Nf κ B介导，导致上述细胞因 子的转录激活。已论述小胶质细胞贡献在慢性CNS疾病中起作用并且可能促进痛觉感知 (Watkins 等，2003)。最近已表明，转录因子Nf κΒ通过白细胞介素1β (ILl β)调节脊髓内的环加氧 酶-2(C0X-2)的表达(Lee等，2004)。作为脊柱前列腺素E2增加的主要原因，痛觉介质 C0X-2已被认为是各种镇痛药/抗炎药的靶点。在动物模型中已证明了 Nf κ B抑制剂显著 地降低C0X-2水平和机械性异常性疼痛以及热痛觉过敏的能力。较之C0X-2，抑制⑶K9作用会导致抑制各种痛觉介质而不是仅抑制单一一种。因 此，⑶K9抑制剂的镇痛作用可能优越于例如C0X-2抑制剂。由于其与Nf κ B介导的基因转录的相关性，因此与⑶K9的抑制性相互作用可能不 仅是用于治疗急性炎性疼痛而且是用于治疗慢性疼痛的合理方法。如在本文中使用的，术语“疼痛”通常涉及任何类型的疼痛并且广义上包括各类疼 痛如急性疼痛、慢性疼痛、炎性疼痛和神经性疼痛。在本发明的优选实施方案中，“疼痛”包 括神经性疼痛及相关病症。所述疼痛可以是慢性疼痛、异常性疼痛(从正常的无害刺激感 知疼痛)、痛觉过敏(对任何特定痛觉刺激的放大的反应)以及感受野的扩展(即当施加刺 激时“疼痛”的面积)、幻痛或炎性疼痛。
急性疼痛类型包括但不限于组织损伤相关的疼痛、术后疼痛、创伤后疼痛、因烧伤 所致的疼痛、因局部或全身性感染所致的疼痛、与以下疾病相关的内脏痛，所述疾病包括: 胰腺炎、间质性膀胱炎(intestinal cystitis)、痛经、肠易激综合征、克罗恩病、输尿管绞 痛和心肌梗死。此外，术语“疼痛”包括与中枢神经系统病症有关的疼痛，所述中枢神经系统病症 包括多发性硬化、脊髓损伤、外伤性脑损伤、帕金森病和中风。在优选的实施方案中，“疼痛”涉及慢性疼痛类性，包括头痛(例如偏头痛、阵发性 和慢性紧张性头痛、类紧张性头痛、丛集性头痛和慢性阵发性偏头痛)、腰痛、癌症疼痛、骨 性关节炎疼痛和神经性疼痛、但不限于此。本文定义的炎性疼痛(应答组织损伤和所致的炎性过程的疼痛)涉及与疾病包括 结缔组织疾病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化和关节炎相关的炎性疼痛， 但不限于此。神经性疼痛(由周围神经损伤或中枢神经系统本身的损伤所致的疼痛)包括这 样的病症，所述病症包括但不限于代谢性神经病(例如糖尿病神经病变)、疱疹后神经痛、 三叉神经痛、脑神经痛、中风后神经性疼痛、多发性硬化相关的神经性疼痛、HIV/AIDS-相 关的神经性疼痛、癌症相关的神经性疼痛、腕管相关的神经性疼痛、脊髓损伤相关的神经 性疼痛、复杂性区域疼痛综合征、纤维肌痛相关的神经性疼痛、反射交感神经营养不良 (reflexsympathic dystrophy)、幻肢综合征或者周围神经或脊髓损伤、神经横断包括手 术、截肢术和残肢痛、因抗癌和抗AIDS治疗的副作用所致的疼痛、术后神经性疼痛、神经病 相关的疼痛例如特发性或外伤后神经病和单神经炎中的疼痛，以及因结缔组织疾病如类风 湿性关节炎、瓦伦伯格综合征、系统性红斑狼疮、多发性硬化或者结节性多动脉炎所致的神 经性疼痛。所述神经病可以分类成神经根病、单神经病、多发性单神经病、多神经病或神经 丛病。术语“异常性疼痛”意指由正常地不令人疼痛的刺激引起的疼痛。异常性疼痛可 能发生在受刺激区域以外的区域。术语“痛觉过敏”意指对疼痛刺激的敏感度增强。术语“痛觉减退”意指对疼痛刺激的敏感度降低。炎性疾病令人惊奇地，可能表明，在体外和体内炎性测定中，如本文公开的式I的CDK抑制 性化合物发挥抗炎功效。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及治疗炎性疾病的方法，所述方法包括给药 有效量的式I的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂。在特别优选的实施方案中，用于治疗炎 性疾病的式I的化合物对CDK9较之对其他CDK显示出增加的选择性。CDK9在炎性疾病的发病中的作用可能是基于以下作用机制炎性疾病例如类风 湿性关节炎(RA)、动脉粥样硬化、哮喘、炎性肠疾病、系统性红斑狼疮和若干其他自身免疫 性疾病是由肿瘤坏死因子α (TNFa))介导的，TNFa是所述疾病中的炎性和组织阻塞性 途径的主要调节因子。已知TNFa信号转导由若干转导蛋白如I κ B激酶(IKK)，其磷酸化 I κ B蛋白，此蛋白当其被磷酸化时从Nf κ B解离。解离的Nf κ B (细胞因子转录的正调节因 子)转移至细胞核内，在此它与其识别位点结合。
已在RA患者的滑膜中发现了激活的Nf κ B [Han等；2003，Autoimmunity, 28， 197-208]。它调节促炎基因如TNF α、IL_6、IL_8、NOS和C0X2。在许多关节炎的动物模型 中已证明，靶向Nf κ B及其上游信号转导配偶体IKK是有效的治疗策略[Firestein，2003， Nature 423,356-361]。结合的Nf κ B与包含组蛋白乙酰转移酶(CBP、p300、p/CAF、SRC-I和SRC-I-相关 蛋白)的辅激活蛋白复合物结合，所述复合物募集并激活催化RNA Pol II的CTD的磷酸化 的 CDK9 [West 等；2001 ,Journal of Virology75 (18)，8524-8537]。所致的 RNA Pol II CTD 过度磷酸化导致已知也受TNFa调节的促炎细胞因子例如IL-I β、IL_6和IL_8的转录激 活。若干研究表明，TNFa是调节促炎细胞因子表达的自体信号转导级联的“总调节 因子”。为了打断此促炎级联，可以使用特异性抗体(Abs)来成功地阻断TNFa信号转导。 在若干临床研究中，已证明使用Abs的RA的抗TNF α治疗的治疗效力，并且FDA批准的药 物如英利昔单抗和依那西普已上市[Feldmann和Maini，NatMed，2003，9 (10) ；356-61]。但 是，基于Ab的疗法的缺点包括它们的免疫原性可能性、在进行治疗期间伴随的效力下降以 及昂贵的治疗费用。此外，Ab动力学能够大体上完全或完全不地降低循环TNFa。因此， 免疫应答的生理功能也被抑制[Laufer 等，Inflammation andRheumatic Diseases, 2003 ； Thieme,pp.104-5]。在大多数情况下，由于缺乏对各个靶的特异性，用针对靶例如P38MAPK或IKK的激 酶抑制剂治疗性地干预TNFa介导的信号转导级联已表现出严重的副作用。与其不同，如本文所述的式I的CDK特异性抑制剂可以在TNF α信号转导途径的 最末端进行干预，这样减少了与生理功能的相互作用。此外，所述化合物，凭借优越的特异 性避免有害效应，由此能够打断自身TNFa介导的炎性网络。因此，用式I的CDK特异性抑 制剂治疗构成治疗炎性疾病和自身免疫性疾病的有希望的策略。因此，如本文所述的式I的化合物可以用于治疗和/或预防炎性疾病。如在本文中使用的，“炎性疾病”涉及由引起身体组织炎症并随后产生急性或慢性 炎性病症的免疫系统或组织的细胞或非细胞介质引发的疾病。这样的炎性疾病的实例是I-IV型的超敏感性反应，例如，但不限于肺的超敏感性 疾病包括哮喘、特应性疾病、变应性鼻炎或结膜炎、眼睑的血管性水肿、遗传性血管性水肿、 抗受体超敏感性反应和自身免疫性疾病、桥本甲状腺炎、系统性红斑狼疮、肺出血肾炎综合 征、天疱疮、重症肌无力、格雷夫斯氏病和雷诺病、B型胰岛素抵抗性糖尿病、类风湿性关节 炎、银屑病、克罗恩病、硬皮病、混合性结缔组织病、多肌炎、结节病、韦格纳肉芽肿病、肾小 球肾炎、急性或慢性宿主抗移植物反应。此外，术语“炎性疾病”包括但不限于腹腔炎症、皮炎、胃肠炎症(包括炎性肠疾 病、溃疡性结肠炎)、纤维化、眼睛和眼眶炎症、由干燥综合征所致的干眼病以及严重干眼 病、乳腺炎、耳炎、口炎、肌肉骨骼系统炎症(包括痛风、骨性关节炎)、中枢神经系统的炎性 疾病(包括多发性硬化、细菌性脑膜炎、脑膜炎)、泌尿生殖道炎症(包括前列腺炎、肾小球 肾炎)、心血管炎症(包括动脉粥样硬化、心力衰竭)、呼吸道炎症(包括慢性支气管炎、慢 性阻塞性肺病)、甲状腺炎、糖尿病、骨炎、肌炎、多器官功能衰竭(包括脓毒症)、多肌炎和 银屑病关节炎。
免疫件疾病还预期式I的化合物可用于治疗和/或预防免疫性疾病，例如自身免疫性疾病。因此，本发明提供用于治疗和/或预防免疫性疾病的方法，所述方法包括向有此 需要的个体给药有效量的至少一种式I的CDK抑制剂。如在本文中使用的，术语“免疫性疾病”涉及的疾病包括但不限于变态反应、哮 喘、移植物抗宿主病、免疫缺陷和自身免疫疾病。特别地，免疫性疾病包括糖尿病、风湿性疾病、AIDS、慢性肉芽肿病、移植器官和组 织的排斥反应、鼻炎、慢性阻塞性肺病、骨质疏松、溃疡性结肠炎、克罗恩病、鼻窦炎、红斑狼 疮、银屑病、多发性硬化、重症肌无力、脱发、多发性感染、特应性皮炎、湿疹，以及严重的过 敏反应，但不限于此。此外，“免疫性疾病”还包括变态反应例如接触性变态反应、食物变态 反应或药物变态反应。增殖件疾病式I的化合物是代表参与调节细胞周期的关键分子的细胞周期蛋白依赖性激酶 的抑制剂。细胞周期失调是赘生性细胞的主要特征之一。因此，预期证明所述化合物可用 于停止或恢复控制异常分裂细胞中的细胞周期。因此，预期式I的化合物可用于治疗和/ 或预防增殖性疾病如癌症。因此，本发明提供用于治疗和/或预防增殖性疾病的方法，所述方法包括给药有 效量的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。如在本文中使用的，术语“增殖性疾病”涉及癌症，包括但不限于良性瘤、发育异 常、增生，以及表现出转移生长或任何其他转变的瘤。术语“癌症”包括但不限于良性瘤和恶性瘤，如癌、肉瘤、癌肉瘤、形成血液的组织 的癌、神经组织包括脑的肿瘤，以及皮肤细胞癌症。可以治疗的癌症的实例包括但不限于，癌，例如，膀胱癌、乳腺癌、结肠癌(例如结 肠直肠癌如结肠腺癌和结肠腺瘤)、肾癌、表皮癌、肝癌、肺癌例如腺癌、小细胞肺癌和非小 细胞肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌如外分泌胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列 腺癌，或者皮肤癌例如鳞状细胞癌；淋系的造血肿瘤，例如白血病、急性淋巴细胞白血病、B 细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤或非洲淋巴瘤； 髓系的造血肿瘤，例如急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征或前髓细胞性白血病； 甲状腺滤泡癌；间质源肿瘤，例如纤维肉瘤或横纹肌肉瘤；中枢神经系统或周围神经系统 的肿瘤，例如星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤；黑素瘤；精原细胞瘤；畸 胎癌；骨肉瘤；色素性干皮症(xenoderoma pigmentoum)；角化棘皮瘤(keratoctanthoma)； 甲状腺滤泡癌；卡波西肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、小肠癌、小肠瘤、胃肠瘤、胶质母细胞 瘤、脂肪肉瘤、胚细胞瘤、头劲瘤(耳、鼻和喉部位的肿瘤)、口癌、喉癌、喉癌和食道癌；骨 及其支持组织和结缔组织的癌症如恶性或良性骨瘤，例如恶性成骨性肉瘤、良性骨瘤、软骨 瘤；如恶性软骨肉瘤或良性软骨瘤、骨肉瘤；膀胱以及雄性和雌性泌尿生殖系统的内部和 外部器官和结构的肿瘤、软组织瘤、软组织肉瘤、维尔姆斯肿瘤、或内分泌腺和外分泌腺的 癌症如甲状腺癌、甲状旁腺癌、垂体癌、肾上腺癌、唾液腺癌。感染性疾病此外，本发明涉及治疗和/或预防感染性疾病的方法，所述方法包括给药有效量的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。已知某些宿主细胞CDK参与病毒复制，即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9(J. Virol. 2001 ； 75 7266-7279)。特别地，已描述了⑶K9激酶活性在调节HIV-I转录延伸和组蛋白甲基化 中的作用(J.Virol 2004,78(24) 13522-13533)。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及治疗和/或预防感染性疾病的方法，所述方法包括给药有效量的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，其中所述化合 物对CDK9较之对其他CDK显示出增加的选择性。如在本文中使用的，术语“感染性疾病”包括由病原体如病毒、细菌、真菌和/或寄 生虫所致的感染。病毒诱导的感染性疾病包括因感染以下病毒所致的疾病，所述病毒包括反转录 病毒、人内源性反转录病毒、嗜肝性DNA病毒、疱疹病毒、虫媒病毒、腺病毒、披膜病毒类和 痘病毒类。特别地，感染性疾病是由以下病毒引起的，所述病毒包括但不限于病毒如HIV-1、 HIV-2、HTLV-I和HTLV-II，嗜肝性DNA病毒如HBV，疱疹病毒如单纯疱疹病毒I型(HSV I)、单纯疱疹病毒11型(HSV II)、EB病毒(EBV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、人巨细胞病毒 (HCMV)或人疱疹病毒8型(HHV-8)、虫媒病毒例如HCV、西尼罗河病毒或黄热病毒、人乳头状 瘤病毒、痘病毒类、辛德毕斯病毒或腺病毒。感染性疾病的实例包括但不限于AIDS、包柔螺旋体病、肉毒中毒、腹泻、BSE (牛 海绵状脑病)、切昆贡亚热、霍乱、CJD(克-雅二氏病)、结膜炎、巨细胞病毒感染、登革热、 脑炎、东方马脑炎、西方马脑炎、EB病毒感染、大肠杆菌感染、经食物感染、口蹄疫、真菌性皮 炎、胃肠炎、幽门螺旋杆菌感染、肝炎(HCV、HBV)、带状疱疹、HIV感染、流行性感冒、疟疾、麻 疹、脑膜炎、脑膜脑炎、传染性软疣、蚊媒疾病、细小病毒感染、鼠疫、PCP (肺孢子虫病)、脊 髓灰质炎、原发性胃肠炎、Q热、狂犬病、呼吸道合胞体病毒(RSV)感染、风湿热、鼻炎、裂谷 热、轮状病毒感染、沙门氏菌病、肠炎沙门菌、疥疮、细菌性痢疾、天花、链球菌感染、破伤风、 中毒性休克综合征、结核病、溃疡(消化性溃疡病)、出血热、痘症、疣、西尼罗河病毒感染 (西尼罗河脑炎)、百日咳、黄热病。心血管疾病此外，本发明涉及治疗和/或预防心血管疾病的方法，所述方法包括给药有效量 的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。已报告心血管疾病领域构成⑶K抑制剂可能的临床应用(PharmacoITher 1999， 82 (2-3) 279-284)。此外，已知抑制细胞周期蛋白T/⑶K9复合物，而且更具体地，抑制⑶K9 可以在心血管疾病如心力衰竭的治疗中起有益作用(W02005/027902)。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及治疗和/或预防心血管疾病的方法，所述 方法包括给药有效量的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，其中所述化合 物对CDK9较之对其他CDK显示出增加的选择性。术语“心血管疾病”包括但不限于心脏和血管系统的病症，例如充血性心力衰竭、 心肌梗死、心脏缺血性疾病如稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛和无症状性缺血，所有种类的 房性和室性心律失常、高血压性血管疾病、外周血管疾病、冠状动脉心脏病和动脉粥样硬 化。此外，如在本文中使用的，该术语包括但不限于成人先天性心脏病、动脉瘤、心绞痛、血 管神经性水肿、主动脉瓣狭窄、主动脉瘤、主动脉瓣反流、心律失常性右心室发育不良、动静脉畸形、心房颤动、贝赫切特综合征、心动过缓、心脏扩大症、心肌病如充血型心肌病、肥厚 型心肌病和限制型心肌病、颈动脉狭窄、脑出血、丘-施二氏综合征、胆固醇栓塞、细菌性心 内膜炎、纤维肌性发育不良、充血性心力衰竭、心脏瓣膜疾病如瓣膜闭锁不全或瓣膜狭窄、 心脏病发作、硬脑膜外血肿或硬脑膜下血肿、希-林二氏病、充血、高血压、肺动脉高压、肥 大性生长，左心室肥大、右心室肥大、左心发育不全综合征、低血压、间歇性跛行、缺血性心 脏病、克-特-韦三氏综合征、延髓外侧综合征、二尖瓣脱垂、QT延长综合征二尖瓣脱垂、心 肌缺血、心肌炎、心包膜病症、心包炎、外周血管疾病、静脉炎、结节性多动脉炎、肺动脉瓣闭 锁、雷诺病、再狭窄、风湿性心脏病、Sneddon综合征、狭窄、上腔静脉综合征、X综合征、心动 过速、遗传性出血性毛细血管扩张症、毛细血管扩张、颞动脉炎、血栓闭塞性血管炎、血栓形 成、血栓栓塞、静脉曲张、血管疾病、血管炎、血管痉挛、心室纤颤、威廉斯综合征、外周血管 疾病、静脉曲张和小腿溃疡、深静脉血栓形成以及午-帕-怀三氏综合征。此外，术语心血管疾病包括由先天性缺陷、遗传缺陷、环境影响(即饮食影响、生 活方式、压力等)以及其他缺陷或影响所致的疾病。神经变件疾病已描述⑶K抑制剂发挥神经保护功效。特别地，已报告在神经变性疾病如阿 尔茨海默病中，CDK抑制剂阻止神经元死亡(Biochem Biophys ResCommun 2002(297) 1154-1158 ；Trends Pharmacol Sci 2002(23) 417-425 ；Pharmacol Ther 1999,82(2-3) 279-284)。因此，预期在神经变性疾病的治疗中作为CDK抑制剂的式I的化合物提供有益的 功效。因此，本发明涉及治疗和/或预防神经变性疾病的方法，所述方法包括给药有效 量的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。如在本文中使用的，术语“神经变性疾病”包括中枢神经系统的病症以及周围神 经系统的病症，包括但不限于脑损伤、脑血管疾病及它们的后遗症、帕金森病、皮质基底节 变性、运动神经元疾病、痴呆包括ALS、多发性硬化、外伤性脑损伤、中风、中风后、外伤性脑 损伤后和小血管脑血管疾病、痴呆例如阿尔茨海默病、血管性痴呆、Lewy体痴呆、额颞型痴 呆以及与染色体17相关的帕金森症、额颞型痴呆包括匹克病、进行性核麻痹(progressive nuc 1 ear palsy)、皮质基底节变性、亨廷顿病、丘脑变性、克-雅二氏痴呆、HIV痴呆、伴有痴 呆的精神分裂症、科尔萨科夫精神病和AIDS相关性痴呆。类似地，认知相关性病症，例如轻度认知缺损、年龄相关性记忆缺损、年龄相关性 认知衰退、血管性认知缺损、患有学习失能的儿童的注意缺陷障碍、注意缺陷障碍伴多动症 以及记忆障碍，也被认为是神经变性疾病。具体地，本发明涉及用于治疗上述类型的疼痛及相关病症和炎性病症、免疫性疾 病、增殖性疾病、感染性疾病、心血管疾病和神经变性疾病的方法，其中术语“治疗”包括预 防、改善或治疗疼痛及相关病症和炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、感染性疾病、心血管 疾病和神经变性疾病。因此，在本发明的进一步的方面，提供用于医学，特别是用于治疗或预防由细胞周 期蛋白依赖性激酶尤其是CDK9的活性介导的疾病和病症的通式(I)的化合物。进一步提供通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防由细胞周期蛋白依赖性激
55酶尤其是CDK9的活性介导的疾病和病症的药剂中的用途。此外，本发明提供治疗或预防由细胞周期蛋白依赖性激酶尤其是CDK9的活性介 导的疾病和病症的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者给药有效量的通式(I)的 化合物。如上所述，由细胞周期蛋白依赖性激酶的活性介导的病症包括疼痛、炎性病症、增 殖性疾病、免疫性疾病、感染性疾病、心血管疾病和神经变性疾病。以上详细讨论了属于这些类别的具体病症和疾病。药物组合物本发明的优选实施方案包括给药组合物，所述组合物包含作为活性成分的至少一 种式I的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，以及至少一种药学可接受的(即无毒性的)载 体、赋形剂和/或稀释剂。这样的组合物构成本发明的进一步的方面。适合地，所述组合物包含作为活性成分的至少一种式I的细胞周期蛋白依赖性激 酶抑制剂，其中所述至少一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂对CDK9比对其他CDK具有增 加的选择性。此外，本发明还包括兼有至少两种CDK的抑制剂和/或其药学可接受的盐的组合 物。所述至少两种抑制剂可以抑制相同的细胞周期蛋白依赖性激酶或者还可以抑制不同类 型的细胞周期蛋白依赖性激酶，例如，所述组合物中的一种抑制剂可以抑制CDK9而另一种 抑制剂能够抑制例如CDK2。“药学可接受的盐”意指保持式I的化合物的生物学有效性和性质并且由适合的无 毒性有机或无机酸或者有机或无机碱形成的常规的酸加成盐或碱加成盐。酸成合盐的实例 包括得自无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及得自有 机酸如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些。关于疼痛治疗，单一疼痛药物由于它仅干扰许多疼痛转导途径中的一种，通常仅 部分地有效地缓解疼痛。因此，也意图联合作用于疼痛感知过程中不同点的减轻疼痛的药 剂(镇痛药)，给药式I的CDK抑制剂。“镇痛药”包括使疼痛感知减弱的分子或分子组合。镇痛药采用不同于抑制CDK的 作用机制。—类镇痛药，例如非留体抗炎药(NSAID)，其下调被伤害感受器检测到的刺激的化 学信使，另一类的药物，例如阿片样物质，改变中枢神经系统中感受伤害性信息的处理。其 他镇痛药是局部麻醉药、抗惊厥药和抗抑郁药如三环抗抑郁药。除了 CDK抑制剂之外，给药 一种或多种药物可以更有效地缓解疼痛。用于本发明的方法和组合物的优选的NSAID是阿司匹林、醋氨酚、布洛芬和吲哚 美辛。此外，环加氧酶_2(C0X-2)抑制剂如特异性的C0X-2抑制剂(例如塞来昔布、C0X189 和罗非昔布)也可以在本发明的方法或组合物中用作镇痛剂。优选的三环抗抑郁药选自氯米帕明、阿莫沙平、去甲替林、阿米替林、丙米嗪、地 昔帕明、多塞平、曲米帕明、普罗替林和双羟萘酸丙米嗪。此外，在本发明的方法和组合物中，还优选使用以下药物作为镇痛药抗惊厥药 (如加巴喷丁)、GABAB激动药(如L-巴氯芬)、阿片样物质、辣椒素(varmiloid)受体拮抗 药和大麻素(CB)受体激动药如CBl受体。
在制备本发明的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂组合物时，可以遵循公知的药学 来源的标准建议，例如Remington :The Science and Practice ofPharmacy，第 19版，(Mack Publishing,1995)。
按照已知的方法，在常规的固体或液体载体或稀释剂和常规的药用 (pharmaceutically-made)辅剂中，可以制备适合的剂量水平的本发明的药物组合物。优选 的制剂是适合于口服给药。这些给药形式包括例如丸剂、片剂、薄膜衣片剂、包衣片剂、胶囊 齐U、散剂和贮库制剂(cbposit)。此外，本发明还包括用于肠胃外给药的药物制剂，肠胃外给药包括皮肤给药、皮内 给药、胃内给药、皮内给药(intracutan)、血管内给药、静脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、 鼻内给药、阴道内给药、含服给药(intrabuccal)、经皮给药(percutaneous)、直肠给药、皮 下给药、舌下给药、局部给药或透皮给药，其中所述制剂除了包含常规的载体和/或稀释剂 之外还包含至少一种本发明的抑制剂和/或其药学可接受的盐作为活性成分。包含至少一种本发明的抑制剂和/或其药学可接受的盐作为活性成分的本发明 的药物组合物，典型地会与根据期望的给药形式选择的适合的载体材料一起给药，即对于 口服给药采用片剂、胶囊剂(固体填充的胶囊剂、半固体填充的胶囊剂或液体填充的胶囊 剂)、配制型散剂(powders forconstitution)、凝胶剂、酏剂、可分散的颗粒剂、糖浆剂、混 悬剂等形式，并且符合常规的药学实践。例如，对于采用片剂或胶囊剂的形式口服给药，可 以将活性药物组分与任何口服无毒性的药学可接受的载体混合，优选地与惰性载体如乳 糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露醇、乙醇(液体填充的胶囊 齐U)等混合。此外，还可以将适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂混合入片剂或胶囊剂中。 散剂和片剂可以包含约5重量％ -约95重量％的如本文所述的式I的细胞周期蛋白依赖 性激酶抑制剂或其类似物或各自的药学活性盐作为活性成分。适合的粘合剂非限制性地包括淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β乳糖、玉米甜 味剂、天然的和合成的树胶如阿拉伯胶、黄蓍胶、或者油酸钠、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙 二醇和蜡。在适合的润滑剂中，可以提及硼酸、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化 钠等。适合的崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶、瓜尔胶等。适当时，还可以包含甜味剂和调味剂以及防腐剂。下文中更详细地讨论崩解剂、稀 释剂、润滑剂、粘合剂等。作为可靶向的药物载体的适合的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、 聚羟丙基甲基丙烯酸酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚、或被棕榈酰基取代的聚氧乙烯基 聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与用于实现药物的控制释放的生物可降解的聚合物 类偶联，例如聚乳酸、聚ε “己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙 烯酸酯、以及水凝胶的交联的或两性的嵌段共聚物。此外，本发明的药物组合物可以制备成缓释剂型来提供组分或活性成分中的任何 一种或多种的速度控制释放，以优化治疗效力如抗组胺活性等。适合的缓释剂型包括具有 充满活性成分并定型成片剂形式的不同崩解速度的层或控释聚合物基质的片剂，或者包含 这样的被充满的或包裹的多孔聚合物基质的胶囊。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。作为实例，可以提及用于肠胃外注 射的水或水/丙二醇溶液剂，或者对于口服溶液剂、混悬剂和乳剂添加甜味剂和遮光剂。液 体形式制剂还可以包括用于鼻内给药的溶液剂。适用于吸入的气雾剂制剂可以包括可以与药学可接受的载体如惰性压缩气体如 氮气混合存在的溶液和粉末形式的固体。为了制备栓剂，首先，将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯如可可脂的混合物熔解，然后， 例如通过搅拌，将活性成分均质地分散于其中。接着将熔融的均质的混合物倾入适宜大小 的模具中，使其冷却并由此固化。还包括这样的固体形式制剂，其被设计成在使用前即刻被转化成液体形式制剂用 于口服给药或肠胃外给药。这样的液体剂型包括溶液剂、混悬剂和乳剂。本发明的化合物还可以透皮递送。透皮组合物可以采用乳膏剂、洗剂、气雾剂和/ 或乳剂的形式，并且可以被包含在本领域已知的用于此目的的基质或贮库型透皮贴剂中。如在本文中使用的，术语胶囊指由例如甲基纤维素、聚乙烯醇或变性的明胶或淀 粉制成的用于容纳或封装包含活性成分的组合物的特定容器或外壳。硬壳胶囊典型地由混 合的或较高凝胶强度的来自骨或猪皮的明胶制成。胶囊本身可以包含少量的染料、遮光剂、 增塑剂和/或防腐剂。对于片剂而言，应理解压制的或模制的固体剂型包括活性成分和适 合的稀释剂。通过压制混合物或经湿法制粒、干法制粒所得的颗粒，或者通过本领域技术人 员熟知的压制方法，可以制备所述片剂。口服凝胶剂意指将活性成分分散于或溶于亲水性半固体基质。配制型散剂包含粉末混合物，其包含活性成分和可以悬浮于如水或果汁中的适合 的稀释剂。适合的稀释剂是通常构成所述组合物或剂型的主要部分的物质。适合的稀释剂包 括糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇、得自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉，以及纤 维素如微晶纤维素。在所述组合物中，稀释剂可以占总组合物的重量的约5% -95%，优选 地约25重量％ -约75重量％，而且更适合地约30重量％ -约60重量％。术语崩解剂指加入所述组合物中以帮助药物的药学活性成分崩解和释放的材料。 适合的崩解剂包括淀粉、“冷水可溶的”改性淀粉例如羧甲基淀粉钠，天然的和合成的树胶 例如刺槐豆胶、梧桐胶、瓜尔胶、黄蓍胶和琼脂，纤维素衍生物例如甲基纤维素和羧甲基纤 维素钠、微晶纤维素和交联的微晶纤维素如交联羧甲基纤维素钠，藻酸盐如藻酸和藻酸钠， 粘土如膨润土，以及泡腾剂混合物。在所述组合物中，崩解剂可以占所述组合物中重量的约 2% -约20%，更适合地约5重量％ -约10重量％。粘合剂是使粉末微粒结合或“粘合”在一起并通过形成颗粒使它们内聚从而用作 制剂中的“粘合剂”的物质。粘合剂使稀释剂或填充剂中已存在的内聚力增加。适合的粘 合剂包括糖类例如蔗糖、得自小麦、玉米、稻米和马铃薯的淀粉，天然树胶如阿拉伯胶、明 胶和黄蓍胶，海藻的衍生物例如藻酸、藻酸钠和藻酸钙铵，纤维素材料例如甲基纤维素、羧 甲基纤维素钠和羟基丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，以及无机化合物例如硅酸镁铝。在 所述组合物中，粘合剂可以占所述组合物重量的约2 % -约20 %，适合地约3重量％ -约10 重量％，而且更适合地为约3重量％-约6重量％。润滑剂指，加入剂型中，通过减少摩擦或磨损，使片剂颗粒等在压制后能够脱离模具或模圈的一类物质。适合的润滑剂包括硬脂酸金属盐例如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸 钾、硬脂酸、高熔点赌，以及其他水溶性润滑剂例如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙 二醇和D，L-亮氨酸。润滑剂通常在压制前的最后一步时添加，因为它们必须存在于颗粒表 面。在所述组合物中，润滑剂可以占所述组合物重量的约0. 2% -约5%，适合地约0. 5重 量％ -约2重量％，而且更适合地约0. 3-约1.5重量％。助流剂是防止所述药物组合物的组分烘焙在一起并改善颗粒的流动性使得流动 平滑且一致的材料。适合的助流剂包括二氧化硅和滑石。在所述组合物中，助流剂可以占最终组合物重量的约0. 1 % -约5 %，适合地约0. 5
重量％ -约2重量％。着色剂是为所述组合物或所述剂型提供着色的赋形剂。这样的赋形剂可以包括吸 附至适合的吸附剂如粘土或氧化铝上的食品级染料。着色剂可以占所述组合物重量的约 0. -约5%，适合地约0. 1重量％ -约1重量％。本发明涉及向有此需要的个体给药包含作为活性成分的细胞周期蛋白依赖性激 酶抑制剂的组合物来治疗任何类型的疼痛、炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、心血管疾 病或神经变性疾病。“有此需要的个体”包括动物，适合地包括哺乳动物，而且最适合地包括人类，预期 它们在不久的将来遭受任何类型的疼痛、炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、心血管疾病 或神经变性疾病，或者它们正遭受所述病症。例如，这样的动物或人类可能患有目前引起疼 痛并且可能继续引起疼痛的进行中的病症，或者所述动物或人类已经受，正经受或将要经 受通常产生疼痛后果的操作或事件。慢性疼痛病症如糖尿病神经性痛觉过敏和胶原血管病 是第一种类型的实例；牙科手术(work)，特别是在炎症或神经损伤部位，和毒素暴露(包括 暴露于化学治疗药)是后一类型的实例。为了达到期望的治疗效果，必须按治疗有效量给药各个细胞周期蛋白依赖性激酶 抑制剂。术语“治疗有效量”用于表示引起所述生物学或医学反应的活性化合物或药剂的 量。此反应可以发生在研究者、兽医、医生或其他临床医师正研究的组织、系统、动物或人类 中，并且包括缓解正受治疗的疾病的症状。在本发明的上下文中，治疗有效量包括，例如，减 轻疼痛特别是减轻炎性疼痛或神经性疼痛的量。特别地，治疗有效量表示在受治疗个体中 发挥痛觉减退效应的量。这样的有效量会随个体不同而不同，取决于所述个体对例如疼痛的正常敏感性、 其高度、重量、年龄和健康状况、疼痛源、CDK抑制剂的给药方式、给药的特定抑制剂以及其 他因素。因此，建议凭经验确定在特定系列情况下针对特定个体的有效量。现在将参考实施例和附图更详细地描述本发明，其中

图1示意地描述保留性神经损伤模型(spared nerve injury model) (SNI模型， 由Decosterd和Woolf(2000)开发，其特征在于结扎并切断坐骨神经的两个分支(即胫神 经和腓总神经)而保留腓肠神经完整无损。图2示意地描述⑶K9作为靶在疼痛形成中的可能作用。图3描述在给药化合物IA和16A后，用LPS诱导的小鼠进行细胞因子(TNF α )测
量的结果。
图4A和图4B描述给药化合物1A、16A、20A和25A对LPS诱导的THP-1巨噬细胞 中TNF α和IL-6的表达的效力。图4Α表示在LPS诱导的THP-I巨噬细胞中TNF α测量的 结果。图4Β表示在LPS诱导的THP-I巨噬细胞中IL-6测量的结果。
制备所沭化合物的通用方法所有试齐[J 购 自 ACROS Organics、Aldrich、Lancaster、Maybridge 禾口 BoronMolecular。在SurveyorMSQ(Thermo Finnigan,USA)上使用 APCI 电离进行所述化合物的LC/ MS分析。在《MERCURY plus 400MHz》波谱仪(Varian)上记录1HNMR谱。用残余溶剂质子 共振作为内标，相对于四甲基硅烷(TMS)，以ppm给出化学位移值。在Sanyo Gallenkamp 仪上测定熔点。分析方法NMRi普在 Bruker AM 400 波谱仪上或者在 Varian 400MHz Mercury Plus 波谱仪 上进行。使用以下缩写s(单峰)、d(双峰)、dd(双重双峰)、t (三重峰)和m(多重峰)。 ESI-MS 用配置有 Ionspray 接口的 MDS Sciex API 365 质谱仪(MDS Sciex ；Thom Hill, ON, Canada)测定质谱。通过针对 WindowsNT 的 Applied Biosystems (Foster City, CA, USA)Analyst 软件控制仪器设置、数据采集和处理。通过正电离Ql扫描模式进行50-100 次扫描以累加峰。用在0.5%甲酸中的50%甲醇稀释样品溶液，达到浓度约10yg/ml。通 过微量注射器(Iml),经输液泵(Havard Apperatus 22 ；Havard Instruments ；Holliston, MA, USA)和熔融石英毛细管，以20ul/min的速度将各样品溶液直接输入。使用Macherey Nagel Polygram SIL G/UV245进行薄层色谱法(TLC)。通过在254nm使用UV灯，然后用高
锰酸钾或茚三酮染色，实现显色。在使用前蒸馏溶剂。所有可商购的试剂未经进一步纯化使 用。使用 Merck-Hitachi 装置=AcN-水(流速:1ml mirT1)，柱=LiChrosphere 5um RP18e, 125X4. Omm(Merck)，泵:L_7100 Merck-Hitachi，进行分析型 HPLC。使用梯度 A、B 和 C 来 检测纯化的实施例的化合物。梯度A的特征从在t = Omin时AcN-水(5/95)，在15min内 达到AcN-水(50/50)，在另外5min后达到AcN-水(95/5)，在AcN-水(95/5)再保持3min ； 梯度B的特征从在t = Omin时AcN-水(5/95)，在15min内达到AcN-水(60/40)，在另外 5min后达到AcN-水(95/5)，在AcN-水(95/5)再保持IOmin ；梯度C的特征从在t = Omin 时 AcN-水(20/80)，在 30min 内达到 AcN-水(95/5)。使用 Merck-Hitachi 装置AcN_ 水 (流速:6ml/min)，柱LUNA C18 (2) 100A, 250 X 21. 2mm, 10 μ (Merck)，接口 :D-7000, UV-VIS Detector :L_7420，泵L_6250 Merck-Hitachi，进行制备型 HPLC。表1实施例方法以及原料的制备制备6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-胺，制备A类嘧啶的通用方法。
H2fAic 丨 + (哪向2-甲氧基苯基硼酸(20. 0g，155mmol)在500mll，4_ 二氧六环中的溶液加入200ml饱和碳酸钠水溶液。在室温下，用氩气吹洗30min。将4-氨基-6-氯嘧啶(28. Ig, 186mmol)和四(三苯基膦)钯(9. 00g，77. 5mmol)同时加入反应混合物中，并再通入氩气 40min。将反应混合物加热至回流，保持16h，经TLC确认反应结束，然后在减压下浓缩混合 物。在DCM和水之间分配剩余物。分出有机层，用盐水、水洗涤，干燥(Na2SO4),然后浓缩。 通过硅胶柱色谱纯化所得粗品剩余物，用在DCM中的15%乙酸乙酯洗脱，得到6-(2_甲氧 基苯基)嘧啶-4-胺(18. Og, 58% )。1H-WR = (DMSO-Cl6) 5=8. 17 (1H, s), 7. 71 (1H, d)， 7. 41 (1H, t)，6. 96-7. 06 (2H, m)，6. 95 (1H, s)，3. 98 (3H, s) ；MS (m/z) = 202. 1 (M+H)。
制备2-氯-N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺，制备B类嘧啶的 通用方法。在室温下，将氯代乙酰氯(2. 30g, 1. 62ml, 20. 4mmol)缓慢地加入6_(5_氟-2-甲 氧基苯基)嘧啶-4-胺(3. OOg, 13. 7mmol)在氯仿(15ml)中的悬浮液中。将NEt3(2.80g， 3. 87ml, 27. 5mmol)加入反应混合物并搅拌24h。反应结束后，蒸发易挥发成分。使用在氯 仿中的甲醇(0-10% )，在硅胶(200-400目)上通过快速柱色谱纯化剩余物，然后干燥，得 到 2. 20g(54. 4% )期望的化合物。1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ = 11. 27 (s, 1H)，8· 97 (s, 1H)，8· 75 (s，1Η)，7· 75 (dd, 1Η)，7· 38 (m, 1Η)，7· 24(m，2H)，4· 43(s，2H)，3· 86(s，3H) ；ms (m/ ζ) 296 (Μ+Η) ；HPLC 纯度98. 3%0制备4-氯-6_(2-甲氧基苯基)嘧啶，制备C类嘧啶的通用方法。 向2-甲氧基苯基硼酸(10. Og, 66. Immol)在THF(IOOml)和水(40ml)中的溶液加 入4，6-二氯嘧啶(10. Ig,67. 8mmol)。在0°C，将二醋酸钯(750mg，3. 30mmol)和PPh3(1. 76g， 6. 70mmol)和碳酸钠(21. 3g,201mmol)加入反应混合物中。在室温下搅拌反应混合物过夜， 通过TLC监测反应。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物。用乙酸乙酯和水萃取剩余物。 分出有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4),然后浓缩。通过硅胶柱色谱纯化所得粗品剩余物， 用30%在己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到期望的产物化合物9. 0g(61. 9% )。方法方法1 (通过酰氯)
将亚硫酰氯(2eq)滴加入冷却的羧酸RCOOH (Ieq)和2滴无水DMF在无水DCM中 的混合物，并在室温(或加热回流)下搅拌l_2h。蒸发易挥发物，然后将剩余的酰氯溶于 无水DCM/AcN。在另一个烧瓶中，加入胺A(Ieq)和NEt3(3_4eq)在无水DCM/AcN中的混合 物，并在室温下滴加酰氯的溶液。搅拌反应混合物l_2h，然后添加到过量的碳酸氢钠溶液中 终止反应。分出有机层，然后用DCM萃取水层。依次地用水和盐水洗涤合并的有机层，干燥 (Na2SO4)，然后在真空中浓缩至粗品剩余物。剩余物经制备型TLC/HPLC分离出纯化合物。
方法2 (通过HATU/HBTU偶联) 在密封管中，将DIPEA(2eq)加入羧酸RCOOH(Ieq)在DCM或AcN中的溶液中，并 搅拌15-20min。加入HATU或HBTU (Ieq)，然后用氩吹洗混合物lOmin。在室温下搅拌反应 物质直至继而产生澄清的溶液。加入胺A(Ieq)，再吹洗混合物lOmin，然后在密封管中在 80-100°C加热2-18h。冷却反应混合物，然后按照方法1中进行后处理。经制备型TLC/HPLC 纯化，得到纯化合物。方法3 (通过氯乙酰基衍生物B)
碱或纯溶剂 R = Ar/杂环将胺/羟基衍生物R-YH (Y = 0/N ；2eq)[纯的或者含有2eq碳酸钾)溶于无水AcN/ DMF并搅拌0. 5h。加入氯乙酰基衍生物B (Ieq)在无水AcN/DMF中的溶液，并在室温(或在 80-85°C)下搅拌整个混合物2-8h。用过量的水稀释反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取。然 后依次地用水、盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4),然后在真空中浓缩至干。如此所得的剩余 物经制备型TLC/HPLC纯化得到纯化合物。方法4 (通过酰胺上的Buchwald型反应)
O
N^N
