专利名称：丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和parp调节剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及上述“调节剂”与通过结合DNA中能形成某些四链结构(quadruplex structure)的区域而起作用的治疗剂联用；治疗剂本身有抗癌症活性，但当与调节剂联用时它们的活性增强。该协同作用允许以较低剂量给予治疗剂，而仍能获得等效或较高水平的至少一种所需作用。
本发明治疗剂是结合核酸中某些基序的化合物。要用的治疗剂可选自几个不同类别的化合物，例如结合DNA中四链形成区域的那些化合物。治疗剂可用于治疗癌症和其它适应症，例如炎性疾病，本领域已知制备和使用它们的方法。几种优选的治疗剂类别如下所述。各类治疗剂可与任何活性PARP抑制剂联用，包括但不限于本文公开的。
在一方面，治疗剂可以是式(TA1-1)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
式中V是H、卤素或NR1R2； A是H、氟或NR12； Z是O、S、NR1或CH2； U是OR2或NR1R2； X是OR2、NR1R2、卤素、叠氮基或SR2； n是1-3； 其中在NR1R2中，R1和R2可以形成双键或环，二者各被任选取代； R1是H或C1-6烷基； R2是H或任选含有一个或多个选自N、O或S的不毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C2-10烯基或C1-10烷基；或者R2是任选取代的杂环、芳基或杂芳基； R5是W上任何位置的取代基；其是H、OR2、C1-6烷基、C2-6烯基、各自任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代；或者R5是无机取代基；和 W是任选取代的芳基或杂芳基，其可以是单环或与单环或多环稠合并任选含有杂原子； 或式(TA1-2)所示化合物
式中V、A、X、Z和U如式TA1-1中所限定，W选自下组
式中Q、Q1、Q2和Q3独立为CH或N； Y独立为O、CH、＝O或NR1；和 R5如式1中所限定。
该结构的化合物、制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2005年4月15日提交的美国专利申请序列号11/106,909，该申请名为“SUBSTITUTEDQUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USINGTHEREOF”(取代的喹诺苯并噁嗪类似物及其使用方法)。
在式(TA1-1)所示治疗剂的具体实施方式
中，该治疗剂是式(TA1-1A)所示化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药，或其特定的异构体或异构体混合物
在另一方面，本发明组合的治疗剂是下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
式中V是H、卤素或NR1R2； A是H、氟或NR12； Z是O、S、NR1或CH2； U是OR2或NR1R2； X是OR2、NR1R2、卤素、叠氮基或SR2； n是1-3； 其中在NR1R2中，R1和R2可以形成双键或环，二者各被任选取代； R1是H或C1-6烷基； R2是H或任选含有一个或多个选自N、O或S的不毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C2-10烯基或C1-10烷基；或者R2是任选取代的杂环、芳基或杂芳基； R5是W上任何位置的取代基；其是H、OR2、C1-6烷基、C2-6烯基，各自任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代；或者R5是无机取代基；和 W是任选取代的芳基或杂芳基，其可以是单环或与单环或多环稠合并任选含有杂原子； 或式(TA3-2)所示化合物
式中V、A、X、Z和U如式1中所限定，W选自下组
式中Q、Q1、Q2和Q3独立为CH或N； Y独立为O、CH、＝O或NR1；和 R5如式1一样限定。
式(TA3-1)所示这些化合物的制备和活性描述于Nagasawa等于2006年6月8日提交的美国专利申请序列号60/811,992，该申请名为“QUINOLONEANALOGS DERIVATIZED WITH SULFONIC ACID，SULFONATE ORSULFONAMIDE”(用磺酸、磺酸酯或磺酰胺衍生的喹诺酮类似物)。
在另一方面，本发明组合的治疗剂是下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
式中，如果Z2、Z3或Z4分别为N，B、X、A或V不存在，而如果Z2、Z3或Z4分别为C，B、X、A或V独立为H、卤素、叠氮基、R2、CH2R2、SR2、OR2或NR1R2；或者 A和V，A和X，或X和B可形成各自可任选取代和/或与环稠合的碳环、杂环、芳基或杂芳基； Z是O、S、NR1、CH2或C＝O； Z1、Z2、Z3和Z4是C或N，只要任意两个N不毗连； W与N和Z一起形成任选取代的5-或6-员环，该环与任选取代的饱和或不饱和环稠合；所述饱和或不饱和环可含有杂原子，并且所述饱和或不饱和环是单环或与一个或多个碳环或杂环稠合； U是R2、OR2、NR1R2、NR1-(CR12)n-NR3R4或N＝CR1R2，其中在N＝CR1R2中，R1和R2可与C一起形成环， 前提条件是U不是H，并且当U是OH、OR2或NH2时，Z1-Z4中至少一个是N； 在各NR1R2中，R1和R2可与N一起形成任选取代的环； 在NR3R4中，R3和R4可与N一起形成任选取代的环； R1和R3独立为H或C1-6烷基； 各R2是H或各自任选用卤素、一个或多个不毗连杂原子、碳环、杂环、芳基或杂芳基取代的C1-10烷基或C2-10烯基，其中各环是任选取代的；或者R2是任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基； R4是H、任选含有一个或多个选自N、O或S的不毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C2-10烯基或C1-10烷基；或者R3和R4可与N一起形成任选取代的环； 各R5是环W上任何位置的取代基；其是H、OR2、氨基、烷氧基、酰氨基、卤素、氰基或无机取代基；或者R5是C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-CONHR1，它们各自任选被卤素、羰基或一个或多个非毗连杂原子取代；或者两个毗连R5相连获得5-6员任选取代的碳环或杂环，该碳环或杂环可与其它任选取代的碳环或杂环稠合；和 n是1-6。
在以上式(TA4-1)，当Z1是N时，B可以不存在，或者当Z1是C时，B是H或卤素。
在上式(TA4-1)，W与N和Z一起形成任选取代的5-或6-员环，该环与选自下组的任选取代的芳基或杂芳基稠合
式中各Q、Q1、Q2和Q3独立为CH或N； Y独立为O、CH、C＝O或NR1； n和R5如上所限定。
在其它实施方式中，W与N和Z一起形成下式所示的基团
式中Z是O、S、CR1、NR1或C＝O； 各Z5是CR6、NR1或C＝O，前提条件是如果Z和Z5毗连的话，二者不全是NR1； 各R1是H、C1-6烷基、COR2或S(O)pR2，其中p是1-2； R6是H或本领域已知的取代基，包括但不限于炔基、烷基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和 环S和环T可以是饱和或不饱和的。
在一些实施方式中，W与N和Z一起形成与苯基稠合的5-或6-员环。在其它实施方式中，当U是NR1R2时，只要U不是NH2，W与N和Z一起形成与另一环任选稠合的5-或6-员环。在某些实施方式中，当U是NR1R2(例如，NH2)时，W与N和Z一起形成不与另一环稠合的5-或6-员环。
在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA4-2A)或(TA4-2B)所示
式中A、B、V、X、U、Z、Z1、Z2、Z3、Z4和n如TA4-1所述； Z5是O、NR1、CR6或C＝O； R6是H、C1-6烷基、羟基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和 Z和Z5可任选形成双键。
在上式(TA4-1)、(TA4-2A)和(TA4-2B)中，U可以是NR1R2，其中R1是H，R2是任选被杂原子取代的C1-10烷基、C3-6环烷基、芳基或含有一个或多个N、O或S的5-14员杂环。例如，R2可以是被任选取代的吗啉、硫代吗啉、咪唑、氨基二噻二唑(aminodithiadazole)、吡咯烷、哌嗪、吡啶或哌啶取代的C1-10烷基。在其它实例中，R1和R2与N一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑(aminodithiazole)。
式(TA4-1)所示化合物、制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2005年9月16日提交的美国专利申请号11/228,636，该申请名为“QUINOLONEANALOGS”(喹诺酮类似物)。
在还有另一方面，与PARP抑制剂组合的治疗剂可选自下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
式中，当V、X和Y与除氮以外的杂原子相连时，它们不存在，而当与C或N相连时，它们独立为H、卤素、叠氮基、R2、CH2R2、SR2、OR2或NR1R2；或 式中V和X，或X和Y可形成碳环、杂环、芳基或杂芳基，各自可以是任选取代的和/或与环稠合； Z1、Z2和Z3是C、N、O或S； Z是O、S、NR2、CH2或C＝O； W与N和Z一起形成与任选取代的芳基或杂芳基稠合的任选取代的5-或6-员环，其中所述芳基或杂芳基可以是单环或与单环或多环稠合，其中所述环任选含有杂原子； U是-C(＝O)R2、-COOR2、-CONR1R2、-CONR1-(CR12)n-NR3R4、SO3R2、SO2NR1R2、SO2NR1NR1R2、SO2NR1OR2、SO2NR1-(CR12)n-NR3R4或SO2NR1NR1-(CR12)n-NR3R4或SO2NR1-O-(CR12)n-NR3R； 其中在各NR1R2中，R1和R2与N一起形成任选取代的环； 在NR3R4中，R3和R4与N一起形成任选取代的环； R1和R3独立为H或C1-6烷基； 各R2是H或各自任选被卤素、一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子、碳环、杂环、芳基或杂芳基取代的C1-10烷基或C2-10烯基，其中各环是任选取代的；或者R2是任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；或者R2是COR1或S(O)xR1，其中x是1-2； R4是H、任选含有一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子并且任选被碳环或杂环取代的C2-10烯基或C1-10烷基；或者R3和R4与N一起可形成任选取代的环； 各R5是W上任何位置的取代基；其是H、OR2、氨基、烷氧基、酰氨基、卤素、氰基或无机取代基；或者R5是C1-6烷基、C2-6烯基、-CONHR1，它们各自任选被卤素、羰基或一个或多个非毗连杂原子取代；或者两个毗连R5相连以获得5-6员任选取代的碳环或杂环，该碳环或杂环任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合；和 n是1-6。
在上述(TA5-1)中，环T可形成选自下组的任选取代的5-员环
在上式(TA5-1)中，W与N和Z一起可形成任选取代的5-或6-员芳环或杂芳环，所述芳环或杂芳环与选自下组的任选取代的芳基或杂芳基稠合
式中各Q、Q1、Q2和Q3独立为CH或N； P独立为O、CH、C＝O或NR1； n和R5如上限定。
在这些化合物的其它实施方式中，W与N和Z一起可形成选自以下结构式所示的基团
式中Z是O、S、NR2、CH2或C＝O； 各Z4是CR6、NR2或C＝O； R6是H或本领域已知的取代基，包括但不限于羟基、烷基、烷氧基、卤素、氨基或酰氨基；和 环S和M可以是饱和或不饱和的。
在一些实施方式中，W与N和Z一起可形成与苯基稠合的5-或6-员环。
在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-2A)或(TA5-2B)所示
式中U、V、W、X、Y、Z、Z1、Z2、Z3、R5和n如以上TA5-1所述； Z4是CR6、NR2或C＝O；和 Z和Z4可任选形成双键。
在上式(TA5-1)、(TA5-2A)和(TA5-2B)中，U可以是SO2NR1R2，其中R1是H，R2是任选被杂原子、C3-6环烷基、芳基或含有一个或多个N、O或S的5-14员杂环取代的C1-10烷基。例如，R2可以是被任选取代的吗啉、硫代吗啉、咪唑、氨基二噻二唑、吡咯烷、哌嗪、吡啶或哌啶取代的C1-10烷基。在其它实例中，R1和R2与N一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑。
在这些化合物的其它实施方式中，U是SO2NR1-(CR12)n-NR3R4；n是1-4；各R1是H或烷基；NR3R4中的R3和R4一起形成任选取代的哌啶、吡咯烷、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑或氨基二噻唑。在一些实例中，U是SO2NH-(CH2)n-NR3R4，式中R3和R4与N一起形成任选取代的吡咯烷，其可在该吡咯烷环中的任何位置连接于(CH2)n。在一个实施方式中，R3和R4与N一起形成N-甲基取代的吡咯烷。
在一个实施方式中，本发明提供式(TA5-1)、(TA5-2A)或(TA5-2B)所示化合物，式中 如果V和Y存在，各自独立为H或卤素(例如，氯或氟)； X是-(R5)R1R2，式中R5是C或N，其中在各-(R5)R1R2中，R1和R2一起可形成任选取代的芳环或杂芳环； Z是NH或N-烷基(例如，N-CH3)； W与N和Z一起可形成与任选取代的芳环或杂芳环稠合的任选取代5-或6-员环；和 U是-SO2R5R6-(CH2)n-CHR2-NR3R4，式中R5是CR1或N；R1是H或烷基；R6是H或C1-10烷基，其中在-CHR2-NR3R4部分中，各R3或R4与C一起可形成任选取代的杂环或杂芳环，或者其中在-CHR2-NR3R4部分中，各R3或R4与N一起可形成任选取代的碳环、杂环、芳环或杂芳环。
在另一实施方式中，本发明提供式(TA5-1)、(TA5-2A)或(TA5-2B)所示化合物，式中 如果V和Y存在，其是H或卤素(例如，氯或氟)； 如果X存在，其是-(R5)R1R2，其中R5是C或N，其中在各-(R5)R1R2中，R1和R2一起可形成任选取代的芳环或杂芳环； Z是NH或N-烷基(例如，N-CH3)； W与N和Z一起形成与任选取代的芳环或杂芳环稠合的任选取代的5-或6-员环；和 U是-SO2R5R6-(CH2)n-CHR2-NR3R4， R5是CR1或N； R6是H或烷基，其中在-CHR2-NR3R4部分中，各R3或R4与C一起可形成任选取代的杂环或杂芳环，或者其中在-CHR2-NR3R4部分中，各R3或R4与N一起可形成任选取代的碳环、杂环、芳环或杂芳环。
在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-3)所示
式中U、V、X、Y、Z、Z1、Z2、Z3、R5和n如上所述。
在还有另一实施方式中，本发明化合物如通式(TA5-4A)或(TA5-4B)所示
式中U、V、X、Z、R5和n如以上关于TA5-1所述。
式(TA5-1)所示化合物和它们的制备及使用方法描述于Pierre等于2006年6月8日提交的美国专利申请序列号60/811,990，名为PYRIDINONEANALOGS(吡啶酮类似物)，和Nagasawa等于2007年3月1日提交的美国临时专利申请，代理人案件号为53223-3003001。
在还有另一方面，用于本发明组合的治疗剂可以是下式所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
式中X是H、OR2、NR1R2、卤素、叠氮基、SR2或CH2R； A是H、卤素、NR1R2、SR2、OR2、CH2R2、叠氮基或NR1-(CR12)n-NR3R4； Z是O、S、NR1或CH2； U是R2、OR2、NR1R2或NR1-(CR12)n-NR3R4，只要U不是H； W是任选取代的芳基或杂芳基，其可以是单环或与任选含有杂原子的单环或多环稠合； 其中在NR1R2中，R1和R2与N一起，在NR3R4中，R3和R4与N一起可独立形成含N和任选的O或S的任选取代5-6员环； R1和R3独立为H或C1-6烷基；和 R2和R4独立为H、或任选含有一个或多个选自N、O或S的非毗连杂原子并任选被取代或未取代的芳环、杂芳环碳环或杂环取代的C2-10烯基或C1-10烷基；或者R2任选是环烷基、取代的杂环、芳基或杂芳基； R5是W上任何位置处的取代基，其是H、卤素、氰基、叠氮基、-CONHR1、OR2、或C1-6烷基或C2-6烯基，各任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代； 前提条件是X和A不都是H，还有当A是H、卤素或NR1R2时，R5是氰基或-CONHR1； 或式(TA6-1A)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药
A是H、卤素、叠氮基、SR2、OR2、CH2R2、NR1R2或NR1-(CR12)n-NR3R4； Z、U、W、R1、R2、R3和R4如式TA6-1中所限定；和 R5是W上任何位置处的取代基，其是H、卤素、氰基、叠氮基、-CONHR1、OR2、或C1-6烷基或C2-6烯基，各任选被卤素、＝O或一个或多个杂原子取代； 其中式TA6-1和-1A中各任选取代的部分被一个或多个卤素、氰基、叠氮基、乙酰基、酰氨基、OR2、NR1R2、氨基甲酸酯基、C1-10烷基、C2-10烯基取代，各基团被卤素、＝O、芳基或一个或多个选自N、O或S的杂原子任选取代；或被芳环、碳环或杂环取代。
在上式TA6-1或TA6-1A中，W可选自下组
式中Q、Q1、Q2和Q3独立为CH或N； Y独立为O、CH、＝O或NR1；和 R5如式1所限定。
在这些化合物的一些实施方式中，上式TA6-1或TA6-1A中的各W可以是任选取代的苯基、吡啶、联苯基、萘、菲、喹啉、异喹啉、喹唑啉、噌啉、2，3-二氮杂萘、喹喔啉、吲哚、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并呋喃、蒽酮、呫吨酮、吖啶酮、芴酮、咔唑基、嘧啶并[4，3-b]呋喃、吡啶并[4，3-b]吲哚、吡啶并[2，3-b]吲哚、芴酮、吖啶或酚嗪(acridizine)。在一些实施方式中，W是任选取代的苯基。
式(TA6-1)所示化合物，制备和使用它们的方法描述于Whitten等于2006年4月14日提交的美国专利申请序列号11/404,947，其名为QUINOBENZOXAZINE ANALOGS AND METHODS OF USINGTHEREOF(喹诺苯并噁嗪类似物及其使用方法)。
本发明联用上述治疗剂与至少一种调节剂。本领域已知PARP抑制剂的例子，它们描述于，例如C.R.Calebrese等，Clin.Cancer Res.第9卷，2711-18(2003)；S.J.Veuger等，Cancer Res.第63卷，6008-15(2003)；C.R.Calabrese等，J.Nat’l.Cancer Inst.96(1)，56-67(2004)；“Potent Novel PARPInhibitors”(强效的新PARP抑制剂)，Expert Reviews in Molecular Medicine，第7(4)卷(2005年3月)；和P.Jagtap，Nature Rev.Drug Discovery，第4卷，421-40(20045)。这些文献中所揭示的PARP抑制剂适用于本发明的方法和组合物。可用的其它PARP抑制剂包括，例如10-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-2H-7-氧杂-1，2-二氮杂-苯并[de]蒽-3-酮(GPI 15427)和2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5H-苯并[c][1，5]二氮杂萘-6-酮(GPI 16539)。参见，Di Paola等，Eur.J.Pharmacology，527(1-3)，163-71(2005)。适用于本发明的PARP抑制剂的代表性但非限制性例子包括下文所示的已知化合物，包括其药学上可接受的盐和其单独异构体或异构体的混合物。
三环内酰胺吲哚 三环苯并咪唑 AG14361 TI3R＝4’-F R＝H R＝H R＝2-Cl R＝3-NH2 R＝2-OH
CEP-6800 BGP-15
