专利名称：从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法
技术领域：
本发明涉大孔吸附树脂在中药成分分离、纯化中的应用，特别是一种从大麥中提取 环磷酸腺苷(cAMP)的工艺方法。
背景技术：
我国是世界上枣资源最丰富的国家，也是世界上惟一出口红枣的国家。大枣是鼠李 科(Rhamnaceae)枣属植物枣树的成熟果实，大枣又称红枣，原产于中国。中国麥资源 在世界上独一无二的生产栽培优势，具有巨大的发展空间和经济效益。环核苷酸是枣果 中特色最为突出的重要生物活性物质，为蛋白激酶致活剂，是有机体中广泛存在的一种 重要的生理活性物质，细胞内传递激素和递质作用的中介因子，起着放大激素的作用信 号和控制遗传信息的作用，作为第二信使(Secondmessager)，参与多种生理生化过程的 调节。临床医学表明，cAMP不仅对冠心病、心肌梗塞等心血管病有预防和治疗作用， 而且还具有调节神经递质合成，促进激素分泌的作用。cAMP在调节细胞增值与分化这 一对既相联系又相矛盾的过程中，起着重要的作用，对离体细胞有抑制细胞分裂、促进 其分化的作用。因此，凡能使细胞内cAMP含量升高的因素均能降低细胞的生长速度， 抑制细胞的增殖，从而促进细胞的分化。据报导，大枣中cAMP的含量在高等植物中是 最高的，是梨含量10倍以上，达到500nmol/g，是一般动植物材料环核苷酸含量的数千 至数万倍，具有广阔的开发利用价值。目前有关大枣中提取cAMP的研究报道较少，大多数研究集中于大枣中cAMP的分 离分析方面。文献报道K一H a n a b u s a等将枣粉置于5。C水，搅拌lh,均化，离 心，沉淀，使其溶于水，离心分离，取上清液合并后连续上两次D 0 w e x I x4型甲 酸盐柱，0. 05mo 1 /1甲酸洗脱，洗脱液上氧化铝柱后，再上一次Dowe x I x4 型柱，所得组分冻干，最后得到纯度为34%的cAMP， T L C纯化后得到纯度97%cAMP 产品。中国专利CN200410018617公开了一种从大枣中分离cAMP的方法，该专利经过 4次柱层析，并结合溶剂萃取方法的配合，得到了90X以上的cAMP产品。由以上可以 看出，目前有关大枣中分离环磷酸腺苷的方法，工艺非常繁琐，很难产业化。同时工艺 步骤地增加也势必造成目标成分的损失和生产成本的增加，因此发明一种简单的适合产 业化的大枣中提取环磷酸腺苷的方法将具有广阔的经济和社会价值。发明内容本发明的目的是提供一种新的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，它是利用大孔 树脂吸附法从大枣中提取分离cAMP，以充分利用我国丰富的以充分利用我国丰富的大枣
资源，深层挖掘大枣的药用价值。本发明的优点为工艺简单，产品质量好，提取率高， 原料丰富，成本低，无三废，不污染环境，经济效益大。本发明的工艺流程为大枣粉碎后用水或乙醇的水溶液作溶剂进行渗漉或加热提 取。提取液经冷却后过滤，得透明粗提液。在交换柱内装大孔吸附树脂0U—1树脂，大 枣提取液上柱后，先用乙醇水溶液预洗，以去除大量杂质；再用盐酸水溶液淋洗，得CAMP 解吸液。cAMP解吸液用NaOH调节pH后，通入另一个装有大孔吸附树脂ME—2树脂的 交换柱，水洗后，再用乙醇水溶液解吸，解吸液浓縮、干燥后即得产品。本发明从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法包括下述步骤1) 将大枣原料粉碎，用水或乙醇的水溶液作溶剂进行渗漉或乙醇溶液加热提取， 冷却至室温后过滤，得澄清透明提液。2) 将澄清提取液通入装有大孔吸附树脂(0U—1大孔吸附树脂)的树脂柱中吸附， 用水洗涤和盐酸水溶液解吸，得解吸液l;吸附、洗涤或解吸的流速为0. 5-2. 5个床体 积/小时。3) 解吸液1经氢氧化钠调节pH后通入另一个装有大孔吸附树脂(ME-2大孔吸附树 脂，天津欧瑞生物科技有限公司生产)的交换柱中吸附，用水洗涤和乙醇水溶液解吸， 得解吸液2;吸附、洗涤或解吸的流速为0. 5-2. 5个床体积/小时。4) 解吸液2经浓縮、干燥得cAMP大枣提取物产品。 步骤l)所述的溶剂乙醇水溶液的浓度为5%-80%。 步骤l)所述的提取温度是10-80°C。步骤2)所述的大枣原料重量与树脂的体积是h 1 4 (克毫升)。 步骤2)所述的树脂柱径和柱高比为1: 5 30。步骤2)所述的盐酸水水溶液解吸液为0. 1%-10%的盐酸水溶液。步骤3)解吸液经 调解pH后，pH为1-6。所述的两种树脂(0U-1、 ME-2)的质量比为1: 1-5。所述的0U-1 树脂洗涤液为水或5-85%的乙醇；步骤3)所述的ME-2树脂洗涤液为水或5%-20%的乙醇 水溶液。步骤3)所述的乙醇解吸液为5%-90%的乙醇水溶液。本发明是利用大孔树脂吸附法由大枣中提取分离cAMP，充分利用了我国丰富的大枣 资源。仅通过"吸附——洗脱"简单的生产工艺，便可得到较纯度cAMP产品(较之原料 中的含量提高了近200倍)。本发明工艺简单，产品质量好，提取率高，易于制剂，原料 丰富，成本低，无三废，不污染环境，经济效益大。
具体实施例方式实施例1:取10g大枣粉碎后以20%的乙醇水溶液25。C提取。提取液冷却至室温后 过滤，得透明粗提取液。在内径为1. 5cm的交换柱内装大孔树脂吸附树脂OU-l树脂(天 津欧瑞生物科技有限公司生产，Q/12XQ0365-2005) 10mL，大枣粗提取液100mL上柱