RCONH2
Pd(PPh3)4, Xantphos1 Cs2CO3 1,4-二氧六坏 在干燥的密封管中，将四(三苯基膦)钯(O) (5mol% )加入酰胺RCONH2(Ieq)和 C(Ieq)在无水1，4_ 二氧六环中的混合物中，然后用氩吹洗15min。加入碳酸铯(2eq)和 Xantphos (IOmol % )，并再用氩吹洗全部物质15min，然后密封。然后在120°C加热反应混合 物3-6h，接着冷却至室温。然后将其倾入过量的水中，并用乙酸乙酯萃取。用水、盐水洗涤
62有机层，干燥(Na2SO4),然后在真空中浓缩至干。如此所得的剩余物经制备型TLC/HPLC纯 化得到纯化合物。方法5 (通过用有机硼酸和相应的氯嘧啶进行的Suzuki偶联) 在0°C，向硼酸(1. 25mmol)在THF和水(6ml，1 1)的混合物中的溶液，加入6_氯 嘧啶-4-基氨基甲酰基哌啶(1. Ommol)，然后加入醋酸钯(2. lmmol) ,PPh3 (2. Immol)和饱和 碳酸钠溶液(2ml)。在室温下搅拌反应混合物30h，然后通过硅藻土(celite)层过滤，用乙 酸乙酯洗涤硅藻土层。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4),然后 在减压下蒸发。用己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂，经柱色谱纯化粗产物，得到纯产物。方法6 (通过在氢气氛下用氢氧化钯进行的脱保护) 在氮气氛下，向Cbz-保护的化合物(15mm0l)在50ml甲醇中的溶液加入20%氢氧 化钯(1.5g)，然后在氢气氛下在室温下搅拌混合物8h。通过硅藻土过滤反应混合物，然后 蒸发溶剂。将所得混合物溶于乙醚，搅拌，过滤，用乙醚洗涤，然后在真空下干燥，得到粗产 物，并通过制备型TLC/HPLC纯化粗产物。方法7 (通过使用HCl在酸性条件下进行的脱保护) 在室温下，向Boc-保护的化合物(Immol)在20ml的1，4_ 二氧六环中的溶液，力口 入HCl在1，4-二氧六环中的溶液(4M，20ml)，并搅拌混合物3h。此后，蒸发溶剂得到粗品 胺盐酸盐，并通过制备型TLC/HPLC纯化粗品胺盐酸盐。方法8 (通过混合酸酐)
ηO
X + H2W NMM'CAIBE> rAn.R'
Oh 2K将NMM(131mg，143 μ 1，1. 3mmol)加入到搅拌的冷却(_15°C )碳酸(1. 3mmol)在无 水 THF(4ml)中的溶液中。》*WCAIBE(178mg，170yl，1.3^ol)。搅拌 15min 后，加入在无 水THF(2ml)中的适合的胺(1.3mm0l)，并搅拌混合物14h，在此期间，使其温热至室温。在 真空中蒸发溶剂，然后将所得剩余物溶于乙酸乙酯(10ml)，用IN HCl、水、NaHCOyK溶液和 盐水(每步洗涤5ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。过滤后，在减压下蒸发溶剂。通过适合的 色谱方法纯化粗品化合物。
方法9 (通过用TFA在酸性条件下进行的脱保护) 向Boc-保护的化合物(0. Immol)在少量DCM中的溶液加入TFA/DCM(4ml, 1 1) 的混合物。在室温下搅拌此溶液2h，然后在减压下除去溶剂。通过制备型TLC/HPLC纯化所 得剩余物。方法10 (通过用拉尼镍进行的氢化) 在氮气氛下，向硝基衍生物(2mmol)在IOml甲醇中的溶液加入Raney-镍(0. 2g)， 然后在氢气氛下，在室温下搅拌混合物8h。通过硅藻土过滤反应混合物，然后蒸发溶剂。将 所得混合物溶于乙醚，搅拌，过滤，用乙醚洗涤，然后在真空下干燥，得到粗产物，通过制备 型TLC/HPLC纯化粗产物。方法11 (通过与甲磺酰氯偶联) 在0°C，向胺(Immol)和NEt3 (2mmol)在DCM(IOml)中的溶液加入甲磺酰氯 (1.05mmOl)。再另外搅拌0. 5h后，用乙酸乙酯(IOml)稀释反应混合物，用水和盐水洗涤 (每个洗涤步骤5ml)，然后用Na2SO4干燥。过滤后，在减压下蒸发溶剂。通过适合的色谱方 法纯化粗品化合物。方法12 (通过异氰酸酯与胺的反应) 在0°C下，向异氰酸酯(Immol)在甲苯(IOml)中的溶液加入胺(Immol)在甲苯 (2ml)中的溶液。在密封管中，在130-140°C加热所得混合物36h。用乙酸乙酯(IOml)稀释 反应混合物，用水和盐水(每步洗涤5ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。过滤后，在减压下蒸发 溶剂。通过适合的色谱方法纯化粗品化合物。实施例的合成 实施例1 (3R) -N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-N-甲基哌啶_3_甲酰胺
制备前体3-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶甲酸(R)-苄酯。在室温下，向6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-胺(5. 80g, 28. 8mmol)在60mlDCM中的 溶液加入4- 二甲基氨基吡啶(4. 16g，34. Ommol)，然后滴加N_Cbz3-哌啶甲酰氯(8. OOg, 28. 4mmol)[从N-Cbz 3-哌啶甲酸和草酰氯制备]。搅拌反应混合物2h，然后用水洗涤。分 出有机层，干燥(Na2SO4),然后浓缩。使所得粗品剩余物通过硅胶垫，用25%在己烷中的乙 酸乙酯洗脱，得到3-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基-氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸(R)-苄 酯(8. 5g，收率67% )0
1H-NMR (CDCl3) δ = 8. 95 (1Η, s)，8. 78 (1H, s)，8. 20 (1H, bs)，7. 91 (1H, dd)，
7.45-7. 35 (5H, m)，7. 16-7. 00 (2H, m)，5. 20 (2H, s)，4. 40-4. 26 (1H, m)，4. 18-4. 02 (1H, m)， 3. 98 (3H, s)，3. 41-3. 17 (2H, m)，3. 08-2. 92 (1H, m)，2. 60-2. 41 (1H, m)，2. 18-1. 55 (4H, m)； MS(m/z) = 407.1。制备实施例1在氮气氛下，向3-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基-氨基甲酰基)哌啶甲 酸(R)-苄酯(7.0g)在50ml甲醇中的溶液加入10%氢氧化钯(1. 5g)，然后在氢气氛下， 在室温下搅拌混合物8h。通过硅藻土过滤反应混合物，然后蒸发溶剂。将所得混合物溶于 乙醚，搅拌，过滤，用乙醚洗涤，然后在真空下干燥，得到为白色固体的实施例1 (3. 5g，收率 72% )。1H-NMR (DMS0_d6) δ = 11. 10(1H, s) ,8. 95 (1H, s)，8. 67 (1H, s)，7. 84 (1H, d, J = 10Hz)，7. 48 (1H, dd)，7. 20-7. 04 (2H, m)，3. 98 (3H, s)，3. 06-2. 56 (5H, m)，1. 96-1. 32 (4H, m)； MS (m/z) = 312. 9(M+H) ；mp :210_213°C ；分析纯度95. 5% ；手性纯度[R = 91. 62%禾口 S =
8.37% ]。实施例2 =N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌啶_3_甲酰胺* TFA制备前体3-[6-(5_氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲酸 苄酯。在0°C，向 5-氟-2-甲氧基苯基硼酸(0. 20g，l. Immol)在 THF 和水(6ml，l 1) 的混合物中的溶液，加入3-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯(0.35g， 1. Ommol)，然后加入醋酸钯(12mg,0. 054mmol), PPh3(31mg,0. 12mmol)和饱和碳酸钠溶 液(2ml)。在室温搅拌反应混合物30h，然后通过硅藻土层过滤，并用乙酸乙酯洗涤硅藻 土层。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，然后在减压下蒸发。用己烷 /乙酸乙酯(4 1)作为洗脱剂，通过柱色谱纯化粗产物，得到0.31g(收率53.8%)的 3-[6-(5_氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯。制备实施例2在氢气氛下，过夜搅拌3-[6-(5_氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(0. 25g，0. 5mmol)、甲醇(7ml)和20%氢氧化钯(0. 12g,50% w/w)的混合 物。然后将其通过硅藻土层过滤，并用甲醇洗涤硅藻土层。在减压下蒸发滤液，然后通过柱 色谱纯化，得到0. 125g期望的产物和不可分离的杂质。通过制备型HPLC进一步纯化，得到 2mg(收率0. 8% )的N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌啶-3-甲酰胺，为TFA
Τττ . ο
1HNMR (400MHz, DMS0_d6 禾口 D2O) 5 1. 6-1. 7 (m, 2H)，1. 75-1. 9 (m, 1H)，2-2. 1 (m, 1H)，2. 8-3. 0 (m, 2H)，3. 0-3. 1 (m, 1H)，3. 15-3. 2 (m, 1H)，3. 3-3. 35 (m, 1H)，3. 8 (s,3H)， 7. 1-7. 2(m, 1H)，7. 35-7. 4(m, 1H)，7. 6-7. 7(m, 1H)，8. 8(s, 1H)，8. 9(s, 1H) ；MS (m/z) 331(M+H)ο实施例3 :N- (6- (2-氟_6_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌啶_3_甲酰胺* TFA制备前体3-[6-(2_氟-6-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲酸 苄酯。在0 °C，向2-氟-6-甲氧基苯基硼酸(0. 20g, 1. Immo 1)在THF和水(6ml， 1 1)的混合物中的溶液，加入3-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (0. 35g，0. 93mmol)，然后加入醋酸钯(12mg，54 μ mol)、PPh3 (31mg，0. 12mmol)和饱和碳 酸钠溶液(2ml)。在室温下搅拌反应混合物30h，然后通过硅藻土层过滤，用乙酸乙酯 洗涤硅藻土层。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机层，用盐水洗涤，干燥，然后在减压下蒸 发。用己烷/乙酸乙酯(4 1)作为洗脱剂，经柱色谱纯化粗产物，得到0.31g(收率 66. 7% )3-[6-(2_氟-6-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄酯。制备实施例3在氢气氛下，过夜搅拌3-[6-(2_氟-6-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(0. 3g，0. 6mmol)、甲醇(7ml)和20%氢氧化钯(0. 12g,50% w/w)的混合 物。然后通过硅藻土层过滤，并用甲醇洗涤硅藻土层。在减压下蒸发滤液，然后通过柱色谱 纯化，得到0.2g(93.8%收率)期望的产物和不可分离的杂质。通过制备型HPLC进一步纯 化，得到2mg(收率0. 9% )的N-(6-(2-氟-6-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌啶-3-甲酰 胺，为TFA盐。1HNMR (400MHz, DMS0_d6 和 D2O) δ = 1. 6-1. 7 (m, 2H)，1. 75-1. 8 (m, 2H)，2-2. 1 (m, 2H)，3. 0-3. 2 (m, 2H)，3. 3-3. 35 (m, 1H)，3. 6 (s,3H)，6. 8-6. 9 (m, 1H)，6. 95-7. 0 (m, 1H)， 7. 4-7. 5 (m, 1H)，8. 1 (s，1H)，8. 9 (s，1H) ；MS (m/z) 331 (M+H)。实施例4 =N- (6- (2,6- 二甲氧基苯基)嘧啶_4_基)哌啶_3_甲酰胺* TFA制备前体3-[6-(2，6-二甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄向2，6_二甲氧基苯基硼酸(0.6(^，3.311111101)在二甲氧基乙烷/水(81111，3 1) 的混合物中的溶液，加入3-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯(0.82g， 2. 2mmol)，然后加入四(三苯基膦)钯(0) (0. 15g，0. 13mmol)和饱和碳酸钾溶液(2ml)。在 90°C加热反应混合物2h，然后将其冷却至室温，接着通过硅藻土层过滤，并用乙酸乙酯洗涤 硅藻土层。用乙酸乙酯萃取水层，合并有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4),然后在减压下蒸 发。用己烷/乙酸乙酯(4 1)作为洗脱剂，通过柱色谱纯化粗产物，得到0.80g(收率 53%)的3-[6-(2，6_ 二甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄酯。制备实施例4方法6，收率0.2%。在氢气氛下，过夜搅拌3-[6-(2，6_ 二甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(800mg, 1. 68mmol)、甲醇(7ml)和20%氢氧化钯(400mg, 50% w/w)的混合 物。然后将其通过硅藻土层过滤，并用甲醇洗涤硅藻土层。在减压下蒸发滤液，然后通过柱色谱纯化，得到120mg期望的产物和不可分离的杂质。通过制备型HPLC进一步纯化，得到 2mg的哌啶-3-甲酸[6-(2，6- 二甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺，为TFA盐。1HNMR (400MHz, DMS0_d6 禾口 D2O) δ = 1. 6-1. 7 (m, 2H)，1. 75-1. 9 (m, 1H)，2-2. 1 (m, 1H)，2. 8-3. 0 (m, 2H)，3. 0-3. 1 (m, 1H)，3. 15-3. 2 (m, 1H)，3. 3-3. 35 (m, 1H)，3. 6 (s,6H)，
6.8 (d, 2H)，7. 35-7. 5 (m, 1H)，7. 9 (s，1H)，8. 9 (s，1H) ；MS (m/z) 342 (M+H)。实施例5和6 =N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺，制 备外消旋混合物在用冰冷却的条件下，向6-氧代哌啶-3-甲酸(0. 21g，1. 5mmol)在无水 DMF(IOml)中的溶液加入 HBTU(1. 13g,2. 98mmol)和 DIPEA(0. 30g，0. 39ml，2. 3mmol)，然 后在室温下搅拌45min。在用冰冷却的条件下，向此反应混合物滴加在无水DMF中的胺 A(0.30g，1.5mmOl)。然后在120°C加热反应混合物4h。反应结束后，将其冷却，完全蒸 发DMF，然后将其溶于乙酸乙酯(30ml)，接着用水(2x15ml)洗涤，然后用盐水洗涤，干燥 (Na2SO4),在减压下蒸发。使用快速硅胶(10%甲醇/DCM)通过柱色谱进行最终纯化，得到 78mg(收率17% )期望的产物。分离N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺的外消旋混合 物得到实施例5和6通过用手性HPLC纯化，将实施例5和6分离成对映体，由82. 5mg的外消旋混合物 得到40mg各对映体，利用以下方法制备型方法柱250x50mm CfflRALPAK AD-H 5 μ m ；流动相庚烷/乙醇/ 二 乙胺=70/30/0. 1 ；流速:120ml/min ；检测=UV 325nm ；温度:25°C ；分析型方法柱250x4. 6讓CHIRALPAK IB 5μπι ；流动相庚烷/乙醇/ 二乙 胺=70/30/0. 1 ；流速:lml/min ；检测=DAD 280nm ；温度30°C。实施例5 =1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 2. 02-2. 08 (m, 1H)，2. 12-2. 20 (m, 1H)， 2. 40-2. 48 (m, 2H)，2. 92-3. 02 (m, 1H)，3. 46-3. 54 (m, 2H)，3. 90 (s, 3H)，7. 07 (t, 1H)，7. 15 (d, 1H), 7. 47 (t, 1H), 7. 77 (d, 1H), 8. 66 (s, 1H), 8. 84 (s, 1H) ；MS (m/z) 327 (M+H) ； HPLC (λ = 280nm,[分析型方法]):rt 14. Imin(99. 3% ) ；mp :205_208°C ；Spec. opt. rot. :41· 08。实施例6 =1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 2. 02-2. 08 (m, 1Η)，2. 12-2. 20 (m, 1Η)，
2.40-2. 48 (m, 2H)，2. 92-3. 02 (m, 1H)，3. 46-3. 54 (m, 2H)，3. 90 (s, 3H)，7. 07 (t, 1H)，7. 15 (d, 1H), 7. 47 (t, 1H), 7. 77 (d, 1H), 8. 66 (s, 1H), 8. 84 (s, 1H) ；MS (m/z) 327 (M+H) ； HPLC (λ = 280nm,[分析型方法]):rt 18. 5min(99. 0% ) ；mp :203_207°C ；Spec. opt. rot. :_40· 67。实施例7 :Ν- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)乙酰胺按照方法4合成实施例7，用在氯仿中的甲醇(0-10%)，在硅胶(200-400目)上 通过快速柱色谱纯化，收率41 %。1Hwr(^OMHzjCD3OD)J = 2. 69-2. 73 (m，2Η)，3. 31 (s，3Η)，3. 43-3. 49 (m，3Η)，
3.50-3. 53 (m, 2H)，3. 75 (dd, 1H)，3. 82 (t, 1H)，3. 91 (s，3H)，7. 10 (td, 1H)，7. 17 (d，1H)，
7.49-7. 54 (m, 1H)，7. 74 (dd, 1H)，8. 70 (d, 1H)，8. 89 (d, 1H) ；MS (m/z) 371 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 12. Omin(99% )。实施例8 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)甲基_5_氧代吡咯烷_3_甲酰 胺
按照方法4合成实施例8，使用在氯仿中的甲醇(0-10% )，在硅胶(200-400目) 上通过快速柱色谱纯化，收率51 %。1HNMR(400MHz, CD3OD) δ = 2. 70 (d, 2H, CH-CE,)，2. 82 (s, 3H, CH3)，3. 45-3. 53 (m, 1H, CH-CH2), 3. 65-3. 74 (m, 2H, CH2), 3. 90 (s, 3H, O-CH3), 7. 10 (t, 3J = 7·5Ηζ，1Η，甲氧 基-Ar)，7. 18(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 49-7. 54 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 75(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 1. 6Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 70(d，5J = 0. 8Hz, 1H，嘧啶-Ar), 8. 89 (s, br.，1H，嘧 啶-Ar) ；MS(m/z) :327(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [A]) :rt 11. 3min(98% )
实施例9 :1-乙基-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_5_氧代吡咯烷_3_甲酰 胺按照方法4合成实施例9，使用在氯仿中的甲醇(0-10% )，在硅胶(200-400目) 上通过快速柱色谱纯化，收率56. 7%。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 1. 10-1. 15(m，3H，CH2-CH3), 2. 71(d,3J = 7·9Ηζ，2Η， CH2-CH3)，3. 30-3. 33 (m, 2H, CE2-CH)，3. 42-3. 52 (m, 1H, CH2-CH)，3. 66-3. 76 (m, 2H, CH2-CH)， 3. 90(d，3H，O-CH3)，7. 07-7. 12 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 19(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar)， 7. 49-7. 54 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 74(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 70 (d, 5J=1.2Hz，lHjfl^-Ar)，8.90(d，5J=1.2Hz，lHjfl^-Ar) ；MS (m/z) :341(M+H) ；HPLC ( λ =214nm, [A]) :rt 12. 4min(99% ) 实施例10 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4_基)环丙烷-1，1_ 二甲酰胺按照方法4合成实施例10，使用Sunfire C18柱(250x5(kim ； 10 μ )，流动相0. 1% 甲酸(aq) AcN (50 50)并且流速118ml/min，λ = 210nm，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 12. 58 (s, 1H) ,8. 93 (s, 1H) ,8. 72 (s, 1H), 7. 73-7. 70 (dd, 1H)，7. 52 (s, br.，1H)，7. 35-7. 32 (m, 2H)，7. 24-7. 20 (m, 1H)，3. 86 (s,3H)， 1.56(d，4H) ；MS (m/z) :331(M+H) ； HPLC (λ =214nm，[A]) :rt 13. 5min(100% ) ；mp 190 0C0实施例11 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_1，4，5，6_四氢_6_氧 代-1-丙基哒嗪-3-甲酰胺按照方法4 合成实施例 11，使用 Zodiacsil 120-5-C18 柱(250x32mm ； 10 μ )，流动 相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速4ml/min，通过制备型 HPLC 纯化。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ = 9. 41 (s , 1Η) , 8. 96 (s , 1Η) , 8. 88 (s , 1Η), 7. 78-7. 75 (dd, 1H)，7· 16-7. 11 (m, 1H)，6· 99-6. 95 (m, 1H)，3. 93(s，3H)，3. 83 (t, 2H)，
2.97(t，2H)，2· 60(t，2H)，1· 78-1. 70(m，2H)，0· 96(t，3H) ；MS (m/z) 386 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 19. Omin(100% ) ；mp :200°C。实施例12 1-仲丁基-N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_5_氧代吡咯烷_3_甲酰胺按照方法4合成实施例12，使用在氯仿中的甲醇(0-10% )，在硅胶(200-400目) 上通过快速柱色谱纯化，收率36. 2%。1HnmrGoomHz, CD3OD) δ = O. 86 (td,3J = 7. 5Hz,4J = 2. IHz，3H，CH2-CH3)， 1. 15 (d, 3J = 6. 6Hz, 3H, CH-CH3)，1. 48-1. 59 (m, 2H, CH2-CH3)，2. 71-2. 75 (m, 2H, CH-CH2-C (O))，3. 42-3. 52 (m, 1H, CH-C (O))，3. 55-3. 70 (m, 2H, N-CH2)，3. 91 (d，3H, O-CH3)，
3.99-4. 06 (m, 1H, Cfl-N)，7. 10 (td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 18 (d，3J = 8. 3Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 49-7. 54 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 75 (dd, 3J = 7. 9Hz，4J =
I.7Ηζ，1Η，甲氧基-△!■)，8.70(8，1!1，嘧啶-六10，8.90(8，1!1，嘧啶-八1·)；MS (m/z) :369(M+H)； HPLC(λ = 214nm, [A]) :rt 13. 2min(100% )
实施例13 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)(3-甲氧基丙基)_5_氧代吡 咯烷-3-甲酰胺按照方法4合成实施例13，收率44. 3%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1Hnmr(^OMHzjCD3OD) δ = 1. 79(qu,3J = 6. 6Hz,2H, CH2-CH2-CH2)，2. 68-2. 72 (m, 2H, CH2)，3. 29 (s，3H，CH3)，3. 31-3. 50 (m, 5H, CH2)，3. 65-3. 75 (m, 2H, CH2)，3. 88 (s,3H, O-CH3) ,7. 05 (t, 3J = 7. 5Ηζ,1Η,甲氧基-Ar)，7. 13 (d，3J = 8. 3Hz，1H，甲氧基-Ar)， 7. 42-7. 48 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 75(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 2. IHz, 1Η,甲氧基-Ar), 8. 66 (s, 1H,嘧啶-Ar) ,8. 82 (s, 1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) :385(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt
II.Imin(96. 2% )。实施例14 :N- (6- (4-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例14，收率47.6%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化，然后使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ;10μ )， 流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水 (95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :345(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 7min(100% ) ；mp :148°C。实施例15 :N- (6- (2-乙氧基苯基)嘧啶_4_基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例15，收率5.2%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化，然后使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ;10μ )， 流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水 (95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :341(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 11. 2min(99. 7% ) ；mp:117°C。实施例16 :N- (6- (2-乙氧基_5_氟苯基)嘧啶_4_基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例16，收率4. 1%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化，然后使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ;10μ )， 流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水 (95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :359(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [B]) :rt 11. 3min(95. 2% ) ；mp 208 0C0实施例17 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例17，收率5. 5 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 06(s, 1H) ,8. 94 (s, 1H) ,8. 76 (s, 1H), 7. 72-7. 69 (dd, 1Η)，7. 50 (s, 1Η)，7. 36-7. 32 (m, 1H)，7. 25-7. 21 (m, 1H)，3. 87 (s, 3H)， 3. 27 (与溶剂重合， 2H)，2. 98-2. 96 (m, 1H)，2. 24-2. 18 (m, 2H)，2. 01 (m, 1H)，1. 89 (m, 1H)； MS (m/z) :345(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 11. 4min(97% ) ；mp 245 0C0
实施例18 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_5_氧代吡咯烷_3_甲酰 胺
按照方法2合成实施例18，收率11.7%，使用硅胶(GF254)并用5%的在氯仿中 的MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 8. 86 (s, 1H) , 8. 78 (s, 1H) , 7. 65-7. 62 (dd, 1H), 7. 24-7. 14(m，2H)，3. 91 (s，3H)，3. 72-3. 56(m，4H)，2. 72-2. 58(m，3H) ；MS (m/z) :331(M+H)； HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 9min(100% ) ；mp:222°C。实施例19 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_2，6_ 二氧代哌啶_4_甲 酰胺按照方法2合成实施例19，收率3. 5%，使用0_4 %在氯仿中的MeOH，在硅胶 (100-200目)上通过快速柱色谱初步纯化，然后使用Kromasil C18 (250x30mm ； 10 μ )柱， 流动相0.0IM 在 AcN 中的 NH4OAc AcN (70 30)，并且流速42ml/min，λ =210nm，通过 制备型HPLC进一步纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 12 (s, 1H), 10. 78 (s, 1H) ,8. 95 (s, 1H) ,8. 70 (s, 1H)，7. 71-7. 68 (dd, 1H)，7. 37-7. 32 (m, 1H)，7. 24-7. 20 (m, 1H)，3. 86 (s,3H)，3. 36-3. 33 (m, 1H)，2. 79-2. 64 (m，4H) ； 359MS (m/z) (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 12. Omin (96% )； mp 160 °C ο实施例20 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_氧代吡咯烷甲酰 胺按照方法4合成实施例20，收率12.4%，使用0_20%在石油醚中的乙酸乙酯，在 硅胶(100-200目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 9. 07 (s, 1H) ,9. 1 (s, 1H) ,7. 77-7. 74 (dd, 1H), 7. 15-7. 10 (m, 1H)，6. 98-6. 95 (m, 1H)，4. 15 (t，2H)，3. 93 (s, 3H)，2. 71 (t，2H)，2. 23-2. 17 (m, 2H) ；MS (m/z) 288 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rtmin(100% ) ；mp:137°C。实施例21 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环丙烷-1，1_ 二甲酰胺按照方法2合成实施例21，收率-J. 3%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 1. 52-1. 56 (m, 4H, CH2) , 3. 84 (s, 3Η, CH3), 7. 06-7. 10 (m, 1Η,甲氧基-Ar)，7· 18(d，3J = 7. 9Hz, 1Η,甲氧基-Ar), 7. 34 (s，br.，1H, ΗΝ)， 7. 45-7. 52 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 87(dd，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 63 (d, 5J=1.2Hz，lHjfl^-Ar)，8.90(d，5J=1.2Hz，lHjfl^-Ar) ；MS (m/z) 313 (M+H) ；HPLC ( λ =214nm, [C]) :rt 6. 8min(90% )。实施例22 :2-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基)吡咯烷甲酸 (S)-叔丁酯按照方法4合成实施例22，收率55. 8%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 1. 47 (s，9Η，tert.-Bu)，1. 89-1. 96 (m，2Η，CH2)， 2. 16-2. 32 (m, 1H, CH2)，2. 34-2. 49 (m, 1H, CH2)，3. 34-3. 58 (m, 2H, CH2)，3. 91 (s,3H, CH3)，4. 44-4. 51 (m, 1H, CH-CH2), 6. 99(d，3J = 8. 3Hz, 1Η,甲氧基-Ar), 7. 05(t，3J = 7. 5Hz, 1Η,甲 氧基-Ar)，7. 38-7. 43 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 89 (s,br.，1H,甲氧基-Ar)，8. 73 (s,br.，1H,嘧 啶-Ar),9. 10(d，5J = 1. 2Hz, 1H,嘧啶-Ar) ；399MS(m/z) (M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [C]) rt 13. lmin(100% )。实施例23 (2S) -N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)吡咯烷_2_甲酰胺* HCl按照方法7合成实施例23，收率95%，通过用乙醚洗涤进行纯化。
1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 2. 08-2. 14(m，2H，CH2) ,2. 14—2. 25 (m，1H，CH2), 2. 53-2. 63 (m, 1H, CH2)，3. 38-3. 52 (m, 2H, CH2)，3. 95 (s, 3H, CH3)，4. 62 (dd, 3J = 8. 7Hz，3J = 6. 6Hz, 1H, CH-CH2), 7. 19(td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 27(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar), 7. 62-7. 67 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 75(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧 基-Ar)，8. 75 (d, 5J = 1. 2Hz, 1H,嘧啶-Ar)，9. 10 (d, 5J = 1. 2Hz, 1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) 299 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 8. Imin (96% )。实施例24 :N- (6- (2-乙氧基_4_氟苯基)嘧啶_4_基)_6_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例24，收率1. 5%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化，然后使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ;10μ )， 流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水 (95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 359 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 9min(100% ) ；mp:222°C。实施例25 :N- (6- (4-氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基)_6_氧代哌啶_3_甲酰 胺按照方法2合成实施例25，收率2. 1%，使用LUNA C18 (2) 100A柱(250x 21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 373 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [B]) :rt 11. 8min(100% ) ；mp:105°C。实施例26 :N- (6- (5-氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基)_6_氧代哌啶_3_甲酰 胺按照方法2 合成实施例 26，收率18. 7%，使用 LUNA C18(2)100A 柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 373 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 12. 2min(96. 4% ) ；mp 2360C0实施例27 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环戊烷甲酰胺按照方法2合成实施例27，收率11. 2%，使用LUNA C18⑵100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 298 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 17. Imin (98. 1% ) 实施例28 :2-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基)_4，4_ 二氟吡咯 烷-1-甲酸叔丁酯按照方法4合成实施例28，收率70. 2%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。