可与上述治疗剂联用的调节剂还包括具有本文所述的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示结构的化合物。
化合物TA1-1A是用于本发明方法和组合物的优选治疗剂。其配制和给药的合适方法的更多细节见Lim等于2006年6月3日提交的美国临时申请序列号60/803,864。
本发明还部分提供包含属于本文所述本发明范围的至少一种治疗剂与至少一种调节剂的组合的药物组合物。所述组合物可任选包含稀释剂或其它药学上可接受的赋形剂。
对于动物或人对象的给药，治疗剂的合适剂量通常是0.01-15mg/kg，优选0.1-10mg/kg。剂量水平依赖于疾病的性质、药效、患者的情况、职业医师的判断和给药频率及方式，然而，本领域普通技术人员可优化这些参数。
类似地，调节剂，例如本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII所示化合物的剂量通常在约0.01-15mg/kg之间，和约0.1-10mg/kg之间。调节剂单独可对治疗癌症有活性。对于上述组合治疗，当与治疗剂联用时，调节剂的剂量通常比单用调节剂治疗同一疾病或对象所需的剂量低2倍到10倍。采用本领域已知方法不难测定与治疗剂联用的调节剂的合适量。
还提供了调节PARP蛋白活性的方法，包括将包含PARP蛋白的系统与调节(例如，抑制)该蛋白质活性有效量的本文所述组合物接触。这种实施方式中的系统可以是无细胞系统或含细胞系统。还提供了降低细胞增殖和任选诱导凋亡的方法，包括将细胞与本文所述组合物或组合治疗接触，其中治疗剂的给药量能有效降低细胞增殖，PARP抑制剂的给药量足以增强治疗剂的效力。这种实施方式中的细胞可以是在细胞系、组织或对象(例如，科研动物或人)中。
本发明还部分提供治疗细胞增殖异常相关疾病的方法。例如，提供了治疗对象中细胞增殖疾病的方法，所述方法包括将本文所述治疗剂和本文所述PARP抑制剂给予需要治疗细胞增殖疾病的对象；治疗剂和PARP抑制剂的给药量能有效治疗细胞增殖疾病。所述对象可以是任选含有肿瘤，例如异种移植肿瘤(例如，人肿瘤)的科研动物(例如，啮齿类动物、狗、猫、猴)，或可以是人。
有时，细胞增殖疾病是肿瘤或无肿瘤癌症，包括但不限于结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、淋巴结癌症、结肠癌、前列腺癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、肝癌、肾癌、血液和心脏癌症(例如，白血病、淋巴瘤、癌)。
可一起或分别制备用于给药的治疗剂和PARP抑制剂的任何合适制剂。对于各组分，可采用任何合适的给药途径，包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、肌肉内、透皮、局部和皮下途径。可单独或一起给予一起使用的两种物质(PARP抑制剂和治疗剂)。当一起给予时，它们可以是不同的剂型，或者它们可混合在一个组合药物中。因此，本文提供了包含本文所述治疗剂和至少一种PARP抑制剂及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
以下实施例说明但不限制本发明。
实施例1 式I、II、III和IV所示化合物的合成工艺 工艺1 用浓硫酸(5mL)处理乙醇(100mL)中的3-溴-4-吡啶羧酸(3.0g，14.9mmol)。
使该混合物回流，此时所有物质溶解。回流12小时后，LCMS表明反应完成。将该反应混合物冷却至室温，用旋转蒸发仪浓缩至其原始体积的三分之一。然后用250mL乙酸乙酯稀释该混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤两次。用旋转蒸发仪浓缩得到浅黄色油状的3.25g乙酯，其纯度足以进行随后的化学转化。LCMS(ESI)216.2(M+1)+。
将3-溴-4-吡啶羧酸乙酯(1.15g，5.0mmol)、2-氨基-4-甲氧基羰基-苯基硼酸(1.04g，4.5mmol)、乙酸钠(1.64g，20mmol)、氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(182mg，0.25mmol)和二甲基甲酰胺(7.5mL)混合在一个烧瓶中。将该烧瓶抽真空，充氮气两次并加热至125℃，搅拌12小时或直至LCMS表明不存在任何起始物质。将该混合物冷却至室温，加入水(100mL)以形成棕色沉淀物。滤出沉淀物得到637mg 5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯。LCMS(ESI)255.4(M+1)+。
混合5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(200mg，0.787mmol)与磷酰氯(1mL)并加热至回流。2小时后，LCMS表明不存在任何起始物质。减压除去挥发物质。将残留物溶解于二氯甲烷(50mL)，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤两次。硫酸钠干燥有机相，旋转蒸发仪浓缩得到浅灰色固体状的5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(140mg)。LCMS(ESI)273.3(M+1)+。
将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(20mg，0.074mmol)与苯胺(60mg，0.65mmol)和N-甲基吡咯烷酮(0.2mL)混合在微波试管中，将该混合物加热至120℃，持续10分钟，此时LCMS表明不存在任何起始物质从而表明反应完成。然后通过HPLC纯化该混合物得到酯(22mg)或者可用6N氢氧化钠处理其得到酸(19mg)。LCMS(ESI)316.3(M+1)+。1HNMR(400MHz，CD3OD)10.17(1H，s)，9.67(1H，br)，8.99(1H，d，5.9Hz)，8.83(1H，d，8.6Hz)，8.62(1H，d，5.9Hz)，8.24(1H，d，1.6Hz)，8.04(1H，s)，8.02(1H，s)，7.93(1H，dd，8.2，1.6Hz)，7.43(1H，d，7.4Hz)，7.41(1H，d，7.4Hz)，7.10(1H，m)。
将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸甲酯(232mg，0.853mmol)与间-氯苯胺(217mg，1.71mmol)和N-甲基吡咯烷酮(1mL)混合在烧瓶中，将该混合物加热至80℃，持续2小时，此时LCMS表明不存在任何起始物质从而表明反应完成。将该混合物溶解于CH2Cl2，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，Na2SO4干燥。通过快速层析(SiO2，EtOAc/己烷梯度为1∶1-9∶1)纯化该物质获得酯。将该物质溶解于甲醇和6NNaOH水溶液中，50℃搅拌混合物30分钟。真空除去挥发物质。利用己烷和乙酸乙酯的混合物，从乙酸/THF/甲醇中研磨残留物。经过滤和干燥提供147mg 5-(3-氯苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-羧酸。LCMS(ESI)350(M+1)+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.21(s，1H)，9.72(br s，1H)，9.02(d，J＝5.6，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，8.62(d，J＝5.6，1H)，8.31(br s，1H)，8.28(d，J＝1.6，1H)，8.10(br d，J＝8，1H)，7.99(dd，J＝2，J＝8.4，1H)，7.46(t，J＝8.0，1H)，7.16(br d，J＝7.2，1H)ppm。
将乙酸钠(410mg，5mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(36mg，0.05mmol)加入3-溴-4-吡啶羧酸乙酯(230mg，1.0mmol)和2-氨基-4-氰基苯基硼酸盐酸盐(179mg，0.9mmol)的混合物中。将该混合物连接于出口起泡器，加热至120℃，持续18小时，此时LCMS分析根据起始物质的消失表明反应完成。冷却至室温后，加入水，滤出黑色固体，用二氯甲烷洗涤获得灰色固体状的5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(156mg)，其纯度足以进行随后的化学转化。LCMS(ESI)222.4(M+1)+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)12.2(1H，s)，9.96(1H，s)，8.90(1H，d，5.1Hz)，8.77(1H，d，8.2Hz)，8.13(1H，d，5.1Hz)，7.73(1H，dd8.2，1.6Hz)，7.70(1H，d，1.6Hz)。
将磷酰氯(2mL)加入5-氧代-5，6-二氢苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(150mg，0.66mmol)。将该混合物加热回流3小时，此时LCMS分析表明不存在任何起始物质。减压除去挥发物，将粗产物溶解于二氯甲烷，用盐水和饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥。减压浓缩后，用乙酸乙酯和己烷研磨粗产物得到5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(125mg)。LCMS(ESI)240.3(M+1)+。
在微波反应器中将5-氯苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(30mg，0.13mmol)、苯胺(60mg，0.65mmol)和二甲基甲酰胺(0.2mL)的混合物加热至120℃，持续10分钟。LCMS表明不存在起始物质。用水稀释混合物，静置数分钟沉淀得到灰白色固体状5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(25mg)。LCMS(ESI)297.3(M+1)+。
将叠氮钠(65mg，1mmol)和氯化铵(53mg，1mmol)加入5-(苯基氨基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-8-腈(25mg，0.084mmol)的二甲基甲酰胺(0.2mL)粗制混合物中。将该混合物在120℃加热18小时，此时LCMS分析表明不存在任何起始物质。用水稀释该混合物，通过制备型HPLC纯化得到N-苯基-8-(1H-四唑-5-基)苯并[c][2，6]二氮杂萘-5-胺(14mg)。LCMS(ESI)340.3(M+1)+.1HNMR(400MHz，CD3OD)10.11(1H，s)，8.96(1H，d，5.9Hz)，8.85(1H，d，8.2Hz)，8.53(1H，d，5.5Hz)，8.47(1H，s)，8.16(1H，d，8.6Hz)，7.88(1H，s)，7.86(1H，d，0.8Hz)，7.57-7.51(3H，m)，7.36-7.31(2H，m)。
代表性化合物见下表1A所示。
表1A
工艺2
将5-溴嘧啶-4-羧酸(按照美国专利4,110,450所述方法制备)(1.0当量，6.14g，30.2mmol)悬浮在CH2Cl2(100ml)中。加入草酰氯(1.1当量，2.9ml，33.0mmol)，再加入2滴DMF。室温下搅拌混合物过夜，真空除去挥发物。将残留物溶解于MeOH(50ml)中并加热。真空蒸发MeOH后，将化合物溶解于CH2Cl2中，倒在预填充的硅胶柱上。用20％的乙酸乙酯-己烷洗脱所述物质。蒸发溶剂获得淡橙色结晶固体状5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯(2.54g，39％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 217[M]+；219[M+2]+；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.04(s，3H)，9.02(s，1H)，9.21(s，1H)ppm。
工艺3
将乙酸钠(4.0当量，1.92g，23.41mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(0.05当量，214mg，0.29mmol)加入5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，1.27g，5.85mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，1.35g，5.85mmol)的无水DMF(10ml)混合物中。120℃，氮气气氛下搅拌该混合物18小时。加入水和盐水，滤去得到的固体杂质。用CH2Cl2(4x)萃取该物质，Na2SO4干燥合并的萃取相。蒸发CH2Cl2后，真空加热残留物以蒸发剩余的DMF。CH2Cl2中研磨得到的固体，过滤并干燥以提供米色固体状5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(127mg，8.5％产率)。LCMS(ES)＞80％纯度，m/z 256[M+1]+；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.79(s，3H)，7.81(d，J＝8.0，1H)，8.68(d，J＝8.8，1H)，9.49(s，1H)，10.19(s，1H)，12.37(s，1H)ppm。
工艺4
在一小瓶中，将5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，151mg，0.59mmol)在甲苯(1ml)中与DIEA(1.5当量，155ul，0.89mmol)和POCl3(5当量，270ul，3.0mmol)混合。120℃，搅拌该混合物1小时，冷却至室温。加入冰和水后，用CH2Cl2(4x)萃取化合物。Na2SO4干燥溶液，经硅藻土垫过滤。蒸发挥发物后，在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨该物质，过滤并干燥获得浅棕色绒毛状固体的5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(115mg，71％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 274[M+1]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.96(s，3H)，8.37(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.60(d，J＝1.6，1H)，9.15(d，J＝8.8，1H)，9.74(s，1H)，10.61(s，1H)ppm。
工艺5
将5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(10mg)在NMP(0.1ml)中与3，5-二氟苯胺(100mg)混合。利用微波将该混合物在120℃加热10分钟。加入水，用CH2Cl2萃取该物质。除去溶剂。在乙酸乙酯和己烷的混合物中研磨，过滤得到5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯。将该物质悬浮在THF和MeOH的1∶1混合物(2ml)中，加入5N氢氧化锂水溶液。室温下剧烈搅拌该混合物5小时。加入水和6N盐酸以诱导预期物质沉淀。滤出固体，用水洗涤，干燥并悬浮在MeOH中。经过滤和干燥得到黄色固体状的5-(3，5-二氟苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(4mg，31％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 353[M+1]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ6.90(br t，J＝9.6，1H)，8.02(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.18(br d，J＝10.8，2H)，8.34(d，J＝1.6，1H)，8.86(d，J＝8.4，1H)，9.65(s，1H)，10.40(s，1H)，10.44(s，1H)ppm。
工艺6
采用相同方法，从5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯和3-乙炔基苯胺制备5-(3-乙炔基苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸。LCMS(ES)95％纯度，m/z 341[M+1]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ4.20(s，1H)，7.19(d，J＝7.6，1H)，7.42(t，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.30(d，J＝1.6，1H)，8.34(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，8.49(br s，1H)，8.85(d，J＝8.8，1H)，9.65(s，1H)，10.11(s，1H)，10.43(s，1H)ppm。
通过相同方法，利用5-氯嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯和合适的胺制备代表性类似物(表1B)。
表1B
工艺7
按照工艺2中用于制备5-溴嘧啶-4-羧酸甲酯的方法制备5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯。LCMS(ES)＞90％纯度，m/z 263[M]+，265[M+2]+；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.59(s，3H)，4.00(s，3H)，8.71(s，1H)ppm。
工艺8
将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，661mg，2.52mmol)溶解于CH2Cl2(10ml)中。加入间-氯过苯甲酸(m-cpba，77％纯度级别，2.5当量，1.42g，6.34mmol)，室温下搅拌该混合物1小时。向得到的悬液中加入无水THF(10ml)、盐酸甲胺(10当量，1.7g，25.18mmol)和DIEA(10当量，4.3ml，24.69mmol)，室温下搅拌混合物过夜。先在真空中除去溶剂，然后加入CH2Cl2和饱和的碳酸氢钠水溶液。倾倒出两相，再作两次CH2Cl2萃取。Na2SO4干燥合并的萃取相，蒸发溶剂。通过硅胶快速层析纯化(20-30％乙酸乙酯/己烷)提供灰白色固体状的5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-羧酸甲酯(461mg，75％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 246[M]+，248[M+2]+。
工艺9
将乙酸钠(3.0当量，240mg，2.93mmol)和氯化1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁钯(II)(与二氯甲烷形成络合物)(0.05当量，36mg，0.049mmol)加入5-溴-2-(甲基氨基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，240mg，0.975mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.0当量，226mg，0.98mmol)的无水DMF(2ml)混合物中。120℃微波加热并搅拌混合物10分钟。加水诱导预期化合物沉淀。过滤并干燥该化合物得到3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(57mg，21％产率)。LCMS(ES)＞80％纯度，m/z 285[M+1]+。
工艺10
采用工艺3和4所述的方法，从3-(甲基氨基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯制备3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸。通过快速层析纯化终产物，分离得到黄色固体(0.35mg)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 346[M+1]+。
工艺11
