噻吩化合物的制作方法

专利名称：噻吩化合物的制作方法
噻吩化合物
相关申请的交叉引用
本申请主张2006年10月2日递交的美国临时申请No.60/848,761的权
益。前述申请的内容在此通过整体引用引入本文。
背景技术：
由大麻(Cannabis sativa)提炼出的大麻素已于几世纪以来被用作治疗药 物的一种。比如，被用来作止痛、肌肉放松、刺激食欲及抗惊厥用。近来的 研究更指出其具有治疗癌症、缓和慢性发炎疾病，如风湿病及多发性硬化症 的功效。
大麻素的作用受至少两种大麻素受体CB1及CB2受体的介导，此两者都 属G蛋白偶联受体(GPCR)超家族。CB1受体主要表现于脑部以调控抑制递 质释放，而CB2受体主要表现于免疫细胞以调控免疫反应。相关资料见 Matsuda等人，Nature(1990) 346:561及Munro等人，Nature(1993) 365:61 。 相较于其它GPCRs， CB1受体具有高量表达的特征。在中枢神经系统 中，其被高量表达于脑皮层、海马体、基底核、及小脑中，但于下视丘及脊 随中却呈现低量表达。如见Howlett等人，Pharmacol Rev(2002) 54:161。其
功能可影响到许多神经学及心理学现象，如情绪、食欲、呕吐控制、记忆、
空间协调、肌肉张力、及痛觉缺失。如见Goutopoulos等人，Pharmacol Ther(2002) 95:103。除了中枢神经系统，其也表现于许多周边器官，如肠、 心脏、肺脏、子宫、卵巢、睪丸及扁桃腺。如见Galidgue等人，EurJ Biochem(1995) 232:54。
CB2受体其44n/。与CBl受体相同，而其中有68%是在跨膜区相同。相关 资料见Munro等人，Nature( 1993) 365:61 。相较于CB1受体，CB2受体的高 量表达较被限制于脾脏及扁桃腺，而在肺脏、子宫、胰脏、骨髓、及胸腺中 则呈低量表达。在免疫细胞中，B细胞所表达的CB2受体为最高量，其次依 序为自然杀伤细胞(natural killer cells)、单核细胞(monocytes)、中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil)、及T淋巴细胞。相关资料见Gali6gue等人， Eur J Biochem(1995) 232:54。 CB2受体活化已被证实对于与神经系统退变性疾 病(如阿兹海默症)相关的炎症具有止痛效果，且也扮演维持骨质密度及改 善动脉粥样硬化的角色。相关资料见Malan等人，Pain(2001) 93:239; Benito 等人，JNeurosci(2003) 23:11136; Ibrahim等人，Proc Natl Acad Sci USA(2003) 100:10529; Idris等人，Nat Med(2005) 11:774;以及Steffens等人，Nature(2005) 434:782。

发明内容
本发明以发现某些噻吩化合物具有治疗大麻素受体相关疾病的功效为基础。
本发明的一方面中，其特征是如下式(I)的噻吩化合物
式中，R,是氢、C广do烷基、C2-do烯基、CVQo炔基、C3-C2o环垸基、 C3-C2。环烯基、CrC2。杂环垸基、Q-C2。杂环烯基、芳基、或杂芳基；R2是
氢、d-do垸基、C2-d。烯基、C2-do炔基、C3-C2Q环垸基、C3-C20环烯基、 C广C2。杂环垸基、d-C2。杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、ORa、 COORa、
OC(0)Ra、 C(0)Ra、 C(0)NRaRb、或NRaRb，其每一 Ra及Rb分别独立为氢、 CrC川垸基、C3-C2o环烷基、d-C加杂环垸基、芳基、或杂芳基；每一 R3、 R4、及Rs分别独立为氢、卤素、Crdo垸基、C2-d。烯基、C2-do炔基、C3-C20 环垸基、Q-C2o环烯基、d-C2o杂环垸基、d陽C2o杂环烯基、芳基、或杂芳 基或Rs连同R6及两者所接至的碳原子为C3- C2o环烯基或C3- C2。杂环烯基 且Re是CVd。烯基或CVd。炔基，或Re连同Rs及两者所接至的碳原子为C3-C20环烯基或C3- C2。杂环烯基。