1HNMR (400MHz, CD3OD,旋转异构体)δ = 1. 36,1. 47(s,9H, tert. -Bu),
2.49-2. 62 (m, 1H, CH2)，2. 80-2. 90 (m, 1H, CH2)，3. 80-3. 88 (m, 2H, CH2)，3. 91 (s,3H, CH3)， 4. 59-4. 64,4. 65-4. 71 (m，lH，CH-CH2), 7. 08(t,3J = 7. 5Ηζ，1Η，甲氧基-Ar)，7. 17(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 47-7. 53 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 75-7. 81 (m, 1H,甲氧基-Ar)， 8. 68-8. 74 (m, 1H,嘧啶-Ar)，8. 89 (s, br.，1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) 435 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [C]) :rt 16. lmin(100% )。实施例29 :4，4- 二氟_N_ (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)吡咯烷_2_甲酰胺* HCl按照方法7合成实施例29，收率93%，通过用乙醚洗涤进行纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 2. 80-2. 94 (m, 1H, CH2) ,3. 09-3. 21 (m, 1H, CH2)，
3.88-3. 97 (m，2H，CH2)，3. 96 (s，3H，CH3)，4. 98(t，3J = 8. 7Hz, 1H, CH-CH2), 7. 17-7. 22 (m, 1H, 甲氧基-Ar)，7. 28(d，3J = 7. 9Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 63-7. 68 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 76 (dd, 3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 74 (s，br.，1H，嘧啶-Ar), 8. 89(d，5J = 0. 8Hz, 1H，嘧啶-Ar) ；MS (m/z) 335 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 9. 3min(96. 3% ) 实施例30 2-氨基-N-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺* HCl按照方法2合成实施例30，收率23. 1 %，然后按照方法7，使用LUNAC18 (2) 100A 柱(250x21. 2mm ;10μ )，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 327 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. Imin (94. 1% ) 实施例31 :3-氨基-N-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺* HCl按照方法7从实施例32合成实施例31，收率81 %，通过用乙醚洗涤进行纯化。MS (m/z) 327 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 9min(100% ) 实施例32 :3-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基)环己基氨基甲酸叔丁按照方法2 合成实施例 32，收率23. 1%，使用 LUNA C18(2)100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 427 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 19. Omin (95. 3% ) 实施例33 4-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基)环己基氨基甲酸叔丁按照方法2合成实施例33，收率22%，使用LUNAC18(2)100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1% TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 427 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 18. 6min(95. 3% ) 实施例34 :4_氨基-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺* HCl按照方法7从实施例33合成实施例34，收率76. 7%,通过用乙醚洗涤进行纯化。MS (m/z) 327 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 7min(98. 1% )。实施例35 2-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基)_4_氟吡咯烷甲 酸叔丁酯
72
按照方法4合成实施例35，收率57. 7%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR(400MHz, CD3OD,旋转异构体)δ = 1. 39,1. 49 (s, br. ,9H, tert. -Bu)，
2.36-2. 68 (m, 2H, CH2)，3. 60-3. 86 (m, 2H, CH2)，3. 88 (s, 3H, CH3)，4. 50-4. 62 (m, 1H, CH-CH2)， 5. 18 (m, 0. 5H, CH-CH2)，5. 31 (m, 0. 5H, CH-CH2)，7. 06 (t，3J = 7. 5Hz, 1H,甲氧基-Ar)， 7. 13(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 43-7. 48 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 75-7. 81 (m, 1H,甲氧 S-Ar)，8.67(s，br.，lHjfl^-Ar)，8.83(s，lHjfl^-Ar) ；MS(m/z) :417(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 16. 5min(95% )。实施例36 4-氟-N- (6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)吡咯烷_2_甲酰胺* HCl按照方法7从实施例35合成实施例36，收率100%，通过用乙醚洗涤进行纯化。1HNMR (400MHz，CD3OD) δ = 2. 62-2. 74 (m, 1H, CH2)，2. 80-2. 99 (m, 1H, CH2)，
3.57-3. 72 (m, 1H, CH2)，3. 78-3. 88 (m, 1H, CH2)，3. 98 (s, 3H, CH3)，4. 88 (dd, 3J = 3. 3Hz，3J = 10. 8Hz, 1H, CH-CH2)，5· 41 (t，3J = 3. 8Hz，0· 5Η, CH-CH2)，5. 54 (t，3J = 3. 8Hz，0· 5Η, CH-CH2)， 7. 19-7. 25 (m, 1Η,甲氧基-Ar)，7. 31 (d，3J = 8. 3Ηζ，1Η，甲氧基-Ar)，7. 67-7. 72 (m, 1H,甲 氧基-Ar)，7. 74 (m, 3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar)，8. 76(d，5J = 7. 9Hz, 1H,嘧 啶-Ar)，9· 18(d，5J = 7. 9Hz，1H，嘧啶-Ar) ；MS (m/z) :317(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) rt 8. 6min(100% )。实施例37 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌啶_2_甲酰胺* TFA按照方法2合成实施例37的Boc-保护的前体，分离纯化后，通过方法9制备实施 例 37，收率28. 7%。MS (m/z) :331(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. Omin (100% ) ；mp :122°C。实施例38 4-氨基-N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺* TFA按照方法2合成实施例38的Boc-保护的前体，分离纯化(收率60. 5% )后，通 过方法9制备实施例38，收率39. 2%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的MeOH洗脱， 通过制备型TLC纯化。MS (m/z) :345(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 3min(98. 4% ) ；mp 1620C0实施例39 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-四氢_2H_吡喃_4_甲酰 胺按照方法2合成实施例39，收率39. 2%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :332(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 13. 9min(100% ) ；mp:155°C。实施例40 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4_基)_2_氧代哌啶_4_甲酰胺按照方法2合成实施例40，收率12.3%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的 MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。MS (m/z) :345(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 9min(100% ) ；mp:225°C。实施例41 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4_基)_2_氧代哌啶_3_甲酰胺按照方法2合成实施例41，收率6. 7%。MS (m/z) :345(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 13. 6min(99. 3% ) ；mp:180°C。
实施例42 四氢-N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2H_吡喃_4_甲酰胺按照方法2 合成实施例 42，收率21. 9%，使用 LUNA C18(2)100A 柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS(m/z) :314(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 11. 9min(100% ) 实施例43 四氢-N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2H_噻喃_4_甲酰胺按照方法2合成实施例43，收率8. 4%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ )，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :330(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [B]) :rt 14. 8min(85. 7% ) 实施例44 4-乙酰胺基-N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺按照方法2合成实施例44，收率19.2%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 1. 66-1. 75 (m, 2Η) , 1. 76-1. 88(m,6H), 1. 99(s, 3H)，2· 51-2. 57 (m, 1H)，3. 94(s，3H)，4· 11-4. 13 (m, 1H)，5· 81 (s, br.，1H)，6· 97 (dd, 1H)， 7. 14-7. 19 (m, 1H)，7. 78 (dd, 1H)，8. 88 (s, 1H)，9. 02 (s, 1H)，9. 56 (s, br.，1H) ；MS (m/z) 387 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 14. 2min(99. 1% ) 实施例45 3-氨基-N-(6_(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺* HCl按照方法2合成实施例45的Boc-保护的前体，分离和纯化后(收率42. 2% ), 通过方法7制备实施例45，收率69. 2%。MS (m/z) 345 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 10. lmin(100% )。实施例46:(15，21 )-2-氨基4-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷 甲酰胺* HCl按照方法2合成实施例46的Boc-保护的前体，分离和纯化后(收率16. 4% )， 通过方法7制备实施例46，收率45. 3%。MS (m/z) 345 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 2min(100% ) ；mp:272°C。实施例47 四氢-N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2H_吡喃_2_甲酰胺按照方法2 合成实施例 47，收率28. 4%，使用 LUNA C18(2)100A 柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 314 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 15. 2min(97. 2% ) 实施例48 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环丁烷甲酰胺按照方法2 合成实施例 48，收率29. 4%，使用 LUNA C18(2)100A 柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 284 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt min(92. 1% ) 实施例49 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺
按照方法2合成实施例49，收率17. 8%，使用LUNA C18⑵100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS(m/z) :312(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 16. 7min(98% ) 实施例50 3-乙酰胺基-N-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲酰胺按照方法2合成实施例50，收率13. 5%，使用LUNA C18⑵100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 1. 10-1. 20 (m，2Η)，1. 36-1. 54 (m，4Η)，1. 88-1. 94 (m， 2H)，1. 98 (s，3H)，2. 22-2. 28 (m, 1H)，2. 58-2. 66 (m, 1H)，3. 92 (s, 3H)，5. 52 (d, 1H)， 7. 01-7. 13 (m, 2H)，7. 46-7. 50 (m, 1H)，7. 85-7. 88 (m, 1H)，8. 87 (s, 1H)，9. 06 (s, 1H)，9. 78 (s, br. , 1H) ；MS (m/z) :369(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 11. 6min(99. 8% ) 实施例51 4-甲基磺酰氨基-N- (6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)苯甲酰胺按照方法11合成实施例51。实施例52 3-甲基磺酰氨基-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_4_甲基苯甲 酰胺按照方法11合成实施例52。实施例53 3-甲基磺酰氨基-N- (6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)苯甲酰胺按照方法11合成实施例53。实施例54 =N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)吡啶酰胺按照方法4 合成实施例 54，收率25. 8%，使用 LUNA C18(2)100A 柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 4. 01 (s, 3H)，7. 13-7. 17 (m, 1H)，7. 27-7. 47 (m, 1H)， 7. 53-7. 57 (m, 1H)，7. 78-7. 82 (m, 1H)，8. 07-8. 09 (m, 1H)，8. 17-8. 21 (m, 1H)，8. 21-8. 31 (m, 1H)，8. 81-8. 83 (m, 1H)，9. 03 (s, 1H)，9. 05 (s, 1H)，10. 6 (s, 1H) ；MS (m/z) 307. 6 (M+H)； HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 18. 5min(97. 4% ) 实施例55 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_5_甲基异噁唑_3_甲酰 胺按照方法2合成实施例55，收率38. 7 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速40ml/min，通过 制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8. 93 (s, 2Η) ,8. 88 (s, 1H) ,8. 41 (s, br. , 1H), 7. 77-7. 74 (dd, 1H)，7. 17-7. 12 (m, 1H)，6. 99-6. 95 (m, 1H)，3. 94 (s, 3H)，2. 60 (s,3H) ；MS (m/ ζ) :329(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [A]) :rt 16. 9min(92% ) ；mp :170°C。实施例56 5-乙基-N- (6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)吡啶_2_甲酰胺按照方法2合成实施例56，收率13.8%，使用硅胶(GF254)并用10%在氯仿中的 乙酸乙酯洗脱，通过制备型TLC纯化。1Hnmr(^omHzjCDCI3) δ = 10. 63 (s, 1H), 9. 02 (s, 1H), 8. 99 (s, 1H), 8. 50 (s, 1H),8. 20 (d, 1H)，7. 77-7. 73 (m, 2H)，7. 13-7. 10 (m, 1H)，6. 99-6. 95 (m, 1H)，3. 95 (s, 3H)，2. 77 (q, 2H)，1. 32(t，3H) ；MS(m/z) :353(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [A]) :rt 21. Imin(100 % ) ;mp 176°C。实施例57 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_7_甲基H_咪唑并[1， 2-a]吡啶-2-甲酰胺按照方法2合成实施例57，收率5.7%，通过在甲醇中搅拌粗品化合物，然后过滤 不溶的固体来纯化。再次重复此过程，在真空中干燥，得到纯产物。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 9. 19 (s, 1H) ,9. 12 (s, 1H) ,9. 0(s, 1H) ,8. 97 (s, 1H)，7. 84-7. 81 (dd, 1H)，7· 71 (s，1H)，7. 45-7. 41 (m, 2H)，7. 31-7. 29 (m, 1H)，3. 94 (s,3H)， 2.58(s，3H) ；MS (m/z) :378(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 14. 8min(100% ) 实施例58 5-乙基-N- (6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)异噁唑_3_甲酰 胺按照方法4合成实施例58，收率14. 5 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN (30 70)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ = 9. 22 (s , 1Η) , 8. 98 (d, 1Η) , 8. 92 (s , 1Η), 7. 80-7. 77 (dd, 1H) , 7. 16-7. 11 (m, 1H) , 6. 99-6. 96 (m, 1H) ,6. 55 (s, 1H) , 3. 94 (s, 3H) , 2. 87(q,2H),1. 36 (t,3Η) ；MS (m/z) 343 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 19. 9min(100% ) ；mp :175°C。实施例59 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_6_甲基吡唑并[l，5_a] 嘧啶-3-甲酰胺按照方法4合成实施例59，收率20. 4 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 10. 65 (s，1Η)，9· 31 (s，1Η)，8· 98 (s，1Η)，8· 92 (s， 1H)，8. 75 (s，1H)，7. 79-7. 76 (dd, 2H)，7. 38 (m, 1H)，7. 28 (m, 1H)，3. 93 (s,3H)，2. 44 (s,3H)； MS (m/z) 379 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 18. Imin (98% ) ；mp :265°C。实施例60 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_1，2_ 二氢_2_氧代喹 啉-4-甲酰胺按照方法4合成实施例60，收率5.7%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的 MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。MS (m/z) 391 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 14. 6min(100% ) ；mp:276°C。实施例61 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_氧代_2_苯基乙酰胺按照方法1合成实施例61，收率2. 5 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。1HnmrgoomHzjCDCI3) δ = 9. 53 (s, br. , 1H), 9. 01 (s, 1H), 8. 95 (s, 1H), 8. 40 (d, 2H)，7. 81-7. 78 (dd, 1H)，7. 69 (t, 1H)，7. 54 (t, 1H)，7. 15 (m, 1H)，7. 00-6. 97 (m, 1H)，3. 95 (s, 3H) ；MS (m/z) 352 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [B]) :rt 19. 4min(92. 7% ) ；mp 146 0C0
实施例62 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_ (2，4，5_三氟苯基)乙 酰胺按照方法2合成实施例62，收率34%，用0-5%在氯仿中的MeOH作为洗脱剂，在 硅胶(100-200目)上，通过柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 20(s, 1H) ,8. 94 (s, 1H) ,8. 68 (s, 1H), 7. 70-7. 67 (m, 1Η)，7. 55-7. 50 (m, 2Η)，7. 32-7. 29 (m, 1H)，7. 21-7. 17 (m, 1H)，3. 87 (s,3H)， 3.81(s，2H) ；MS(m/z) :392(M+H) ；HPLC(λ =214nm，[B]) :rt 18. 7min(100% ) ；mp 2080C0 实施例63 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(卩比啶_2_基)乙酰胺按照方法4合成实施例63，收率85 %，使用LUNA C18 (2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 3· 79 (s，2Η)，4· 11 (s，3Η)，7· 03—7. 06 (m，1Η)，
7.13-7. 15 (m, 1H)，7. 42-7. 59 (m, 2H)，7. 59-7. 61 (m, 1H)，7. 83-7. 86 (m, 1H)，8. 00-8. 04 (m, 1H)，8. 60(s，1H) ,8. 91 (s，1H)，11. 19(s，1H) ；MS (m/ζ) 321. 1 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 9. 77min(98% )。实施例64 (2R) _N_ (6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_苯基丙酰胺按照方法2合成实施例64，收率:3· 1 %，使用LUNA C18 (2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) 334 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt min(100% )。实施例65 (2S) -N- (6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_苯基丙酰胺按照方法2合成实施例65，收率-J. 9%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HnmrgoomHzJDCI3) δ = I. 58 (d, 3J = 7. 0Hz, 3H, CH3), 3. 94-3. 99 (m, 4H, OCH3, CH-CH3)，7. 04 (d，3J = 8. 3Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 09 (td, 3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，1H，甲氧 基-Ar)，7. 25-7. 31 (m, 1H,苯基-Ar)，7. 32-7. 40 (m, 4H,苯基-Ar)，7. 48-7. 53 (m, 1H,甲氧 基-Ar)，7. 86 (dd, 3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz，1H,甲氧基-Ar)，8. 99 (s, 1H,嘧啶-Ar)，9. 03 (s, 1H,嘧啶-Ar), 10. 30 (s, br.，1H，NH) ；MS (m/z) 334 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 19. Imin(98. 8% ) 实施例66 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2_硝基苯基)乙酰胺按照方法2合成实施例66，收率5. 1%，使用LUNA C18⑵100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 3. 90 (s，3Η，CH3)，4. 36 (s，2Η，CH2)，7. 02 (d，3J =
8.3Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 08 (td, 3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 42 (dd, 3J =7. 9Hz，4J = 1. 2Hz, 1H,硝基-Ar), 7. 52(tdd，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz，4J = 0. 8Hz，2H， 硝基-Ar), 7. 63(td，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 2Hz, 1H,甲氧基-Ar), 7. 82(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 16(dd，3J = 8. 3Hz，4J = 1. 2Hz, 1H, Ar), 8. 93 (s, 1H,嘧啶-Ar)，9. 45(s，1H，嘧啶-Ar)，11. 44(s，br.，1H，NH) ；MS (m/z) :365(M+H) ； HPLC (λ = 214nm，[C]) rt 12. 9min(99% )。实施例67 :2-(3，4，5-三氟苯基)-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例67，收率4. 3%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HnmrGoomHz, CDCl3) δ = 3. 79 (s, 2H, CH2), 3. 93 (s, 3H, CH3), 6. 96-7. 05 (m, 3H, Ix 甲氧基-Ar，2x 氟-Ar)，7. 09(td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 46-7. 52 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 92 (dd, 3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar)，8. 92 (s, 1H,嘧啶-Ar)， 9. 15(s，1H，嘧啶-Ar)，11. 44(s，br.，1H，NH) ；MS (m/z) :374(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) rt 19. 2min(99. 6% ) 实施例68 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(萘基)乙酰胺按照方法2合成实施例68，收率4. 1%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 3. 92 (s，3Η，CH3)，4. 00 (s，2Η，CH2)，7. 01 (d，3J =
8.3Ηζ，1Η，甲氧基-Ar)，7. 07(td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，lH，甲氧基-Ar)，7. 43-7. 51 (m, 4H,萘基-Ar)，7. 80-7. 86 (m，4H，3x 萘基-Ar，Ix 甲氧基-Ar)，7. 89(dd，3J = 7. 9Hz，4J =
1.7Hz, 1H,甲氧基-Ar)，8. 16(dd，3J = 8. 3Hz，4J = 1. 2Hz, 1H, Ar), 8. 94(d，5J = 0. 8Hz, 1H, 嘧啶-Ar)，8. 97 (d, 5J = 0. 8Hz, 1H,嘧啶-Ar)，9. 78 (s, br.，1H, NH) ；MS (m/z) 370 (M+H)； HPLC( λ = 214nm, [C]) :rt 17. 7min(99. 7% ) 实施例69 2-(3-甲氧基苯基)-N-(6_ (2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例69，收率8. 2%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1Hnmr(^omHzjCDCI3) δ = 3. 80 (s, 5H, CH2+CH3), 3. 92 (s, 3H, CH3), 6. 86 (dd, 3J = 7. 9Hz，4J = 2. 5Hz, 1Η，亚甲基-Ar)，6. 88-6. 90 (m, 1H，亚甲基-Ar)，6. 92(d，3J = 7. 5Hz, 1H, 亚甲基-Ar)，7. 01(d，3J = 8. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 07(td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz, 1H,甲 氧基-Ar)，7. 29 (t，3J = 7. 9Hz，1H，亚甲基-Ar)，7. 44-7. 48 (m，1H，甲氧基-Ar) ,7. 88 (dd, 3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar)，8. 90 (s, 1H,嘧啶-Ar)，8. 99 (s, 1H,嘧啶-Ar)，
9.49 (s, br. , 1H, NH) ；MS (m/z) 350 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [C]) :rt 13. 8min(97. 7% ) 实施例70 :1-(4-氯苯基)4-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环丁烷甲酰胺按照方法2合成实施例70，收率-J. 2%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 1. 89—2. 00 (m，2Η，CH2)，2. 02—2. 11 (m，2Η，CH2)，
2.53-2. 61 (m, 2H, CH2)，2. 87-2. 95 (m, 2H, CH2)，3. 93 (s, 3H, CH3)，7. 03 (d, 3J = 7. 9Hz, 1H,甲 氧基-Ar)，7. 07 (td, 3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，1H，甲氧基-Ar)，7. 33-7. 39 (m, 4H,氯-Ar)， 7. 48-7. 53 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 82(dd，3J = 7. 9Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 91 (s,lH』fl^-Ar)，8.92(s，lH』fl^-Ar)，9.01(s，br.，lH，NH) ；MS(m/z) :394(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [C]) :rt 15. 8min(99. 3% ) 实施例71 2-(2-甲氧基苯基)-N-(6_ (2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法3合成实施例71，收率3. 5%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (40微米)上，通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :350(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 16. Imin (95. 9% )。实施例72 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (1H-吡唑基)乙酰胺按照方法2合成实施例72，收率3. 5%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (40微米)上，通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :310(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 8min(97% ) ；mp:138°C。实施例73 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)(4-甲氧基苯基)环丙 烷甲酰胺按照方法1合成实施例73，收率17. 1 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。1HnmrgoomHzjCDCI3) δ = 8. 80 (s, 2H), 7. 89 (s, 1H), 7. 67 (d, 1H), 7. 40 (d, 2H), 7. 12-7. 08 (m, 1H)，6. 97-6. 92 (m, 3H)，3. 91 (s,3H)，3. 85 (s,3H)，1. 72 (s, 2H)，1. 21 (s,2H)； MS (m/z) :394(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 21. Imin (96. 6% ) ；mp 1450C0实施例74 =N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2-甲氧基苯基)乙酰 胺按照方法1合成实施例74，收率11. 3%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的 MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8. 86 (s, 1H) ,8. 80 (s, 1H) ,8. 51 (s, br. , 1H), 7. 71-7. 70 (dd, 1H)，7. 33-7. 29 (m, 2H)，7. 14-7. 06 (m, 1H)，7. 01-6. 94 (m, 3H)，3. 97 (s, 3H) ,3. 90(s,3H) ,3. 77(s,2H) ；MS (m/z) :368(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) 18. Irt min(96. 3% ) ；mp :170°C。实施例75 :2-(3，4-二甲氧基苯基)-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例75，收率2. 8%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶(40微米)上，通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :380(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 13 :6min(100% ) ；mp :194°C。实施例76 1-(4-甲氧基苯基)-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环丙烷甲酰 胺按照方法2合成实施例76，收率2. 7%，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :376(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm，[19，1]) :rt 19. Imin (100% ) ；mp:123°C。实施例77 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_氧代_2_苯基乙酰胺按照方法2合成实施例77，收率10.3%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (40微米)上，通过快速柱色谱纯化。