在微波容器中，将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1.0当量，274mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.2当量，329mg，1.42mmol)和乙酸钠(3.0当量，291mg，3.55mmol)混合在无水DMF(2ml)中。通过在溶液中进行氮气鼓泡10分钟对混合物脱气，用微波将反应(体系)在120℃加热30分钟。冷却后，使得预期物质从NMP中沉淀出来。滤出固体，悬浮在水中，过滤并干燥。在AcOEt中研磨该物质，过滤得到黄色固体。利用相同量的物质重复同一方法9次获得3-(甲硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(283mg，10％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 302[M+1]+，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ2.71(s，3H)，3.89(s，3H)，7.80(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.97(d，J＝1.6，1H)，8.59(d，J＝8.8，1H)，9.98(s，1H)，12.34(s，1H)ppm。
工艺12
将3-(甲硫基)-5-氧代-5，6-二氢嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，279mg，0.926mmol)悬浮在甲苯(2ml)中。加入POCl3(2ml)和DIEA(0.5ml)，120℃搅拌该混合物5小时。真空除去挥发物，加入CH2Cl2。用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，用水洗涤，Na2SO4干燥。经硅藻土垫过滤溶液，真空除去溶剂。在己烷和AcOEt中研磨该物质，过滤和干燥得到米色固体状5-氯-3-(甲硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(184mg，63％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 320[M+1]+，322[M+3]+。
工艺13
将5-氯-3-(甲硫基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，182mg，0.57mmol)与苯胺(0.5ml)在NMP(1ml)中混合。用微波将混合物在120℃加热10分钟。加入水，过滤得到的固体并干燥。在EtOAc和己烷中研磨该化合物，过滤获得黄色固体状3-(甲硫基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 377[M+1]+。将该物质悬浮在CH2Cl2(4ml)中，小批量加入间-氯过苯甲酸(77％纯度，2.5当量，165mg，0.737mmol)。1小时后，加入额外量(100mg)的mcpba，搅拌混合物1.5小时。加入更多CH2Cl2后，用水(4x)洗涤有机相，Na2SO4干燥，溶液经硅胶垫过滤，用MeOH/CH2Cl2混合物洗脱。蒸发溶剂后，分离得到黄色固体状3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(166mg，72％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 409[M+1]+，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.77(s，3H)，3.93(s，3H)，7.15(t，J＝7.2，1H)，7.45(t，J＝7.6，2H)，7.99(dd，J＝2.0，J＝8.4，1H)，8.16(d，J＝7.6，2H)，8.28(d，J＝2.0，1H)，8.89(d，J＝8.8，1H)，9.76(s，1H)，10.61(s，1H)ppm。
工艺14
在密闭的小瓶中，将3-(甲基磺酰基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯(1.0当量，62mg，0.152mmol)与盐酸甲胺(100mg)、DIEA(260ul)在DMF(1ml)中混合。60℃搅拌该混合物40分钟。加入水诱导3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸甲酯沉淀，过滤分离。将该物质悬浮在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(4ml)中，有LiOH(200mg)存在下于60℃剧烈搅拌1.5小时。加入HCl水溶液达到pH＝1。过滤固体，干燥并在AcOEt/己烷中研磨得到黄色固体状3-(甲基氨基)-5-(苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(40mg，74％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 346[M+1]+。
采用相同的方法制备以下类似物(表1C)。通过制备型HPLC和吉尼维克(genevac)蒸发纯化后，分离得到固体物质。
表1C
工艺15
将3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(20mg)与2当量合适的伯胺在NMP(0.5ml)中混合。加入HOBt(14mg)、三乙胺(13uL)和EDCI(18mg)，70℃搅拌该混合物1小时。加入水和HCl，过滤分离该物质。采用该方法制备表1D所示化合物。
表1D
工艺16
将3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-羧酸(100mg，0.23mmol)与二苯基磷酰基叠氮化物(50ul，0.23mmol)和三乙胺(34ul，0.23mmol)在异丙醇(8ml)中反应。95℃搅拌该混合物3小时。除去溶剂，将残留物在水和乙酸乙酯之间分配。Na2SO4干燥有机层，真空除去溶剂。加入CH2Cl2诱导固体形成，滤出并干燥获得3-(环丙基氨基)-5-(3-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶并[4，5-c]喹啉-8-基氨基甲酸异丙酯。LCMS(ES)90％纯度，m/z 497[M+1]+。
实施例2 式V、VI、VII和VIII所示化合物的合成工艺 工艺1
将2-溴-3-噻吩羧酸(1.0当量，12.56g，60.66mmol)悬浮在CH2Cl2(200ml)中。加入草酰氯(1.1当量，5.9ml，67.16mmol)和5滴DMF，诱导气体生成。室温下搅拌该混合物过夜，真空除去挥发物。将得到的固体悬浮在干燥甲醇(150ml)中，将该混合物加热至沸腾。蒸发溶剂得到粗制棕色油状的2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(13.16g，98％产率)。LCMS(ES)99％纯度，m/z未测；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.88(s，3H)，7.23(d，J＝5.6，1H)，7.56(d，J＝5.6，1H)ppm。
工艺2
在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，260mg，1.18mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸盐酸盐(1.1当量，300mg，1.30mmol)、乙酸钠(3.0当量，292mg，3.56mmol)和PdCl2(dppf)(0.05当量，31mg，0.059mmol)一起混合在无水DMF(2ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物10分钟。加入水，滤出固体并干燥。将该物质悬浮在CH2Cl2中，过滤并干燥获得黄色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(152mg，50％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 260[M+1]+；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.54(d，J＝5.2，1H)，7.79(d，J＝4.8，1H)，7.86(d，J＝8.4，1H)，7.91(dd，J＝8.4，J＝1.6，1H)，8.03(d，J＝1.2，1H)ppm。
工艺3
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，618mg，2.38mmol)悬浮在MeOH、THF和水的10ml混合物(1∶1∶1，v∶v∶v)中。加入LiOH(2.0当量，114mg，4.76mmol)，室温下搅拌该混合物2小时。加入额外量的LiOH(114mg)，搅拌该混合物1小时。加入LiOH(50mg)，再搅拌该混合物2小时。加入水，经硅藻土垫过滤溶液。用1NNaOH水溶液彻底清洗硅藻土垫。用6N水性HCl酸化该溶液以诱导预期物质沉淀。过滤并干燥获得黄色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(562mg，96％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 246[M+1]+；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.61(d，J＝5.2，1H)，7.73(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.88(d，J＝5.6，1H)，7.92(d，J＝8.4，1H)，8.02(d，J＝1.6，1H)，11.92(s，1H)，13.21(br.s，1H)ppm。
工艺4
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(1.0当量，38mg，0.155mmol)悬浮在二噁烷(1ml)中。加入LiAlH4(7.0当量，40mg，1.05mmol)，100℃搅拌该混合物45分钟。加入水，然后加入MeOH和CH2Cl2。滤去固体盐，用MeOH和CH2Cl2洗涤。真空蒸发挥发物后，将该物质溶解于NMP、MeOH和水的混合物中，通过制备型HPLC纯化。吉尼维克(genevac)蒸发获得灰白色固体状7-(羟甲基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(12mg，34％)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 232[M+1]+；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ4.56(s，2H)，7.15(d，J＝7.6，1H)，7.39(br s，1H)，7.55(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.2，1H)，7.76(d，J＝8.0，1H)，11.73(s，1H)ppm。
工艺5
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，17mg，0.066mmol)悬浮在氯仿(0.3ml)和乙酸(0.1ml)的混合物中。加入NBS(9.5当量，112mg，0.63mmol)，70℃搅拌该混合物16小时。加入水和氨水，CH2Cl2(2x)萃取该物质。Na2SO4干燥合并的萃取相，真空除去溶剂获得2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(17mg，76％)。LCMS(ES)＞85％纯度，m/z 338[M]+，340[M+2]+；1H NMR(CDCl3/CD3OD，9∶1，400MHz)δ3.99(s，3H)，7.30(m，1H)，7.69(d，J＝8.4，1H)，7.45(m，1H)，7.88(br d，J＝8，1H)，8.05(br s，1H)ppm。
工艺6
将2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，17mg，0.050mmol)悬浮在MeOH/THF/水的1∶1∶1混合物(0.6ml)中。加入LiOH(39mg)，室温下搅拌该混合物1小时。加入水和6N HCl，过滤得到的沉淀物。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发得到固体状2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(2.1mg，13％产率)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 324[M]+，326[M+2]+；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.75(s，1H)，7.75(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.90(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.06(s，1H)ppm。
工艺7
在密闭的容器中，将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(44mg，0.170mmol)悬浮在浓氨水(1ml)中。100℃搅拌该混合物过夜。加入1NNaOH水溶液，室温下搅拌该混合物2小时。滤出该固体并干燥得到棕色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(13mg，32％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 245[M+1]+。
工艺8
在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，64mg，0.29mmol)、2-氨基苯基硼酸(1.2当量，48mg，0.35mmol)、乙酸钠(3.0当量，71mg，0.86mmol)和PdCl2(dppf)(0.1当量，15mg，0.028mmol)一起混合在无水DMF(0.2ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物5分钟。通过制备型HPLC纯化该物质。蒸发乙腈，用CH2Cl2(3x)萃取该化合物。水洗合并的有机相，Na2SO4干燥，真空除去溶剂。EtOH重结晶得到棕褐色结晶固体状噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(7mg，12％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 202[M+1]+；1H NMR(CDCl3/CD3OD，9∶1，400MHz)δ7.28(m，1H)，7.33(m，1H)，7.43-7.50(m，2H)，7.74(d，J＝4.4，1H)，7.82(d，J＝7.6，1H)ppm。
工艺9
在微波容器中，将2-溴-3-噻吩羧酸甲酯(1.0当量，250mg，1.13mmol)、2-氨基-3-氰基苯基硼酸HCl(1.1当量，250mg，1.24mmol)、乙酸钠(3.0当量，278mg，3.39mmol)和PdCl2(dppf)(0.007当量，4.3mg，0.0082mmol)一起混合在无水DMF(2.5ml)中。用微波炉在120℃加热该混合物10分钟。加入水，用CH2Cl2萃取该物质。盐水洗涤有机萃取相，Na2SO4干燥，真空除去溶剂。在AcOEt中超声处理得到的固体，过滤并干燥得到米色固体状4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(121mg，48％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 227[M+1]+。
工艺10
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，20mg，0.088mmol)溶解于无水DMF(0.15ml)中。加入叠氮钠(4.0当量，23mg，0.354mmol)和氯化铵(4.0当量，19mg，0.354mmol)，120℃搅拌该混合物过夜。冷却反应混合物，加入水。加入6NHCl水溶液诱导沉淀物形成。过滤和真空干燥后，分离得到浅绿色固体状7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮(18mg，76％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 270[M+1]+，242[M+1-N2]+；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.64(d，J＝5.2，1H)，7.86(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，7.89(d，J＝5.2，1H)，8.09(d，J＝8.0，1H)，8.16(d，J＝1.6，1H)，12.03(s，1H)ppm。
工艺11
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，18mg，0.069mmol)溶解于无水DMF(0.4ml)中。加入K2CO3(7.0当量，70mg，0.506mmol)和3-溴-1-丙醇(16当量，100ul，1.144mmol)，100℃搅拌该混合物1.5小时。加入水后，用CH2Cl2萃取该混合物。Na2SO4干燥合并的萃取相，真空除去溶剂。通过制备型硅胶TLC分离化合物8和9(用30％AcOEt/己烷洗脱两次，然后用50％AcOEt/己烷洗脱一次)。极性较低的化合物是4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(12mg)。LCMS(ES)80％纯度，m/z 318[M+1]+。极性较高的化合物是5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(19mg)。LCMS(ES)80％纯度，m/z 318[M+1]+。两种化合物无需进一步纯化即可用于后续步骤。
工艺12
将5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，19mg，0.060mmol)溶解于THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物(0.5ml)中。加入LiOH(40mg)，室温下搅拌得到的混合物1.5小时。加入水、MeOH和HCl，通过制备型HPLC纯化该溶液。吉尼维克蒸发得到白色固体状5-(3-羟丙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(4mg，22％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 304[M+1]+。1H NMR(CDCl3/CD3OD，9∶1，400MHz)δ2.08(qi，J＝6.0，2H)，3.61(t，J＝5.2，2H)，4.62(t，J＝6.0，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.77(d，J＝5.2，1H)，7.93(d，J＝8.0，1H)，7.99(dd，J＝1.2，J＝8.4，1H)，8.26(d，J＝0.8，1H)ppm。
工艺13
按照工艺12所用的方法制备4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯。分离得到固体4-(3-羟基丙氧基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(3mg，26％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 304[M+1]+。
工艺14
按照工艺11所用的方法，从4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯和2-二甲基氨基乙基氯制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯。LCMS(ES)95％纯度，m/z 331[M+1]+。
工艺15
按照工艺12所用的方法制备5-(2-(二甲基氨基)乙基)-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸。通过制备型HPLC和吉尼维克蒸发得到TFA盐物质。LCMS(ES)95％纯度，m/z 317[M+1]+，1H NMR(CDCl3/CD3OD，9∶1，400MHz)δ3.06(s，6H)，3.50(t，J＝7.6，2H)，4.88(t，J＝7.6，2H)，7.53(d，J＝5.2，1H)，7.73(d，J＝5.6，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，7.95(br d，J＝8.4，1H)，8.2(br s，1H)ppm。