依据上述式(I)，部分上述噻吩化合物具有下述一或多个特征！^是经卤 素取代的芳基(如2，4-二氯苯基)；R6为未经取代或经环垸基取代的烯基， 如戊-l-烯基(penten-l-yl)及2-环己基乙-l-烯基(2-cyclohexylethen-l-yl)，或未 经取代或经烷氧基、胺基、环垸基、杂环垸基、芳基或杂芳基取代的炔基，如2-环戊基乙-l-炔基(2-cyclopentylethyn-l-yl)、 2-环己基乙-l-炔基 (2陽cyclohexylethyn隱1誦yl)、 2-环丙基乙-1隱炔基(2《)^1(^^^716&)^-1 -yl)、戊-1 -炔基(pent-l-ynyl)、己-l-炔基(hex-l-ynyl)、 3-异丙氧基-丙-l-炔基 (3-isopropoxy-prop-l曙ynyl)、 3-二甲胺基隱丙'誦l-炔基
(3-dimethylamino-prop-1 -ynyl)、卩比咯畔木-1隱丙隱1 -'炔基(pyrolidin-lyl-propyn-1 yl) 及苯乙-1 -炔基(phenylethyn-1 -yl);且R2为C(0)Ra(其Ra可为哌啶基(piperidinyl) 或吡咯烷基(pyrrolidinyl))或C(O)NRJlb (其Ra及Rb分别独立为氢、环己基、 哌啶基、或八氢环五吡咯(octahydrocyclopentapyrrolyl))。
"垸基"一词是指饱和直链或支链碳氢基团，如-CH3或-CH(CH3)2。"烯 基"一词是指包含至少一双键的直链或支链碳氢基团，如-CH=CH-CH3。"炔 基"一词是指包含至少一叁键的直链或支链碳氢基团，如-CeC-CH3。"环垸
基"一词是指饱和环状碳氢基团，如环己基。"环烯基"一词是指包含至少一 双键的非芳香性环状碳氢基团，如环己烯基。"杂环烷基"一词是指具有至少 一环杂原子(例如，氮、氧或硫)的饱和环状基团，如4-四氢吡喃基 (4-tetrahydropyranyl)。"杂环烯基"一词是指具有至少一环杂原子(例如，氮、 氧或硫)及至少一环状双键的非芳香性环状基团，如吡喃基(pyranyl)。"芳 基"一词是指具有一或多个芳香环的碳氢基团。芳基基团范例包括苯基 (phenyl,Ph)、亚苯基(phenylene)、萘基(naphthyl)、亚萘基(naphthylene)、芘基 (pyrenyl)、蒽基(anthryl)、及菲基(phenanthryl)。"杂芳基"一词是指具有一或多 个芳香环的碳氢基团，且该芳香环包含至少一杂原子(例如，氮、氧或硫)。 杂芳基基团范例包括呋喃基(foryl)、亚呋喃基(fbrylene)、苐基(fluorenyl)、吡咯 基(pyrrolyl)、噻吩基(thienyl)、恶唑基(oxazolyl)、咪唑基(imidazolyl)、噻唑基 (thiazolyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、喹唑啉基(quinazolinyl)、喹 啉基(quinolyl)、异喹啉基(isoquinolyl)及B引哚基(indolyl)。
除非有特别指出，否则在此所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、 杂环烷基、杂环烯基、芳基、以及杂芳基可包括经取代及未经取代的基团。 可能取代于环垸基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基、以及杂芳基的取 代基包含但不受限于Crd。烷基、C2-do烯基、C2-d。炔基、C3-C2。环烷基、 CVC2o环烯基、d-C2。杂环垸基、d-C2。杂环烯基、Crd。垸氧基、芳基、芳 氧基、杂芳基、杂芳氧基、胺基、CVd。垸胺基、d-C20二垸胺基、芳胺基、二芳胺基、d-do垸基磺胺(d-doalkylsulfonamino)、芳基磺胺 (arylsulfonamino)、 C广Cio院基亚月安(C广CK) alkylimino)、芳基亚月安(arylimino)、 C广dQ垸基磺亚胺(Crdoalkylsulfonimino)、芳基磺亚胺(arylsulfonimino)、氢 氧基、卤素、硫代基(thio)、 Crdo烷硫基、芳硫基、C!-do烷硫酰基 (alkylsulfonyl)、芳硫酰基(arylsulfonyl)、酰基胺(acylamino)、胺基酰 (aminoacyl)、胺基硫酰(aminothioacyl)、酉先胺基(amido)、脒基(amidino)、胍基 (guanidine)、脲基(ureido)、 6t脲基(thioureido)、月青基、石肖基、亚石肖基、迭氮基 (azido)、酰基、硫酰基、酰氧基(acyloxy)、羧基、及羧酸酯。另一方面，可能 取代于垸基、烯基、或炔基的取代基包含除Crdo垸基外的上述所有取代基。 环垸基、环烯基、杂环垸基、杂环烯基、芳基、及杂芳基也可互相稠合。