MS(m/z) :334(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 18. Imin(100% ) ；mp 1090C0实施例78 =N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)乙酰胺按照方法4合成实施例78，收率25. 5%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (40微米)上通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :321(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [B]) :rt 7. 2min(98. 6% ) ；mp:128°C。实施例79 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (噻吩_2_基)乙酰胺按照方法4合成实施例79，收率55%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (40微米)上通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :326(M+H) ；HPLC (λ = 214nm, [B]) :rt 13. 2min(96. 2 % ) ;mp 135 "C ；HRMS 理论值348. 0777600,实测值:348· 0777185 (NaC17H15N302S)，理论值 326. 0958800，实测值326. 0957739 (C17H16N302S)。实施例80 =N- (6- (2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_3_基)乙酰胺按照方法8合成实施例80，收率37. 3%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (40微米)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, DMS0_d6) δ = 3. 79(s，3H，OCH3), 4. 12(s，2H，CH2), 7. 05(t，3J = 7. 5Hz, 1Η, Ar)，7. 14 (d, 3J = 8. 3Hz, 1Η, Ar)，7. 42-7. 46 (m, 1Η, Ar)，7. 84-7. 87 (m, 3H, Pyr.， Ar),8. 60 (s，1H,嘧啶)，8. 77(d，3J = 6. 0Hz，2H，Pyr.)，8· 92 (s, 1H,嘧啶)，11. 26 (s, 1H, NH) ；MS (m/z) :321(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [B]) :rt 8. 4min(92% ) ；mp :87°C。实施例81 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_2_基)乙酰胺按照方法2合成实施例81，收率23. 8%，用0_3%在氯仿中的MeOH作为洗脱剂， 在硅胶(200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 17 (s，1Η)，8· 95 (s，1Η)，8· 75 (s，1Η)，8· 51 (d， 1H)，7· 77-7. 69(m，2H)，7· 41-7. 20(m，4H)，4· 01 (s，2H)，3· 83(s，3H) ；MS (m/z) :339(M+H)； HPLC(λ = 214nm, [A]) :rt 9. 8min(100% ) ；mp :176°C。实施例82 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_3_基)乙酰胺按照方法4合成实施例82，收率12. 1 %，用0_3 %在氯仿中的MeOH作为洗脱齐U， 在硅胶(200-400目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 22 (s, 1H) ,8. 95 (s, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,8. 53 (s, 1H)，8. 47 (d, 1H)，7. 76-7. 69 (m, 2H)，7. 38-7. 31 (m, 2H)，7. 22-7. 19 (m, 1H)，3. 87 (s,2H)， 3.83(s，3H) ；MS (m/z) :339(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 2min(100% ) ；mp:197°C。实施例83 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (卩比啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例83，收率16. 1%，使用40%在氯仿中的乙酸乙酯，通过在 硅胶(GF254)上进行两次制备型TLC来纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 24 (s, 1H) ,8. 95 (s, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,8. 52 (d, 2H)，7. 70 (d, 1H)，7. 36-7. 34 (m, 3H)，7. 23-7. 20 (m, 1H)，3. 87 (s, 2H)，3. 83 (s,3H) ；MS (m/z) 339 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 9. 3min(98. 9% ) ；mp 197 0C0实施例84 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶~4~基)-2_(1Η_吡唑基)乙 酰胺按照方法2合成实施例84，收率4.8%，使用5%在氯仿中的MeOH，通过在硅胶(GF254)上进行制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 8. 87 (s，1Η)，8. 74 (s，1Η)，7. 74 (s，1Η)，7. 65 (d， 1H)，7. 57(s, 1H)，7. 20-7. 13(m，2H)，6. 37 (s, 1H)，5. 17(s，2H)，3. 87(s，3H) ；MS(m/z) 328 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 13. 9min(100% ) ；mp :190°C。实施例85 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4_基)-2_(1Η_咪唑基)乙 酰胺按照方法2合成实施例85，收率23. 6%，使用0_10%在氯仿中的MeOH，在硅胶 (60-120目)上通过柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 28 (s, 1H) ,8. 97 (s, 1H) ,8. 71 (s, 1H), 7. 74-7. 68 (m, 2H)，7. 35-7. 32 (m, 1H)，7. 24-7. 20 (m, 2H)，6. 93 (s, 1H)，5. 05 (s,2H)，3. 84 (s, 3H) ；MS (m/z) 328 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 8. 9min(96. 6% ) ；mp 243 0C0实施例86 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (噻吩_2_基)乙酰胺按照方法2合成实施例86，收率20. 7%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (100-200目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 17 (s, 1Η) , 8. 95 (s, 1H) ,8. 74 (s, 1H), 7. 72-7. 69 (dd, 1Η)，7. 41 (d, 1Η)，7. 35-7. 32 (m, 1H)，7. 24-7. 20 (m, 1H)，7. 00-6. 97 (m, 2H)，4.03 (s，2H)，3.85 (s，3H) ；MS (m/z) :344(M+H) ； HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 18. 2min(98. 3% ) ；mp 1600C0实施例87 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)(4-甲氧基苯基)环己 烷甲酰胺按照方法1合成实施例87，收率18. 2 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 8. 76 (s, 2Η) , 7. 62-7. 59 (dd, 1H) , 7. 40 (d, 2H), 7. 22-7. 14 (m, 2H)，6. 94 (d, 2H)，3. 93 (s, 3H)，3. 78 (s,3H)，2. 47-2. 43 (m, 2H)，1. 99-1. 95 (m, 2H)，1. 65-1. 63(m，2H)，1. 43-1. 42(m，2H) ,0. 91-0. 85(m，2H) ；MS (m/z) 436 (M+H) ； HPLC (λ =214nm, [A]) :rt 21. 7min(100% ) ；mp :129°C。实施例88 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (3，4_ 二甲氧基苯基) 乙酰胺按照方法2合成实施例88，收率29. 4%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的 MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 07(s, 1H) ,8. 93 (s, 1H) ,8. 73 (s, 1H), 7. 71-7. 68 (dd, 1Η)，7. 36-7. 31 (m, 1Η)，7. 23-7. 19 (m, 1H)，6. 96 (s, 1H)，6. 91-6. 85 (m, 2H)， 3. 84 (s, 3H), 3. 74 (s, 3H), 3. 72 (s, 3H), 3. 70 (s, 2H) ；MS (m/z) 398 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 16. 9min(100% ) ；mp:168°C。实施例89 :2-(5-氯吡啶-2-基氧基)-N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基) 乙酰胺按照方法2合成实施例89，收率5.7%，用10%在氯仿中的乙酸乙酯作为洗脱齐IJ， 在硅胶(GF254)上通过制备型TLC纯化。
1HnmrgoomHzjCDCI3) δ = 8. 92 (s, 1H), 8. 91 (s, 1H), 8. 72 (s, 1Η), 8. 12 (d, 1Η), 7. 78-7. 74 (dd, 1Η)，7. 66-7. 63 (dd, 1Η)，7. 15-7. 10 (m, 1Η)，6. 98-6. 91 (m, 2Η)，4. 97 (s, 2H)， 3.93(s，3H) ；MS(m/z) :389(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [C]) :rt 18. 8min(98. 7 % ) ;mp 185 °C。 实施例90 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶~4~基)_2_ (1H_吡咯_3_基)乙 酰胺按照方法2合成实施例90，收率4.6%，用10%在氯仿中的乙酸乙酯作为洗脱剂， 在硅胶(GF254)上通过制备型TLC纯化。1HnmrGoomHz, CDCl3) δ = 8. 8 (s, 1H), 8. 84 (s, 1H), 8. 34 (s, br. , 1H), 8. 18 (s, 1H)，7. 73-7. 70 (dd, 1H)，7. 13-7. 09 (m, 1H)，6. 97-6. 93 (m, 1H)，6. 86 (s, 1H)，6. 81 (s，1H)，
6.22 (s, 1H), 3. 92 (s, 3H), 3. 69 (s, 2H) ；MS (m/z) :327(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 15. 4min(100% ) ；mp :150°C。实施例91 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (噻吩_3_基)乙酰胺按照方法2合成实施例91，收率19. 9 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ;10μ)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)并且流速48ml/min，λ = 235nm，通过制备型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ = 8. 86 (s , 1Η) , 8. 84 (s , 1Η) , 7. 90 (s , 1Η),
7.74-7. 71 (dd, 1H)，7. 43-7. 41 (m, 1H)，7. 14-7. 07 (m, 3H)，6. 99-6. 93 (m, 1H)，3. 92 (s, 3H)， 3.83(s，2H) ；MS (m/z) 344 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 18. 2min(94. 4 % ) ;mp 172°C。实施例92 (2R) _N_ (6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_苯基丙酰胺按照方法1合成实施例92，收率8.5%，使用50%在石油醚中的乙酸乙酯，用硅胶 (GF254)通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8. 83 (s, 1H) , 8. 81 (s, 1H) , 7. 91 (s, br. , 1H), 7. 71-7. 68 (dd, 1H)，7. 40-7. 30 (m, 5H)，7. 13-7. 09 (m, 1H)，6. 96-6. 93 (m, 1H)，3. 90 (s, 3H),3. 76(q,1H),1.60 (d,3H) ；MS (m/z) 352 (M+H) ； HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 19. 4min(91.5% )；浅棕色半固体。实施例93 (2S)-N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_苯基丙酰胺按照方法1合成实施例93，收率8. 7 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x46mm ;5 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(55 45)，并且流速48ml/min，λ = 235nm，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 07 (s, 1Η) , 8. 91 (s, 1Η) ,8. 75 (s, 1Η), 7. 70-7. 66 (dd, 1Η) , 7. 40 (d, 2Η)，7. 36-7. 26 (m, 3Η)，7. 24-7. 20 (m, 2Η)，4. 08 (q, 1H),3. 86(s,3H),1.42(d,3Η) ；MS (m/z) 352 (M+H) ； HPLC ( λ = 214nm, [C]) :rt 17. 7min(100% ) ；mp :110°C。实施例94 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2_硝基苯基)乙酰胺按照方法2合成实施例94，收率6. 6%，使用Gemini C18柱(50χ30_;5μ)并且 流动相0. OlM NH4OAc (aq) AcN(60 40)，流速lml/min，通过制备型 HPLC 纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 8. 96 (s, 1H) , 8. 63 (s, 1H) , 8. 09 (d, 1Η),7. 76-768 (m, 2H)，7. 61-7. 57 (m, 2H)，7. 35-7. 30 (m, 1H)，7. 21-7. 17 (m, 1H)，4. 27 (s, br.， 2H)，3. 80(s，3H) ；MS(m/z) :383(M+H) ；HPLC(λ = 214nm, [C]) :rt 14. 9min(90. 7% ) ；mp 177°C。实施例95 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-2_(5_(苯氧基甲 基)-2H-四唑-2-基)乙酰胺按照方法3合成实施例95，收率10. 8 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0. OlM NH4OAc (aq) AcN (40 60)，并且流速4ml/min，通过制 备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 57 (s, 1Η) , 9. 01 (s, 1Η) ,8. 65 (s, 1Η), 7. 75-7. 71 (dd, 1Η)，7. 37-7. 30 (m, 3Η)，7. 23-7. 20 (m, 1Η)，7. 07 (d, 2Η)，6. 98 (t, 1H)，
5.90(s，2H)，5· 41 (s，2H)，3· 82(s，3H) ；MS (m/z) 436 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [C]) :rt 17. lmin(100% ) ；mp :155°C。实施例96 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-2_(5_(苯氧基甲 基)-IH-四唑-1-基)乙酰胺按照方法3，合成实施例96，收率13.6%，其为实施例95的副产物，使用 Zodiacsil 120-5-C18 柱(250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(40 60)， 并且流速4ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 52(s, 1H) ,8. 99 (s, 1H) ,8. 62 (s, 1H), 7. 74-7. 70 (dd, 1Η)，7. 37-7. 32 (m, 1Η)，7. 29-7. 19 (m, 3H)，6. 99-6. 93 (m, 3H)，5. 68 (s, 2H)，5. 52(s，2H)，3.80 (s，3H) ；MS (m/z) 436 (M+H) ； HPLC ( λ = 214nm, [C]) :rt 15. Imin(83. 5% ) ；mp :190°C。实施例97 :2-(3-(1Η-四唑-1-基)苯氧基)-N-(6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧 啶-4-基)乙酰胺按照方法2合成实施例97，收率52. 3 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0. 甲酸(aq) AcN (40 60)，并且流速48ml/min，通过制 备型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 12 (s, 1H), 10. 09 (s, 1H) ,8. 98 (s, 1H) ,8. 73 (s, 1H)，7. 74-7. 71 (dd, 1H)，7. 60-7. 51 (m, 3H)，7. 37-7. 32 (m, 1H)，7. 24-7. 16 (m, 2H)，5. 01 (s, 2H)，3. 84(s，3H) ；MS (m/z) 422 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [C]) :rt 14. Imin (97. 8% ) ；mp 213°C。实施例98 =N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (呋喃_2_基)乙酰胺按照方法2合成实施例98，收率5. 1 %,使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(40 60)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC进行初步纯化。通过使用10%在石油醚中的乙酸乙酯进行制备型TLC并用乙 醚洗涤来进一步纯化，得到纯产物。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8. 88 (s, 1H) ,8. 83 (s, 1H) ,8. 09 (s, br. , 1H), 7. 75-7. 72(dd，1H)，7· 46(s，1H)，7· 26(与溶剂重合， 1Η)，7. 12-7. 09 (m，1Η)，
6.96-6. 93 (m, 1H) ,6. 42 (m, 1H) ,6. 35 (d, 1H) , 3. 91 (s，2H) , 3. 84 (s，1H) ；MS (m/z) 328 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 17. 2min(100% ) ；mp:141°C。
实施例99 =N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶~4~基)_2_ (呋喃_3_基)乙酰胺按照方法2合成实施例99，收率11.5%，使用0_45%在石油醚中的乙酸乙酯，在 中性氧化铝上通过柱色谱纯化。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ = 8. 86 (s , 1Η) , 8. 84 (s , 1Η) , 8. 00 (s , 1Η), 7. 75-7. 71 (dd, 1H)，7. 50 (s, 2H)，7. 14-7. 10 (m, 1H)，6. 97-6. 93 (m, 1H)，6. 43 (s, 1H) ,3. 92(s,3H) ,3. 64(s,2H) ；MS (m/z) 328 (M+H) ； HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 16. 9min(100% ) ；mp :168°C。实施例100 2-(5-氯吡啶-2-基氧基)_N_(6_(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧 啶-4-基)乙酰胺按照方法2合成实施例100，收率5.7%，用10%在氯仿中作的乙酸乙酯为洗脱 剂，在硅胶(GF254)上通过制备型TLC纯化。1HnmrgoomHzjCDCI3) δ = 8. 92 (s, 1H), 8. 91 (s, 1H), 8. 72 (s, 1H), 8. 12 (d, 1H), 7. 78-7. 74 (dd, 1H)，7. 66-7. 63 (dd, 1H)，7. 15-7. 10 (m, 1H)，6. 98-6. 91 (m, 2H)，4. 97 (s, 2H)， 3.93(s，3H) ；MS (m/z) 389 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [C]) :rt 18. 8min(98. 7 % ) ;mp 185 °C。实施例101 2-(4-氨基苄氧基)-N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙 酰胺按照方法1合成实施例101的前体，分离和纯化后(收率25. 6% ),通过方法 10制备实施例101，收率54. 5 %，用20-25 %在石油醚中的乙酸乙酯作为洗脱剂，在硅胶 (100-200目)上通过柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 9. 01 (s, br. , 1H) ,8. 93 (s, 1H) ,8. 84 (s, 1H),
7.76-7. 72 (dd, 1H)，7. 17-7. 10 (m, 3H)，6. 96-6. 93 (m, 1H)，6. 68 (d, 2H)，4. 54 (s,2H)， 4. 07 (s, 2H), 3. 90 (s, 3H), 3. 73 (s, br. , 2H) ；MS (m/z) 383 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) rt 11. 4min(89. 6% ) ；mp:153°C。实施例102 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (1H-吡咯_2_基)乙 酰胺按照方法4合成实施例102，收率8. 4%，使用硅胶(GF254)并用10%在氯仿中的 乙酸乙酯洗脱，通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 10. 92 (s, 1H) , 10. 64 (s, 1H) ,8. 93 (d, 1H),
8.76 (s，1Η) ,7. 73-7. 70 (dd, 1Η)，7. 37-7. 31 (m, 1Η) ,7. 24-7. 20 (m, 1Η) ,6. 65 (s, 1Η)， 5· 94-5. 90(m，2H)，3· 85(s，3H)，3· 73(s，2H) ；MS (m/z) 327 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) rt 16, 4min(93. 2% ) ；mp 186 0C0实施例103 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-2_(5_(吡 啶-3-基)-2H-四唑-2-基)乙酰胺按照方法3合成实施例103，收率25. 5%，产物从反应混合物中沉淀析出，过滤， 用水洗涤，然后在真空中干燥，得到纯产物。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 11. 61 (s，1Η)，9· 26 (s，1Η)，9· 02 (s，1Η)，8· 76 (d， 1H)，8. 67 (s，1H)，8. 45 (d, 1H)，7. 75-7. 74 (dd, 1H)，7. 63 (m, 1H)，7. 34 (m, 1H)，7. 21 (m, 1H) ,5. 98(s,2H) ,3. 82(s,3H) ；MS (m/z) 407 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) 13. 2rtmin(95% ) ；mp :277°C。实施例104 1-(4-甲氧基苯基)-N-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)环己烷甲 酰胺按照方法2合成实施例104，收率4. 7%，使用LUNA C18⑵100A柱(250x21. 2mm ； 10iO，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS(m/z) :418(M+H) ；HPLC( A = 214nm, [B]) :rt 20. 2min(100% ) 实施例105 2-(4-甲氧基苯基)_N_ (6_ (2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例105，收率1.5%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅胶 (40微米)上通过快速柱色谱纯化。MS (m/z) :350(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [B]) :rt 14. 3min(95. 9% ) 实施例106 :2_ (2，3，5-三氟苯基)-N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰胺按照方法2合成实施例106，收率32. 2 %，使用LUNA C18(2) 100A柱 (250x21. 2mm; 10 ii)，流动相0. 1% TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水 (40/60)至AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :374(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [C]) :rt 16. 5min(97. 8% ) 实施例107:N-(6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (4_ ((4-甲基哌嗪基) 甲基)苯基)乙酰胺按照方法合成实施例107，收率2%，使用在氯仿中的甲醇(0-10% )，在硅胶(40 微米)上通过快速柱色谱纯化。'HNMR(400MHz, CD30D) 8 = 2. 84 (s，3H，N_CH3)，2. 90-2. 96 (m，4H，2xCH2)，3. 83 (d， 3J = 5. 0Hz，4H，2xCH2)，3. 88(s，3H，0_CH3)，7. 08 (td，3J = 7. 5Hz,4J = 0.8Hz，lH，甲氧 基-Ar)，7. 16(d，3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基 _Ar)，7. 48-7. 53 (m, 1H,甲氧基 _Ar)，7. 72(dd，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基 _Ar)，8. 65(d，5J = 0. 8Hz, 1H，嘧啶-Ar)，8. 89(d，5J = 1. 2Hz, 1H，嘧啶-Ar) ；MS (m/z) :432(M+H) ；HPLC(入=214nm, [A]) :rt 8. 2min(92. 1% ) 实施例108 :2-(2，5_ 二甲氧基苯基)-N-(6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙酰 胺按照方法2合成实施例108，收率63. 2 %，使用LUNA C18(2) 100A柱 (250x21. 2mm; 10 ii)，流动相0. 1% TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水 (40/60)至AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。MS (m/z) :380(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 17. 4min(91% ) 实施例109 :N- (6- (2_乙氧基_5_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_3_基)乙酰 胺按照方法2合成实施例109，收率17. 7 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm; 10 ii)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) :353(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 10. 5min(100% ) ；mp:175°C。实施例110 :N-(6-(5-氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_(吡啶_3_基)乙 酰胺
按照方法2合成实施例110，收率25. 7 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS(m/z) :367(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 4min(100% ) ；mp:175°C。实施例111 :N- (6- (2-乙氧基_5_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)乙酰 胺按照方法2合成实施例111，收率18. 6 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) :353(M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 16. 6min(100% ) ；mp:221°C。实施例112 :N-(6-(5-氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_(吡啶_4_基)乙 酰胺按照方法2合成实施例112，收率27 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) 367. 2(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 44min(97. 4% ) 实施例113 :N-(6-(2-乙氧基_4_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_(吡啶_4_基)乙酰 胺按照方法2合成实施例113，收率19 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) 353. 4(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 32min(100% ) 实施例114 :N- (6- (2_乙氧基_4_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_3_基)乙酰 胺 * HCl按照方法2合成实施例114，收率17%，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) 353. 5(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 38min(98. 6% ) 实施例115 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_甲基_2_(吡啶_4_基) 丙酰胺按照方法2合成实施例115，收率25%。MS (m/z) 367. 3(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 03min(99. 6% ) 实施例116 :N- (6- (2-乙氧基_4_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)乙酰 胺 * HCl按照方法2合成实施例116，收率20%，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) 339. 3(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 31min(96. 0% ) 实施例117 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(吡啶_4_基硫基) 乙酰胺按照方法3合成实施例117，收率8. 6%。
MS(m/z) 371. 3(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 35min(96. 0% ) 实施例118 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(卩比啶_3_基氧基)丙酰胺按照方法2合成实施例118，收率38.6%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅 胶(100-200目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 1. 68 (d，3Η，CH3)，3. 93 (s，3Η，CH3)，4. 83 (q，3J =
6.6Hz, 1H, CH), 7. 01(d，3J = 8. 3Hz, 1Η,甲氧基-Ar), 7. 07(t，3J = 7. 5Hz, 1Η,甲氧基-Ar)，