工艺16
将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，1.50g，5.79mmol)悬浮干燥甲苯(15ml)中。加入POCl3(1.2当量，0.64mmol，6.99mmol)和DIEA(0.8当量，0.81mmol，4.65mmol)，120℃在氮气气氛下剧烈搅拌该混合物3小时。加入冰和水来水解该混合物。用CH2Cl2(4x)萃取化合物。Na2SO4干燥合并的萃取相，经硅藻土垫过滤黑色溶液。真空蒸发挥发物后，在AcOEt和己烷的混合物中研磨所得固体。经过滤和干燥得到黄色绒毛状固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.14g，71％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 278[M+1]+，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.01(s，3H)，7.72(d，J＝4.8，1H)，7.74(d，J＝5.2，1H)，8.14(d，J＝8.4，1H)，8.25(d，J＝8.4，1H)，8.85(d，J＝1.6，1H)ppm。
工艺17
按照工艺16所用的方法，从噻吩并[3，2-c]喹啉-4(5H)-酮制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉。分离得到固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉(71mg，93％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 220[M+1]+，223[M+3]+。
工艺18
按照工艺16所用的方法制备4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。分离得到黄色绒毛状固体4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(833mg，77％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 245[M+1]+，247[M+3]+。
工艺19
将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合在小瓶中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，过滤并干燥得到的固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。LCMS(ES)95％纯度，m/z 302[M+1]+。
工艺20
将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(34mg，0.113mmol)溶解于NMP(0.3ml)中。加入30％H2O2(0.2ml)水溶液，然后加入6N NaOH(50ul)。50℃加热该混合物2小时。加入额外量的30％H2O2水溶液(0.3ml)和6NNaOH(100ul)，30分钟后有70％转化。加入水，过滤并干燥固体。在同一条件下使该物质进一步反应以获得完全的转化。分离得到固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(30mg，83％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 320[M+1]+。
工艺21
将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(28mg，0.088mmol)悬浮在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛中，氮气气氛中在80℃加热该混合物2小时。真空除去挥发物。(加入)乙酸(0.5ml)和无水肼(0.1ml)，115℃搅拌该混合物1小时。加入水和盐水，过滤固体。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发和在AcOEt/己烷中研磨得到灰白色固体状N-苯基-7-(4H-1，2，4-三唑-3-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(9mg，30％产率)。LCMS(ES)94％纯度，m/z 344[M+1]+。
工艺22
将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，27mg，0.0897mmol)和盐酸羟胺(10当量，62mg，0.892mmol)及K2CO3(10当量，124mg，0.896mmol)混合在EtOH(0.5ml)中，用微波在100℃加热该混合物10分钟。过滤除去固体，用EtOH洗涤。真空除去溶剂。将粗制物质悬浮在氯仿(0.5ml)中。加入氯甲酸乙酯(20ul)和三乙胺(20ul)，室温下搅拌该混合物10分钟。加入CH2Cl2，用盐水洗涤有机相。Na2SO4干燥有机相，除去溶剂。将粗制物质悬浮在NMP(1ml)中，用微波在160℃加热10分钟。通过制备型HPLC纯化该物质。吉尼维克蒸发得到灰白色固体状3-(4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮(7mg，22％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 361[M+1]+。
工艺23
将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈(1.0当量，23mg，0.094mmol)、苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合在小瓶中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，过滤并干燥得到的固体4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈。LCMS(ES)95％纯度，m/z 302[M+1]+。将该物质在小瓶中与DMF(0.5ml)、NH4Cl(50mg)和NaN3(50mg)混合。120℃搅拌该混合物3小时。加入水和过滤后，分离得到米色固体状N-苯基-7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(13mg，41％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 345[M+1]+，317[M+1-N2]+。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.07(t，J＝7.2，1H)，7.40(t，J＝7.6，2H)，8.00(dd，J＝1.6，J＝8.4，1H)，8.04(d，J＝5.2，1H)，8.10(dd，J＝1.2，J＝8.8，2H)，8.19(d，J＝8.0，1H)，8.25(d，J＝5.6，1H)，8.43(d，J＝1.6，1H)，9.34(s，1H)ppm。
通过相同的方法，用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-腈和合适的胺制备代表性类似物(表1C)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。四唑类合成后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，向反应混合物中加入水后有物质沉淀，通过过滤分离。
表1C
工艺24
将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉(23mg)与苯胺(0.1ml)和NMP(0.1ml)混合，用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入NMP(0.8ml)，通过制备型HPLC纯化该化合物。吉尼维克蒸发得到粉色固体状N-苯基噻吩并[3，2-c]喹啉-4-胺(31mg，定量)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 277[M+1]+。
工艺25
按照工艺24中的方法，利用N，N-二甲基乙二胺制备N1，N1-二甲基-N2-(噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基)乙-1，2-二胺。制备型HPLC和吉尼维克蒸发得到预期的TFA盐物质。LCMS(ES)95％纯度，m/z 272[M+1]+。
工艺26
将4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸酯(10mg，0.036mmol)悬浮在NMP(0.1ml)和3-氨基甲基吡啶(0.1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。将该反应混合物溶解于NMP和MeOH的混合物中，通过制备型HPLC纯化酯中间体。吉尼维克蒸发溶剂后，将得到的固体溶解于THF和MeOH的1∶1混合物(0.6ml)中。加入5NLiOH(0.2ml)水溶液，室温下搅拌该混合物17小时。加入水和HCl水溶液，通过制备型HPLC纯化4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸溶液。通过吉尼维克蒸发除去溶剂得到白色固体状化合物4-(吡啶-3-基甲基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(10mg，62％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 336[M+1]+。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.23(s，2H)，7.71-7.78(m，4H)，8.11(d，J＝5.6，1H)，8.47(d，J＝8.0，1H)，8.49(d，J＝0.8，1H)，8.62(d，J＝5.2，1H)，8.97(s，1H)ppm。
通过相同的方法，用4-氯噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸酯和合适的胺制备代表性类似物(表2)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。酯类水解后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，酸化水解混合物后有物质沉淀，通过过滤分离。
表2
工艺27
将4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(6mg)与甲磺酰胺(120mg)、EDCI(80mg)和DMAP(20mg)在无水DMF(0.5ml)中反应。5小时后，加入水，对该溶液实施制备型HPLC。吉尼维克蒸发得到固体N-(甲磺酰基)-4-(苯基氨基)噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酰胺(6mg，81％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 398[M+1]+。
工艺28
在一小瓶中，将4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸(1.0当量，20mg，0.081mmol)、N-羟基苯并三唑一水合物(2.0当量，22mg，0162mmol)、对-甲氧基苄胺(2.0当量，21ul，0.162mmol)和三乙胺(2.0当量，23ul，0.165mmol)溶解于无水DMF(0.5ml)中。加入EDCI(2.0当量，31mg，0.162mmol)，70℃搅拌反应混合物过夜。加入MeOH(0.5ml)和水(2ml)，过滤和干燥得到的沉淀物。在AcOEt中研磨该物质，过滤并干燥得到灰白色固体(19mg，65％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 365[M+1]+，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ3.71(s，3H)，4.40(d，J＝6.0，2H)，6.88(d，J＝8.8，2H)，7.24(d，J＝8.8，2H)，7.60(d，J＝5.6，1H)，7.69(dd，J＝1.6，J＝8.0，1H)，7.84(d，J＝5.6，1H)，7.90(s，1H)，7.91(d，J＝8.8，1H)，9.11(t，J＝5.6，1H)ppm。
通过这些工艺，利用4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]喹啉-7-羧酸和合适的胺制备以下代表性类似物(表3)。在一些情形中，制备型HPLC纯化这些物质，吉尼维克蒸发后分离得到干燥固体。
表3
以下代表性类似物(表4)可从它们在表3中描述的相应甲酯类制备。
按照用于化合物15的水解方法制备这些化合物。
表4
以下代表性类似物(表5)可从它们在表3中描述的相应叔丁酯或N-Boc保护的前体制备。用30％三氟乙酸的CH2Cl2溶液处理这些前体2小时。真空除去挥发物得到预期物质。
表5
工艺29
将3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸乙酯(1.0当量，7.6mg，0.018mmol)悬浮在THF、MeOH和水的1∶1∶1混合物中。加入氢氧化锂(40mg，1.66mmol)，室温下搅拌该混合物1小时。加入水和盐酸，过滤并干燥得到的固体获得固体3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸。LCMS(ES)95％纯度，m/z 389[M+1]+。
采用工艺28所述方法，通过将3-(7-(1H-四唑-5-基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表6)。通过制备型HPLC纯化这些物质，吉尼维克蒸发后分离得到干燥固体。
表6
工艺30
采用工艺28所述反应条件，通过将3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表7)。采用工艺29所述的条件水解该酯获得以下类似物。
表7
工艺31
采用工艺30所述反应条件，通过将2-(3-(7-(甲氧基羰基)噻吩并[3，2-c]喹啉-4-基氨基)苯基)乙酸与合适的胺反应制备以下代表性类似物(表8)。
表8
实施例3 式IX、X、XI和XII所示化合物的合成工艺 工艺1
将2-氨基-4-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，100mg，0.42mmol)溶解于无水DMF(0.8ml)。将该混合物在氮气气氛下加热至80℃。向该热混合物中滴加亚硝酸叔丁酯(1.2当量，60ul，0.50mmol)的DMF(0.8ml)溶液。几分钟后，不产生气体表明反应完成。冷却混合物，倾倒在预填充的硅胶柱上。利用己烷，然后用AcOEt/己烷(2∶8)进行快速层析得到黄色固体状5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(49mg，53％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 222[M]+，224[M+2]+。
工艺2
在微波容器中，将5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，97mg，0.44mmol)、2-氨基-3-甲氧基羰基苯基硼酸HCl(1.1当量，111mg，0.48mmol)、乙酸钠(3.0当量，107mg，1.31mmol)和PdCl2(dppf)(0.05当量，11mg，0.022mmol)一起混合在无水DMF(1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。加入水，用CH2Cl2萃取物质。用盐水洗涤合并的萃取相，Na2SO4干燥并通过蒸发除去溶剂。将物质溶解于CH2Cl2和MeOH的混合物中，经硅藻土垫过滤该溶液。蒸发挥发物获得粗制的黑色固体状4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(44mg，39％产率)。为了分析，对少部分化合物进行制备型HPLC。LCMS(ES)95％纯度，m/z 261[M+1]+。
工艺3
在THF、MeOH和水的(1∶1∶1，v∶v∶v)混合物(0.6ml)中将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(35mg，0.12mmol)和LiOH(60mg，0.83mmol)搅拌2小时。加入6NNaOH水溶液，硅藻土过滤溶液。酸化溶液，过滤得到的固体。经制备型HPLC纯化和吉尼维克蒸发得到白色固体状4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(0.8mg)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 247[M+1]+。
工艺4
将2-氨基-4-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.0当量，2.0g，8.44mmol)溶解于CH2Cl2(4ml)。加入乙酸酐(1.5当量，1.2ml，12.66mmol)和三乙胺(1.1当量，1.3ml，9.28mmol)，100℃搅拌该混合物1小时。过滤得到的固体，在AcOEt中研磨，然后再次过滤。干燥后，分离得到米色固体状2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-羧酸甲酯(1.81g，77％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 280[M+1]+。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.25(s，3H)，3.95(s，3H)ppm。
工艺5
按照工艺2所用的方法，从2-乙酰氨基-5-溴噻唑-4-羧酸甲酯制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯。分离得到黑色固体状2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(106mg，37％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 318[M+1]+。
工艺6
按照工艺3中的方法从2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯制备2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸。分离得到黑色固体状2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(14mg，44％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 304[M+1]+，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ2.22(s，3H)，7.74(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.89(d，J＝8.4，1H)，8.03(d，J＝1.6，1H)，12.07(s，1H)，12.80(s，1H)ppm。
工艺7
120℃将2-乙酰氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(102mg，0.34mmol)在6NHCl水溶液中搅拌过夜。加入水，化合物经过滤和干燥获得黑色固体状2-氨基-4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(76mg，86％产率)。LCMS(ES)95％纯度，m/z 262[M+1]+，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.60(d，J＝8.4，1H)，7.70(dd，J＝1.2，J＝8.0，1H)，7.99(d，J＝1.2，1H)，11.94(s，1H)ppm。
工艺8