本发明的另一方面中，其特征是如式(I)的噻吩化合物，其中&是ft CVCu)
垸基、C2-d。烯基、C2-do炔基、C3-C2。环垸基、C3-C2。环烯基、C,-C2()杂环
垸基、C广C2o杂环烯基、芳基、或杂芳基R2是CVdo烯基、C2-do炔基、C3-C20
环烷基、C3-C2。环烯基、d-C2。杂环垸基、d-C2。杂环烯基、芳基、杂芳基、 卤素、ORa、 OC(O)Ra、 NRaRb、或经NRa画C(O)画Rb、 NRa-C(S)-Rb、
NRa-C(0)-NRbRc、 NRa-C(S)-NRbRc、或NRa-C^N-CN)陽NRbRc取代的C广do 垸基，其每一Ra、 Rb及Rc各自独立为氢、Crd。垸基、Q-C2o环烷基、d-C^ 杂环烷基、芳基、或杂芳基；且每一R3、 R4、 Rs及R6分别独立为氢、卤素、
C广C!o院基、C2-Ck)稀基、C2一Ck)快基、C3-C20环院基、C3-C20环》希基、(^-(1!20
杂环垸基、d-C^杂环烯基、芳基、或杂芳基，或R5与R6连同两者所接至的
碳原子为C3-C20环烯基或C3-C20杂环烯基。
部分上述噻吩化合物具有下述一或多个特征R4是经卤素取代的芳基
(如2,4-二氯苯基)；R6是氯基或戊-l-烯基；且R2为经NRa-C(0)-Rb， NRa-C(O)-NRbRc或NRa-C(S)-NRbRc取代的甲基，其中，Ra为氢，R。为氢，且 Rb为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、吡啶基、选择性经卤素或 Q-do烷基取代的苯基、或可选择地经芳基或杂芳基取代的d-do垸基。
C(0)Ra (其Ra可为哌啶基(piperidinyl)或吡咯垸基(pyrrolidinyl))或 C(0)NRaRb (其Ra及Rb分别独立为氢、环己基、哌啶基、或八氢环五吡咯 (octahydrocyclopentapyrrolyl))。
在又一方面中，本发明的特征在于一种治疗大麻素受体介导的疾病的方法。此方法包括将有效剂量的上述式(I)中的一种或多种噻吩化合物，给予所 需的受试者。其中大麻素受体介导的疾病的实例为肝脏纤维化、掉发症、月巴 胖症、新陈代谢症候群(例如X症候群)、高血脂症、二型糖尿病、动脉粥状 硬化症、物质成瘾疾(例如酒瘾及尼古丁瘾)、忧郁症、动机缺乏症候群、学 习或记忆官能障碍、痛觉缺失、失血性休克、局部缺血、肝硬化、神经痛、 止吐、高眼压、支气管舒张、骨质疏松、癌症(例如前列腺癌、肺癌、乳癌、 头颈部癌)、神经退化性疾病(例如老年痴呆症或帕金森氏症)或发炎性疾病。
本文中，"治疗"一词是指将一种或多种噻吩化合物给予染有上述疾病、其 疾病症状、或为该疾病的易染病体质的受试者，以达成治疗效果，例如治 愈、缓和、改变、影响、改善、或预防上述疾病、其症状、或其易染病体质。
此外，本发明包含一种医药组合物，其包括有效量的至少一种上述噻吩 化合物及医药上可接受的载体。
上述噻吩化合物包含化合物本身、及其可应用的盐类、前体药、及溶剂 化物。盐类，例如，可在阴离子与噻吩化合物上的正电基团(如胺基)间形 成。适合的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸
根离子、柠檬酸根、甲基磺酸根(methanesulfonate)、三氟醋酸根 (trifluoroacetate)、醋酸根、苹果酸根(malate)、托西酸根(tosylate)、酒石酸根、 延胡索酸根(fomurate)、麸胺酸根(glutamate)、葡糖醛酸根(glucuronate)、乳酸