7.25-7. 29 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 40-7. 45 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 94 (dd, 3J = 6. IHz，4J = 1. 6Hz, 1H，吡啶-Ar), 8. 32(s,br.，1H，吡啶-Ar), 8. 42(s,br.，1H，吡啶-Ar), 8. 81-8. 83 (m, 2H,嘧啶-Ar,吡啶-Ar)，8. 90 (d, 5J = 1. 3Hz, 1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) 351 (M+H) ；HPLC ( λ = 214nm, [A]) :rt 10. Imin(96. 9% )。实施例119 :N-(6-(5-氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_(吡啶_3_基)乙 酰胺* HCl按照方法2合成实施例119，收率24%，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) 367. 1 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. Imin (94% )。实施例120 :N- (6- (5_氟_2_异丙氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)乙 酰胺* HCl按照方法2合成实施例120，收率23%，然后通过溶于DCM并添加1. 2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) 367. 2 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 2min (83% )。实施例121 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_4_甲氧基_2_ (吡 啶-3-基)丁酰胺按照方法2合成实施例121，收率80%，使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的 MeOH洗脱，通过制备型TLC纯化。MS (m/z) 397 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 7min(100% ) 实施例122 :N- (6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_3_ (吡啶_4_基)丙酰 胺 * HCl按照方法2合成实施例122，收率32%，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) 353 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 9. 7min(100% )。实施例123 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_(吡啶_3_基氧基) 乙酰胺按照方法3合成实施例123，收率21 %,使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC纯化。MS (m/z) 355 (M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt IOmin (100% ) 实施例124 :N- (6_ (2_乙氧基_4_氟苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_3_基)乙酰 胺按照方法2合成实施例124，收率14. 7%，使用硅胶(GF254)并用60%在石油醚中的乙酸乙酯洗脱，通过制备型TLC纯化。MS(m/z) :339(M+H) ；HPLC(入=214nm, [A]) :rt 8. 9min(98. 5% ) 实施例125 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (吡啶_4_基)丙酰胺按照方法2合成实施例125，收率35. 9 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 ii)，流动相0. 01M NH40Ac(aq) AcN(35 65)，并且流速48ml/min，通过 制备型HPLC纯化。MS (m/z) :335(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 10. lmin(96. 2% )。实施例126 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4_基)_2_ (吡啶_3_基)丙酰胺按照方法2合成实施例126，收率53. 7 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 ii)，流动相0. 01M NH40Ac(aq) AcN(35 65)，并且流速40ml/min，通过 制备型HPLC纯化。MS (m/z) :335(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt lOmin (98. 4% )。实施例127 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4_基)(吡啶_4_基)环丙 烷甲酰胺* HC1按照方法4合成实施例127，收率45.2%，使用硅胶(GF254)，通过制备型TLC纯 化，然后溶于DCM并添加1. 2eq.的HC1乙醚溶液来转化成HC1-盐。MS (m/z) :365(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 10. 6min(100% ) ；mp:142°C。实施例128 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (4_甲基吡啶_3_基) 乙酰胺按照方法4合成实施例128，收率71 %，使用硅胶(GF254)，通过制备型TLC纯化。MS (m/z) :353(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 9. 8min(92. 7% ) ；mp :260°C。实施例129 :3_氨基-N-(6_(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(吡啶_3_基) 丙酰胺* HC1按照方法2合成实施例129，收率13 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 ii)，流动相0. 01M NH40Ac (aq) AcN(35 65)，并且流速40ml/min，通过 制备型HPLC纯化，然后进行方法7 (收率100% )。MS (m/z) :368(M+H) ；HPLC( A = 214nm, [A]) :rt 8. Omin (100% )。实施例130 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (3_甲基吡啶_4_基) 乙酰胺* HC1按照方法2合成实施例130，收率16. 4%，用30%在石油醚中的乙酸乙酯作为洗 脱剂，在硅胶(100-200目)上通过柱色谱纯化，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.HCl乙醚 溶液来转化成HC1-盐。MS (m/z) :353(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 9. 8min(100% )。实施例131 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (嘧啶_2_基氧基)乙酰胺按照方法2合成实施例131，收率25. 1%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅 胶(100-200目)上通过快速柱色谱纯化。'HNMR (400MHz, CDC13) 6 = 3.92(s，3H，CH3)，5. 04 (s，2H，CH2)，7. 01 (d，1H，甲氧 基-Ar)，7. 04-7. 08 (m, 1H，甲氧基-Ar)，7. 38-7. 45 (m, 1H,甲氧基-Ar)，7. 92 (dd, 1H,甲氧 基-Ar)，8. 57 (d, 2H,嘧啶-Ar) ,8. 81 (s, br. , 1H,嘧啶-Ar) ,8. 91 (s, br. , 2H,嘧啶-Ar)；
88MS(m/z) :338(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 7min(97% )。实施例132 2-(2-溴吡啶_3_基氧基)_N_ (6_ (2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)乙 酰胺女TFA按照方法2合成实施例132，收率14%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (100-200目)上通过快速柱色谱进行第一步纯化，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ)，流动相0. 1 % TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC进行最终纯化，为TFA盐。1HnmrGoomHz, CDCl3) δ = 3. 92 (s, 3H, CH3), 4. 72 (s, 2H, CH2), 7. 02 (d, 1Η,甲 氧基-Ar)，7. 08 (td, 1H,甲氧基-Ar)，7. 20 (dd, 1H,甲氧基-Ar)，7. 27-7. 30 (m, 1H,甲氧 基-Ar)，7. 90 (dd, 1H,吡啶-Ar)，8. 13 (dd, 1H,吡啶-Ar)，8. 82 (d, 1H,嘧啶-Ar)，9. 03 (d, 1扎嘧啶-六10，8.91(8，1^.，1!1，吡啶-八1·) ；MS (m/z) :415(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 16. 5min(100% )。实施例133 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_3_ (4_甲基吡啶_3_基) 丙酰胺* HCl按照方法2合成实施例133，收率45%，然后通过溶于DCM并添加1.2eq.的HCl 乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) :367(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 11. 7min(98. 1 % ) ；mp 分解: 110°C。实施例134 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_6，7_ 二氢_5H_环戊二 烯并[b]吡啶-7-甲酰胺*HC1按照方法4合成实施例134，收率10 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)并且流速40ml/min，通过 制备型HPLC纯化，然后通过溶于DCM并添加1. 2eq.的HCl乙醚溶液来转化成HCl-盐。MS (m/z) :365(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 13. 7min(83. 2 % ) ；mp 分解: 200 °C。实施例135 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_6，7_ 二氢_5H_环戊二 烯并[b]吡啶-7-甲酰胺按照方法2合成实施例135，收率3 %，使用在氯仿中的甲醇(0_10 % )，在硅胶 (100-200目)上通过快速柱色谱进行第一步纯化，使用LUNA C18(2) 100A柱(250x21. 2mm ； 10μ )，流动相0. 1% TFA(aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水(40/60)至 AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC进行最终纯化，mp 220°C。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 5. 08 (s, 2H, CH2) , 7. 34 (d, 1H) , 7. 54-7. 59 (m, 1H) , 7. 64-7. 68(m，2H) ,7. 74(d, 1H) , 7. 79-7. 84 (m, 1Η) ,7. 90-7. 95 (m, 1Η) , 7. 97 (d, 1Η)，8· 24-8. 33(m，3H)，8· 72(d，1Η) ；MS (m/z) :403(Μ+Η) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 18. Imin (92. 1% ) 实施例136 :2_氨基-N-(6_(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(吡啶_3_基) 乙酰胺* HCl按照方法2合成实施例136，收率24 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ )，流动相0· OlM NH4OAc (aq) AcN(35 65)，并且流速40ml/min，通过制备型HPLC纯化，然后进行方法7 (收率100% )。MS(m/z) :354(M+H) ；HPLC( A = 214nm, [A]) :rt 9. 8min(78. 7% ) 实施例137 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_2_ (哌嗪基)_2_ (吡 啶-3-基)乙酰胺* TFA按照方法2和9合成实施例137，方法2的收率15%，方法9的收率95%。MS (m/z) :423(M+H) ；HPLC( A = 214nm, [A]) :rt 9. 4min(98. 1% ) 实施例138 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4_基)哌啶甲酰胺按照方法4合成实施例138，收率35%。MS (m/z) :313(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 12. 2min(100% ) 实施例139 :N- (6- (2-甲氧基苯基)嘧啶-4_基)哌啶甲酰胺* TFA按照方法4合成实施例139，然后进行方法9，收率5%。MS (m/z) 314 (M+H) ； HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 旋转异构体 7. 1+7. 4min(94. 4% ) 实施例140 4-乙基-N-(6_(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)哌嗪甲酰 胺 * HC1按照方法4合成实施例140，收率25. 3 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm; 10 ii)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化，然后用5%在石油醚中的丙酮洗涤，接着通过溶于DCM并添加1.2eq.的HC1 乙醚溶液来转化成HC1-盐，收率100%。MS (m/z) 360 (M+H) ；HPLC( A = 214nm, [A]) :rt 9. lmin(99% ) ；mp :219°C。实施例141 1-(6- (5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_3_ (吡啶_3_基)脲* HC1按照方法12合成实施例141，收率21.2%，通过用5%在DCM中的甲醇稀释以沉 淀析出固体来纯化，然后通过溶于DCM并添加1. 2eq.的HC1乙醚溶液来转化成HC1-盐，收 率:100%oMS (m/z) 340 (M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [B]) :rt 10. 2min(99. 8% ) ；mp:224°C。实施例142 1-(6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)脲按照方法4合成实施例142，收率11.8 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm; 10 ii)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) :262(M) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 12. 3min(98% ) ；mp:170°C。实施例143 :N_ (6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (卩比咯烷基)乙
酰胺按照方法3合成实施例143，收率11.2%，用1 %在氯仿中的甲醇作为洗脱剂，通 过制备型TLC纯化(硅胶GF254)。1HNMR(400MHz, CDC13) 6 = 9. 76 (s , 1H) , 8. 93 (s , 1H) , 8. 89 (s , 1H), 7. 77-7. 74 (dd, 1H)，7. 14-7. 12 (m, 1H)，6. 97-6. 94 (m, 1H)，3. 92 (s, 3H)，3. 34 (s, 2H) ,2. 72(m,4H) , 1. 88(m,4H) ；MS (m/z) 331 (M+H) ；HPLC (入=214nm, [B]) :rt 9. lmin(98. 3% ) ；mp :115°C。
实施例144 =N- (6_ (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2_氧代哌啶基) 乙酰胺按照方法2合成实施例144，收率8. 8%，用7%在氯仿中的MeOH作为洗脱剂，通 过进行两次制备型TLC来纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 8. 94 (s，1Η)，8. 66 (s，1Η)，7. 69—7. 66 (dd，1Η)， 7. 37-7. 32 (m, 1H)，7. 24-7. 20 (m, 1H)，4. 20 (s, 2H)，3. 86 (s,3H)，3. 34 (m, 2H)，2. 26 (m, 2H)，
I.75(s，br.，4H) ；MS (m/z) 359 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 12. 9min(100 % ) ；mp 220 °C。实施例145 :N- (6- (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基)_3_ (2-氧代哌啶基) 丙酰胺按照方法2合成实施例145，收率13. 9 %，用5 %在氯仿中的MeOH作为洗脱剂，在 硅胶(GF254)上通过制备型TLC纯化。1HNMR (400MHz, DMS0-d6) δ = 8. 92 (s, 1H) ,8. 72 (s, 1H) ,7. 71-7. 68 (dd, 1H)，7· 37-7. 32 (m，1H)，7.24-7. 21 (m，lH)，3.87 (s，3H)，3.59-3. 56 (与溶剂重合， 1H)，3· 55(t，2H)，3· 30(t，2H)，2· 69(t，2H)，2· 20(t，2H)，1. 70-1. 67(m，4H) ；MS (m/z) 373 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 13. 3min(% ) ；mp:208°C。实施例146 :2_ (4-苄基哌嗪-1-基)-N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基) 乙酰胺按照方法3合成实施例146，收率29.2%，用1 %在氯仿中的甲醇作为洗脱剂，通 过制备型TLC纯化(硅胶GF254)。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 8. 86 (s, 1H) , 8. 83 (s, 1H) , 7. 67-7. 64 (dd, 1H)，7. 33-7. 31 (m, 4H)，7. 25-7. 15 (m, 3H)，3. 90 (s,3H)，3. 57 (s, 2H)，3. 26 (s,2H)， 2. 67 (s, br. , 4H), 2. 60 (s, br. , 4H) ；MS (m/z) 436 (M+H) ；HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt
II.9min(93. 8% ) ；mp :136°C。实施例147 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (4，4-二甲基-2，5_ 二 氧代咪唑烷-1-基)乙酰胺按照方法3合成实施例147，收率25. 4 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 8. 87 (s, 1H) , 8. 67 (s, 1H) , 7. 64-7. 61 (dd, 1H), 7. 23-7. 12(m，3H)，4. 39(s，2H)，3. 88(s，3H)，1. 45(s，6H) ；MS (m/z) : 388 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 13. Omin(97. 7% ) ；mp 2600C0实施例148 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_氧代_2_(哌啶基) 乙酰胺按照方法2合成实施例148，收率26. 3 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm ； 10 μ)，流动相0· 甲酸(aq) AcN (25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ = 9. 60 (s , 1Η) , 8. 97 (s , 1Η) , 8. 78 (s , 1Η), 7. 76-7. 73 (dd, 1H)，7. 15-7. 10 (m, 1H)，6. 98-6. 94 (m, 1H)，4. 03-4. 01 (m, 2H)，3. 92 (s,3H) , 3. 66 (t, 2H) , 1. 70 (s, br. , 6H) ；MS (m/z) :359 (M+H) ；HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 17. lmin(100% ) ；mp :165°C。实施例149 N- (6_ (5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2-氧代吡咯 烷-1-基)乙酰胺按照方法2合成实施例149，收率14.5%，用乙酸乙酯作为洗脱剂，在中性氧化铝 上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8. 92 (s, 1H) ,8. 76 (s, 1H) ,8. 68 (s, br. , 1H), 7. 75-7. 72 (dd, 1H)，7. 14-7. 09 (m, 1H)，6. 99-6. 93 (m, 1H)，4. 13 (s，2H)，3. 91 (s,3H)， 3. 56(t，2H)，2. 51(t，2H)，2. 17-2. 14(m，2H) ；MS (m/z) :345(M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) rt 12. Imin(97. 6% ) ；mp:219°C。实施例150 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-2_(2_氧代吡咯烷基)乙 酰胺按照方法4合成实施例150，收率88.2%，使用在氯仿中的甲醇(0_10%)，在硅 胶(100-200目)上通过快速柱色谱纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 2. 07-2. 15 (m, 2H, CH2-CE2-CH2)，2. 44 (t，3J = 7. 5Hz, 2H, CH2-CH2-CE2-C (0))，3· 56 (t，3J = 7. 5Hz，2H，CH2-CH2-C迅-N)，3. 88 (s，3H，CH3)，4. 22 (s， 2H, N-CH2-C (0)) ,7. 06 (t, 3J = 7. 5Hz, 1H,甲氧基-Ar)，7. 14 (d, 3J = 8. 3Hz, 1H,甲氧基-Ar)， 7. 43-7. 48 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 76(dd，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 61 (s, 1H,嘧啶-Ar) ,8. 82 (s, 1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) :327(M+H) ；HPLC( λ = 214nm, [A]) :rt 10. 9min(100% )。实施例151 :2_ (2，5-二氢-1-异丁基-5-氧代-IH-吡唑-3-基)-N-(6-(2-甲氧 基苯基)嘧啶-4-基)乙酰胺按照方法2合成实施例151152，收率3. 4 %，使用LUNA C18(2) 100A柱 (250x21. 2mm; 10 μ)，流动相0. 1% TFA (aq)梯度在 45min 内，由在 t = Omin 时 AcN-水 (40/60)至AcN-水(95/5)，流速6ml/min，通过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CD3OD) δ = 0. 91 (d,3J = 6. 6Hz，6H，2xCH3)，2· 09—2. 20 (m， 1Η, CH-CH3) ,3. 80 (d,3J = 7·5Ηζ，2Η，CH-CH2), 3. 89(s,3H, CH3)，3· 90-3. 92 (m，2Η，CH2)， 7. ll(td，3J = 7. 5Hz，4J = 0. 8Hz，lH，甲氧基 _Ar)，7. 18(d，3J = 7. 9Hz，lH，甲氧基-Ar)， 7. 51-7. 56 (m, 1H,甲氧基-Ar), 7. 73(dd，3J = 7. 5Hz，4J = 1. 7Hz, 1H,甲氧基-Ar), 8. 68 (d, 5J = 0. 8Hz, 1H,嘧啶-Ar)，8. 92 (d, 5J = 0. 8Hz, 1H,嘧啶-Ar) ；MS (m/z) 382 (M+H) ；HPLC ( λ =214nm, [A]) :rt 13. 4min(86. 7% )。实施例152 :N-(6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2，5_ 二氢异丁 基-5_氧代-IH-吡唑-3-基)乙酸按照方法4合成实施例152，收率9. 9%，使用Gemini C18 (50x30mm ;5 μ )柱，通 过制备型HPLC纯化。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 9. 22 (s，1Η)，8. 93 (s，1Η)，8. 78 (s，1Η)，8. 55 (s， 1H)，7. 75 (dd, 2H)，7. 20-7. 15 (m, 2H)，6. 95 (m, 2H)，6. 12 (s，1H)，4. 30 (s,2H)，4. 03 (d, 2H)， 3. 91 (d,6H) ,2. 15 (m, 1H), 1. 04(d,6H) ；MS (m/z) 400 (M+H) ； HPLC (λ = 214nm, [A]) :rt 22. 2min(86. 2% )。
实施例153 :N-(6-(5-氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_(哌啶_4_基)乙酰 胺 * HC1按照方法2合成实施例153，收率27. 4%，然后作为最后几步，按照方法9脱保 护，通过溶于NaHC03水溶液来转化成游离碱，然后通过溶于DCM并添加1. 2eq.的HC1乙醚 溶液来转化成HC1-盐，收率23. 3%。MS(m/z) :345(M+H) ；HPLC(入=214nm, [A]) :rt 9. 4min(95. 8% ) 实施例154 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)-2_(2，6_ 二氧代哌啶_4_基) 乙酰胺按照方法2合成实施例154，收率4. 0 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm; 10 ii)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)，并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化，然后用乙醚洗涤。MS (m/z) :355(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 10. 6min(92. 5% ) 实施例155 :N- (6- (5_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基)_2_ (2_氧代哌啶_4_基) 乙酰胺按照方法2合成实施例155，收率4.4%，使用在氯仿中的甲醇(0_10% )，在硅胶 (40微米)上通过快速柱色谱纯化，然后使用硅胶(GF254)并用3%在氯仿中的MeOH洗脱， 通过制备型TLC纯化。MS (m/z) :359(M+H) ；HPLC ( A = 214nm, [A]) :rt 12. 6min(99. 5% ) ；mp:217°C。实施例156 :N-(6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基)-2_(5_氧代吡咯烷_3_基)乙
酰胺按照方法2合成实施例156，收率3. 8 %，使用Zodiacsil 120-5-C18柱 (250x32mm; 10 ii)，流动相0. 甲酸(aq) AcN(25 75)并且流速4ml/min，通过制备 型HPLC纯化。MS (m/z) :327(M+H) ；HPLC( A = 214nm, [A]) :rt 10. 4min(100% ) ；mp:220°C。表2中的实施例 制备共同的中间体(VIII)制备Cbz-哌啶-4-甲酸(VI)在0°C，在 0. 5h 内，向哌啶-4-甲酸(5. 0g，38. 7mmol)和 Na0H(l. 86g，46. 5mmol) 在吐0(151111)中的搅拌溶液，滴加50%氯甲酸苄酯的甲苯溶液(13. 6mL,40. 6mmol)。在室温
93下搅拌反应混合物6小时。通过TLC监测反应进程。结束后，用稀HCl (pH 3)酸化反应混 合物，然后用乙酸乙酯(3X100ml)萃取。用硫酸钠干燥合并的有机相，然后浓缩。通过快 速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用30%乙酸乙酯/正己烷洗脱)，得到为浅黄色油的哌啶-1， 4_ 二甲酸单苄酯(VI) (6. 5g,64% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:95%。ESMS :m/z = 264 (M+l)。制备化合物(VII)将哌啶-1，4- 二甲酸单苄酯(VI) (5. 0g, 19mmol)悬浮于亚硫酰氯中(IOml)并在 室温下搅拌1小时。蒸出过量的亚硫酰氯，然后即刻将所得粗品4-氯羰基哌啶-1-甲酸苄 酯(VII)用于下一反应。制备化合物(VIII)将4-氯羰基哌啶-1-甲酸苄酯(VII) (5. 70g, 20. 2mmol)、4_氨基_6_氯嘧啶(I) (2. IOg, 16. 2mmol)和 4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(2. 90g,23. 7mmol)在二氯甲烧(50ml)中 的混合物加热至回流温度，保持18小时。通过TLC监测反应进程，然后蒸馏完全蒸出二氯 甲烷。将碳酸氢钠水溶液加入剩余物，用乙酸乙酯(3X100ml)萃取混合物。分出有机层， 用硫酸钠干燥，然后浓缩，得到为黄色固体的4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲 酸苄酯(VIII) (5. 9g，79% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:82%。ESMS :m/z = 375 (M+l)。实施例的合成实施例IA 合成哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物 #1A) 向2-乙氧基苯基硼酸(II) (1.73g,10. 4mmol)在30ml的1，4_ 二氧六环中的溶 液加入IOml饱和碳酸钠水溶液。在室温下用氩气吹洗lOmin。将6-氯嘧啶-4-基胺(I) (1. 50g,ll. 5mmol)和四(三苯基膦)钯(O) (0. 66g,0. 57mmol)同时地加入反应混合物中， 并再通入氩气5min。加热反应混合物至回流，保持12小时。经TLC表明反应结束后，在减 压下浓缩混合物。在二氯甲烷和水之间分配剩余物。分出有机层，用水和盐水洗涤，用硫酸 钠干燥，然后浓缩。用15%在二氯甲烷中的乙酸乙酯洗脱，通过柱色谱纯化所得粗品剩余 物，得到6-(2_乙氧基苯基)嘧啶-4-基胺(III) (2. 17g,87. 3% )01HNMR(CDCI3)S = 8· 64(1H，S)，7· 90-7. 86(1H，m)，7· 41-6. 88(4H，m)，4· 85(2H， bs)，4. 15 (2H, q)，1. 40 (3H, t)。MS :m/z = 216(M+1)。 在0°C，向哌啶-1，4-二甲酸单叔丁酯(V) (1. 27g，5. 54mmol)在无水二氯甲烷中 的搅拌溶液，加入HOBt (1. 27g，9. 30mmol)和EDCI (1. 78g，9. 30mmol)，然后搅拌反应混合物 5-10分钟。然后加入6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基胺(III) (1.00g，4. 65mmol)，然后在氮 气氛下加热反应混合物至回流，保持48小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，然后用IN HC1、 碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，接着用无水硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，然后通过柱 色谱纯化粗产物，得到4-[6-(2_乙氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁 酯(IV) (0. 79g，40% )。1HNMR(CDC13) 6 = 8. 86-8. 83 (2H, m) ,8. 17(1H, bs) ,8. 05-7. 88 (1H, m), 7. 42-7. 28 (1H, m)，7. 16-6. 87 (2H, m)，4. 25-4. 08 (4H, m)，2. 86-2. 68 (2H, m)，2. 48-2. 28 (1H, m)，2. 00-1. 62 (4H, m)，1. 59-1. 41 (12H, m)。MS :m/z = 427 (M+l)。 在0°C，向4-[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 (IV) (0. 500g,l. 17mmol)在无水二氯甲烷(1.5ml)中的搅拌溶液加入TFA (1. 5ml)，然后搅 拌反应混合物2-3小时。反应结束后(经TLC监测)，在减压下除去溶剂混合物，然后将二 氯甲烷加入剩余物。加入固体碳酸钠，然后搅拌混合物3-4小时。其后过滤混合物并用二 氯甲烷洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，得到固体，用10%乙酸乙酯/己烷洗涤此固体以除 去非极性杂质，得到为纯白色固体的哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物 #1A) (0. 19g,50% )。1HNMR(CDC13) 6 = 8. 87-8. 84(2H，m)，8. 01-7. 84(2H，m)，7. 42-7. 27(1H，m)， 7. 15-6. 89 (2H, m)，4. 18 (2H, q)，3. 24-3. 16 (2H, m)，2. 80-2. 60 (2H, m)，2. 47-2. 38 (1H, m)， 2. 01-1. 63 (4H, m)，1. 45 (3H, t)。MS :m/z = 327 (M+l)。实施例1A的备选合成 步骤I:在室温下，在氮气氛下，向4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (6. 15g，16. 4mmol)、2_乙氧基苯基硼酸(II) (3. OOg, 18. Immol)在饱和碳酸钠溶液 (IOml)和1，4_ 二氧六环(IOml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 81g，3. 6mmol)，然后 加入三苯基膦(0. 94g，3. 6mmol)。在110°C下，加热并回流所得反应混合物1小时，并且通过 TLC监测。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯(3X100ml)萃取滤液。分出有 机层，合并，用硫酸钠干燥，过滤，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶， 用50%乙酸乙酯/正己烷洗脱)，得到为浅黄色油的4-[6-(2_乙氧基苯基)嘧啶-4-基氨 基甲酰基]哌啶-I-甲酸苄酯(IX) (3. 8g,50% )0HPLC 纯度 λ = 220nm:94%。ESMS :m/z = 461 (M+l)。步骤II:在氮气氛下，将4-[6_(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄 酯(IX) (1.47g，3. 19mmol)溶于甲醇(20ml)，然后加入10% Pd/C(0. 81g)。在氢囊压下，在室 温下搅拌反应18小时。通过硅藻土层，从反应混合物中过滤催化剂，然后将滤液蒸发至干， 得到哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A) (0. 61g，58% )0HPLC 纯度 λ = 220nm:87%。ESMS :m/z = 327 (M+l)。实施例2A 合成1-甲基哌啶-4-甲酸[6-(2_乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#2A) 在0°C，向哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A) (0. 28g，0. 86mmol)和 33%福尔马林溶液(0. 045ml)在 IOml AcN MeOH H2O(2 1 1)中的搅拌混合物，加入NaCNBH3 (0. 13g，2. lmmol)。在室温下搅拌反应混合物30min，然后用 乙酸乙酯(3X20ml)萃取。分出有机层，合并，用硫酸钠干燥，过滤，然后在减压下浓缩。通 过制备型HPLC纯化粗产物(C-18，含有0. 05% TFA的AcN = H2O)，得到为白色固体的1_乙基 哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#2A) (0. 195g,66% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:99%。ESMS :m/z = 341 (M+l)。1HNMR (500MHz, DMS0_d6) δ = 11. 0(s, -NH，1 H) ；9. 20 (br, -NH，1 H) ；8.95 (s， Ar-H，1H) ；8. 85(s, Ar-H，1 H) ；8. 0 (m, Ar_H，1H) ；7. 45 (m, Ar_H，1H) ；7. 2 (m, Ar-H，1 H)； 7. 05 (m, Ar-H, 1H) ；4. 2(q, J = 7. 4Hz, -OCHaCH3^H) ；3. 41(m，2H) ；2. 95(m，2H) ；3. 0(m, 2H) ；2. 80 (s, -NCH3, 3H) ；2. 5(br,与 DMSO 重叠，1H) ；2. 1 (m, 2H) ； 1.8(m，2H) ； 1.4 (t，J = 7. 4Hz, -OCH2CH3, 2H)。熔点65_67°C。实施例3A 合成1-乙基哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#3A)在室温下，向哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A) (0. 20g,0. 61mmol)和碳酸钾(0. 10g,0. 72mmol)在DMF(3ml)中的搅拌溶液加入溴乙烷 (0. 07g，0. 05ml,0. 61mmol)。在60°C加热反应混合物1小时。通过TLC监测反应进程。将 反应混合物倾入冰水中，然后用乙酸乙酯萃取(3X IOOmL)。分出有机层，合并，用硫酸钠干 燥，过滤，然后在减压下浓缩。通过用乙醚(3ml)研制来纯化粗产物，过滤，然后在高真空度 下干燥，得到为白色固体的1-乙基哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物 #3A) (0. 093g,43% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:96%。ESMS :m/z = 355 (M+l)。1HNMR (500MHz, CDCl3) δ = 8. 95 (s, Ar-H, 1H) ；8.90 (s，Ar-H, 1H) ；8. 0(s, Ar-H 和-NH，2H) ；7. 4(s, Ar-H, 1H) ；7. 05-7. 0 (m, Ar-H，2H) ；4. 2(q, J = 7. 4Hz, -OCEiCH3, 2H)； 3. 05 (m, 2H) ；2.4 (q，J = 7. 3Hz, -NCEiCH3^H) ；2. 35 (s, 1H) ；2· 1_1· 8 (m，6H) ；1. 5(t, J = 7. 4Hz, -OCH2CHa, 3H) ；0· 5 (t，J = 7. SHz-NCH2CHa, 3H)。熔点137-139°C。实施例4A 合成1-异丙基哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物MA) 在室温下，向哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A) (0. 35g,1.0mmol)和碳酸钾(0. 17g，1. 2mmol)在DMF(4ml)中的搅拌溶液加入2-溴丙烷 (0. 10ml, 1. 07mmol)。在60°C加热反应混合物1小时。通过TLC监测反应进程。将反应混 合物倾入冰水中，然后用乙酸乙酯萃取(3X100ml)。分出有机层，合并，用硫酸钠干燥，过 滤，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物(C-18，AcN:H20含有0. 05% TFA)，然 后冷冻干燥，得到为白色固体的1-异丙基哌啶-4-甲酸[6- (2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基] 酰胺(化合物 #4A) (0. 2g,51% ) HPLC 纯度 \ = 220nm:99%。ESMS :m/z = 369 (M+l)。'HNMR (500MHz, CDC13) 8 :8. 95(s, Ar_H，2H) ；8. 4(br, _NH 1H) ；8. 05 (m, Ar_H， 1H) ；7. 42 (m, Ar-H, 1H) ；7. 1—7. 0(m，Ar-H, 2H) ；4. 2(q, J = 7. 4Hz, -0CE,CH3,2H) ；4. 0(m, 1H) ；3.6(m，2H) ；3.3(m，2H) ；2. 8-2. 5 (m, 3H) ；2.2(m，2H) ； 1. 3 (t, J = 7. 4Hz, -0CH2CH3, 3H)； 1. 10(d，6H)。