将4-氧代-4，5-二氢噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，0.62g，2.38mmol)悬浮在甲苯中。加入DIEA(1.5当量，122ul，3.57mmol)和POCl3(2.3当量，507ul，5.47mmol)，120℃剧烈搅拌混合物1小时。加入水、冰和CH2Cl2，硅藻土过滤得到的乳液。倒出有机相，再用CH2Cl2萃取水相。Na2SO4干燥合并的有机萃取相，真空除去溶剂获得4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(0.31g，47％产率)。LCMS(ES)＞90％纯度，m/z 279[M+1]+。
工艺9
在微波容器中，将4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯(1.0当量，23mg，0.084mmol)和苯胺(13当量，0.1ml，1.1mmol)混合在NMP(0.1ml)中。用微波炉以120℃加热该混合物10分钟。通过制备型HPLC纯化中间体酯，吉尼维克蒸发后分离得到固体。室温下在含LiOH(41mg)的THF、MeOH和水(1∶1∶1，v∶v∶v)混合物(0.6ml)中搅拌该固体2小时。加入HCl和水，蒸发有机溶剂，将溶液静置2小时。缓慢形成的沉淀物经过滤和干燥得到固体4-(苯基氨基)噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸(2步骤的产率为8％)。LCMS(ES)＞95％纯度，m/z 322[M+1]+。
利用4-氯噻唑并[4，5-c]喹啉-7-羧酸甲酯和合适的胺，通过相同工艺制备代表性类似物(表9)。微波反应所用的反应温度是120℃-180℃。最终化合物合成后，通过制备型HPLC/吉尼维克蒸发分离这些物质。在一些情形中，酸化后有物质沉淀，经过滤纯化。
表9
实施例4 在无细胞体外试验中调节CK2和PARP活性 在体外无细胞CK2试验中评估本文所述化合物的调节活性。在体外无细胞PARP试验中评估本文所述化合物的调节活性。下文描述了这些试验。
CK2试验 将10微升体积的测试化合物水溶液加入含10微升试验稀释缓冲剂(ADB；20mM MOPS，pH7.2，25mMβ-甘油磷酸，5mM EGTA，1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)、10微升底物肽(RRRDDDSDDD，溶解于ADB，浓度为1mM)、10微升重组人CK2(25ng，溶解于ADB；州北公司(Upstate))的反应混合物中。加入10微升ATP溶液(90％75mM MgCl2，75微摩尔/升溶解于ADB中的ATP；10％[γ-33P]ATP(储备液1mCi/100μl；3000Ci/mmol(帕金埃尔默公司(Perkin Elmer))以引发反应，30℃维持10分钟。用100微升0.75％磷酸淬灭反应，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司(Millipore))过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次，真空干燥平板5分钟，向各孔加入15ul闪烁液体，然后利用华莱士发光计数器(Wallacluminescence counter)检测残留的放射性。
PARP试验 利用化学发光PARP测定试剂盒(特拉维金公司(Trevigen))进行PARP试验，简言之，通过将10微升溶解于1X PARP缓冲剂(通过混合用高纯度水稀释的20X PARP缓冲剂来制备)中的测试化合物和15微升稀释的PARP-HSA酶(用1X PARP缓冲剂稀释，0.1单位/孔)加入25微升PARP混合物(由10X PARP混合物和10X活化DNA(二者均是2.5微升/孔)及20微升/孔的1X PARP缓冲剂来制备)，在组蛋白包被的带孔中进行反应。环境温度下温育反应(体系)60分钟，然后除去液体。用PBS(200ul)清洗各孔4次后，加入50微升STREP-HRP(辣根过氧化物酶)溶液(用1X Strep-稀释剂稀释500-倍)，环境温度下温育反应(体系)30分钟。除去液体，用PBS(200ul)清洗各孔4次后，加入各50微升的PeroxyGlo A和B(化学发光辣根过氧化物酶底物)，用SpectraMax M5平板读数计定量测定得到的化学发光情况。
表10-15显示了化合物对CK2活性的调节作用。
表10
表11
表12显示了化合物对PARP和CK2的调节作用。
表12
表13
表14
表15
实施例5 细胞增殖调节活性 下文描述了利用Alamar蓝色染料(4℃保存，每孔用20ul)的代表性细胞增殖试验方案 96-孔板设置和化合物处理 a.裂解和胰蛋白酶处理细胞 b.利用血细胞计数器计数细胞 c.按照以下平板布局，每孔涂布4,000-5,000个细胞(100μl培养基)，并接种入96-孔板。只向孔B10-B12加入细胞培养基。孔B1-B9有细胞但未加化合物。
123456789101112 A 空 B未加化合物 只有培养基 C10nM 100nM 1uM10uM对照1 D10nM 100nM 1uM10uM化合物1 E10nM 100nM 1uM10uM化合物2 F10nM 100nM 1uM10uM化合物3 G10nM 100nM 1uM10uM化合物4 H 空 d.将100μl的2X药物稀释液加入各孔，其浓度如以上平板布局所示。同时，将100μl培养基加入对照孔(孔B 10-B 12)。总体积为200μl/孔。
e.37℃，5％CO2在增湿培育箱中温育4天。
f.将20μl Alamar蓝色试剂加入各孔。
g.37℃，5％CO2在增湿培育箱中温育4小时。
h.利用微板读数计记录544nm激发波长和590nm发射波长的荧光。
在这些试验中，用测试化合物培养细胞约4天，然后将染料加入细胞，约4小时后检测非还原染料的荧光。这些试验中可利用不同类型的细胞(例如，HCT-116人结肠直肠癌细胞、PC3人前列腺癌细胞和MiaPaca人胰腺癌细胞)。下文提供了代表性化合物的抗增殖作用。
实施例6 调节内源性CK2活性 将人白血病Jurkat T-细胞系维持在补加了10％胎牛血清和50ng/mlGeutamycin的RPMI 1640(开姆布莱克斯公司(Cambrex))中。治疗前，先洗涤细胞，以约106个细胞/毫升的密度重悬在含1％胎牛血清的培养基中并在有指定量的药物存在下温育2小时。离心回收细胞，用低渗缓冲液(20mM Tris/HClpH 7.4；2mM EDTA；5mM EGTA；10mM巯基乙醇；10mM NaF；1uM冈田酸(Okadaic acid)；10％v/v甘油；0.05％NP-40；1％蛋白酶抑制剂混合物)裂解，用试验稀释缓冲液(Assay Dilution Buffer)(ADB；20mM MOPS，pH 7.2，25mM β-甘油磷酸，5mM EGTA，1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇)将经澄清的裂解液的蛋白质稀释至1微克/微升。向20微升的稀释蛋白质加入10微升底物肽(RRRDDDSDDD，溶解于ADB，浓度为1mM)和10微升PKA抑制剂混合物(州北公司)。加入10微升ATP溶液(90％75mMMgCl2，溶解于ADB中的100uM ATP；10％[γ-33P]ATP(储备液1mCi/100μl；3000Ci/mmol(帕金埃尔默公司))，32℃维持15分钟。用100微升0.75％磷酸猝灭反应，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司)过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次后，利用华莱士发光计数器检测残留的放射性。
通过
图1所示试验所评估的两种化合物的调节活性。这些化合物的结构如下所示
如图1所示，与未治疗的对照相比，该两种化合物各自显著抑制内源性CK2活性。与参比化合物4，5，6，7-四溴苯并三唑(TBB)(一种已知的CK2抑制剂)(Ruzzene等，Biochem J.15364(部分1)41-7(2002))相比，该两种化合物也更强地抑制内源性CK2活性。
表20调节内源性CK2活性
表20b调节内源性CK2活性
实施例7 评估药代动力学特性 在静脉内(IV)推注和口服(PO)分别给予5mg/kg和25mg/kg药物剂量后的ICR小鼠中研究药物的药代动力学特性。在预定时间收集血液样品，分离血浆。从在给药后第5、15和30分钟和第1、2、4、8和24小时收集的血液样品分离血浆。
通过下述LC/MS/MS方法定量测定药物水平。将无隔室药代动力学分析(noncompartmental pharmacokinetic analysis)应用于静脉内给药。采用线形梯形法则(linear trapezoidal rule)计算AUC(0-24)。分别用最后3个和最初3个数据点计算最终t1/2和C0。
利用Quattro Micro LC/MS/MS仪器，采用MRM检测模式，利用内标(IS)实施生物分析。简言之，利用120μL乙腈沉淀蛋白质来制备15□L血浆样品以供分析。将上清液转移至96孔板，利用Phenomenex Polar-RP HPLC柱进行LC-MS/MS分析。流动相是水配制的10mM NH4HCO3(溶液-A)和甲醇配制的10mM NH4HCO3(溶液-B)。首先用25％溶液-B，然后用100％溶液-B平衡该柱，5分钟。该方法的动态范围是1-10,000ng/mL。按照生物分析样品清单，用两条定标校准曲线(bracketing calibration curve)以分批方式定量测定分析物。
以下化合物A1的药代动力学概况和估计的药代动力学参数见图2A和表21。
A1 表21.静脉内和口服分别给予5和25mg/kg后的预计药代动力学参数 以下测试化合物的药代动力学概况和估计的药代动力学参数见图2B和表22。
A2 表22.IV和PO给药后的预计药代动力学参数 实施例8 评估化合物在肿瘤抑制中的效力 通过静脉内和口服给予带肿瘤的异种移植小鼠来评估化合物A1和化合物A2(前述的)的体内活性。体内实验遵照动物使用和护理委员会(Animal Use andCare Committee)批准的方案。雌性NCr nu/nu小鼠购自塔寇尼克农场(TaconicFarms)，以12/12白天周期(light cycle)分组饲养在通风搁物架系统(ventilatedrack system)上。先将供给物质和水进行消毒，再使用。小鼠随意进食γ射线照射的实验室食物和酸化水。在层流通风橱中处理动物。
采用公式(lxw2)/2计算肿瘤大小(mm3)，其中w＝以mm计的肿瘤宽度和l＝以mm计的肿瘤长度。假定1mg等于1mm3的肿瘤体积来估计肿瘤重量。
对于静脉内给予化合物A1，在右腹给动物皮下接种5×106个MiaPaca细胞。每周监测肿瘤两次，然后在肿瘤长到适于研究的大小后每日监测两次。在研究的第一天，将动物随机分成n＝5治疗组，组平均肿瘤大小为160mm3。
组1平均值 160.966UTC 组2平均值 161.816Gemzar 组3平均值 161.80730mg/kg CK2化合物 组4平均值 159.62160mg/kg CK2化合物 ％Dif.1.363 SD1.034. 动物经QD静脉内给药接受14剂载体、100mg/kg Q3D的Gemzar或30mg/kg或60mg/kg化合物A1。在第3、6、8、10、13和15天记录肿瘤体积检测值(图3A)和体重(图3B)。具体未治疗的对照动物和给予60mg/kg化合物A1的动物的照片示于图3C和3D。化合物A1在图3A、3B、3C和3D中称为“CK2抑制剂”。
还将化合物A1口服给予MiaPaca异种移植动物并抑制肿瘤生长。用2％PEG 300将化合物A1配制成10mg/mL的钠盐，利用磷酸钠缓冲液缓冲至pH8.4。当以100mg/kg QDx8的剂量，然后以200mg/kg QDx5的剂量口服给予动物时，与未治疗的对照组相比，化合物A1显著抑制肿瘤生长。以80mg/kgIP Q3D剂量给予的GemzarTM用作阳性对照。通过口服给药将化合物A1以100mg/kg递送给带MCF-7异种移植物的动物，以150mg/kg递送给带PC-3异种移植物的动物，在两组研究均显著抑制肿瘤生长。
还测定到化合物A1降低肿瘤中的CK2活性。评估肿瘤中的CK2活性揭示用化合物A1治疗的动物的肿瘤的CK2活性是未用化合物A1治疗或用GemzarTM治疗动物的肿瘤的CK2活性的约40％。
评估了化合物A1在动物血浆和肿瘤中的分布。在给予30mg/kg化合物A 1IV、60mg/kg化合物A1IV和200mg/kg化合物A1口服的动物中，分别在血浆中鉴定到约6.8、2.2和9.5微摩尔(micromolar)化合物A1，在肿瘤中分别鉴定到约42.9、7.0和6.4微摩尔化合物A1。
胱冬酶染色也评估为化合物A1治疗肿瘤的生物标记。在经IV给药用60mg/kg化合物A1治疗的动物中，胱冬酶-3染色水平比未治疗的对照细胞高4倍。这些结果提示胱冬酶-3染色可以是监测细胞增殖抑制和肿瘤抑制的有用生物标记。
对于评估化合物A2，通过静脉内和腹膜内给药将该化合物给予带肿瘤的异种移植小鼠。在右腹给动物皮下接种5×106个BC-PC3细胞。每周监测肿瘤两次，然后在肿瘤长到适于研究的大小后每日监测两次。在研究的第一天，将动物随机分成n＝8个治疗组(对于阳性和阴性对照组，n＝5)，组平均肿瘤大小为97mm3。
组1 平均值97.80 UTC 组2 平均值96.95 Gemzar Q3D 组3 平均值96.6850mg/kg CX-5011IV BID x10天 组4 平均值98.9560mg/kg CX-5011IV QD x17天 组5 平均值96.51100mg/kg CX-5011IP BID x17天 ％Dif 2.50 SD 1.01 动物接受17剂载体、100mg/kg Q3D的Gemzar或60mg/kg QD静脉内给药或100mg/kg BID腹膜内给药的化合物。一组(3号)接受10剂50mg/kg BID静脉内给药的化合物。在第1、4、7、11、13、15和18天记录肿瘤体积检测值和体重，数据显示化合物A2显著抑制肿瘤进展(图4A)，而不显著改变体重(图4B)。以50和60mg/kg的静脉内给药和100mg/kg的腹膜内给药将化合物A2递送至带MiaPaca异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。以30和60mg/kg的静脉内给药和200mg/kg的口服给药将化合物A2递送至带MDA-MB-231异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。以100mg/kg QDx8和200mg/kg QDx6的口服给药将化合物A2递送至带MiaPaca异种移植物的动物显著抑制肿瘤进展。pH 10.0和10mg/mL的化合物A2的葡甲胺盐用作研究的口服制剂。
静脉内QDx6给予30mg/kg化合物来进行化合物A2的肿瘤药代动力学研究。在第1、4和6天取得血浆、血液和肿瘤样品，各时间点处死3只动物。约3天后达到稳态，终点斜率降低，半衰期大致翻倍，6天后最低浓度高4-5倍，第4和第6天之间没有明显差异。
通过静脉内给药将化合物A3给予带MiaPaca异种移植物的动物也显著抑制肿瘤进展。
化合物A3 实施例9 调节非-CK2蛋白激酶活性 研究了本文所述化合物对除CK2以外的蛋白激酶的体外调节活性。采用已知方案进行体外分析(例如，在万维网网址upstate.com/img/pdf/KP_AssayProtocol_Booklet_v3.pdf描述的试验方案)。在这些试验中筛选本文所述化合物，根据针对除CK2外的蛋白激酶的调节活性和对CK2或PARP的特异性区分优先次序。
实施例10 通过内皮管形成试验(endothelial tube formation assay)评估血管生成抑制 采用生产商推荐的方案，利用BD生物科学公司的96孔BD BioCoatTM血管生成系统进行人内皮管形成试验。
简言之，在有或没有各种浓度的化合物A2存在下，将HUVEC细胞(来自ATCC)悬浮在含10％FBS的150ul培养基中，在基质胶包被的平板的96-孔中，各自的密度为4×105个细胞/ml。37℃温育平板18小时。用钙黄绿素AM染色细胞，通过荧光显微术或相差目测观察结果。在上述试验中观察到，1-5μM浓度范围的化合物A2抑制管形成。
实施例11 在无细胞体外试验中调节蛋白激酶活性 在PIM-1试验中，将5ul体积的测试化合物水溶液加入含5ul 5x反应缓冲液(40mM MOPS，pH 7.0，1mM EDTA)、2.5ul重组人PIM-1溶液(10ng)、2.5ul底物肽(KKRNRTLTK)和10ul ATP溶液-98％(75mM MgCl2 37.5uM ATP)2％([γ-33P]ATP3000Ci/mmol-帕金埃尔默公司)的反应混合物。30℃温育反应(体系)10分钟，用100ul 0.75％磷酸猝灭，然后转移并经磷酸纤维素过滤平板(毫孔公司)过滤。用0.75％磷酸清洗各孔5次后，将闪烁液(15ul)加入各孔。利用发光计数器检测残留的放射性。化合物A2抑制PIM-1，IC50＝189nM。
进一步测试化合物A2针对其它蛋白激酶的活性。采用各激酶的标准辐射测量激酶试验(standardized radiometric kinase assay)测定以下激酶抑制IC50数据，该试验需要滤器通过感兴趣的激酶结合33P标记底物蛋白。测定了10种药物浓度的各IC50值。反应条件可见万维网URLupstate.com/discovery/services/ic50_profiler.q。
采用各激酶的标准辐射测量激酶试验测定以下激酶抑制数据，该试验需要滤器通过感兴趣的激酶结合33P标记底物蛋白。测定了0.5μM药物浓度的活性百分比。反应条件可见万维网URLupstate.com/discovery/services/ic50_profiler.q。
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A1.具有式I、II、III或IV所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中 Z1、Z2、Z3和Z4各自是N或CR3； Z5、Z6、Z7和Z8各自是CR6或N； Z1-Z4中零个、一个或两个是N，Z5-Z8中的零个、一个或两个是N； 各R3和各R6独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基(heteroacyl)、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 或者各R3和各R6独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR、极性取代基、羧基生物电子等排体(carboxybioisostere)、COOH或NO2， 其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 其中同一原子或毗邻原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环； 各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2， 其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O； 其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环， R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基； 各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和 在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员； 前提条件是当式(I)中的-NR4R5是-NHΦ时，其中Φ是任选取代的苯基 如果Z5-Z8均是CH或Z5-Z8中一个是N，则Z1-Z4中至少一个是CR3并且至少一个R3必须是非氢取代基；或者 如果各R3是H，则Φ必须是被取代的；或 如果Z5-Z8均是CH或Z5-Z8中一个是N，则Z2不是C-OR”，并且Z3不是NH2、NO2、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。
A2.如实施方式A1所述的化合物，其中所述极性取代基是具有电偶极子和任选具有偶极矩的取代基。
A3.如实施方式A1或A2所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。
A4.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。
A5.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。
A6.如实施方式A1-A5中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基。
A7.如实施方式A1-A5中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基或羧酸。