后，弃流出液，再用40ml的去离子水冲洗，以去除杂质；再用50ml0. 5mol/L的盐酸水 溶液淋洗，淋洗液经8。/。的氢氧化钠调节至pH4.5后，得cAMP解吸液l。然后将解吸液 1通入内装20mL大孔吸附树脂ME-2的(天津欧瑞生物科技有限公司生产， Q/12XQ0362-2005)内径为1. 5cm的交换柱，編的水冲洗，40ml2(m的乙醇水溶液解 吸，得解吸液2，解吸液2经浓縮、干燥得含cAMP的大枣提取物，高效液相色谱测定， cAMP含量为1.12%。实施例2:取10g大枣粉碎后.，以水溶液4(TC提取。提取液冷却至室温后过滤，得 透明粗提液。在内径为1. 5cm的交换柱内装0U-1树脂10mL，大枣粗提取液100mL上柱 后，弃流出液，再用60ml的去离子水冲洗，以去除杂质；再用70ml0. 8mol/L的盐酸水 溶液淋洗，淋洗液经8。/。的氢氧化钠调节至pH4.5后，得cAMP解吸液l。然后将解吸液 1通入内装大孔吸附树脂ME-2树脂20mL内径为1. 5cm的交换柱，10ml的水冲洗，40ml2(m 的乙醇水溶液解吸，得解吸液2，解吸液2经浓縮、干燥得含cAMP的大枣提取物，高 效液相色谱测定，cAMP含量为1.02%。实施例3:取500g大枣粉碎后，以20%乙醇水溶液50'C提取。提取液冷却至室温后 过滤，得透明粗提液。在内径为5cm的交换柱内装0U-l树脂500mL，大枣粗提液5000mL 上柱后，弃流出液，再用200ml的去离子水冲洗，以去除杂质；再用300mll.0mol/L的 盐酸水溶液淋洗，淋洗液经8y。的氢氧化钠调节至pH4.5后，得cAMP解吸液l。然后将 解吸液1通入内装大孔吸附树脂ME-2树脂1000ml内径为5cm的交换柱，1000ml的水冲 洗，2000ml20。/。的乙醇水溶液解吸，得解吸液2，解吸液2经浓縮、干燥得含cAMP的大 枣提取物，高效液相色谱测定，cAMP含量为0.95%。
权利要求
1、一种从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于它包括下述步骤大枣粉碎后用水或乙醇的水溶液作溶剂进行渗漉或加热提取，提取液经冷却后过滤，得透明粗提液，在交换柱内装大孔吸附树脂，大枣提取液上柱后，先用乙醇水溶液预洗，以去除大量杂质；再用盐酸水溶液淋洗，得环磷酸腺苷解吸液，环磷酸腺苷解吸液用NaOH调节pH后，通入另一个装有大孔吸附树脂的交换柱，水洗后，再用乙醇水溶液解吸，解吸液浓缩、干燥后即得产品。
2、 一种从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于它包括下述步骤1) 将大枣原料粉碎，用水或乙醇水溶液作溶剂进行渗漉或加热提取，冷却至室温 后过滤，得透明提液；2) 将澄清提取液通入装有大孔吸附树脂的树脂柱中吸附，用水溶液洗涤和盐酸水 解吸；吸附、洗涤或解吸的流速为0.5-2.5个床体积/小时；3) 步骤2中的解吸液经氢氧化钠调节pH后，在装有另一种大孔吸附树脂的树脂柱 中吸附，水洗，乙醇水溶液解吸；吸附、洗涤、解吸的流速为0.5-2.5个床体积/小时；4) 歩骤3种的解吸液经浓縮、干燥后得cAMP大枣提取物产品。
3、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的提取溶剂为5%-80%的乙醇水溶液。
4、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的提取温度为10-80°C。
5、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的大枣原料重量与树脂的体积是l: 1 4。
6、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于解吸 液经调解pH后，pH为1-6。
7、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述的两种树脂的质量比为1: 1-5。
8、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的树脂柱径和柱高比为1: 5 30。
9、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的0U-1树脂洗涤液为水或5%-85%的乙醇，所述的解吸液为0. 1-10%的盐酸水溶液。
10、 根据权利要求2所述的从大枣中提取环磷酸腺苷的工艺方法，其特征在于所述 的ME-2树脂洗涤液为水或5%-20%的乙醇水溶液，所述的解吸液为5-90%的乙醇水溶液。
全文摘要
本发明是一种从大枣中提取环磷酸腺苷(cAMP)的工艺方法。采用将大枣用水或乙醇溶液渗漉或加热提取、提取液通入装有大孔吸附树脂(OU-1吸附树脂)的树脂柱中吸附、用乙醇水溶液洗涤和酸水解吸、解吸液用氢氧化钠调节pH后，通入装有ME-2的大孔吸附树脂柱，水冲洗后用一定浓度的乙醇解吸，解吸液浓缩、干燥后得到含cAMP大于1％的大枣提取物产品。本发明工艺简单、产品质量好，易于制剂，提取率高，无三废，不污染环境，原料来源丰富，成本低，经济效益大。
文档编号A61K36/185GK101108871SQ20071005838
公开日2008年1月23日 申请日期2007年7月24日 优先权日2007年7月24日
发明者孔德领, 华 张, 欧来良, 王为超 申请人:天津欧瑞生物科技有限公司