熔点173_175°C实施例5A 合成1-苄基哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#5A)[1043] 在室温下，向哌啶-4-甲酸[6- (2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A) (0. 60g, 1. 84mmol)和碳酸钾(0. 25g，1. 8mmol)在DMF(40mL)中的搅拌溶液加入苄基溴 (0. 31g，0. 22ml, 1. 84mmol)。在60°C加热反应混合物1小时并通过TLC监测反应进程。将 混合物倾入冰水中，然后用乙酸乙酯萃取(3X100ml)。分出有机层，合并，用硫酸钠干燥， 过滤，然后在减压下浓缩。用无水乙醚研制粗产物，然后过滤固体，得到为黄色固体的1-苄 基_哌啶-4-甲酸[6- (2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#5A) (0. 165g. 21% )0HPLC 纯度 \ = 220nm:96%。ESMS :m/z = 417 (M+l)。'HNMR(500MHz, DMS0-d6) 8 = 10. 8 (s, -NH, 1H) ；8. 90 (s, Ar-H, 1H) ；8. 89 (s, Ar-H, 1H) ；7. 42 (m, Ar-H, 1H) ；7. 30 (m, Ar-H, 5H) ；7. 2 (m, Ar-H, 1H) ；7. 05 (m, Ar-H, 1H) ；4. 2 (q, 0CH2CH3,2H) ；3.42(s，2H) ；2. 9(br,2H) ；2. 5 (br，与 DMSO 质子重叠，1H) ；2. 0(m,2H) ； 1. 8(m, 2H) ；1.6(m，2H) ；1. 4 (t，J = 7. 3Hz，0CH2￡H2，3H)。实施例6A 合成哌啶-4-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺(化合物 步骤I 在室温下，在氮气氛下，向4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 730g，1.95mmol)、2-甲氧基苯基硼酸(0. 300g, 1. 97mmol)在饱和碳酸钠溶液 (IOml)和1，4_ 二氧六环(IOml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 088g,0. 39mmol)，然 后加入三苯基膦(0. 103g，0. 39mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时并通过TLC监 测。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X 100ml)。分出有机层，合 并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用50%乙酸乙 酯/正己烷洗脱)，得到为白色固体的4-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(XI) (0. 47g,53% )0HPLC 纯度 λ = 220nm:89%。ESMS :m/z = 447 (M+l)。步骤II:将4-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄酯(XI) (0.45g，l. OOmmol)溶于甲醇二氯甲烷(4 1) (24ml)，然后在氮气氛下加入10 % Pd/ C(0.2g)。在氢囊压下，在室温下搅拌反应18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中 除去催化剂，然后将滤液蒸发至干。其后，用无水乙醚(IOml)处理粗产物，然后过滤固体， 得到为白色固体的哌啶-4-甲酸[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#6A) (0. 19g,42% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:97%。ESMS :m/z = 313 (M+l)。1HNMR (500MHz, DMS0_d6) δ = 11. 2(s, -NH，1 H) ；9. 05 (s, br.，NH, 1H) ；8.95 (s， Ar-H, 1H) ；8. 70 (s, Ar-H, 1H) ；7. 95 (m, Ar-H, 1H) ；7. 5 (m, Ar-H, 1H) ；7. 2 (m, Ar-H, 1H)， 7. 1 (m, Ar-H, 1H) ；3.95(s，3H) ；3.3(m，2H) ；2.95(m，3H) ； 2. 05 (m, 2H) ； 1.85(m，2H)。熔点279-280°C。实施例7A 合成哌啶-4-甲酸[6-(2_异丙氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺(化合 物 #7A) 步骤 I 在室温下，在氮气氛下，向4-(6-氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 830g, 2. 22mmol)、2_异丙氧基苯基硼酸(0. 400g, 2. 22mmol)在饱和碳酸钠溶液 (IOml)和1，4_ 二氧六环(IOml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. lg，0. 44mmol)，然后 加入三苯基膦(0. llg，0. 42mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时并通过TLC监测。 通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X100ml)。分出有机层，合并， 用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用50%乙酸乙酯 /正己烷洗脱)，得到为白色固体的4-[6-(2_异丙氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(XIII) (0. 36g，37% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 448 (M+l)。步骤II:在氮气氛下，将4-[6_(2-异丙氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲酸 苄酯(XIII) (0. 32g,0.67mmol)溶于甲醇(20ml)，然后加入 10 % Pd/C (0. 17g)。在氢囊压 下，在室温下搅拌反应18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中除去催化剂，然后将滤 液蒸发至干。其后，用无水乙醚(IOmL)研制粗产物，然后过滤所得固体，得到为白色固体的 哌啶-4-甲酸[6-(2-异丙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#7A) (0. 12g，52% )0HPLC 纯度 λ = 220nm:99%。ESMS :m/z = 341 (M+l)。1Hnmr(SoomHzjCDCI3) δ = 8. 95(s,Ar-H, 1H) ；8. 92 (s, Ar-H, 1H) ；8. 05 (m,-NH and Ar-H, 2H) ；7. 4(m, Ar-H，1 H) ；7. 05 (m, Ar-H，2H) ；4. 7(m, OCH，1 H) ； 3. 20 (m, 2H) ；2.7(m，2H)； 2. 41 (m, 1H) ； 1. 95-1. 75(m，5H) ;1.40(d，6H)。实施例8A 合成哌啶-4-甲酸[6-(2-环丙基甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺(化 合物#8A) 步骤I 在室温下，在氮气氛下，向4-(6-氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 59g，1. 6mmol)和2-(环丙基甲氧基)苯基硼酸(0. 34g，1. 9mmol)在饱和碳酸钠 溶液(5ml)和1，4_二氧六环(5ml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 071g，0. 32mmol)， 然后加入三苯基膦(0. 083g，0. 32mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时并通过TLC 监测。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X100mL)。分出有机层， 合并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用50%乙酸 乙酯/正己烷洗脱)，得到为白色固体的4-[6-(2_环丙基甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲 酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XV) (0. 4g，35% ) HPLC 纯度 \ = 220um:98%。ESMS :m/z = 487 (M+l)。步骤II:在氮气氛下，将4-[6_(2-环丙基甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(XV) (0.41g,0. 84mmol)溶于甲醇(20ml)，然后加入 10% Pd/C(0. 2g)。在 氢囊压下，在室温下搅拌反应18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中除去催化剂，然 后将滤液蒸发至干。其后，用无水乙醚(10ml)研制粗产物，然后滤出固体，得到为白色固 体的哌啶-4-甲酸[6-(2_环丙基甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#8A) (0. llg， 37% )。HPLC 纯度 \ = 220nm:97%。ESMS :m/z = 353 (M+l)。'HNMR(500MHz, CDC13) 8 8. 90 (s, Ar-H, 1H) ；8. 95 (s, Ar-H, 1H) ；8. 05 (m, _NH，1H)； 8. 0 (m, Ar-H, 1H) ；7. 4 (m, Ar-H, 1H) ；7. 05 (m, Ar-H, 1H) ；6. 95 (m, Ar-H, 1H)，3. 95 (d, 0CH2, 2H) ；3. 0(m,2H) ；2. 40 (br,3H) ；2. 1-1. 9(br,4H) ；1. 2. (m, 1H) ；0. 6(m,2H) ;0.45(m，2H)。实施例9A 合成哌啶-4-甲酸[6- (2-苄氧基苯基)嘧啶_4_基]-(化合物#9A) 步骤I 在氮气氛下，在室温下，向4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 74g，2. Ommol)和2-苄氧基苯基硼酸(0. 50g，2. 2mmol)在饱和碳酸钠溶液(4ml) 和1，4-二氧六环(4ml)中的搅拌混合物加入醋酸钯(II) (0. 09g，0. 40mmol)，然后加入三苯 基膦(0. 105g，0. 400mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时并通过TLC监测。通过硅 藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X 100ml)。分出有机层，合并，用硫酸 钠干燥，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，得到4-[6-(2_苄氧基苯基)嘧 啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XVI) (0. 65g,62% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:95%。ESMS :m/z = 523 (M+l)。步骤II:将4-[6_(2-苄氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄酯(XVI) (0. 5g, lmmol)溶于33% HBr (在乙酸中，3ml)中，并在室温下搅拌45分钟。沉淀析出黄色 固体；在0°C用氢氧化钠水溶液终止反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取(3X10ml)。分出有 机相，合并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物(C-18，含有
0.05% TFA的AcN:H20)，然后冷冻干燥，得到为白色固体的哌啶-4-甲酸[6_(2_苄氧基苯 基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#9A) (0. 028g,7% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 389 (M+l)。1Hnmr(SoomHzjDmSo-CI6) δ ll. 2(s, -NH, !H) ；9. 40(s,br.，-NH，1H) ；8. 95 (s, Ar-H, 1H) ；8. 70 (s，Ar-H, 1H) ；7. 8 (m, Ar-H, 1H) ；7. 5 (br, Ar-H, 5H) ； 7. 35 (m, Ar-H, 1H) ； 7. 0 (m, Ar-H, 1H) ；4. 3(s，2H) ；3. 3(m,与 DMSO 重叠，2H) ；2. 95(m，2H) ；2. 8(m，lH) ；2. l(m，2H)；
1.8(m，2H)。熔点224-227°C。实施例IOA 合成哌啶-4-甲酸[6-(4_氟_2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#10A) 步骤I 在氮气氛下，在室温下，向4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 63g，1. 7mmol)和4-氟-2-甲氧基苯基硼酸(0. 30g, 1. 8mmol)在饱和碳酸钠溶液 (4ml)和1，4_ 二氧六环(4ml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 076g，0. 34mmol)，然后 加入三苯基膦(0. 089g，0. 34mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时，并且通过TLC监 测反应。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X 100ml)。分出有机 层，合并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用50%乙 酸乙酯/正己烷洗脱)，得到为白色固体的4-[6-(4_氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基 甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XIX) (0. 42g,53% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:84%。步骤II:在氮气氛下，将4-[6-(4-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲 酸苄酯(XIX) (0. 42g,0. 9mmol)溶于甲醇(20ml)，然后加入10 % Pd/C (0. 2g)。在氢囊压 下，在室温下搅拌反应18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中除去催化剂，然后将 滤液蒸发至干。其后，用无水乙醚(5ml)研制粗产物，然后滤出固体，得到为白色固体的哌 啶-4-甲酸[6-(4-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#10A，)(0. 22g,76%)0HPLC 纯度 λ = 220nm:99%。ESMS :m/z = 331 (M+l)。1HNMR(500MHz, DMS0_d6) δ = 11. 0(s, -NH，1 H) ；8. 95(s, Ar-H, 1H) ；8. 70(s, br.，-NH, 1H) ；8. 6 (s, Ar-H, 1H) ；8. 0 (m, Ar-H, 1H) ；7. 2 (m, Ar-H, 1H) ；6. 95 (m, Ar-H, 1H)， 3.95(s，3H) ；3. 25(br，2H，与 DMSO 信号重叠)；2. 95(m，2H) ；2. 0(m,2H) ； 1.8(m，2H)。实施例IlA 合成哌啶-4-甲酸[6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺 (化合物#11A) 步骤I:在氮气氛下，在室温下，向4_(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 60g, 1. 6mmol)和5-氟-2-甲氧基苯基硼酸(0. 300g, 1. 76mmol)在饱和碳酸钠溶 液(5ml)和1，4-二氧六环(5ml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 072g，0. 32mmol)，然 后加入三苯基膦(0. 084g，0. 32mmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时，并且通过TLC 监测反应。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X 100ml)。分出有 机层，合并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过快速柱色谱纯化粗产物(硅胶，用50% 乙酸乙酯/正己烷洗脱)，得到为浅黄色油的4-[6-(5_氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨 基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XXI) (0. 39g,52% )。HPLC 纯度 \ = 220nm 80% ) ESMS :m/z = 465 (M+1)。步骤II:在氮气氛下，将4-[6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲 酸苄酯(XXI) (0. 39g,0. 84mmol)溶于甲醇(15ml)，然后加入10 % Pd/C (0. 2g)。在氢囊压 下，在室温下搅拌混合物18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中除去催化剂，然后将 滤液蒸发至干。用无水乙醚(5ml)研制所得粗产物，然后滤出固体，得到为白色固体的哌 啶-4-甲酸[6-(5-氟-2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#11A) (0. 076g,27%)oHPLC 纯度 \ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 331 (M+1)。'HNMR(500MHz, DMS0_d6) 8 = 11 (s，-NH, 1H) ；8. 99 (s, Ar-H, 1H) ；8. 89 (s, Ar-H, 1H) ；7. 70 (m, Ar-H, 1H) ；7. 20 (m, Ar-H, 1H) ；3. 95 (s, 0CHS,3H) ；2. 90(m，2H) ；2. 55 (br，3H，与 DMSO 质子重叠)；2. 00(m，2H) ； 1. 80 (br，2H)。实施例12A:合成哌啶-4-甲酸[6-(2-氟-6-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#12A) 步骤I:在氮气氛下，在室温下，向4-(6_氯嘧啶-4-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸苄酯 (VIII) (0. 75g,2mmol)和6-氟-2-甲氧基苯基硼酸(0. 37g，2. 2mmol)在饱和碳酸钠溶液 (4ml)和1，4-二氧六环(4ml)中的搅拌混合物，加入醋酸钯(II) (0. 09g，0. 4mmol)，然后 加入三苯基膦(0. 105g，0. OOmmol)。在110°C加热回流所得混合物1小时，并通过TLC监 测反应。通过硅藻土层过滤反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取滤液(3X 100ml)。分出有机 层，合并，用硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物(C-18，含 有0. 05% TFA的AcN:H2O)，得到4-[6-(2-氟-6-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌 啶"I"甲酸苄酯(XXIII) (0. 05g,4% )。HPLC 纯度 λ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 465 (M+l)。步骤II:在氮气氛下，将4-[6-(2-氟-6-甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲 酸苄酯(XXIII) (0.05g，0. lmmol)溶于甲醇(5ml)，然后加入 10 % Pd/C(0. 03g)。在氢囊 压下，在室温下搅拌混合物18小时。通过硅藻土层过滤，从反应混合物中除去催化剂，然 后将滤液蒸发至干。用无水乙醚(2ml)研制所得粗产物，然后浓缩，得到为白色固体的哌 啶-4-甲酸[6-(2-氟-6-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#12A) (0. 029g,81%)oHPLC 纯度 λ = 220nm:96%。ESMS :m/z = 331 (M+l)。1HNMR(500MHz, DMS0-d6) δ 11. 2 (s, -NH, 1H) ；9. 0 (s, Ar-H, 1H) ；8. 60 (br, -NH, 1H)； 8. 10 (s，Ar-H, 1H) ；7. 50 (m, Ar-H, 1H) ；7. 05 (m, Ar-H, 1H) ；6. 95 (m, Ar-H, 1H) ；3. 85 (s, 3H)； 3. 3 (m，2H，与 DMSO 质子重叠)；3. 0-2. 8 (m, 2H) ；2. 5 (br，1H，与 DMSO 质子重叠)；2. 0(m,2H)； 1. 75(m，2H)。熔点140-143°C实施例13A 合成1-乙酰基哌啶-4-甲酸[6_(2_乙氧基苯基)嘧啶_4_基]酰 胺(化合物#13A) 在0°C，向哌啶-4-甲酸[6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#1A)(0. 25g,0. 76mmol)和 NEt3(0. OlmL，0. 76mmol)在 THF(lOml)中的搅拌混合物加入乙酰氯 (0. 053ml, 0. 76mmol)。在室温下搅拌混合物20min，然后蒸出溶剂；将剩余物溶于水，然后 用乙酸乙酯萃取(3X10ml)。分出有机层，合并，用硫酸钠干燥，过滤，然后在减压下浓缩。 用无水乙醚研制所得粗产物，然后滤出固体，得到为白色固体的1-乙酰基哌啶-4-甲酸 [6-(2-乙氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#13A) (0. 208g, 73% )0HPLC 纯度 \ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 369 (M+l)。'HNMR(500MHz, CDC13) 8 = 8. 90 (s, Ar-H, 1H) ；8. 95 (s, Ar-H, 1H) ；8. 05 (m, _NH， 1H) ；8. 0 (m, Ar-H, 1H) ；7. 4 (m, Ar-H, 1H) ；7. 1 (m, Ar-H, 1H) ；7. 0 (m, Ar-H, 1H)，4. 62 (d, 1H) ；4. 2(q, J = 7. 3Hz, 0迅CH3，2H) ；3. 95 (d, 1H) ；3. 1 (m, 1H) ；2. 75 (m, 1H) ；2. 55 (m, 1H)； 2. 05(s,3H) ；2. 0(m,2H) ；1.8(m，2H) ；1. 45 (t，J = 7. 3Hz，0CH2￡H2，3H) 熔点171-173°C实施例14A:合成哌啶-4-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺盐酸盐 (化合物#14A) (HC1盐) 将哌啶-4-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#6A) (2. Og， 6. 4mmol)溶于HC1在1，4-二氧六环中的饱和溶液(50ml)中，并在室温下搅拌此澄清的溶 液半小时。浅黄色固体沉淀析出。加入乙醚(50ml)以析出更多此固体。过滤后，用乙醚 (50ml)洗涤固体，然后在高真空度下干燥，得到为白色固体的哌啶-4-甲酸[6-(2-甲氧基 苯基)嘧啶-4-基]酰胺盐酸盐(化合物#14A，化合物#6A的HC1盐)，2. 2g，98% )0HPLC 纯度 \ = 220nm:98%。ESMS :m/z = 313 (M+l)。'HNMR (500MHz, DMS0_d6) 8 = 11. 2(s, _NH，1H) ；9. 05 (br, NH, 1H) ；8. 95 (s, Ar-H, 1H) ；8. 70 (s, Ar-H, 1H) ；7. 95 (m, Ar-H, 1H) ；7. 5 (m, Ar-H, 1H) ；7. 2 (m, Ar-H, 1H) ；7. 1 (m, Ar-H, 1H) ；3. 95(s，-0CH3，3H) ； 3.3(m，2H) ； 2. 95(m，3H) ； 2. 05(m，2H) ； 1.85(m，2H)。熔点214-217°C实施例15A 合成哌啶-4-甲酸[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺甲磺酸盐 (化合物#15A)(甲磺酸盐)
化合物#6A化合物#15A.CH3S03H& 在0°C，向哌啶-4-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#6A) (2. 5g,8mmol)在甲醇氯仿(1 1,75ml)中的澄清溶液滴加入甲磺酸(5ml，80mmol)，然 后在室温下搅拌形成的澄清溶液半小时。白色固体沉淀析出，然后加入乙醚(150ml)以析
106出更多此固体，其后滤出固体并用乙醚(50ml)洗涤。将此粗品固体溶于90ml的氯仿甲 醇(2 1)，然后在60°c加热混合物以变成澄清溶液。然后加入乙醚(90ml)，并在室温下放 置混浊溶液1小时。滤出形成的结晶固体，用乙醚(50ml)洗涤，然后在高真空度下干燥，得 到为白色固体的哌啶-4-甲酸[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺甲磺酸盐(化合物 #15a，化合物#6a的甲磺酸盐)(2. 9g，89% )。hplc 纯度 λ = 220nm:99%。esms :m/z = 313 (m+l)。1hnmr(500mhz, dms0_d6) δ = 11. 2(s, -nh，1 h) ；9. 0(s, ar-h, 1h) ；8. 7(s, ar-h, 1h) ；8. 6(br, nh, 1h) ；8. 4(br, 1h) ；7. 92 (m, ar-h，1 h) ；7. 55 (m, ar-h，1 h) ；7. 25 (m, ar-h, 1h),7. l(m, ar-h, 1h) ；3.95 (s，-och3, 3h) ；3.35(m，2h) ；2.9(m，3h) ； 2. 35 (s, chaso3hjsh)； 2. 05 (m, 2h) ；1. 80 (m, 2h).熔点268-270°c #16A)
实施例16a 合成哌啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物 步骤i 向2-甲氧基苯基硼酸⑴(10. 3g，68. 2mmol)在300ml的1，4-二氧六环中的溶液 加入iooml饱和碳酸钠水溶液。在室温下用氩气吹洗30min。然后同时加入4-氨基-6-氯 嘧啶(i) (8. 8g，68. 2mmol)和四(三苯基膦)钯(0) (3. 9g，3. 4mmol)，然后再向混合物通入 氩气20min。加热反应混合物至回流，保持12小时(经tlc确认反应结束)，然后在减压下 浓缩。在二氯甲烷和水之间分配剩余物。分出有机层，用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，然 后浓缩。用15%在二氯甲烷中的乙酸乙酯洗脱，通过硅胶柱色谱纯化所得粗品剩余物，得到 6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(xxiv) (8. og)。1hnmr(dmso-ci6) δ = 8. 17 (1η, s), 7. 71 (1h, d)，7. 41(1h，t)，6. 96-7. 06 (2h，m)， 6. 95 (1h, s)，3. 98 (3h, s)。ms :m/z = 202. 1 (m+l)。步骤ii: 在室温下，向6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(xxiv) (5g)在20ml 二氯甲烷中 的溶液加入4-二甲基氨基吡啶(1.2eq)，然后滴加入3-氯羰基哌啶-1-甲酸苄酯(xxv) (1. leq.)。搅拌反应混合物2小时，然后用水洗涤。分出有机层，用硫酸钠干燥，然后浓缩。 使所得粗品剩余物通过硅胶垫并用25%在己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XXVI) (5. Ig)。1HNMr(CDCI3) δ = 8. 95 (1η，s)，8. 78 (1Η，s)，8. 20 (1Η，bs)，7. 91 (1Η，dd)， 7. 45-7. 35 (5H, m)，7. 16-7. 00 (2H, m)，5. 20 (2H, s)，4. 40-4. 26 (1H, m)，4. 18-4. 02 (1H, m)， 3. 98 (3H, s)，3. 41-3. 17 (2H, m)，3. 08-2. 92 (1H, m)，2. 60-2. 41 (1H, m)，2. 18-1. 55 (4H, m)。MS :m/z = 407. 1 (M+1)。步骤III: 在氮气氛下，向化合物3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌 啶-1-甲酸苄酯(3g)在20mL甲醇中的溶液加入10%氢氧化钯(300mg)，然后在氢气氛下， 在室温下搅拌混合物4小时。通过硅藻土过滤反应混合物，然后蒸发溶剂。将乙醚加入产 物中，搅拌混合物，过滤并用乙醚再洗涤所得固体，然后在真空下干燥，得到为白色固体的 哌啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#16A) (1. 8g)。MS :m/z = 312. 9(M+1)。1HnMR(DMSO-CI6) δ = 11. 10(1H, s) ,8. 95 (1H, s) ,8. 67 (1H, s), 7. 84 (1H, d, J = 10Hz)，7. 48 (1H, dd)，7. 20-7. 04 (2H, m)，3. 98 (3H, s)，3. 06-2. 56 (5H, m)，1. 96-1. 32 (4H, m)。实施例17A 合成(S)-哌啶-3-甲酸[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰胺(化 合物#ΠΑ)步骤I将(S)-哌啶-3-甲酸(XXXI)(10. Og, 77. 4mmol)在 80ml THF 和 50ml 水的混合 物中的溶液冷却至0°c，然后同时加入碳酸氢钠(13.0g，15. 5mmol)和氯甲酸苄酯(15. 8g， 92.9mmol)。在0°C搅拌反应混合物6小时，然后在减压下浓缩。用乙醚萃取水层以除去过 量的氯甲酸苄酯，然后用IM HCl溶液酸化至pH 6，其后用乙酸乙酯萃取。分出有机层，用硫 酸钠干燥，然后浓缩，得到(S)-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯(XXXII) (10. 0g，49% )。1H-WR (DMSO-Cl6) δ = 7. 38 (5Η, m)，5· 12 (2Η, s)，4. 19-3. 90 (2H, m)，3. 02 (1H, m)， 2. 44 (1H, m)，2. 05 (1H, m)，1. 80-1. 40 (3H, m)。MS :m/z = 263. 9 (M+1)。步骤II 将(S)-哌啶-1，3-二甲酸 1-苄酯(XXXII) (12. 0g，45. 6mmol)溶于纯草酰氯 (30ml)，加入0. 2mL DMF,并在室温搅拌混合物1小时。通过TLC监测反应结束，其表明在 用少量甲醇处理后形成非极性点。然后在减压下浓缩反应混合物，得到(S)-3-氯羰基哌 啶-1-甲酸苄酯(XXXIII) (12. 66g)，将其直接用于下一反应。
在室温下，向6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (7. 80g，39. lmmol)在90ml 二氯甲烷中的溶液加入4- 二甲基氨基吡啶(5. 70g, 47. Ommol)，然后滴加入N- (S) -3-氯羰 基哌啶-1-甲酸苄酯(XXXIII) (11. Og, 39. lmmol)。搅拌反应混合物2小时，然后用水洗涤。 分出有机层，用硫酸钠干燥，然后浓缩。使所得粗品剩余物通过硅胶垫，用25%在己烷中的 乙酸乙酯洗脱，得到(S)-3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄 酯(XXXIV) (9. 4g,54% )。MS :m/z = 407. 1 (M+1)。1HNMr(CDCI3) δ = 8. 95 (1Η，s)，8. 78 (1Η，s)，8. 20 (1Η，bs)，7. 91 (1Η，dd)， 7. 45-7. 35 (5H, m)，7. 16-7. 00 (2H, m)，5. 20 (2H, s)，4. 40-4. 26 (1H, m)，4. 18-4. 02 (1H, m)， 3. 98 (3H, s)，3. 41-3. 17 (2H, m)，3. 08-2. 92 (1H, m)，2. 60-2. 41 (1H, m)，2. 18-1. 55 (4H, m)。步骤IV
XXXlV化合物# 17A在氮气氛下，向(S)-3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲 酸苄酯(XXXIV) (7. Og)在50ml甲醇中的溶液加入10%氢氧化钯(1. 5g)，然后在氢气氛下， 在室温下搅拌混合物8小时。通过硅藻土过滤反应混合物，然后蒸发溶剂。将所得产物溶 于乙醚，搅拌，过滤，用乙醚洗涤，然后在真空下干燥，得到为白色固体的(S)-哌啶-3-甲酸 [6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#17A) (3.0g，62% )，熔点163_165°C。MS :m/z = 312. 9(M+1)。1HNMR (DMS0_d6) δ = 11. 10 (1H，bs)，8. 95 (1H, s)，8. 67 (1H, s)，7. 84 (1H, d, J = 10Hz)，7. 48 (1H, dd)，7. 20-7. 04 (2H, m)，3. 98 (3H, s)，3. 06-2. 56 (5H, m)，1. 99-1. 32 (4H, m)。分析纯度98. 2% ；手性纯度(R)-对映体8. 82%, (S)-对映体91. 17%.熔点163_165°C。[1185]实施例18A 合成(R)-哌啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(R) (化合物#18A)步骤II 将(R)-哌啶-3-甲酸(XXVII)(5. 0g,39mmol)在 50ml THF 和 20ml 水的混合 物中的溶液冷却至0°c，然后同时加入碳酸氢钠(6. 5g,77. 4mmol)和氯甲酸苄酯(8. 0g， 46. 4mmol)。在0°C搅拌反应混合物30min，接着在室温下搅拌3小时，然后在减压下浓缩。 用乙醚萃取剩下的水相以除去过量的氯甲酸苄酯，然后用1M HC1溶液酸化至pH 6，接着用 乙酸乙酯萃取。分出有机层，用硫酸钠干燥，然后蒸发，得到(R)_哌啶-1，3-二甲酸1-苄 酯(XXVIII) (3. 7g,36% )。MS :m/z = 263. 9 (M+1)。'HNMR (DMS0-d6) 8 = 7. 38 (5H, m)，5. 12 (2H, s)，4. 19-3. 90 (2H, m)，3. 02 (1H, m)， 2. 44 (1H, m)，2. 05 (1H, m)，1. 80-1. 40 (3H, m)。步骤III 将(R)_哌啶-1，3-二甲酸 1-苄酯(XXVIII) (8.00g，30.4mmol)溶于纯草酰氯 (20ml)，加入0. 2ml DMF，然后在室温下搅拌混合物1小时。通过TLC监测反应结束，其表 明在用少量甲醇处理后形成非极性点。在减压下浓缩反应混合物，得到(R)_3-氯羰基哌 啶-1-甲酸苄酯(XXIX) (8. 33g)，将其直接用于下一反应。步骤IV 在室温下，向6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (5. 80g，28. 5mmol)在60ml 二氯甲烷中的溶液加入4-二甲基氨基吡啶(4. 16g，34. 2mmol)，然后滴加入(R)_3_氯羰基 哌啶-1-甲酸苄酯(XXIX) (8. 00g，28. 5mmol)。搅拌反应混合物2小时，然后用水洗涤。分 出有机层，用硫酸钠干燥，然后浓缩。使所得粗品剩余物通过硅胶垫，并用25%在己烷中的 乙酸乙酯洗脱，得到(R)-3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄 酯(XXX) (8. 5g,67% )。lx化合物19a步骤1 在_78°c，将氯甲酸苯酯(0. 20g，1. 3mmol)滴加入6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基 胺(0. 26g, 1. 3mmol)和dipea (0. 33g，2. 6mmol)在无水二氯甲烷(ioml)中的溶液，并在室 温下搅拌混合物过夜。然后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环和脯氨酸甲酯盐酸盐 (0. 26g，1. 3mmol)和dipea (0. 33g，2. 6mmol)，然后在70°c加热混合物过夜。蒸发溶剂，然后ms :m/z = 407. 1 (m+1)。1HNMr(CDCI3) δ = 8. 95 (1η，s)，8. 78 (1η，s)，8. 20 (1η，bs)，7. 91 (1η，dd)， 7. 45-7. 35 (5h, m)，7. 16-7. 00 (2h, m)，5. 20 (2h, s)，4. 40-4. 26 (1h, m)，4. 18-4. 02 (1h, m)， 3. 98 (3h, s)，3. 41-3. 17 (2h, m)，3. 08-2. 92 (1h, m)，2. 60-2. 41 (1h, m)，2. 18-1. 55 (4h, m)。步骤v 在氮气氛下，向(r)-3-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]哌啶甲 酸苄酯(xxx) (7. og)在50ml甲醇中的溶液加入10%氢氧化钯(1. 5g)，然后在氢气氛下，在 室温下搅拌混合物8小时。通过硅藻土过滤反应混合物，然后蒸发溶剂。将所得产物溶于乙 醚，搅拌，过滤，用乙醚洗涤剩余物，然后在真空下干燥，得到为白色固体的(r)-哌啶-3-甲 酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#18a) (3. 5g,72% )，熔点210_213°c。分析纯度95. 49%，手性纯度(r)-对映体91. 62%，(s)-对映体8. 37%。ms :m/z = 312. 9(m+1)。1hnmr(dmso-ci6) δ = 11. 10(1h, s) ,8. 95 (1η, s) ,8. 67 (1η, s), 7. 84 (1η, d, j = 10hz)，7. 48 (1η, dd)，7. 20-7. 04 (2η, m)，3. 98 (3η, s)，3. 06-2. 56 (5h, m)，1. 96-1. 32 (4h, m)。实施例19a 合成1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基]吡咯烷_2_甲 酸(化合物19a)