A8.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的羧基生物电子等排体
和以上的盐，其中各R7独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和与其它任选取代的碳环或杂环任选稠合的C3-8杂环；或者R7是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10杂烷基。
A9.如实施方式A1-A3中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。
A10.如实施方式A1-A9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z1-Z4的环上。
A11.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中所述含Z1-Z4的环包含1、2、3或4个极性取代基。
A12.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4各自为CR3，并且R3取代基中的一个是极性取代基。
A13.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中含Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
A14.如实施方式A1-A10中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4和Z5-Z8中至少一个是氮原子。
A15.如实施方式A14所述的化合物，含Z1-Z4的环或含Z5-Z8的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。
A16.如实施方式A14所述的化合物，其中含Z5-Z8的环选自下组
其中各R6A、R6B、R6C和R6D独立选自实施方式A1所限定的R6取代基。
A17.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R4是H。
A18.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R5是任选取代的3-8员环。
A19.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
A20.如实施方式A18所述的化合物，其中R5是任选取代的6员碳环或杂环。
A21.如实施方式A20所述的化合物，其中R5是任选取代的苯环。
A22.如实施方式A21所述的化合物，其中所述化合物具有式I所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
A23.如实施方式A22所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
A24.如实施方式A1-A17中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5(例如，-N(CH3)2)取代的C1-3烷基。
A25.如实施方式A1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH2)取代基。
A26.如实施方式A1所述的化合物，其中R6取代基是-NR4R5取代基。
A27.如实施方式A26所述的化合物，其中R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。
A28.如实施方式A1所述的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4各自为CR3。
A29.如实施方式A1所述的化合物，其中至少一个R3是H。
A30.如实施方式A 1所述的化合物，其中至少两个R3是H。
A31.如实施方式A1所述的化合物，其中至少一个R6是H。
A32.如实施方式A1所述的化合物，其中至少两个R6是H。
A33.如实施方式A13所述的化合物，其中R3A、R3C和R3D各自是H，R3B是极性取代基。
A34.一种含有实施方式A1所述化合物和药学上可接受的载体的组合物。
B1.具有式V、VI、VII或VIII所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中 Z1、Z2、Z3和Z4各自独立为N或CR3，Z1、Z2、Z3和Z4中零个、一个或两个是N； R3、R6A和R6B各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 或R3、R6A和R6B各自独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2， 其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环； 各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2， 其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O； 其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环； R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基； 各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和 在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员； 前提条件是如果式IV中的R5是苯基、取代的苯基、-CH(CH3)-(CH2)3-NEt2、-(CH2)3-哌嗪-(CH2)3-NH2、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R3是非氢部分。
B2.如实施方式B1所述的化合物，前提条件是存在的至少一个R3是极性取代基。
B3.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。
B4.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。
B5.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。
B6.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸、或其盐、酯或生物电子等排体。
B7.如实施方式B6所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸或其盐。
B8.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的生物电子等排体
和以上的盐，其中各R7独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和与其它任选取代的碳环或杂环任选稠合的C3-8杂环；或者R7是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10杂烷基。
B9.如实施方式B 1所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。
B10.如实施方式B1-B9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z1-Z4的环上。
B11.如实施方式B1-B10中任一项所述的化合物，其中所述含Z1-Z4的环包含1、2、3或4个极性取代基。
B12.如实施方式B1-B9中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4各自为CR3，并且R3取代基中的一个是极性取代基。
B13.如实施方式B1-B9中任一项所述的化合物，其中含Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
B14.如实施方式B1-B13中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4中至少一个是氮原子。
B15.如实施方式B14所述的化合物，含Z1-Z4的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。
B16.如实施方式B1-B15中任一项所述的化合物，其中R4是H。
B17.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R5是任选取代的3-8员环。
B18.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
B19.如实施方式B18所述的化合物，其中R5是任选取代的6员碳环或杂环。
B20.如实施方式B19所述的化合物，其中R5是任选取代的苯环。
B21.如实施方式B20所述的化合物，其中所述化合物具有式V所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
B22.如实施方式B21所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
B23.如实施方式B1-B16中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5(例如，-N(CH3)2)取代的C1-3烷基。
B24.如实施方式B1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH2)取代基。
B25.如实施方式B1所述的化合物，其中R6取代基是-NR4R5取代基。
B26.如实施方式B25所述的化合物，其中R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。
B27.如实施方式B1所述的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4各自为CR3。
B28.如实施方式B1所述的化合物，其中至少一个R3是H。
B29.如实施方式B1所述的化合物，其中至少两个R3是H。
B30.如实施方式B1所述的化合物，其中R6A和R6B中至少一个是H。
B31.如实施方式B1所述的化合物，其中R6A和R6B各自是H。
B32.如实施方式B13所述的化合物，其中R3A、R3C、R3D、R6A和R6B各自为H并且R3B是极性取代基。
C1.具有IX、X、XI和XII所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中 Z1、Z2、Z3和Z4各自为N或CR3，Z1、Z2、Z3和Z4中零个、一个或两个是N； R3和R6各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 或R3和R6各自可以是卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2， 其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环； 各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2， 其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O； 其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环； R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基； 各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和 在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员。
C2.如实施方式C1所述的化合物，前提条件是存在的至少一个R3是极性取代基。
C3.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基接受或供给氢键。
C4.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧基、羧基生物电子等排体或在pH约7-8时主要以阴离子存在的其它酸衍生的部分。
C5.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基含有OH或NH、醚氧、胺氮、氧化的硫或氮、羰基、腈和含氮或含氧的杂环(无论芳族或非芳族)。
C6.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸酯基。
C7.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧酸。
C8.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是选自下组的生物电子等排体
和以上的盐，其中各R7独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和与其它任选取代的碳环或杂环任选稠合的C3-8杂环；或者R7是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10杂烷基。
C9.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基选自羧酸、羧酸酯、羧酰胺、四唑、三唑、羧基甲磺酰胺、噁二唑、氧代噻二唑、噻唑、氨基噻唑和羟基噻唑。
C10.如实施方式C1-C9中任一项所述的化合物，其中所述极性取代基在含Z1-Z4的环上。
C11.如实施方式C10所述的化合物，其中所述含Z1-Z4的环包含1、2、3或4个极性取代基。
C12.如实施方式C1-C9中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4各自为CR3，并且R3取代基之一是极性取代基。
C13.如实施方式C1所述的化合物，其中含Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
C14.如实施方式C1-C13中任一项所述的化合物，其中Z1-Z4中至少一个是氮原子。
C15.如实施方式C14所述的化合物，含Z1-Z4的环独立为任选取代的吡啶、嘧啶或哒嗪环。
C16.如实施方式C1-C15中任一项所述的化合物，其中R4是H。
C17.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R5是任选取代的3-8员环。
C18.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
C19.如实施方式C18所述的化合物，其中R5是任选取代的6员碳环或杂环。
C20.如实施方式C19所述的化合物，其中R5是任选取代的苯环。
C21.如实施方式C20所述的化合物，其中所述化合物具有式IX所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
C22.如实施方式C21所述的化合物，其中所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
C23.如实施方式C1-C16中任一项所述的化合物，其中R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5(例如，-N(CH3)2)取代的C1-3烷基。
C24.如实施方式C1所述的化合物，其中所述极性取代基是羧基、羧基烷基(例如，羧甲基)、四唑或酰胺(例如，-CONH2)取代基。
C25.如实施方式C1所述的化合物，其中R6取代基是-NR4R5取代基。
C26.如实施方式C25所述的化合物，其中R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)部分。
C27.如实施方式C1所述的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4各自为CR3。
C28.如实施方式C1所述的化合物，其中至少一个R3是H。
C29.如实施方式C1所述的化合物，其中至少两个R3是H。
C30.如实施方式C1所述的化合物，其中R6是H。
C31.如实施方式C13所述的化合物，其中R3A、R3C、R3D和R6各自为H并且R3B是极性取代基。
C32.如实施方式C1所述的化合物，其中所述化合物具有式IX所示结构，R4和R5不都是氢，R4和R5独立为H、-Y0或-LY1，其中Y0是任选取代的5-员环或任选取代的6-员环，Y1是任选取代的5-员芳环或任选取代的6-员芳环，L是C1-C20烷基接头或C1-C20亚烷基接头。
C33.如实施方式C1所述的化合物，前提条件是如果式IX中的R5是苯基、取代的苯基、-CH(CH3)-(CH2)3-NEt2、-(CH2)3-哌嗪-(CH2)3-NH2、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R3是非氢部分。
C34.一种包含实施方式C1所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
E1.一种鉴定与PARP蛋白相互作用的候选分子的方法，包括 将含有PARP蛋白和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和 与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。
E2.如实施方式E1所述的方法，其中所述PARP蛋白包含SEQ ID NO1所示氨基酸序列或其基本上相同的变体。
E3.如实施方式E1或E2所述的方法，其中所述蛋白质在细胞中。
E4.如实施方式E1-E3中任一项所述的方法，其中所述蛋白质在无细胞系统中。
E5.如实施方式E1-E4中任一项所述的方法，其中所述蛋白质、化合物或分子结合于固相。
E6.如实施方式E1-E5中任一项所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
E7.如实施方式E6所述的方法，其中所述蛋白质包含可检测标记。
E8.如实施方式E6所述的方法，其中所述化合物包含可检测标记。
E9.如实施方式E1-E5中任一项所述的方法，其中不用可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
F1.一种调节PARP蛋白活性的方法，包括将含有该蛋白质的系统与调节该蛋白质活性有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。
F2.如实施方式F1所述的方法，其中所述蛋白质的活性受抑制。
F3.如F1或F2所述的方法，其中所述系统是细胞。
F4.如实施方式F1-F3中任一项所述的方法，其中所述系统是无细胞系统。
F5.如实施方式F1-F4中任一项所述的方法，其中所述蛋白质或所述化合物结合于固相。
G1.一种抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与抑制该细胞增殖有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。
G2.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于细胞系中。
G3.如实施方式G2所述的方法，其中所述细胞处于癌细胞系中。
G4.如实施方式G3所述的方法，其中所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症、结肠直肠癌、皮肤癌、卵巢癌细胞系。
G5.如实施方式G4所述的方法，其中所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌或胰腺癌细胞系。
G6.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于组织中。
G7.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于对象中。
G8.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于肿瘤中。
G9.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于对象的肿瘤中。
G10.如实施方式G1-G9中任一项所述的方法，还包括诱导细胞凋亡。
G11.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞来自具有黄斑变性的对象的眼睛。
G12.如实施方式G1所述的方法，其中所述细胞处于具有黄斑变性的对象中。