根、戊二酸根、及马来酸根。同样地，盐类也可在阳离子与噻吩化合物上的 负电基团(如羧基)间形成。适合的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、 钙离子、以及铵阳离子(如，四甲基铵离子)。噻吩化合物也包括含有四级氮 原子的盐类。前体药的举例包括酯类或其它医药可接受的衍生物，其在给药 予一受试者后，可提供如上述的活性噻吩化合物。溶剂化物意指形成于活性 噻吩化合物与医药可接受溶剂间的复合物。医药可接受溶剂的举例包括水、 乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、醋酸、及乙醇胺。
本发明范畴也包括一种用于治疗上述疾病的组合物，其包括一或多种上 述噻吩化合物；以及使用该类组合物，以制得前述治疗用的药剂。
本发明的诸多实施例细节将于下揭示。本发明的其它特征、目的及优点 将由说明书与权利要求书阐明。实施方式
以下为本发明的38种范例化合物-
Cl
& H H
a
ci
化合物17
化合物18
ci
化合物is
Cl
化合物21
ci
化合物22
化合物23
ci
化合物20
a
化合物24<formula>formula see original document page 12</formula>
化合物33 化合物34 化合物35 化合物36
上述噻吩化合物可以经由本领域公知的合成方法制备。以下的实施例 1-38将详述化合物1-38的制备方式。
下述流程

图1是揭示一合成该些范例化合物的典型流程图。<image>image see original document page 13</image>特别地，如上流程图1所示，首先，包含酮基的噻吩化合物(例如化合
物A)可在锂盐存在的环境下与草酸酯化合物(例如草酸二乙酯，diethyl oxalate)进行克莱森酯縮合反应(Claisen condensation reaction),以开多成含酯 基的l,3-二酮化合物(例如化合物B)。该1，3-二酮化合物可接着与联胺 (hydrazine)反应，以形成腙化合物(hydrazone)，其不需再经纯化，可在醋酸回 流下进行分子内环化反应，以形成含有酯基的吡唑(pyrazole)化合物(例如化 合物C)。该吡唑化合物可与溶于乙腈的N-溴丁二酰亚胺 (N-bromosuccinimide， NBS)反应，以形成在噻吩环的第5位置含溴的化合物 (例如化合物D)。通过与经取代的硼酸或炔烃反应，该溴基可被置换为烯基 或炔基。该化合物上形成的酯基(例如化合物E)可藉由加入碱而被水解形成羧酸，而该羧酸可接着与亚硫酰氯(SOCl2)反应形成氯化酰基团，以获得氯化 酰化合物(例如化合物F)。该氯化酰化合物可与不同胺类化合物反应形成本
发明的某些化合物(例如化合物1-11及化合物30-38)。
上述流程图1中的中间产物可经不伺方式的修饰而得到本发明的其它化
合物。下流程图2为一说明范例
流程图2
化合物12-29:
X=0或S; R6=C1或戊-1 -烯基；
『=环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、吡啶基、经溴或异丁基 取代的苯基、经苯基或噻吩基取代的甲基，或经环己基或丙基取代的胺基
如上流程图2所示，该化合物C或E上的酯基可被还原成羟基。形成的 化合物(例如化合物G)藉由与甲基磺酰氯(methanesulfonyl chloride, MsCl)反 应而形成具有甲基磺酸酯基的化合物(例如化合物H)。形成的化合物可先与 迭氮化钠(sodium azide)反应形成迭氮基(例如化合物I)，再形成具有胺基的 化合物(例如化合物J)。该形成的化合物可与氯化酰(acylchloride)、异氰酸 酯(isocyanate》或异硫氰酸酯(isothiocyanate)反应形成本发明的某些化合物(例 如化合物12-29)。
上述合成的噻吩化合物可以合适的方法纯化，例如柱色谱法、高压液相色谱或再结晶法。
其它噻吩化合物可经由上述合成流程或本领域意志的其它方法使用合适 的起始物制备。上述方法可能在此所述步骤之前或后包含其它步骤，以加入 或去除适合的保护基，得以合成出噻吩化合物。此外，不同合成步骤可以其 它顺序或次序进行，以制得所需化合物。用以合成噻吩化合物的合成化学转 变以及保护基方法论(保护作用与去保护作用)是本领域己知的，例如R.
Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers( 1989); T.W. Greene与P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., John Wiley and Sons(1991); L. Fieser与M. Fieser, Fieser and Fieser，s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley与Sons(1994);以及L. Paquette编，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995)及其后续版本。
在此所述的噻吩化合物可包含非芳香性双键及一或多个非对称中心。因 此，其可为外消旋体(racemates)和外消旋混合物(racemic mixtures)、单一 镜像异构觀个别非镜像异构靱非镜像体混合靱以及顺式(cis-)或反式(trans-) 异构物。所有异构物都考虑在其内。
同时，包含至少一种有效量的上述噻吩化合物及医药上可接受载体的医 药组合物也在本发明的范畴中。此外，本发明涵盖给予一种或多种有效量的 噻吩化合物于感染前述发明内容所述疾病的受试者的方法。"有效量"是指可对 给药受试者产生治疗效果的活性噻吩化合物的剂量。如本领域技术人员所 知，有效量会依治疗的疾病种类、给药路径、所用赋形剂、及合并使用其它 治疗的可能而改变。
为实践本发明所述的方法，包含一种或多种上述噻吩化合物的组合物可 通过非经肠道、口服、经鼻、经直肠、局部、或舌下等方式给药。"非经肠道" 在此是指皮下、腹腔、静脉注射、肌肉注射、关节腔内注射、主动脉注射、 关节液内注射、胸腔注射、脊髓内注射、疾病部位内注射、颅内注射、或其 它适合的给药技术。
无菌可注射的组合物可以是溶液或是悬浮于无毒的静脉注射稀释液或溶 剂中，此类溶剂如1，3-丁二醇。可使用的可接受载体及溶剂可为甘露醇 (mannitol)、水、林格氏溶液(Ringer，s solution)或等渗氯化钠溶液。除此之外，
非挥发油是常用的溶剂或是悬浮介质(例如合成单甘油酯或双甘油酯)。脂肪酸，如油酸(01eicAcid)与其甘油酯衍生物也可用于注射剂的制备，为天然 医药可接受的用油，如橄榄油或蓖麻油等，特别是其多氧乙基化的型态。该 些油酯溶液或悬浮液可包含长链醇类稀释液或分散剂、羧甲基纤维素、或类 似的分散剂。其它一般使用的表面活性剂，如Tween或Spans、或其它相似乳 化剂、或医药制造业一般使用于医药可接受的固态、液态或其它剂量形式的 生物可利用增强剂也可以用于剂型开发的目的。
用于口服给药的组合物可为任何一种口服可接受的剂型，形式包括胶 囊、锭片、乳化剂与液状悬浮液、分散剂与溶剂。以锭片为例， 一般所使用 的载体为乳糖或是玉米淀粉。润滑剂(如硬脂酸镁)也常被添入其中。以口 服胶囊给药形式而言，有效的稀释液包括乳糖与干燥玉米淀粉。当以液状悬 浮液或乳化剂经口给药时，活性物质可悬浮或是溶解于结合乳化剂或悬浮剂 的油状界面中。如果需要，可添加适度的甜味剂，风味剂或是色素。
鼻用气化喷雾剂或吸入剂组合物可根据医药制剂领域公知的技术进行制 备。例如，此组合物可制备于生理食盐水中，应用苯甲醇(benzylalcohol)或其 它适合的防腐剂、增强生物可利用性的促吸收剂、碳氟化合物、和/或其它本 领域已知的溶解剂或分散剂。
包含一种或多种活性噻吩化合物的组合物也可以栓剂方式进行直肠给药。
医药组合物的载体必须是"可接受的"，即其必须与组合物的活性主成份兼 容(优选具有稳定活性主成份的功能)，并且不能对被治疗的受试者造成伤 害。 一种或多种溶解剂可作为递送活性噻吩化合物的医药赋形剂。其它载体 举例包括胶质氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、月桂硫酸钠与D&C Yellow #10。
前述噻吩化合物可初步针X、」'于其治疗前述疾病的功效通过体外分析进行 筛选(见下述实施例39)，并由动物实验与临床试验获得证实。其它方法对于 本领域熟练技术人员也是显而易见的。
下列特定具体实施例仅解释为说明性，无论以任何方式都不限制本公开 内容的其余者。对本发明中配方的形式与细节的省略、修饰、减损、与改变，
在不背离本发明精神与范畴下，均可由本领域技术人员加以进行。本文所引 述的所有发表文献全部并入本文以供参考。实施例1、化合物1: (E)-l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩基)-N-(哌 啶-l-基)-lH-吡唑-3-甲酰胺