用乙酸乙酯萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤合并的有机相，用无水硫酸 钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩。通过硅胶柱色谱纯化剩余物(洗脱剂70%乙酸乙 酯/己烷)，得到1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基氨基甲酰基]吡咯烷-2-甲酸甲酯。 收率500mg， 定量。步骤2:在冰浴温度下，在IOmin内，向1-[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基氨基甲酰基] 吡咯烷-2-甲酸甲酯(LX) (500mg, 1. 40mmol)在THF和水(1 1)的混合物中的溶液加入 LiOH水溶液(0. 118g，2.80mmol)，然后在室温下搅拌2小时。蒸发THF，然后用2N HCl酸 化水溶液。然后用乙酸乙酯(2x100ml)萃取此水相，用水和盐水洗涤合并的有机相，用无水 硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩，得到为白色固体的1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧 啶-4-基氨基甲酰基]吡咯烷-2-甲酸。收率210mg，43.8%。MS :m/z = 343 (M+1)。1HNMR (500MHz, DMS0-d6) δ = 1. 91-1. 99 (3H, m), 2. 19 (1Η, m) , 365-3. 56 (2Η, m) ,3. 84 (3Η, s) , 4. 04-4. 03 (1Η, m) , 7. 10-7. 07(1Η, m) , 7. 18(1Η, d, J = 8. 35Ηζ)， 7. 49-7. 46 (1Η, m)，7. 81 (1Η, d, J = 7. 5Ηζ)，8. 41 (1Η, s)，8. 82 (1Η, s)，9. 43 (1Η, br. s)， 12. 25 (1H, b r. s)。实施例20A 合成1-乙酰基哌啶-3-甲酸[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰 胺(化合物#20A) 将哌啶-3-甲酸[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#16A) (llOmg, 0. 352mmol)溶于5ml无水二氯甲烷，冷却至O V，然后同时加入4_n，n- 二甲基氨基吡啶 (90mg,0. 70mmol)和乙酸酐(54mg，0. 53mmol)。在室温下搅拌反应混合物3小时，用碎冰处 理，然后在水和二氯甲烷之间分配。分出有机层，用硫酸钠干燥，然后浓缩，得到1-乙酰基 哌啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#20A) (105mg，84. 13% )0MS :m/z = 356. 1 (M+1)。1hnmr(dmso-ci6) δ = 11. o (1h，s)，8. 95 (1h，s)，8. 69 (1h，2s)，7. 88 (1h，d，J =10Hz) ,7. 48 (1H, t), 7. 20 (1H d, J = 10Hz)，7. 09 (1H，t)，4. 36 (1H，m)，3. 92 (3H，s)， 3. 06-2. 56 (5H, m)，2. 08-1. 32 (7H, m)。实施例21A 合成1-甲磺酰基哌啶-3-甲酸[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]酰 胺(化合物#21a) 将哌啶-3-甲酸[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#16A) (llOmg, 0. 352mmol)溶于5mL无水二氯甲烷，冷却至0°C，然后同时加入三乙胺(13. Og，15. 5mmol) 和甲磺酰氯(60mg，0. 53mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，用碎冰处理，然后在水和二 氯甲烷之间分配。分出有机层，用硫酸钠干燥，然后浓缩，得到1-甲磺酰基哌啶-3-甲酸 [6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺(化合物#21A) (90mg,80. 3% )0MS :m/z = 391. 46(M+1)。NMR (DMS0-d6) 8 = 11. 2 (1H，s)，8. 94 (1H，s)，8. 67 (1H，1)，7. 88 (1H，d，J =10Hz)，7. 48 (1H, t)，7. 20 (1H, d, J = 10Hz)，7. 07 (1H, t)，3. 88 (3H, s)，3. 72 (1H, m)， 3. 60-3. 02 (2H, m)，2. 98 (3H, s)，2. 96-2. 60 (2H, m)，2. 02-1. 43 (4H, m)。实施例22A 合成哌啶-3-甲酸[6_(2_甲氧基苯基)_2_甲基嘧啶_4_基]酰胺 (化合物#22A)步骤I 向2-甲氧基苯基硼酸(X) (lg,6. 6mmol)在THF(lOml)和水(4ml)中的溶液加 入 6-氯-2-甲基嘧啶-4-基胺(XXXV) (0. 947g，6. 6mmol)。在 0°C，将二醋酸钯(0. 074g, 0. 3mmol)、三苯基膦(0. 175g，6. 6mmol)和碳酸钠(2. 06g, 19. 8mmol)加入混合物。在室温 下过夜搅拌反应混合物，并通过TLC监测反应。反应结束后，在减压下浓缩反应混合物，然 后用乙酸乙酯和水萃取剩余物。分出有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，然后浓缩。通 过硅胶柱色谱纯化所得粗品剩余物，用25% -30%在己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到0. 450g 6-(2-甲氧基苯基)-2-甲基嘧啶-4-基胺(XXXVI)。步骤II 将 6_(2_ 甲氧基苯基)-2_ 甲基嘧啶-4-基胺(XXXVI) (0. lllg,0. 512mmol)溶于 3ml无水二氯甲烷，在室温下，滴加DMAP(0. 075g，0. 614mmol和3-氯羰基哌啶-1-甲酸苄 酯(XXV) (0. 155g，0. 563mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液，并搅拌反应混合物3小时。然 后将水加入反应混合物，然后用二氯甲烷萃取。分出有机层，用无水磷酸钠干燥，然后浓缩， 得到0. 270g3-[6-(2-甲氧基苯基)-2_甲基嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶-1-甲酸苄酯(XXXVII)。步骤V 将3-[6-(2_甲氧基苯基)-2_甲基嘧啶_4_基氨基甲酰基]哌啶甲酸苄酯 (XXXVII) (0. 270g，0. 586mmol)溶于甲醇(5ml)，并向其加入 10% Pd(0H)2(0. 125g)，然后在 氢气氛下过夜搅拌混合物。通过TLC监测反应。结束后，通过硅藻土层过滤反应混合物， 然后浓缩，得到粘性油，在乙醚中搅拌此粘性油，沉淀析出白色固体。过滤得到0. 160g哌 啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)-2-甲基嘧啶-4-基]酰胺(化合物#22A)。MS :m/z = 327 (M+1)。1HwrGOOMHz, DMS0-d6) δ = 1· 5_1· 6 (m，2Η) ； 1· 7_1· 9 (m，2Η) ； 2. 0-2. 1 (m, 2H)； 2.5(s，3H) ；2. 8-3. 0(t, 1H) ；3· 0_3· 1 (m，2H) ；3. l_3.2(d，2H) ；3. 1-3. 2(d,2H) ；3.8(s，3H)； 7. 0-7. 1 (m, 1H) ；7. 1-7. 2 (m, 1H) ；7. 4-7. 5 (m, 1H) ；7. 8-7. 9 (m, 1H) ；8. 5 (s, 1H) ；8. 8 (bs, 2H) ； 11.0 (s，1H)。熔点229-230°C实施例23A:合成1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]_3_哌啶_3_基脲盐酸盐 (化合物#23A)步骤I 向250ml圆底烧瓶加入4，6_ 二氯嘧啶(2. 67g，17. 95mmol)、2_甲氧基苯基硼酸 (3. OOg, 19. 7mmol)、乙腈(50ml)和碳酸钠(2. 95g，26. 9mmol)。用氮气吹洗混合物15分钟， 然后加入Pd (PPh3) 4 (0. 48g，0. 41mmol)，接着在80°C，在氮气氛下加热所得黄色混合物48小 时。冷却后，用NaHCO3水溶液稀释溶液，然后用二氯甲烷萃取。用硫酸钠干燥合并的有机 萃取液，过滤，然后在真空中浓缩。通过硅胶色谱纯化剩余物(2-5%乙酸乙酯/己烷)，得 到为白色固体的4-氯-6-(2-甲氧基苯基)嘧啶。收率2.5gMS :m/z = 221(M+1)。1Hnmr(SoomHzjDmSo-CI6) δ = 3. 95 (3Η, s) , 7. 03 (1Η, d, J = 8. 5Ηζ), 7. 12-7. 09 (1Η, m)，7. 49-7. 46 (2Η, m)，8. 09-8. 06 (1Η, m)，9. 02 (1Η, s)。步骤II 将25%氨溶液(10ml)加入4_氯_6-(2_甲氧基苯基)嘧啶(2g，9. 06mmol)在1， 4-二氧六环(10ml)中的溶液，然后在110°C，在密封管中在持续搅拌下加热混合物8小时。 将反应混合物冷却至室温，在减压下浓缩，然后用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥合并的有机 萃取液，过滤，然后在真空下浓缩，得到为白色固体的6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺。收 率1. 6g，87. 9%。MS :m/z = 202 (M+1)。'HNMR (500MHz, DMS0_d6) 8 = 3. 85 (3H, s) ,6. 81 (2H, br. s), 7. 06-7. 01 (2H, m)， 7. 14 (1H, d, J = 8. 2Hz)，7. 43-7. 40 (1H, m)，7. 85 (1H, d, J = 7. 4Hz)，8. 41 (1H, s)。步骤III 向6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (1.0g，4. 9mmol)和碳酸钾(4. 0g, 29mmol)在2-丁酮(10ml)中的混合物，加入甲酸氯乙酯(0. 50ml, 4. 9mmol)，然后在80°C使 混合物回流3小时。通过TLC监测反应。反应结束后，加入水，然后用乙酸乙酯萃取混合物。 分出有机层，用无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到0.60g[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基] 氨基甲酸乙酯(XL)。步骤IV 使[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]氨基甲酸乙酯(XL) (0. 32g, 1. lmmol)、3-氨 基哌啶-1-甲酸叔丁酯(XLI) (0. 23g，1. lmmol)和甲苯(4ml)的混合物在120°C禾口 lOOpsi 压力下接受微波条件lOmin。通过TLC监测反应。反应结束后，加入水，然后用乙酸乙酯萃 取混合物。分出有机层，用无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到0.40g 3-{3-[6-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]脲基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(XLII)。步骤V 将HC1乙醚溶液(2ml)加入3-{3-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}哌 啶-1-甲酸叔丁酯(XLII) (0. 20g，0. 47mmol)在无水二氯甲烷(2ml)中的溶液，然后在室温 下搅拌混合物2小时。通过TLC监测反应。结束后，从反应混合物中除去溶剂，得到0.20g l-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]-3-哌啶-3-基脲盐酸盐(化合物#23A)。MS :m/z = 328 (M+1)。
115[1257]1HwrgoomHzjDmso-CI6) δ = I. l-l. 2(m, m) ； 1· 6-1· 7(m，2H) ； 1. 9-2. 1 (m,2H)； 2. 9-3. 1 (m, 2H) ；3. 2-3. 3 (m, 2H) ；4. 0 (s, 3H) ；7. 0-7. 1 (m, 1H) ；7. 1-7. 2 (m, 1H) ；7. 4-7. 5 (m, 1H) ；7. 8-7. 9 (m, 1H) ；8. 19 (d, 1H) ；8.2(s，lH) ；8. 8(s, br. , 1H) ；8.9(s，lH) ;10.0(s，lH)。实施例24A 合成1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]_3_哌啶_4_基脲盐酸盐 (化合物#24A)步骤I: 使[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]氨基甲酸乙酯(XL) (0. 30g, 1. lmmol)、4-氨 基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 23g，1. Immo 1)和甲苯(4ml)的混合物在120°C和IOOpsi压力下 接受在微波条件10分钟。通过TLC监测反应。反应结束后，加入水，然后用乙酸乙酯萃取 混合物。分出有机层，用无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到0. 250g的4-{3-[6-(2_甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]脲基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(XLIV)。步骤II: 向4-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲基}哌啶甲酸叔丁酯(XLIV) (0. 250g，0. 585mmol)在无水二氯甲烷(2ml)中的溶液，加入HCl乙醚溶液(2ml)，然后在室 温下搅拌混合物2小时。通过TLC监测反应。结束后，从反应混合物中除去溶剂，得到0. 20g 的1-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]-3-哌啶-4-基脲盐酸盐(化合物#24A)。MS :m/z = 328 (M+1)。1HwrGOOMHz, DMS0-d6) δ = 1. 1-1. 2 (m, 1Η) ； 1· 5_1· 7 (m，2Η) ； 1· 9_2· O (m，2Η)； 2. 9-3. 1 (m, 2H) ；3. 2-3. 3 (m, 2H) ；3. 9(s, 3H) ；7. 0-7. 1 (m, 1H) ；7. 1-7. 2 (m, 1H) ；7. 4-7. 5 (m, 1H) ；7. 8-7. 9(m，2H) ；8. 0—8. 1 (m，1H) ；8.2(s，lH) ；8.5(bs，lH) ；8.7(bs，lH) ；8.8(s，lH)； 9. 6 (s，1H)。实施例25A:合成N-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]_2，2_ 二甲基丙酰胺(化 合物#25A) 在冰浴温度下，在氮气氛下，向6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (0. 15g， 0. 74mmol)在THF(IOml)中的溶液加入NEt3 (0. 210ml, 1. 49mmol)，然后在相同温度下加入 三甲基乙酰氯(XLV) (0. 819mmol)。在0°C搅拌反应混合物1小时，然后升至室温并再搅拌1小时。反应结束后，在减压下除去溶剂。将反应粗产物溶于乙酸乙酯(50ml)，然后用水洗 涤(2x20ml)。分出有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩至干，得到 粗产物，其经硅胶柱色谱(20%乙酸乙酯/己烷)进一步纯化，得到N-[6-(2-甲氧基苯基) 嘧啶-4-基]-2，2-二甲基丙酰胺。收率106mg，50%。实施例26A 合成N-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]_2_苯基乙酰胺(化合物 #26A) 在冰浴温度下，在氮气氛下，向6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (0. 15g， 0. 74mmol)在THF(IOml)中的溶液加入NEt3 (0. 210ml, 1. 49mmol)，然后在相同温度下加入 苯基乙酰氯(XLVI) (0. 819mmol)。在0°C搅拌反应混合物1小时，然后升至室温并再搅拌 1小时。如上所述进行常规后处理，然后经硅胶柱色谱纯化(30%乙酸乙酯/己烷)，得到 N-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙酰胺。收率75mg，30%。实施例27A 合成N-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]苯甲酰胺(化合物#27A) 在冰浴温度下，在氮气氛下，向6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基胺(XXIV) (0. 15g， 0. 74mmol)在THF(IOml)中的溶液加入NEt3 (0. 210ml, 1. 49mmol)，然后在相同温度下加入 苯甲酰氯(XLVII) (0. 819mmol)。在0°C搅拌反应混合物1小时，然后升至室温并再搅拌1小 时。如上所述进行常规后处理，然后经硅胶柱色谱纯化(20%乙酸乙酯/己烷)，得到N-苯 甲酰基-N-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]苯甲酰胺(XLVIII)。收率122mg，40%。在冰浴温度下，将IN NaOH水溶液(2equiv.)缓慢地加入所得N-苯甲酰 基-N-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]苯甲酰胺和2ml水-甲醇的混合物。经TLC监测，在10分钟内反应结束。除去溶剂，然后将剩余物溶于二氯甲烷 (50ml)，接着用水洗涤(2x20ml)，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，然 后浓缩至干，得到粗产物，其经硅胶柱色谱进一步纯化(用20乙酸乙酯/己烷)，得到 N-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]苯甲酰胺。收率45，5mg，50%。实施例28A 合成6-氧代哌啶_3_甲酸[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺 (化合物#28A) 在冰冷条件下，向6-氧代哌啶-3-甲酸(XLIX) (0. 22g，1. 5mmol)在无水 DMF(lOml)中的溶液加入 HBTU(1. 13g,2. 98mmol)和 DIPEA(0. 40ml，2. 3mmol)，然后在室温 下搅拌45分钟。在冰浴温度下，向此反应混合物滴加在无水DMF中的6-(2_甲氧基苯基) 嘧啶-4-基胺(XXIV) (0. 30g, 1. 5mmol)。然后在120°C加热反应混合物4小时。反应结束 后，冷却，然后完全蒸发DMF。将剩余物溶于乙酸乙酯(30ml)，用水(2x15ml)和盐水洗涤，用 无水硫酸钠干燥，然后在减压下蒸发。通过使用硅胶快速柱色谱(10%甲醇/ 二氯甲烷)最 终纯化，得到6-氧代哌啶-3-甲酸[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]酰胺。收率78. 2mg, 17%。实施例29A:合成1-(2_ 二甲基氨基乙基)-3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基] 脲(化合物#29A) 在-78°C，向6-(2_ 甲氧基苯基)嘧啶 _4_ 基胺(XXIV) (0. 400g, 1. 98mmol)和 DIPEA(0. 300g,2. 38mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液滴加入氯甲酸苯酯(0. 370g, 1. 98mmol)。然后在室温下搅拌反应混合物16小时。蒸发二氯甲烷，然后将剩余物溶于1， 4-二氧六环(15ml)。加入N，N-二甲基乙二胺(L) (0. 160g，1. 98mmol)，然后回流混合物14 小时。蒸发溶剂，然后将粗产物再溶于乙酸乙酯，用水(2x50ml)和盐水洗涤，用无水硫酸钠 干燥，然后在减压下浓缩。所得固体粗产物经硅胶柱色谱(15%甲醇/ 二氯甲烷)进一步纯 化，得到1-(2_ 二甲基氨基乙基)-3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲。收率293mg， 47%。实施例30A:合成(3-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}苯基)乙酸 (化合物30A)
化合物30A 在_78°C，将氯甲酸苯酯(0. 15g,99mmol)滴加入6_(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基 胺(XXIV) (0. 20g,0. 99mmol)和 DIPEA(0. 250g，1. 98mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶 液，然后在室温下过夜搅拌混合物。然后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环和(3-氨 基苯基)乙酸(0. 15g，0.99mmol)，并在70°C过夜加热混合物。蒸发溶剂，然后用乙酸乙酯 萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，然后 在真空旋转蒸发器中浓缩。用乙醚洗涤剩余物，得到为有色固体的(3-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲基}苯基)乙酸。[1287]MS :m/z = 379 (M+1)。1HNMR (500MHz, DMS0_d6) δ 3. 57 (2Η, s), 3. 90 (3Η, s), 6. 96 (1Η, d, J = 7· 5Ηζ)， 7. 11 (1Η, d, J = 7. 5Ηζ)，7. 21 (1Η, d, J = 8Ηζ)，7. 20 (1Η, d, J = 8Ηζ)，7. 45-7. 43 (1Η, s)， 7. 50 (1Η, d, J = 6. 5Ηζ)，7. 94 (1Η, d, J = 3Ηζ)，8. 23 (1Η, s)，8. 88 (1Η, s)，9. 82 (1H, br. s)， 10. 21 (1H, br. s)，12. 34 (1H, br. s)。实施例31A:合成{3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}乙酸(化合物31A) 步骤1:在-78 °C，将氯甲酸苯酯(0. 370g，1. 98mmol)滴加入6_ (2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基胺(XXIV) (0. 25g, 1. 2mmol)和 DIPEA (0. 31g，2. 4mmol)在二氯甲烷(IOml)中的溶 液，然后在室温下过夜搅拌混合物。然后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环和甘氨酸 乙酯盐酸盐(0. 17g,1.2mmol)和DIPEA (0. 31g，2. 4mmol)，然后在70°C过夜加热混合物。蒸 发溶剂，然后用乙酸乙酯萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤乙酸乙酯相， 用无水硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩。剩余物经硅胶柱色谱纯化(洗脱剂: 70%乙酸乙酯/己烷)，得到{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲基}乙酸乙酯。收 率:190mg,47. 8%。步骤2:在冰浴温度下，在IOmin内，向{3-[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}乙酸 乙酯(LII) (190mg，0. 57mmol)在THF和水的混合物(1 1)中的溶液加入LiOH(50. Omg， 1. 12mmol)水溶液，然后搅拌混合物2小时。蒸发THF，然后用2N HCl酸化水溶液。其后用 乙酸乙酯(2x100ml)萃取此水相。分出有机相，合并，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥， 然后在真空旋转蒸发器中浓缩，得到为白色固体的{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基] 脲基}乙酸。收率184mg， 定量。MS :m/z = 303 (M+1)。1HNMR (500MHz, DMS0-d6) δ = 3· 73 (3Η，s)，3· 91 (2Η，s)，7· 12—7. 10 (1Η，m)， 7. 21 (1Η, d, J = 8Ηζ)，7. 54-7. 51 (1Η, m)，7. 86 (1H, d, J = 7. 5Hz)，8. 18 (2H, m)，8. 21 (1H, br. s)，8. 87 (1H, br. s)，10. 28 (1H, br. s)。实施例32A:合成2-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}丙酸(化合物 32A) 步骤1 在_78°C，将氯甲酸苯酯(0. 21g，1.4mm0l)滴加入6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基 胺(XXIV) (0. 28g，1. 4mmol)和 DIPEA(0. 35g，2. 8mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液， 然后在室温下过夜搅拌混合物。其后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环和丙氨酸乙酯 盐酸盐(0. 21g,1.4mmol)和DIPEA(0. 35g，2. 8mmol)，然后在70°C过夜加热混合物。蒸发溶 剂，然后用乙酸乙酯萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤合并的有机相，用 无水硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩。剩余物经硅胶柱色谱纯化(洗脱剂45% 乙酸乙酯/己烷)，得到2-{3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲基}丙酸乙酯。收率 470mg，97. 2%。步骤2:在冰浴温度下，在30min内，向2-{3_[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}丙 酸乙酯(LIV) (470mg，1. 4mmol)在THF和水的混合物(1 1)中的溶液加入LiOH水溶液 (0. llg，2.7mmol)，然后搅拌2小时。蒸发THF，然后用2N HC1酸化水溶液。然后用乙酸乙 酯(2x100ml)萃取此水相，分出并合并有机相，然后用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥， 然后在真空旋转蒸发器中浓缩，得到为白色固体的2-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基] 脲基}丙酸(化合物#32A)。收率223mg，50. 4%。MS :m/z = 317(M+1)。'HNMR (500MHz, DMS0_d6) 8 = 1. 38-1. 37 (3H, d, J = 6. 5Hz) ,3. 87 (3H, s)， 4. 29-4. 26 (1H, m)，7. 10 (1H, d, J = 7. 5Hz)，7. 19 (1H, d, J = 7. 5Hz)，7. 48 (1H, s)，7. 92 (1H, m)，8. 11 (1H, s)，8. 27 (1H, br. s)，8. 80 (1H, s)，9. 74 (1H, s)，12. 80 (1H, br. s)。实施例33A:合成2-{3-[6_(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]脲基}_2_甲基丙酸 (化合物33A) 步骤1 在_78°C，将氯甲酸苯酯(0. 21g，1.4mm0l)滴加入6_ (2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基 胺(XXIV) (0. 28g, 1. 4mmol)和 DIPEA (0. 36g, 2. 8mmol)在无水二 氯甲烷(10ml)中的溶液，然后在室温下过夜搅拌混合物。其后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环和2-氨 基-2-甲基丙酸乙酯(0. 17g,1.2mmol)和DIPEA(0. 36g，2. 8mmol)，然后在70°C过夜加热混 合物。蒸发溶剂，然后用乙酸乙酯萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤合并的 有机相，用无水硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩。剩余物经硅胶柱色谱纯化(洗 脱剂30%乙酸乙酯/己烷)，得到2-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲基}-2-甲 基丙酸乙酯。收率370mg，73. 5%。步骤2:在冰浴温度下，在lOmin内，向2-{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]脲 基}-2_甲基丙酸乙酯(LVI) (370mg, 1. 03mmol)在THF和水的混合物(1 1)中的溶液加 入LiOH水溶液(87. Omg, 2. 06mmol)，然后在室温下搅拌2小时。蒸发THF，然后用2N HC1 酸化水溶液。然后用乙酸乙酯(2x100ml)萃取此水相，然后用水和盐水洗涤合并的有机相， 用无水硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩，得到为白色固体的2-{3-[6-(2_甲氧 基苯基)嘧啶-4-基]脲基} -2-甲基丙酸。收率235mg，69. 1 %。MS :m/z = 331(M+1)。'HNMR (500MHz, DMS0_d6) 8 1. 48 (6H, s)，3. 87 (3H, s)，7. 10-7. 04 (1H, m)，7. 18 (1H, d, J = 8Hz)，7. 5-7. 46 (1H, m)，7. 90 (1H, d, 7. 5Hz)，8. 04 (1H, s)，8. 37 (1H, br. s)，8. 78 (1H, s)，9. 62 (1H, br. s)，12. 50 (1H, br. s)。实施例34A:合成{3-[6-(2-甲氧基苯基)嘧啶_4_基]甲基脲基}乙酸(化 合物34A) 步骤1:在_78°C，将氯甲酸苯酯(0. 21g，1.4mm0l)滴加入6_(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基 胺(XXIV) (0. 28g，1. 4mmol)和 DIPEA(0. 35g，2. 8mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液， 然后在室温下过夜搅拌混合物。其后蒸发二氯甲烷，加入无水1，4_ 二氧六环、肌氨酸乙酯 盐酸盐(0. 213g,1.4mmol)和DIPEA(0. 35g，2. 8mmol)，然后在70°C过夜加热混合物。蒸发 溶剂，然后用乙酸乙酯萃取粗产物(2x100ml)。用水(2x50ml)和盐水洗涤合并的有机相，用 无水硫酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩。剩余物经硅胶柱色谱纯化(洗脱剂70% 乙酸乙酯/己烷)，得到{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧啶-4-基]-1-甲基脲基}乙酸乙酯。 收率217mg，44. 9%。步骤2:[1318]在冰浴温度下，在IOmin内，向{3-[6_(2_甲氧基苯基)嘧啶_4_基]甲基脲 基}乙酸乙酯(LVIII) (370mg, 1. 03mmol)在THF和水的混合物(1 1)中的溶液加入LiOH 水溶液(87. Omg, 2. 06mmol)，然后在室温下搅拌2小时。蒸发THF，然后用2N HCl酸化水溶 液。然后用乙酸乙酯(2x100ml)萃取此水相，然后用水和盐水洗涤合并的有机相，用无水硫 酸钠干燥，然后在真空旋转蒸发器中浓缩，得到为棕色固体的{3-[6-(2_甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]-1-甲基脲基}乙酸。收率34mg，10.4%。MS :m/z = 317(M+1)。1HNMR (500MHz, DMS0-d6) δ = 3. 03 (3H, s) , 3. 85 (3H, s) , 4. 11 (2Η, s),
7.10-7. 07 (1Η, s)，7. 18 (1Η, d, J = 8Ηζ)，7. 49-7. 76 (1Η, m)，7. 82 (1Η, d, J = 6. 5Ηζ)，
8.36 (1Η, s)，8. 82 (1H, s)，9. 57 (1H, br. s)，12. 70 (1H, br. s)。牛物学实施例牛物学实施例1I.用于分析炎性疼痛和神经性疼痛的行为动物模型用于分析炎性疼痛和神经性疼痛的若干动物模型是已知的。所述模型具有共同的 特征在例如形成神经损害(如保留性神经损伤，SOT)后，或者使实验动物暴露于伤害性刺 激后(如注射福尔马林或角叉菜胶)，通过可定量的行为成分如对用von Frey毛的机械性 刺激(或对使用激光源的温度刺激或舔舐行为)的缩足阈值，测量由所述干预形成的疼痛 体征。将这些反应解释为等同于人类的机械性和温度异常性疼痛(对机械性刺激的超敏感 性)或痛觉过敏。保留性神经损伤模型(SNI模型，由Decosterd和Woolf (2000)开发，参见图1)的 特征在于临床上相关的神经损害的形成和外科手术干预之后的行为实验(如von Frey测 定)。所述模型成为常用的神经损伤模型，其由结扎和切断坐骨神经的两个分支(即胫神 经和腓总神经)并保持腓肠神经完整无损组成。所述SNI模型引起机械性敏感性和冷敏感 性的快速(少于24小时)、持久和重要的变化，这些变化接近地模拟临床神经性疼痛的特 征。已表明具有这些类型的神经损伤的动物显现出与神经性疼痛患者报告的那些相似的对 机械性刺激的异常痛觉和超敏感性(异常性疼痛)。或者，在小鼠中的福尔马林测定是炎性疼痛和神经性疼痛的伤害感受的有效且 可靠的行为模型。它对各类镇痛药灵敏(Hunskaar S，Hole K，Pain. 1987 Jul ；30(1) 103-14.)。所述伤害性刺激由在左后爪的背侧面的皮肤下注射10 μ 1稀福尔马林(2%在盐 水中)(皮下或足底注射入左后爪)。其反应是舔舐和缩回被注射的爪。对于角叉菜胶测定，将25μ 11%角叉菜胶(在盐水中)皮下注射入小鼠单只后爪 (同侧爪)。随后的炎症导致该爪持久性肿胀和超敏感性(对机械性刺激和温度刺激)。 角叉菜胶测定是用于预测测试化合物的抗炎活性的标准实验室测定。使用爪水肿测定和 Hargreaves测定(因光源的温度刺激而缩足)来读数。至于本发明，在SOT模型、角叉菜胶测定和福尔马林测定中，测定给药式I的细胞 周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制性化合物对产生炎性疼痛和神经性疼痛的效力。下文详述 实验步骤和结果。生物学实施例2Α.保留性神经损伤(SNI)-慢性神经性疼痛模型
122[1331]如上所述，保留性神经损伤(SNI)模型(参见图1)包括损伤实验动物的坐骨神经 的三个末端分支中的两支(胫神经和腓总神经)，保持腓肠神经完整无损。SNI在未受损 的腓肠神经皮肤范围产生机械性和温度异常性疼痛(Decosterd和Woolf，Pain 2000 ；87 149-158. (2) Tsujino 等，Mol. Cel. Neurosci. 2000 ；15 :170_182)。1.在野生型小鼠中形成保留性神经损伤(神经损害)在外科手术准备前，按4μ Ι/g，用1 1 2比例的Hypnorm(0. 315mg/ml枸 橼酸芬太尼 +10mg/ml 氟阿尼酮 Janssen)/Hypnovel (5mg/ml 咪达唑仑；Roche Applied Sciences) /水麻醉野生型小鼠(品系C3HeB/FeJ)(年龄、性别和体重匹配的)。随后，在无菌的预防措施下，在所有小鼠的同侧右后腿的膝盖水平的略上方做切 口，暴露坐骨神经的三个末端分支腓总神经、胫神经和腓肠神经。用7/0丝紧紧地结扎腓 总神经和胫神经，然后结扎的远端切断，切除 2mm的远端神经残段。在操作期间保持腓肠 神经分支不受损伤(本文表示为“同侧SOT”)。缝合覆盖在上面的肌肉和皮肤，并使动物恢 复健康和治愈伤口。在相同小鼠中，暴露但不损伤对侧左后腿的坐骨神经分支(本文表示 为“对侧SNI”)。下文中将经受保留性神经损伤的小鼠表示为“SNI小鼠”。2.向SNI小鼠给药⑶K抑制性化合物术后恢复和伤愈后，SOT小鼠口服(p.o.)接受CDK抑制性化合物的注射液。在此 实施例中，给药化合物#16A。在von Frey测定(机械性异常性疼痛)前30min，口服给药30mg/kgCDK抑制剂 (溶于400μ1 2%羟丙基纤维素；0.25%乳酸(85%溶液))。作为阴性对照，在von Frey 测定前30min，通过单次口服给药相同量(400 μ 1)的2%羟丙基纤维素；0. 25%乳酸(85% 溶液)载体。在SNI后第107天，注射抑制剂或载体，并随后在von Frey测定中测定对机械性 刺激的缩足阈值。在各注射后30min，在von Frey测定中，测定对机械性刺激的反射感受伤 害的反应。如下所述，在von Frey测定中，分析向SNI小鼠给药CDK抑制剂对产生机械性异 常性疼痛的效力。3.给药⑶K抑制性化合物后SNI小鼠的行为试验(von Frey测定)在von Frey测定中，测试经受SOT并随后给药本发明的化合物的小鼠，来测定 神经损伤后和给药后的机械性异常性疼痛的体征(Decosterd andffoolf, Pain 2000 ；87 149-158)。此测定法测定机械性阈值，在此阈值时，正常情况下并疼痛的刺激被动物认为是 不舒服或疼痛的。分别建立同侧SOT和对侧SOT的基线。使用根据Chaplan 等(1994)以及 Malmberg 和 Basbaum(1998)的 “up-down” 法，