H1.一种治疗细胞异常增殖相关疾病的方法，包括将治疗细胞增殖疾病有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物给予有此需要的对象。
H2.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是肿瘤相关癌症。
H3.如实施方式H1或H2所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。
H4.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是无肿瘤癌症。
H5.如实施方式H4所述的方法，其中所述无肿瘤癌症是造血癌症。
H6.如实施方式H1所述的方法，其中所述细胞增殖疾病是黄斑变性。
I1.一种治疗需要这种治疗的对象的癌症或炎性疾病的方法，包括 给予该对象治疗有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的治疗剂或其药学上可接受的盐；和 给予该对象抑制PARP或CK2的分子，该分子的用量能有效增强该治疗剂的所需作用。
I2.如实施方式I1所述的方法，其中抑制PARP或CK2的所述分子是具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物或其药学上可接受的盐。
I3.如实施方式I1所述的方法，其中所述治疗剂是
或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐。
I4.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子基本上同时给予。
I5.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中对象同时使用所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子。
I6.如实施方式I1-I3中任一项所述的方法，其中所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子组合在一个药物组合物中。
I7.一种包含式TA1-1、TA2、TA3-1、TA4-1、TA5-1或TA6中任一所示治疗剂并混合了抑制PARP或CK2的分子或其药学上可接受的盐的药物组合物。
I8.如实施方式I7所述的药物组合物，其中抑制PARP或CK2的分子是PARP抑制剂，是上述的已知化合物，或是GPI 15427、GPI 16539。
I9.如实施方式I7所述的药物组合物，其中抑制PARP或CK2的分子是本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物，或其药学上可接受的盐。
I10.如实施方式I9所述的药物组合物，其中所述治疗剂是式TA2所示化合物或其药学上可接受的盐。
I11.一种治疗组合物，其包含 治疗有效量的式TA2所示治疗剂
或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐， 混合有一定量的PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐，其中所述PARP抑制剂选自GPI 15427、GPI 16539和上文所示的已知化合物；和 其中所述PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐的用量是增强所述治疗剂所需作用的有效量。
M1.一种具有式XIII、XIV、XV和XVI所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯、前药和互变异构体
式中 Z5是N或CR6A； R6A、R6B、R6C和R8各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 或者R6A、R6B、R6C和R8各自独立为卤素、CF3、CFN、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2， R9独立为任选取代的C 1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，或 R9独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR或NO2， 其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环； 各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2， 其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O； 其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环； n是0-4；和 p是0-4。
M2.如实施方式M1所述的化合物，其中Z5是N。
M3.如实施方式M1所述的化合物，其中R8是羧基部分或羧基生物电子等排体。
M4.如实施方式M3所述的化合物，其中，所述羧基部分是羧酸酯或羧酸。
M5.如实施方式M1所述的化合物，其中R9选自-C≡CR、-C≡CH、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-CFN、-C≡N、-OR和卤素。
M6.如实施方式M5所述的化合物，其中R9选自卤素、-C≡CR或-C≡CH。
M7.如实施方式M6所述的化合物，其中R9是卤素。
M8.如实施方式M7所述的化合物，其中R9是氯。
M9.如实施方式M7所述的化合物，其中R9是溴。
M10.如实施方式M7所述的化合物，其中R9是-C≡CH。
M11.如实施方式M8所述的化合物，其具有以下结构
M12.如实施方式M10所述的化合物，其具有以下结构
M13.如实施方式M1所述的化合物，其中p是1或2。
M14.如实施方式M1所述的化合物，其中p是1。
M15.如实施方式M1所述的化合物，其中n是1或2。
M16.如实施方式M1所述的化合物，其中n是1。
N1.一种鉴定与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，包括 将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和 与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。
N2.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶是人丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。
N3.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自CK2、CK2α2、Pim-1、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、DYRK2、Flt3、Flt3(D835Y)、Flt4、HIPK3、HIPK2、ZIPK和ZIPK。
N4.如实施方式N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶在对应于人CK2所列位置含有一个或多个以下氨基酸45位的亮氨酸、163位的甲硫氨酸和174位的异亮氨酸。
N5.如实施方式N4所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1。
N6.如实施方式N1所述的方法，其中所述蛋白质、所述化合物或所述分子结合于固相。
N7.如实施方式N1所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
O 1.一种调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性的方法，包括将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白的系统与调节该蛋白质活性有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触。
O2.如实施方式O1所述的方法，其中所述蛋白激酶活性是将γ磷酸从三磷酸腺苷转移至肽或蛋白质底物。
P1.一种治疗对象的疼痛或炎症的方法，包括给予有此需要的对象治疗疼痛或炎症有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。
P2.一种鉴定减轻炎症或疼痛的化合物的方法，该方法包括 将某系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和 检测该系统中的疼痛信号或炎症信号，藉此与对照分子相比，将能调节疼痛信号或炎症信号的化合物鉴定为能减轻炎症或疼痛的化合物。
P3.一种抑制对象中血管生成的方法，包括给予有此需要的对象抑制血管生成有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。
P4.一种鉴定调节血管生成的化合物的方法，该化合物包括将某系统与式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触；和 检测该系统中血管生成或血管生成信号，藉此与对照分子相比，将能调节血管生成或血管生成信号的化合物鉴定为能调节血管生成的化合物。
Q1.一种式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药
式中标有α的基团代表稠合到含Q1的环上的5-6员芳环或杂芳环，其中α是任选含有一个或多个氮原子作为环成员的6-员芳环，或选自噻吩或噻唑的5员芳环； Q1是C＝X，Q2是NR5，Q1和Q2之间的键是单键；或Q1是C-X-R5，Q2是N，Q1和Q2之间的键是双键；和 其中X代表O、S或NR4； Z1、Z2、Z3和Z4各自是N或CR3并且Z1、Z2、Z3和Z4中一个或多个是CR3； Z5、Z6、Z7和Z8各自是CR6或N； 各R3和各R6独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 或者各R3和各R6独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR或NO2， 其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基， 其中同一原子或毗邻原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环； 各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2， 其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O； 其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环， R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基； 各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和 在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员； 前提条件是当式(A)中的Q1是C-NHΦ时，其中Φ是任选取代的苯基 如果标有α的环是含有至少一个N作为环成员的6-员环，存在的至少一个R3必须是极性取代基，或者如果各R3是H，则Φ必须是被取代的；和 如果标有α的环是苯基，并且Z1-Z4中的3个代表CH，则Z2不能是C-OR”，Z3不能是NH2、NO2、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。
权利要求
1.一种具有式I、II、III或IV所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中
Z1、Z2、Z3和Z4各自是N或CR3；
Z5、Z6、Z7和Z8各自是CR6或N；
Z1-Z4中零个、一个或两个是N，Z5-Z8中的零个、一个或两个是N；
各R3和各R6独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
或者各R3和各R6独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR、极性取代基、羧基生物电子等排体、COOH或NO2，
其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
其中同一原子或毗邻原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；
各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，
其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；
其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环，
R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；
各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和
在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员；
前提条件是当式(I)中的-NR4R5是-NHФ时，其中Ф是任选取代的苯基
如果Z5-Z8均是CH或Z5-Z8中一个是N，则Z1-Z4中至少一个是CR3并且至少一个R3必须是非氢取代基；或者
如果各R3是H，则Ф必须是被取代的；或
如果Z5-Z8均是CH或Z5-Z8中一个是N，则Z2不是C-OR”，并且Z3不是NH2、NO2、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R3或R6中至少一个是极性取代基，其中所述极性取代基是羧酸、羧酸盐、酯、羧酰胺、四唑或羧基生物电子等排体。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，至少一个R3是极性取代基。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，含有Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，R3A、R3C和R3D各为H，R3B是极性取代基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z1-Z4和Z5-Z8中至少一个是氮原子。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R4是H。
8.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的3-8员环。
9.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的6-员碳环或杂环。
11.如权利要求10所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的苯环。
12.如权利要求11所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有式I所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
13.如权利要求12所述的化合物，其特征在于，所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
14.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5取代的C1-3烷基。
15.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NR4R5取代基。
16.如权利要求15所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)或-NH-(C3-C8环烷基)部分。
17.一种具有式V、VI、VII或VIII所示结构的化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中
Z1、Z2、Z3和Z4各自独立为N或CR3，Z1、Z2、Z3和Z4中零个、一个或两个是N；
R3、R6A和R6B各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
或R3、R6A和R6B各自独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2，
其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；
各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，
其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；
其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环；
R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；
各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和
在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员；
前提条件是如果式IV中的R5是苯基、取代的苯基、-CH(CH3)-(CH2)3-NEt2、-(CH2)3-哌嗪-(CH2)3-NH2、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R3是非氢部分。
18.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R3或R6A或R6B中至少一个是极性取代基，其中所述极性取代基是羧酸、羧酸盐、酯、羧酰胺、四唑或羧基生物电子等排体。
19.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，至少一个R3是极性取代基。
20.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，含有Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
21.如权利要求20所述的化合物，其特征在于，R3A、R3C和R3D各为H，R3B是极性取代基。
22.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，Z1-Z4中至少一个是N。
23.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的3-8员环。
24.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
25.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的6-员碳环或杂环。
26.如权利要求25所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的苯环。
27.如权利要求26所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有式V所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
28.如权利要求27所述的化合物，其特征在于，所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
29.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5取代的C1-3烷基。
30.如权利要求17所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NR4R5取代基。
31.如权利要求30所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)或-NH-(C3-C8环烷基)部分。
32.一种具有IX、X、XI和XII所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和互变异构体
式中
Z1、Z2、Z3和Z4各自为N或CR3，Z1、Z2、Z3和Z4中零个、一个或两个是N；
R3和R6各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