((E)-1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-N-(piperidi n画1 -f l)-1 H画pyrazole-3 -carboxamide)的制备
于-78。C下，将溶于二乙醚(30ml)的l-(2-噻吩)-l-丙酮 (l-(2-thienyl)-l-propanone， 6.0g， 42.53mmol)溶液加至溶于二乙醚(55ml)的双 (三甲基甲硅烷基)胺基锂(46.7ml， 46.7mmo1， l池ium bis(trimethylsilyl)amide) 磁搅拌溶液中。于相同温度下搅拌45分钟后，加入草酸二乙酯(6.9ml， 51.03mmol， diethyl oxalate)。将反应混合物回复至室温，再搅拌16小时。接 着将沉淀物过滤出来，并以二乙醚洗涤，于真空状态下干燥获得中间产物 I(a)，艮卩乙基-3-甲基-2,4- 二氧-4-噻吩-2-基-丁酮的锂盐，a l他ium salt of ethyl 3-md:hyl一2,4-dioxo-4-thiophen隱2-yl-butanonate， 6,14g， 62^>。
将中间产物I(a)(4.65g， 18.84mmol)溶于56ml乙醇中，并作磁搅拌，于室 温下， 一次加入2，4-二氯苯基肼盐酸盐(4.35g， 20.73mmo1， 2,4-dichlorophenylhydrazine hydrochloride)。并于室纟显中搅拌24小时。将形成 的沉淀物过滤，并以乙醇及二乙醚冲洗，接着真空干燥得到一淡黄色固体 (5.18g， 71%)。将此固体溶于醋酸(30ml)，并回流加热24小时。接着，将混 合物倒入冰水中，并以乙酸乙酯萃取。将萃取物依序经由水、饱和碳酸氢钠 水溶液、以及食盐水洗涤，并以无水硫酸钠干燥，再经过滤，并挥发浓縮。 接着将粗产物以正己烷/乙酸乙酯(9:l)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到中间产 物II(a)，即l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-2-噻吩基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯， 1 -(2,4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-thiophen-2-yl- 1H-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester，白色固体(3.87g， 73%)。
将中间产物II(a)(5.27g， 13.8mmol)溶于乙腈中磁搅拌，并于(TC下，加入 少量N-溴丁二酰亚胺(NBS， 3.2g， 16.6mmo1)。于0。C中搅拌1小时后，加入 饱和亚硫酸钠溶液。将有机溶剂挥发，并以乙酸乙酯萃取残余的混合物。产 物依序以水、饱和碳酸氢纳水溶液、以及食盐水洗涤，并以无水硫酸钠干燥， 过滤，并浓縮。将粗产物以正己烷/乙酸乙酯(9:l)进行快速硅胶柱色谱纯化， 得到中间产物III，即5-(5-溴-2-噻吩基)-1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-111-吡唑-3-羧酸乙酯，5画(5-Bromo-thiophen-2-y1)-1 -(2，4-dichloro-phenyl)-4-methyl-lH-pyrazole-3隱carboxylic acid ethyl ester， 白色固体 (4.91g， 77%)。
将包含有中间产物m(2.28g， 4.96mmol)、戊-l-烯硼酸(pent-l-enylboronic acid， 677.8mg， 5.95mmol)、四(三苯基膦)钯
(tetmkis隱triphenylphosphinopallidum， 572.8mg， 0.57mmol)、以及碳酸铯(cesium carbonate, 3.23g， 9.91mmol)并溶于DME(10ml)的溶液回流3小时。接着，在 减压条件下，挥发溶剂，将获得的残留物以正己垸/乙酸乙酯(5:l)进行快速硅 胶柱色谱纯化，得到中间产物IV(a)，艮卩l-(2,4陽二氯-苯基)-4誦甲基-5-[((E)-5陽 戊-l-烯)-2-噻吩基]-lH-吡唑-3-羧酸乙酯，
l-(2,4-Dichloro-phenyl)-4-methyl國5曙[((E)-5-pent誦l陽enyl)-thiophen-2-yl]一lH-pyraz ole-3-carboxylic acid ethyl ester， 白色固体(1.16g， 73%)。