定量SOT小鼠的机械性阈值。将小鼠置于直径约9. 5cm, 14cm高，带有近顶部的4个通风孔和有机玻璃盖的有机 玻璃圆筒中。将所述圆筒置于高处的网面(7x7mm2)上。在试验日前，使小鼠适应测试圆筒 1-2小时。在试验日，使小鼠适应圆筒约1小时，其中适应时间取决于因素如小鼠的品系以 及以前已被测试的次数。通常，当小鼠平静并停止探索新环境时，可以开始测试。为了测试小鼠，使用细丝2. 44,2. 83,3. 22,3. 61,3. 84,4. 08 和 4. 31 (力量范围= 0.04-2. Og)。首先使用3.61mN细丝。将所述细丝温和地施加于一只爪的足底表面，使其弯曲，然后保持适当的位置2-4秒。每当出现对刺激的正反应(屈曲反应)时，施加弱一级的 von Frey毛；每当出现负反应(无反应)时，施加强一级的力量。继续测试，直至在第一次 反应变化后，得到了对另外4次刺激的反应。测试的最高力量为4. 31。截止阈值为2g。按照在 Chaplan 等，Journal of Neuroscience Methods. 53(1) :55_63，1994Jul 中所述，使用得分系列(即“屈曲反应”和“无反应”)以及施加的最后的细丝的力量，来测 定机械性阈值。测定的阈值是预期动物会以50%的几率对其作出反应的力量。完成von Frey测定后，处死小鼠。4.给药化合物#16A对产生神经性疼痛的效力如上所述向SNI小鼠给药化合物#16A。如上所述进行Von Frey测定。化合物 #16A对SNI小鼠具有痛觉减退效力。在术后的第107天，在动物的同侧和对侧爪进行Von Frey测定。经化合物#16A治疗的动物表现出阈值显著提高，表明对机械性刺激敏感性降低 (减轻异常性疼痛)。相比之下，经仅口服载体治疗的动物表现出低阈值，表明高的异常性疼痛。这些结果表明，化合物#16A在慢性神经性疼痛的模型中作为痛觉减退药物是有 效的。牛物学实施例3福尔马林测定_炎性过程/炎性疼痛和慢性神经性疼痛的模型在小鼠中的福尔马林测定是伤害感受的有效且可靠的行为模型，并且对各类镇痛 药灵敏(Hunskaar S，Hole K，Pain. 1987 Jul ；30(1) 103-14.)。所述伤害性刺激是将 10 yl 稀福尔马林(2%在盐水中)皮下或足底注射入左后爪。其反应是舔舐和缩回被注射爪。所 述反应表现为两个阶段——注射后0-5min的早期/急性期，以及注射后5-30min的后期/ 慢性期——这反映炎性过程的不同部分(Abbott等，1995)。以下方案描述进行该实验的一 种可能方式1.注射福尔马林和给药⑶K抑制性化合物在此测定中，使用年龄、性别和体重匹配的野生型小鼠(C3HeB/FeJ)。在注射福尔 马林前，将动物随机地细分成实验组，每组10只动物。在注射福尔马林前30min，可以通过 i.p.注射给药适合剂量的⑶K抑制剂(溶于(400 yl)的2%羟丙基纤维素；0.25%乳酸 (85%溶液))。类似地，在注射福尔马林前30min，可以通过i.p.注射给药I K激酶(IKK) 抑制剂(30mg/kg)(在(400 yl) 2%羟丙基纤维素；0. 25%乳酸(85%溶液)中)(阳性对 照)，或者仅仅注射载体((400 ul)2%羟丙基纤维素；0. 25%乳酸(85%溶液))(阴性对 照)。为了注射福尔马林，用纸巾抓着小鼠，以免其动作干扰注射。将被注射的后爪抓在 拇指和食指间，然后使用Hamilton注射器将10 yl福尔马林(2% )在两个前隆凸之间皮下 注射入(s. c.)后爪足底。如下所述，分析经福尔马林处理的小鼠和经抑制剂治疗的小鼠的 行为。2.注射福尔马林和给药CDK抑制性化合物后小鼠的行为分析通过自动跟踪系统(Ethovision3.0 Color Pro, Noldus, ffageningen, Netherlands)监视经福尔马林处理的小鼠的行为即舔舐和缩足，持续指定的时间注射福 尔马林后5min开始测定，然后在注射福尔马林后30min结束。此时间段包含福尔马林引起的伤害感受(痛觉)的II期(痛觉过敏)。分别使用两种不同的荧光染料来局部地标记被注射的后爪(黄色染 料)(Lumogenyellow ；BASF Pigment, Cologne, Germany)和对侧爪(蓝色染料) (Lumogenviolet ；Kremer Pigmente, Aichstetten, Germany)。为了测定藤甜行为，用 CCD 照 相机监视小鼠。监视并录像后，使用Etho Vision软件(Ethovision3. OColor Pro，Noldus， ffageningen,Netherlands)或者通过手动分析，来分析录像。测定荧光点大小和荧光强度， 然后计算经舔和咬后荧光点大小的减小。通过比较被治疗爪对未被治疗爪的点大小的减 少，来自动计算总的舔舐时间强度。作为测定读数的另一种变型，根据录像文件手工地跟踪各个动物的舔舐行为。在 注射福尔马林后30分钟内记录舔舐时间，并针对3种不同的舔舐区(足背、足底、足趾)进 行细分。可以计算各动物以及各实验组的总舔舐时间，并且用作测定化合物效力的参数。结果发现，在注射福尔马林前接受载体处理的小鼠(阴性对照)表现出持久的舔 舐时间并且在经福尔马林治疗处理的爪上荧光点的大小显著减小。相比之下，在经测试化合物/福尔马林处理的小鼠中，可以观察到舔舐时间缩短， 并且因此经福尔马林处理的爪的荧光点大小未显著缩小。在经I K激酶抑制剂(IKK;IKK 的功能参见图2，阳性对照)处理的对照小鼠中，观察到同样的功效，即舔舐时间缩短并且 荧光点大小变化微小。此观察结果表明，在经CDK9抑制剂治疗的小鼠中，炎性疼痛/慢性炎性疼痛知觉 减弱，并表明测试化合物的痛觉减退效力。生物学实施例4小鼠中的角叉菜胶测定_炎症和炎性疼痛的模型角叉菜胶引起的爪水肿模型是用于预测各化合物的抗炎活性和减轻炎症诱导的 疼痛知觉的标准实验室测定。以下方案描述进行该实验的一种可能方式。基本测定包括测定对刺激物如角叉菜胶作出的水肿和机械性以及温度超敏感性 的反应。通过将25μ 11%角叉菜胶(在盐水中)皮下注射入小鼠后爪(同侧爪)来诱导炎 症和产生的炎性疼痛。在注射角叉菜胶前30min，通过i.p.注射向10只小鼠的各组给药式 I的化合物(30mg/kg体重)、载体((400 μ 1)2%羟丙基纤维素；0. 25%乳酸(85%溶液)) 和盐水(生理NaCl)。对侧爪不接受角叉菜胶注射。1. 1给药⑶K抑制性化合物对经角叉菜胶处理的小鼠的效力通过在被注射的(同侧)爪的跖骨区处从足背到足底测得的爪大小增大来检测由 注射角叉菜胶引起的爪水肿。同侧爪和对侧爪的大小用作炎症的替代标志，并在角叉菜胶 注射后若干时间点测量注射前(-1)、注射后2h(2)、3h(3)、4h(4)、5h(5)、6h(6)、24h(24)。与注射角叉菜胶前30分钟所注射的处理物质的类型无关，在角叉菜胶注射后的 第1小时内，所有小鼠的爪大小可能增大例如2-3mm(+10% )。在所述时间过程期间，直至 注射角叉菜胶后24h，角叉菜胶注射前接受CDK抑制性化合物处理的小鼠可能显示出水肿 减小爪大小的增加可能下降，例如从10%降至8%。相比之下，在此时间点，对照小鼠的爪 大小可能平均增大30%。在角叉菜胶注射后24h后，经角叉菜胶处理的所有爪的大小可以 增大，在注射后96h至其最大值。[1370]作为角叉菜胶测定的读数，可以进行Hargreaves测定，其中所述测定能够测定对 辐射热的温度敏感性。Hargreaves测定(Hargreaves等，1988)通过当动物站立在有机玻 璃室中时，将辐射热源聚焦在动物后爪的足底表面，来测定自由移动的动物的伤害感受敏 感性。具体地，将爪的底部暴露于发光源，产生例如55°C的温度。测定照射开始与抬起/拉 起被照射爪之间的潜伏期作为温度敏感性。分别对用如本文公开的CDK9抑制剂和角叉菜胶处理的小鼠，或者用萘普生和角 叉菜胶处理的小鼠，或者用溶剂和角叉菜胶处理的小鼠进行Hargreaves测定。用CDK抑制 剂和角叉菜胶处理的小鼠较之阴性对照小鼠可能表现出更长的潜伏期。此结果表明如本文 公开的⑶K抑制剂的痛觉减退效力。牛物学实施例5在大鼠中的角叉菜胶测定_炎症和炎性疼痛的模型以下描述在大鼠中进行角叉菜胶测定的一种可能的方式。按照Winter 等人所述的方案(Proc. Soc. Exp. Biol. Med.，111，544-547，1962)，在 患有炎性疼痛的大鼠中，所述测定检测镇痛/抗炎活性。将角叉菜胶悬浮液注射入大鼠(200_250g)右后爪的底表面(每爪0. 75mg，在 0. 05ml生理盐水中)。2小时后，依次地对大鼠的两只后爪施加触觉刺激和温度刺激。对于触觉刺激，将动物置于倒置的丙烯酸塑料箱(18x11. 5x13cm)下网格底上。然 后，用渐强的力量首先将电子Von Frey探针尖(Bioseb，模型1610)施加于无炎症的后爪， 其后施加于发炎的后爪，并且自动记录引起缩足所需的力量。实施此方案3次并计算对于 每爪的平均力量。对于温度刺激，仪器(Ugo Basile, Reference 7371)由置于在高处的玻璃底上的 各个丙烯酸塑料箱(17x11x13cm)组成。将大鼠置于箱内并使其自由适应10分钟。然后， 首先将可移动的红外辐射源(96士 lOmW/cm2)聚焦在无炎症的后爪上，其后聚焦在发炎的后 爪上，并且自动记录缩足潜伏期。为了防止组织损伤，所述热源在45秒后自动关闭。行为测量后，通过使用数字式器官充满度测量器(LetiCa，7500型，其显示由爪浸 没产生的排水量，以ml计)测定各后爪的体积，来评价爪水肿。每组研究10只大鼠。盲法进行该试验。按2种剂量(10mg/kg和30mg/kg)在测试之前60分钟口服给药，来评价测试物质 如本文所述的式I的CDK抑制剂，并与载体对照组比较。用在相同实验条件下给药的吗啡(128mg/kg p. o.)和乙酰水杨酸(512mg/kg P.O.)作为对照物质。因此所述实验包括6组。使用非配对t检验，通过对比治疗组和载体对照来分析 数据。分别地对经如本文公开的⑶K9抑制剂和角叉菜胶处理的大鼠，或者经萘普生和 角叉菜胶处理的大鼠，或者经溶剂和角叉菜胶处理的大鼠，进行Hargreaves测定。经⑶K 抑制剂和角叉菜胶处理的大鼠较之阴性对照大鼠应表现出更长的潜伏期。此结果表明如本 文公开的CDK抑制剂的痛觉减退效力。生物学实施例6A. LPS体内测定(LPS) -体内细胞因子抑制模型[1387]对于LPS诱导的感染性休克模型，对小鼠腹膜内(i.p.)注射30yg在盐水中的细 菌脂多糖(LPS;L2630 SIGMA)。所述LPS-介导的炎性信号转导级联的引发导致细胞因子 如TNFa、IL_6和ILlii的血清浓度增加。在指定的时间点，可以从这些动物采集血液。此 后，分离血清，然后可以将样品贮藏在-80°C直至使用商品ELISA测定法测定细胞因子浓度 (AL Moreira 等，Braz J Med Biol Res 1997;30:1199-1207)。已公认炎性介质如细胞因子TNFa、IL6和ILl β可以引起持续性疼痛状况和炎 性病症。在从外周组织的免疫细胞如巨噬细胞和CNS组织的小胶质细胞中释放后，这些 介质似乎不仅在炎性疼痛和神经性疼痛中而且在炎性病症如类风湿性关节炎中发挥关键 作用(F Marchand 等人，Nat RevNeurosci 2005 ；6 (7) ；521-532)。因此，抑制肿瘤坏死因 子α (TNFa)还代表用于治疗炎性疾病的相关靶[Lavagno等人，Eur J Pharmacol 2004 ； 501，199-208]。LPS体内测定可以用作探讨通过药理学处理抑制细胞因子表达的有效模型。1.在野生型小鼠中诱导细胞因子表达向野生型小鼠(品系C3HeB/FeJ)(年龄、性别和体重匹配的)腹膜内注射30 μ g LPS(SIGMA)。给药LPS后90分钟，用0. lml/10g体重的氯胺酮_甲苯噻嗪(50/20mg/ml) 麻醉这些动物，然后通过心脏穿刺采血用于制备血清。2.向LPS小鼠给药⑶K抑制性化合物向LPS小鼠的药理学治疗组(η = 4)分别地腹膜内注射(i. p. KDK抑制性化合物 或载体(阴性对照)。具体地，给药化合物#1A和16A。在LPS刺激前30min，作为单次剂量，给药10mg/kg或30mg/kg (化合物/体重)CDK 抑制剂(溶于 20% DMS0、5% Tween 80,10% Tris 1ΜρΗ8，、20% PEG400、45% PBS)。以相 同的方式给药载体对照。LPS刺激后90分钟(min)，从小鼠采集血样。以前，在按时间过程实验的该动物模 型中，已确认90min时间点为TNFa表达的峰值。如下所述，以商业化的ELISA测定法分析用⑶K抑制剂的药理学治疗对LPS小鼠 的细胞因子水平的效力。3.测定给药⑶K抑制性化合物后LPS小鼠的细胞因子血清浓度心脏穿刺后，将取自LPS动物的血样( 500 μ 1/动物)在湿冰上放置 (inculbated)30min。此后，在13. OOOrpm下，使样品离心15min。从凝块中分出血清并冷冻 贮藏在_80°C。按照制造商的说明书，使用商品化的ELISA试剂盒(Natutec)测定样品中TNFa 和IL6的血清浓度。4.给药化合物#1A和16A对细胞因子的蛋白表达的效力如上所述，向LPS小鼠给药化合物#1A和16A。如上所述进行基于ELISA的细胞因 子血清浓度测定。比较用化合物#1A和16A治疗的动物与用载体治疗的对照动物，显示出 对血清中的TNFa和IL6蛋白浓度的显著抑制效力。在图3中显示给药化合物#1A和16A 对LPS诱导的小鼠的结果，其描述了用LPS诱导的小鼠进行细胞因子(TNFa)测定的结果。这些结果表明，在细胞因子表达的模型中，化合物#1A和16A是细胞因子TNF α和 IL6的有效抑制药。[1403]牛物学实施例7A.体外THP-I测定-细胞因子抑制作用的体外模型人类THP-I细胞系可以用作由脂多糖(LPS)或肿瘤坏死因子α [TNF α ]介导的细 胞因子表达的体外模型。当用LPS诱导或者由TNF α本身诱导(自分泌诱导)时，单核细胞系的ΤΗΡ-1细 胞(ATCC ；ΤΙΒ-202)可以分化成表达促炎细胞因子如TNFa、IL6和ILl β的巨噬细胞样细 胞。已公认炎性介质如细胞因子TNFa、IL6和ILl β可以引起持续性疼痛状况和炎 性病症。在从外周组织的免疫细胞如巨噬细胞和CNS组织的小胶质细胞中释放后，这些 介质似乎不仅在炎性疼痛和神经性疼痛中而且在炎性病症如类风湿性关节炎中发挥关键 作用(F Marchand 等人，Nat RevNeurosci 2005 ；6 (7) ；521-532)。因此，抑制肿瘤坏死因 子α (TNFa)还代表用于治疗炎性疾病的相关靶[Lavagno等人，Eur J Pharmacol 2004 ； 501，199-208]。因此，THP-I体外测定可以用作探讨细胞因子表达的药理学抑制的有效筛选模型 (U Singh 等人，Clin Chem 2005 ；51 (12) ；2252-6]，K Rutault 等人，J Biol Chem 2001 ； 276(9) ；6666-74]。1. THP-I细胞的生长和分化使THP-I细胞生长在添加10% FCS和1 % Pen/Str印的改良RPMI-1640培养基 (ATCC，Cat. No. 30-2001)中。为了细胞因子抑制测定，以5x10s细胞/ml的密度，将细胞接 种于6-孔板中的添加lOOng/ml PMA的标准生长培养基(Sigma，P1585)中，来诱导分化成 巨噬细胞样细胞。24小时后，所述培养基用标准生长培养基(无PMA)替代，并且再孵育细 胞48小时以完成分化。2.用⑶K抑制性化合物和LPS刺激处理分化的THP-I细胞分化72h后，用无血清的生长培养基替代上述培养基，然后，加入各自溶于DMSO的 浓度为0. 5-5 μ M的CDK抑制性化合物和对照化合物如阳性对照和阴性对照(孔中DMSO的 终浓度是0. 1 % )。将细胞与化合物一起孵育60min，然后再用lOOng/ml LPS (Sigma, L2630) 刺激另外4-48小时。收集上清液，并即刻使用可商购的夹心ELISA测定法(eBioscience， Cat. No88-7346,88-7066,88-7010)测定细胞因子如 TNFa、IL-6 和 IL-Ib 的表达，或者冷 冻贮藏在20°C直至评价。3.测定给药CDK抑制性化合物后THP-I上清液中的细胞因子浓度按照制造商的说明书，使用商品化的ELISA试剂盒(eBioscience)测定细胞培养 上清液内TNF a、IL6和ILl β的浓度。4.用⑶K抑制性化合物治疗对THP-I细胞上清液中细胞因子的蛋白表达的效力如上所述(参见第2节)，平行三份地向分化的THP-I细胞施用⑶K-抑制性化合 物#1Α、16Α、20Α和25Α。单独与测试化合物或对照化合物(ρ38抑制剂SB203580和IKK抑 制剂BMS345541) —起预孵育60min后，用LPS刺激细胞。孵育4_48h后，收集上清液，然后， 如以上第3节所述，进行基于ELISA的细胞因子上清液浓度测定。用化合物#1A、16A、20A和25A处理的细胞以及用对照化合物处理的细胞相对经载 体(DMSO)处理的细胞的比较显示出，化合物#认、164、2(^和25々对细胞上清液中1顺0和IL6蛋白浓度的显著抑制效力。与对照化合物SB203580或BMS345541相比，这些化合物显 示出相似的或更好的对TNFa /I1-6表达的抑制作用。在图4A和图4B中显示给药化合物#1A、16A、20A和25A对LPS诱导的THP-1巨噬 细胞中TNFa和IL-6的表达的效力。图4A表示在LPS-诱导的THP-1巨噬细胞中TNF a 的测定结果，而图4B表示在LPS-诱导的THP-1巨噬细胞中IL-6的测定结果。这些结果表明，CDK抑制性化合物#1A、16A、20A和25A是细胞因子TNFa和IL_6 的表达的有效抑制剂。牛物学实施例8A.体外激酶抑制测定在体外激酶抑制测定中，测定化合物1A-30A对细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2/ CycA、CDK4/CycDl、CDK5/p35NCK、CDK6/CycDl 和 CDK9/CycT 的 IC5(I 谱。将在这些测定中所 得的IC5(I值用于评价所述化合物对CDK9抑制的特异性选择性和效力。在这些测定中所得的结果用于挑选对⑶K9显示出特异性的化合物。具体地，意 图将CDK9特异性化合物与对其他CDK即对CDK2、CDK4、CDK5和CDK6中的一些或全部也具 有显著抑制效力的其他化合物区分开。为了避免抑制细胞周期相关的CDK2、CDK4、CDK5和 CDK6时可能发生的不利(细胞生长抑制/细胞毒)效应，这种区分是必要的。此外，这些数据用于建立构效关系(SAR)以辅助设计出在效力和选择性方面新的 且甚至改进的结构/化合物。1.测试化合物以在100% DMS0中的1x10_°2M储备溶液使用化合物，在3块96孔V形微量滴定 板(下文中，所述板被称为“总平板”)的第2列各100 yl。然后，用100%DMS0作为溶剂，使在总平板的第2列中的1x10-°2M储备溶液接受系 列的半对数稀释，得到10种不同浓度，在第12列中，稀释终点为3X10-°7M/100% DMS0。第 1列和第7列充满100% DMS0作为对照。然后，使用96道移液器，将系列稀释的复制板的 各孔2x5 u 1等分成2套相同的“化合物稀释板”。在激酶抑制测定当天，将45 yl H20加入一套化合物稀释板的各孔。为了最达限度 地减少沉淀，仅在将化合物溶液转移至测定板前的几分钟，将H20加入所述板。充分震摇板， 得到半对数级的浓度为1x10-°3M/10% DMS0至3X10-°8M/10% DMS0的“化合物稀释板/10% DMS0”。这些板用于转移5 yl化合物溶液至“测定板”。在工作日结束时，弃去化合物稀释 板。对于测定(参见下文)，从化合物稀释板的各孔将5 yl溶液转移至测定板。测定的终 体积为50iU。在从1x10-°4M至3xlO-°9M范围内的10种最终测定浓度测定所有化合物。在 所有情况中，反应混合物中的最终DMS0浓度为1 %。2.重组蛋白激酶为了测定抑制谱，使用以下5种蛋白激酶CDK2/CycA、CDK4/CycDl、CDK5/p35NCK、 ⑶K6/CycDl和⑶K9/CycT。通过杆状病毒表达系统，在Sf9昆虫细胞中，表达所述蛋白激 酶，其为人重组GST-融合蛋白或者His-标记的蛋白。使用GSH-琼脂糖(Sigma)或者 Ni-NTH-琼脂糖(Qiagen)，通过亲和色谱法纯化激酶。通过SDS-PAGE/银染色测定各激酶 的纯度，并且通过使用激酶特异性抗体的蛋白质印迹分析或者通过质谱来检验各激酶的身 份。[1431]3.蛋白激酶测定在得自Perkin Elmer/NEN (Boston, MA, USA)的 96 孔 FlashPlates 中，在 50 μ 1 反应体积中进行所有的激酶测定。按以下顺序分4步移液反应混合物· 20 μ 1测定缓冲液(标准缓冲液)· 5μ 1 ATP 溶液(在 H2O 中)· 5 μ 1测试化合物(在10% DMSO中)· 10 μ 1底物/10 μ 1酶溶液(预混的)对所有酶的测定包含60mMHEPES-NaOH(pH 7. 5)、3mM MgCl2、3mM MnCl2、3yM原 钒酸钠、1.2mM DTT,50y g/ml PEG20000、1 μ M[-33P]-ATP (约 5xl005cpm/孔)。每孔使用以下量的酶和底物#激酶激酶激酶底物底物[1440]批号ng/50μ 1ng/50μ 1[1441]1CDK2/CycASP005100组蛋白Hl250[1442]2CDK4/CycDlSP00550Rb-CTF (批号 009)500[1443]3.CDK5/p35NCKSPOOl50Rb-CTF (批号 009)1000[1444]3CDK6/CycDlSP003400Rb-CTF (批号 009)500[1445]4CDK9/CycT003100Rb-CTF (批号 009)1000[1446]在30°C温育反应混合物80分钟,3 用 50 μ 12% (v/v)H3PO4终止反应，抽吸板，并用
200 μ 1 H2O或 200 μ 1 0.9% (w/v)NaCl 清洗两次。用微板闪烁计数器(Microbeta，Wallac) 测定33P的结合。使用BeckmanCoulter/Sagian自动系统进行所有测定。4.评价原始数据将各测定板的第1列(η = 8)的计数的中位值定义为“低对照”。此值反映了在不 存在蛋白激酶但存在底物的情况下放射性与板的非特异性结合。将各测定板的第7列(η =8)的计数的中位值当作“高对照”，即不存在任何抑制剂情况下的完全活性。高对照和低 对照之间的差值被称为100%活性。作为数据评价的部分，将得自特定板的低对照值从相应 板的高对照值以及从所有80个“化合物值”中减去。使用以下公式，计算特定板的各孔的 残留活性(％ )残留活性(％) = 100Χ[(化合物的cpm-低对照)/(高对照-低对照)]使用 Quattro Workflow V2. 0. 1. 3 (Quattro Research GmbH, Munich, Germany ； www, quattro-research· com)，计算各浓度的残留活性和化合物IC5tl值。使用的模型是“S形 反应(可变斜率)”，参数“最高”设定在100%，“最低”设定在0%。测试时，化合物1A-30A 的IC50值均在InM和IOuM之间。MM表3给出实施例1-157的生物学数据。表3:THF[1481]TFA[1482]TLC
权利要求
通式I的化合物式(I)或其药学可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有的互变异构体和立体异构体，其中A是N，并且B是CH、C(C1-4烷基)或C(NH2)，Ra是H或甲基；R1选自C1-8烷基；-NR6R7、C1-6烷基-NR6R7、R20、-C1-6烷基-R20、-C1-6烷基-C(O)OR4、C1-6烷基-C(O)R4、-NR10-(C1-6烷基)-NR6R7、-NR10-(C1-6烷基)-R20、-NR10-(C1-6烷基)-C(O)OR4、-NR10R20、O-(C1-6烷基)-NR6R7、-O-(C1-6烷基)-R20、-O-(C1-6烷基)-C(O)OR4、-OR20、C1-6烷基-OR20、C1-6烷基-SR20、C1-C6烷基-NR10R20、(C1-6烷基)-O-(C1-6烷基)-R20、(C1-6烷基)-S-(C1-6烷基)-R20、C(O)R20；其中烷基部分可以是直链或支链的，并且可以被选自卤素、甲氧基、乙氧基、NR6R7或含氮杂环的一个或多个取代基取代；R4表示H或C1-4-烷基；R6和R7各自独立地选自H、C1-6烷基、羟基-C2-6烷基-；R10表示H或C1-4烷基；R20选自芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，并且可以被一个或多个选自以下的取代基取代C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，其中任何一个可以被一个或多个卤素或OH取代基取代；R21、-C1-4烷基-R21；OR21、O(C1-4烷基)R21、SR21、SOR21、SO2R21、C(O)R21、C1-4烷基-OR21、-O(C2-6烯基)、-O(C2-6炔基)，其中任何一个可以被一个或多个卤素或OH取代基取代；OR22、-SR22、-SOR22、-SO2R22、-C(O)R22、-C(O)OR22、-C1-4烷基-O-R22、-C1-4烷基-O-C1-4烷基-O-R22、C1-4烷基-C(O)R22、-C1-4烷基-C(O)R22、NR11C(O)OR22、NR11C(O)R22、-SO2-NR11R12、-C(O)-NR11R12、-C1-4烷基-C(O)-NR11R12、-NH-SO2R15、-N(C1-4烷基)-SO2R15、-(C1-4烷基)NR11R12、NR11R12、-(C1-6烷基)NR11R12、硝基、卤素、氰基和羟基；并且当R20是碳环基或杂环基、或者其中芳香性环与非芳香性环稠合的芳香性基团时，R20还可以被氧代取代；R21选自芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，并且可以被一个或多个如下定义的取代基取代；当R21是芳基或杂芳基基团时，它可以被一个或多个选自以下的取代基取代其中苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代；当R21是碳环或杂环基团时，它可以被选自甲基、氧代或卤素的一个或多个取代基取代；R22是氢或任选地被卤素或羟基取代的C1-6烷基；R11和R12各自独立地表示选自H或C1-4烷基的取代基，或者，R11和R12连接起来从而它们一起形成3-8元非芳香性环；R15表示H或C1-4烷基；R2表示H、C1-6烷基或NH2；各个R3独立地表示选自以下的取代基C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤代烷基、任选地被甲基、氧代或卤素取代的C3-8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基、-C1-6烷基-OH、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-C1-4烷基苯基、C1-6烷氧基-、C1-6烯基氧基、C3-6炔基氧基-、C1-6卤代烷氧基-、-O-C3-8环烷基、-O-C1-4烷基-C3-8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-C1-4烷基苯基、-S(C1-6烷基)、-SO(C1-6烷基)、-SO2C1-6烷基、-SO2C3-8环烷基、-SO2-NR31R32、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-8环烷基、-C(O)OH、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)-NR31R32、-C1-4烷基-O-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-C1-4烷基-OH、-C1-4烷基-O-C1-4烷基-O-C1-4烷基、-C1-4烷基-O-C3-7环烷基、-C1-4烷基-C(O)C1-6烷基、-C1-4烷基-C(O)OH、-C1-4烷基-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-C(O)-NR31R32、-NH-SO2R33、-N(C1-4烷基)-SO2R33、-(C1-4烷基)NR31R32、-NR31R32、-(C1-6烷基)NR31R32、硝基、卤素、氰基、羟基；R31和R32各自独立地表示选自H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基的取代基，或者，R31和R32连接起来从而它们一起形成3-8元非芳香性环；R33表示H或C1-4烷基；x表示在0-4范围内的、在苯环上的独立地选择的R3取代基的数量。FPA00001151596600011.tif
2.权利要求1的化合物，其中A是N，并且B是CH、C(Ch烷基)或C(NH2)，R1选自C1-S焼基；C1^8卤代烷基； 芳基； 杂芳基； C3-I2碳环基； 杂环基；-C1-6焼基_方基； 烷基-杂芳基；烷基-碳环基； -C1^6烷基-杂环基； .Ch 烷基-C(O)OH5烷基-C(O) OC^4烷基 -NRltlCh6烷基-芳基； -NRltlCh6烷基-杂芳基； -NR10C1^6烷基-碳环基； -NR10C1^6烷基-杂环基； -NRiciCh6 烷基-C(O) OH ； -NR10C1^6 烷基-C (0) OC1^4 烷基； -NR10芳基； -NR10杂芳基； -NR10碳环基； -NR10杂环基； -OC1-J5烧基-芳基； -OCh6烷基-杂芳基； -OCh6烷基-碳环基； -OCh6烷基-杂环基； -OCp6 烷基-C(O) 0Η； -OCh6 烷基-C (O)OC1^ 烷基； -0芳基； -0杂芳基； -O碳环基；和 -0杂环基；其中任何上述芳基和杂芳基可以任选地被独立地选自以下的一个或多个基团取代 C1^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、Ch6卤代烷基、任选地被甲基、氧代或卤素取代的c3_8环烷基、 任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基-Cu烷基-0H、其 中苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-Cy烷基苯基、 CV6烷氧基-、C1^6烯基氧基、c3_6炔基氧基-、C1^6卤代烷氧基-、-o-c3_8环烷基、-O-C1^4烷 基-c3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-0-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-CV4烷基苯 基、-S ((V6 烷基)、-so (C1^6 烷基)、-SO2C1^6 烷基、-S02c3_8 环烷基、-SO2-NR11R12、-C (0) C1^6 烷 基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷基、-C (0) -NR11R1^-CV4 烷基-O-C^ 烷基、-(V4 焼基"O-C^4焼基_0H、"C^4焼基"O-C^4焼基"O-C^4焼基、"C^4焼基_0_C3—7环焼基、"C^4 烷基-C (0) C1^6 烷基、-Cp4 烷基-C (0) 0H、-C卜4 烷基-C (0) OC1^4 烷基、-CV4 烷基-C (0) -NR11R12 、-NH-SO2R15, -N (Ch 烷基)-SO2R15, - (C1^4 烷基)NR11R12, NR11R12, - (C1^6 烷基)NR"R12、硝基、卤 素、氰基和羟基；并且其中任何上述碳环基和杂环基可以任选地被独立地选自以下的一个或多个基团取代 CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、Cp6卤代烷基、任选地被甲基、氧代或卤素取代的C3_8环烷基、 任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基、-Cp6烷基-0H、其 中苯基任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-Cy烷基苯基、 CV6烷氧基_、C1^6烯基氧基、C3_6炔基氧基_、C1^6卤代烷氧基_、-0-C3_8环烷基、-O-C1^4烷 基_C3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-ο-苯 基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-O-CV4烷基苯 基、-S ((V6 烷基)、-so (C1^6 烷基)、-SO2C1^6 烷基、-S02c3_8 环烷基、-SO2-NR11R12、-C (0) C1^6 烷 基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷基、-C (0) -NR11R1^-CV4 烷基-O-C^ 烷基、-(V4 焼基"O-C^4焼基_0H、"C^4焼基"O-C^4焼基"O-C^4焼基、"C^4焼基_0_C3—7环焼基、"C^4 烷基-C (0) C1^6 烷基、-CV4 烷基-C (0) OH、-CV4 烷基-C (0) OCh 烷基、-C^ 烷基-C (0) -NR11R1 2、-NH-SO2R15, -N (Ch 烷基)_S02R15、- ((^4 烷基)NR"R12、-NR11R12, - (C1^6 烷基)NR"R12、硝基、 卤素、氰基、羟基和氧代；R2表示H、C1^6烷基或NH2 ；R3表示选自以下的取代基烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、Cp6卤代烷基、任选地被甲 基、氧代或卤素取代的C3_8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或三 氟甲氧基取代的苯基、-Cp6烷基-0H、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲氧基或 三氟甲氧基取代的-Cy烷基苯基、C1^6烷氧基-、C1^6烯基氧基、C3_6炔基氧基_、C1^6卤 代烷氧基_、_0-C3_8环烷基、-O-Ch烷基_C3-8环烷基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲 基、氟甲氧基或三氟甲氧基取代的-0-苯基、任选地被甲基、甲氧基、卤素、卤甲基、氟甲 氧基或三氟甲氧基取代的-O-Ch烷基苯基、-S((V6烷基)、-SO((V6烷基)、-SO2Ch烷 基、_S02C3_8 环烷基、-SO2-NR31R32、-C (0) C1^6 烷基、-C (0) C3_8 环烷基、-C (0) OH、-C (0) OC1^6 烷 基、-C (0) -NR31R32、-CV4 烷基-O-CV4 烷基、-C1^ 烷基-O-C^4 烷基 _0H、-C1^4 烷基-O-C1^ 烷 基-O-C1-4 焼基、-C1-4 焼基—O-C3-7 环焼基、-C1-4 焼基—C (0) C1^ 焼基、-C1-4 焼基—C (0) 0Ηλ—C^4 烷基-C (0) OCh 烷基、-Ch 烷基-C (0) -NR31R32, -NH-SO2R33, -N (C1^4 烷基)_S02R33、- (C1^4 烷 基)NR31R32、-NR31R32,-(C1^6 烷基)NR31R32、硝基、卤素、氰基、羟基； R4和R5独立地表示H或Cy-烷基； R6和R7各自独立地选自H、CV6烷基、羟基-C2_6烷基-； R10表示H或Cy烷基；Rn和R12各自独立地表示选自H或CV4烷基的取代基，或者，R11和R12连接起来从而它 们一起形成3-8元非芳香性环； R15表示H或Cy烷基；R31和R32各自独立地表示选自Η、(^4烷基或Cy卤代烷基的取代基，或者，R31和R32连 接起来从而它们一起形成3-8元非芳香性环； R33表示H或Cy烷基；χ表示在0-4范围内的、在苯环上的独立地选择的R3取代基的数量； m表示1-4的整数；并且 η表示2-4的整数。
3.权利要求1或权利要求2的化合物，其中，独立地或以任意组合的方式Ra是氢；B是CH或C^4烷基； R2是氢或CV4烷基，R3是卤素、C1^6烷氧基、-O-CV4烷基苯基(如-ο-苄基)或-O-CV4烷基_C3-8环烷基；并且χ是1或2。
4.权利要求3的化合物，其中，独立地或以任意组合的方式 B 是 CH ；R2是氢或甲基；并且R3是卤素、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、苄氧基或-OCH2环丙基。
5.权利要求4的化合物，其中R2是氢。
6.权利要求3-5中的任一项的化合物，其中χ是1，并且R3表示Cp6烷氧基、-O-Cp4烷 基苯基或-O-Ch烷基_C3-8环烷基。
7.权利要求3-5中的任一项的化合物，其中χ是2，并且R3基团之一是甲氧基、乙氧 基、-异丙氧基、苄氧基或(1-环丙基)甲氧基，并且另一个R3基团是卤素。
8.权利要求1-7中的任一项的化合物，其中R1是 -C1-C6 焼基；-R20; -C(O)R20 ； -C1-C6 焼基 _R20，其中所述烷基基团任选地被商素、甲氧基、乙氧基、-NR6R7或含氮杂环基环取代；-C1-C6 烷基-OR2° ；-(C1-C6 烷基)-O- (C1-C6 烷基)-R20 ；-C1-C6 烷基-NRiqR20 ；-C1-C6 烧基-SR20 ；-NR10R20 ；-NR6R7 ；-NR10-(C1-C6 烷基)-NR6R7 或-NR10-(C1^6 烷基)-C (O)OH;其中R6、R7、R10和R20如权利要求1中定义。
9.权利要求8的化合物，其中R1表示R2q或NRiqR2q,并且R2q是取代的或未取代的碳环基、杂环基、芳基或杂芳基基团。
10.权利要求8的化合物，其中R1是取代的碳环基基团，其中取代基是在将所述碳环基 基团连接至分子其余部分的同一原子上。
11.权利要求8的化合物，其中R1表示C(O)R2tl,并且R2°是芳基或杂芳基基团、或杂环 基基团，所述芳基或杂芳基基团可以是未取代的或如权利要求1中定义地被取代。
12.权利要求11的化合物，其中R2°是苯基或6元杂环基基团。
13.权利要求8的化合物，其中R1表示C1-C6烷基-R2°，并且R2°是芳基、杂芳基或杂环 基基团，所述芳基、杂芳基或杂环基基团中任何一个可以任选地如权利要求1中所述地被 取代。
14.权利要求8的化合物，其中R1表示C1-C6烷基-0R2°、-(C1-C6烷基^-(C1-C6烷 基)-R20X1-C6烷基-NRi°R2°或C1-C6烷基-SR2°，并且R2°是任选地如权利要求1中所述地被 取代的芳基或杂芳基基团。
15.权利要求1-9或11-13中的任一项的化合物，其中R2°是包含独立地选自氧、硫或 氮的一个或两个杂原子的5元或6元杂环基环。
16.权利要求15的化合物，其中R2tl是哌啶基、吡咯烷基、四氢吡喃基或四氢噻喃基环。
17.权利要求15或权利要求16的化合物，其中所述杂环基环R2°是未取代的，或者被 独立地选自氧代、-CV4烷基、-CV4烷基-O-CV4烷基、-C(O)CV4烷基、-C (O)OCh4烷基、卤素 和-Cy烷基R21的一个或多个取代基取代。
18.权利要求1-10中的任一项的化合物，其中R2tl表示环烷基基团，所述环烷基基团 是未取代的，或者被一个或多个-C"烷基、氧代、-NH2, -NHC(O)CV4烷基、-NHC(O)OCV4烷 基、-C (0) NH2、任选地取代的芳基或杂芳基基团取代。
19.权利要求1-9或11-14中的任一项的化合物，其中R2tl表示任选地被一个或多个选 自-NH-SO2Ch烷基、Cy烷基、-CKCV4烷基)、其中R12如上定义的-NHR12、芳基、杂芳基、硝 基和卤素的取代基取代的萘基或苯基。
20.权利要求1-9、11、13或14中的任一项的化合物，其中R2°表示单环5元或6元杂 芳基环系统。
21.权利要求1_9、11、13或14中的任一项的化合物，其中R2tl表示双环杂芳基基团，所 述双环杂芳基基团包含与不饱和的杂环基环稠和的苯基或者与任选地包含一个或多个额 外的杂原子的不饱和环稠合的杂芳基部分。
22.权利要求20或权利要求21的化合物，其中R2tl是未取代的，或者被一个或多个选 自Cy烷基、卤素、-(C1-C4烷基)-O-R21或R21的取代基取代，其中R21是未取代的苯基或杂 方基。
23.权利要求1-8中的任一项的化合物，其中R1是-NR6R7；或者-NRltl- (C1-C6烷 基)-NR6R7,并且R6和R7各自独立地为氢或C1-C4烷基。
24.权利要求1-8中的任一项的化合物，其中R1是-C1-C6烷 基-NRiqR2q ；-NR10R20 ；-NRiq-(C1-C6 烷基)-NR6R7 或-NRiq-(C1^ 烷基)-C (O)OH ；并且 Riq 是氢或 甲基。
25.权利要求1-24中的任一项的化合物，其用于医学，特别是用于治疗或预防由细胞 周期蛋白依赖性激酶尤其是CDK9的活性介导的疾病和病症。
26.权利要求1-24中的任一项的化合物在制备用于治疗或预防由细胞周期蛋白依赖性激酶尤其是CDK9的活性介导的疾病和病症的药剂中的用途。
27.用于治疗或预防由细胞周期蛋白依赖性激酶尤其是CDK9的活性介导的疾病和病 症的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者给药有效量的权利要求1-24中的任一 项的化合物。
28.权利要求25-27中的任一项的化合物、用途或方法，其中所述的由细胞周期蛋白依 赖性激酶的活性介导的疾病或病症选自疼痛、炎性病症、增殖性疾病、免疫性疾病、感染性 疾病、心血管疾病和神经变性疾病。
29.药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1-24中的任一项的化合物，以及药 学可接受的赋形剂或稀释剂。
30.用于制备权利要求1-24中的任一项的式(I)的化合物或其被保护的衍生物的方 法，所述方法包括(a)将一种式(I)的化合物转化成另一种式(I)的化合物；或者(b)使式A的化合物或其被保护的衍生物 式A其中A、B、R1、Ra和R2如通式⑴中定义，并且X是交叉偶联反应的适合的取代基，与式B的化合物或其被保护的衍生物反应 式B其中R3和χ如通式(I)中定义，并且Y是交叉偶联反应的适合的取代基；其中X和Y表示交叉偶联反应的适合的取代基，并且被选择用来相互反应；或者(c)使式E的化合物或其被保护的衍生物 式E其中R1如通式(I)中定义，并且L4表示适合的离去基；与式F的化合物或其被保护的衍生物反应 其中Ra、R2、R3、χ、A和B如关于通式⑴所定义，并且L2表示适合的离去基； (e)使如上定义的式F的化合物或其被保护的衍生物与式J的化合物 其中R1如关于通式(I)所定义， 在适合的偶联剂存在下反应；或者 (f)使式K的化合物 式F其中Ra、R2、R3、x、A和B如通式(I)中定义；或者(d)通过以下方法制备式(I)的化合物，其中R1是通过氮原子与式(I)的主要羰基相 连的部分，所述方法包括使相应的胺或其被保护的衍生物与式G的化合物或其被保护的衍生物 其中R2、R3、X、A和B如关于通式⑴所定义，并且Z表示交叉偶联反应的适合的取代基与式L的化合物其中R1和Ra如关于通式(I)所定义，在偶联反应适合的条件下反应；或者(g)通过使如上定义的式F的化合物与下式的化合物反应R20N = C = 0 或 R20-(C1^6 烷基)_N = C = 0其中R2tl如关于通式(I)所定义，例如R2tl表示杂芳基基团如吡啶，来制备式(I)的化合 物，其中 R1 是-NHR2q 或-NH- (C1^6 烷基)-R2°。
全文摘要
式(I)通式I的化合物，其中R1、R2、R3、x、A和Ra如说明书中定义，是细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，并且可用于预防和/或治疗任何类型的疼痛、炎性病症、免疫性疾病、增殖性疾病、感染性疾病、心血管疾病和神经变性疾病。
文档编号C07D239/42GK101889004SQ200880119493
公开日2010年11月17日 申请日期2008年10月13日 优先权日2007年10月12日
发明者A·J·尼斯特罗杰, A·米勒, A·马夸特, H·奥尔盖耶, L·蔡特尔曼, M·A·普莱斯, M·奥古斯丁, U·海泽 申请人:Ingenium制药有限公司