或R3和R6各自可以是卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、极性取代基、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2，
其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；
各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，
其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；
其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环；
R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；
各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和
在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员。
33.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R3或R6中至少一个是极性取代基，其中所述极性取代基是羧酸、羧酸盐、酯、羧酰胺、四唑或羧基生物电子等排体。
34.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，至少一个R3是极性取代基。
35.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，含有Z1-Z4的环选自以下结构之一
其中R3P是极性取代基，R3A、R3B、R3C和R3D各自独立选自R3取代基。
36.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R3A、R3C和R3D各为H，R3B是极性取代基。
37.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，Z1-Z4中至少一个是N。
38.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R4是H。
39.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的3-8员环。
40.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的3-8员环取代的C1-10烷基。
41.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的6-员碳环或杂环。
42.如权利要求41所述的化合物，其特征在于，R5是任选取代的苯环。
43.如权利要求42所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有式IX所示结构，R4是H或CH3，R5是用一个或多个卤素或炔属取代基取代的苯基。
44.如权利要求43所述的化合物，其特征在于，所述一个或多个卤素或炔属取代基位于苯环的3-位、4-位或5-位或它们的组合。
45.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R5是用任选取代的苯基、吡啶基或吗啉环取代基取代的C1-3烷基，或用-NR4R5取代的C1-3烷基。
46.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NR4R5取代基。
47.如权利要求46所述的化合物，其特征在于，R6取代基是-NH-(C1-C6烷基)或-NH-(C3-C8环烷基)部分。
48.如权利要求32所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有式IX所示结构，R4和R5不均是氢，R4和R5独立为H、-Y0或-LY1，其中Y0是任选取代的5-员环或任选取代的6-员环，Y1是任选取代的5-员芳环或任选取代的6-员芳环，L是C1-C20烷基接头或C1-C20亚烷基接头。
49.如权利要求32所述的化合物，前提条件是如果式IX中的R5是苯基、取代的苯基、-CH(CH3)-(CH2)3-NEt2、-(CH2)3-哌嗪-(CH2)3-NH2、环己烷或丁基，则存在的一个或多个R3是非氢部分。
50.一种鉴定与PARP蛋白相互作用的候选分子的方法，包括
将含有PARP蛋白和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和
与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为能与该蛋白质相互作用的候选分子。
51.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述PARP蛋白包含SEQID NO4所示氨基酸序列或其基本上相同的变体。
52.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述蛋白质在细胞中。
53.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述蛋白质在无细胞系统中。
54.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述蛋白质、化合物或分子结合于固相。
55.如权利要求50所述的方法，其特征在于，通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
56.如权利要求50所述的方法，其特征在于，不用可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
57.一种调节PARP蛋白活性的方法，包括将含有该蛋白质的系统与调节该蛋白质活性有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。
58.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述蛋白质的活性被抑制。
59.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述系统是细胞。
60.如权利要求57所述的方法，其特征在于，所述系统是无细胞系统。
61.一种抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与抑制该细胞增殖有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触。
62.如权利要求61所述的方法，其特征在于，所述细胞处于癌细胞系中。
63.如权利要求62所述的方法，其特征在于，所述癌细胞系是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、造血癌症、结肠直肠癌、皮肤癌、卵巢癌细胞系。
64.如权利要求61所述的方法，其特征在于，所述细胞处于对象的肿瘤中。
65.如权利要求61所述的方法，还包括将细胞与具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物接触以诱导细胞凋亡。
66.如权利要求61所述的方法，其特征在于，所述细胞来自具有黄斑变性的对象的眼睛。
67.如权利要求61所述的方法，其特征在于，所述细胞处于具有黄斑变性的对象中。
68.一种治疗细胞异常增殖相关疾病的方法，包括将治疗细胞增殖疾病有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物给予有此需要的对象。
69.如权利要求68所述的方法，其特征在于，所述细胞增殖疾病是肿瘤相关癌症。
70.如权利要求69所述的方法，其特征在于，所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、皮肤癌或卵巢癌。
71.如权利要求68所述的方法，其特征在于，所述细胞增殖疾病是无肿瘤癌症。
72.如权利要求71所述的方法，其特征在于，所述无肿瘤癌症是造血癌症。
73.如权利要求68所述的方法，其特征在于，所述细胞增殖疾病是黄斑变性。
74.一种治疗需要这种治疗的对象的癌症或炎性疾病的方法，包括
给予该对象治疗有效量的具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的治疗剂或其药学上可接受的盐；和
给予该对象抑制PARP或CK2的分子，该分子的用量有效增强该治疗剂的所需作用。
75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，抑制PARP或CK2的所述分子是具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物或其药学上可接受的盐。
76.如权利要求74所述的方法，其中所述治疗剂是
或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐。
77.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子基本上同时给予。
78.如权利要求74所述的方法，其特征在于，对象同时使用所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子。
79.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述治疗剂和抑制PARP或CK2的所述分子组合在一个药物组合物中。
80.一种包含式TA1-1、TA2、TA3-1、TA4-1、TA5-1或TA6中任一所示治疗剂并混合了抑制PARP或CK2的分子或其药学上可接受的盐的药物组合物。
81.如权利要求74所述的药物组合物，其特征在于，抑制PARP或CK2的分子是PARP抑制剂，或是GPI 15427、GPI 16539。
82.如权利要求74所述的药物组合物，其特征在于，抑制PARP或CK2的分子是本文所述式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物，或其药学上可接受的盐。
83.如权利要求79所述的药物组合物，其特征在于，所述治疗剂是式TA2所示化合物或其药学上可接受的盐。
84.一种治疗组合物，其包含
治疗有效量的式TA2所示治疗剂
或其特定异构体或异构体的混合物，或其药学上可接受的盐，
混合有一定量的PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐，其中所述PARP抑制剂选自GPI 15427、GPI 16539和上文所示的已知化合物；和
其中所述PARP抑制剂或PARP抑制剂的药学上可接受的盐的用量是增强所述治疗剂所需作用的有效量。
85.一种具有式XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物或其药学上可接受的盐
式中
Z5是N或CR6A；
R6A、R6B、R6C和R8各自独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
或者R6A、R6B、R6C和R8各自独立为卤素、CF3、CFN、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、羧基生物电子等排体、CONR2、OOCR、COR或NO2，
R9独立为任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，或
R9独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR或NO2，
其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
其中同一原子或毗连原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；
各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，
其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；
其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环；
n是0-4；和
p是0-4。
86.如权利要求85所述的化合物，其特征在于，Z5是N。
87.如权利要求85所述的化合物，其特征在于，R8是羧基部分或羧基生物电子等排体。
88.如权利要求87所述的化合物，其特征在于，所述羧基部分是羧酸酯或羧酸。
89.如权利要求85所述的化合物，其特征在于，R9选自-C≡CR、-C≡CH、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-CFN、-C≡N、-OR和卤素。
90.如权利要求89所述的化合物，其特征在于，R9选自卤素、-C≡CR或-C≡CH。
91.如权利要求90所述的化合物，其特征在于，R9是卤素。
92.如权利要求91所述的化合物，其特征在于，R9是氯。
93.如权利要求91所述的化合物，其特征在于，R9是溴。
94.如权利要求90所述的化合物，其特征在于，R9是-C≡CH。
95.如权利要求92所述的化合物，其具有以下结构
96.如权利要求90所述的化合物，其具有以下结构
97.如权利要求90所述的化合物，其中p是1或2。
98.如权利要求90所述的化合物，其中p是1。
99.如权利要求90所述的化合物，其中n是1或2。
100.如权利要求90所述的化合物，其中n是1。
101.一种鉴定与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶相互作用的候选分子的方法，包括
将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶和具有式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示结构的化合物的组合物与候选分子在该化合物与该蛋白相互作用的条件下接触，和
与不含该候选分子时该化合物与该蛋白质之间的对照相互作用相比，测定与该蛋白质相互作用的该化合物的含量是否得到调节，藉此将与对照相互作用相比，调节与该蛋白质相互作用的该化合物的含量的候选分子鉴定为与该蛋白质相互作用的候选分子。
102.如权利要求101所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶是人丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。
103.如权利要求N1所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自CK2、CK2α2、Pim-1、CDK1/细胞周期蛋白B、c-RAF、Mer、MELK、DYRK2、Flt3、Flt3(D835Y)、Flt4、HIPK3、HIPK2、ZIPK和ZIPK。
104.如权利要求101所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶在对应于人CK2所列位置含有一个或多个以下氨基酸45位的亮氨酸、163位的甲硫氨酸和174位的异亮氨酸。
105.如权利要求104所述的方法，其中所述丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶选自CK2、STK10、HIPK2、HIPK3、DAPK3、DYK2和PIM-1。
106.如权利要求101所述的方法，其中所述蛋白质、所述化合物或所述分子结合于固相。
107.如权利要求101所述的方法，其中通过可检测标记检测所述化合物与所述蛋白质之间的相互作用。
108.一种调节丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶活性的方法，包括将含有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶蛋白的系统与调节该蛋白质活性有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物接触。
109.如权利要求108所述的方法，其中所述蛋白激酶活性是将γ磷酸从三磷酸腺苷转移至肽或蛋白质底物。
110.一种治疗对象的疼痛或炎症的方法，包括给予有此需要的对象治疗疼痛或炎症有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。
111.一种抑制对象中血管生成的方法，包括给予有此需要的对象抑制血管生成有效量的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI所示化合物。
112.一种包含式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药并与至少一种药学上可接受的赋形剂混合的药物组合物
式中标有α的基团代表稠合到含Q1的环上的5-6员芳环或杂芳环，其中α是任选含有一个或多个氮原子作为环成员的6-员芳环，或选自噻吩或噻唑的5员芳环；
Q1是C＝X，Q2是NR5，Q1和Q2之间的键是单键；或Q1是C-X-R5，Q2是N，Q1和Q2之间的键是双键；和
其中X代表O、S或NR4；
Z1、Z2、Z3和Z4各自是N或CR3并且Z1、Z2、Z3和Z4中一个或多个是CR3；
Z5、Z6、Z7和Z8各自是CR6或N；
各R3和各R6独立为H或任选取代的C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C12杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
或者各R3和各R6独立为卤素、OR、NR2、NROR、NRNR2、SR、SOR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR或NO2，
其中各R独立为H或C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C1-C8酰基、C2-C8杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳基烷基或C6-C12杂芳基烷基，
其中同一原子或毗邻原子上的两个R可以相连以形成任选含有一个或多个N、O或S的3-8员环；
各R基团，及两个R基团相连形成的各环任选被选自以下的一个或多个取代基取代卤素、＝O、＝N-CN、＝N-OR’、＝NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’和NO2，
其中各R’独立为H、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、C1-C6酰基、C2-C6杂酰基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-12芳基烷基或C6-12杂芳基烷基，这些基团各自任选被选自以下的一个或多个基团取代卤素、C1-C4烷基、C1-C4杂烷基、C1-C6酰基、C1-C6杂酰基、羟基、氨基和＝O；
其中两个R’可相连形成任选含有最多3个选自N、O或S的杂原子的3-7员环，
R4是H或选自下组的任选取代的成员C1-C6烷基、C2-C6杂烷基和C1-C6酰基；
各R5独立为H或选自下组的任选取代的成员C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10杂烷基、C3-8碳环和任选与其它任选取代的碳环或杂环稠合的C3-8杂环；或者R5是被任选取代的C3-8碳环或C3-8杂环取代的C2-10杂烷基、C1-10烷基或C2-10烯基；和
在各-NR4R5中，R4和R5可与N一起形成任选取代的3-8员环，其可任选含有选自N、O或S的其它杂原子作为环成员；
前提条件是当式(A)中的Q1是C-NHФ时，其中Ф是任选取代的苯基
如果标有α的环是含有至少一个N作为环成员的6-员环，存在的至少一个R3必须是极性取代基，或者如果各R3是H，则Ф必须是被取代的；和
如果标有α的环是苯基，并且Z1-Z4中的3个代表CH，则Z2不能是C-OR”，Z3不能是NH2、NO2、NHC(＝O)R”或NHC(＝O)-OR”，其中R”是C1-C4烷基。
全文摘要
本发明部分涉及具有特定生物学活性的分子，所述生物学活性包括但不限于抑制细胞增殖、调节蛋白激酶活性和调节聚合酶活性。本发明的分子可调节酪蛋白激酶(CK)活性和/或多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性。本发明还部分涉及利用这些分子的方法。
文档编号C07D221/18GK101528704SQ200780037330
公开日2009年9月9日 申请日期2007年8月31日 优先权日2006年9月1日
发明者P·C·楚埃, F·皮埃尔, J·P·惠藤 申请人:赛林药物股份有限公司