将中间产物IV(a)(230.2mg， 0.48mmol)于乙醇(3.0ml)中磁搅拌，并加入溶 于乙醇(7ml)的氢氧化钾(160.1mg， 3.0mmo1)。将混合物回流3小时，接着冷 却，将其倒入水中，并以10%的盐酸水溶液酸化。接着，将沉淀物过滤出， 并用水洗涤，于真空状态下干燥得到中间产物V(a)，即1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-[((E)-5-戊-l-烯)-2-噻吩基]-lH-吡唑-3-羧酸 (l-(2,4-Dichloro陽phenyl)陽4-methyl-5-[((E)隱
5-pent-1 -enyl)-thiophen-2-yl]-1 H隱pyrazole-3-carboxylic acid ， 白色固"[本 (191.1mg， 92%)。
将溶于甲苯(7.0ml)的中间产物V(a)(171.7mg， 0.41mmol)及亚硫酰氯 (114.1|il， 1.56mmol)溶液回流3小时。接着于减压条件下，将溶剂蒸干。再将 残留物溶于甲苯(7.0ml)中，并再次将溶剂蒸干，以得到白色固体的氯化酰粗 产物。将上述氯化酰溶于二氯甲烷(10ml)中，并于0"C下，逐滴加至溶于二氯 甲烷(5ml)的l-胺基哌啶(l-aminopiperidine， 53.9^1， 0.54mmo1 )及三乙胺 (75.8^1， 0.54mmol)混合液中。于室温下，搅拌8小时后，以水终止该反应。 将水层分开，接着以二氯甲垸(2xl0ml)萃取。萃取物接着以食盐水洗涤，再以 无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓縮。得到一粗产物，将其以正己垸/乙酸乙 酯(2:1)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到白色固体化合物1(172.8mg， 84%)。
'H-NMR (CDC13， ppm):7.61(d， 1H)， 7.49 (d， 1H)， 7.35-7.33 (m， 2H)， 6.71 (d， 1H)， 6.64 (d， 1H)， 6.39 (d， 1 H)， 6.02 (dt， 1H)， 2.87-2.84 (m， 4H)，2.50-2.45 (m， 3H)， 1.79-1.71 (m， 6H)， 1.50-1.40 (m， 4H)， 0.93 (t， 3H). ES-MS(M+1): 503.1。
实施例2、化合物2: (E)-l-(2,4-二氯苯基)-N-(六氢环戊[c]吡咯-2(lH)-基)-4-甲 基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-甲酰胺
((E)-l-(2,4-dichlorophenyl)-N-(hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(lH)-yl)-4-methyl-5-(5-(pent-l-enyl)thiophen-2-yl)-lH-pyrazole-3-carboxamide)的帝!j备 除了最后步骤的氯化酰粗产物(75mg， 0.17mmol)是于0'C， 二氯甲垸中，以六 氢环戊-[c]吡咯-2(lH)-胺盐酸盐(hexahydrocyclopenta-[c]pyrrol-2(lH)-amine hydrochloride, 44.0mg， 0.27mmol)及三乙胺(62.9pl， 0.44mmol)处理外，制备 化合物2的其余步骤都与上述实施例1的方法相似，如此便可得到白色固态 化合物2(68mg， 75%)。
!H-NMR(CDC丄3， ppm):7.48(s， 1H)， 7.32 (m， 2H)， 6.71 (d， 1H)， 6.64 (dd， 1H)， 6.38 (dd， 1H)， 6.01 (dt， 1H)， 3.28 (t， 2H)， 2.67 (m， 2H)， 2.54-2.47 (m， 5H)， 2.16-2.07 (m， 2H)， 1.67-1.42 (m， 9H)， 0.93 (t， 3H)。 ES陽MS(M+1): 529.1。
实施例3、化合物3: (￡)-^环己基-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-甲酰胺
((E)-N-cyclohexyl-l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-l-enyl)thiophen-2-yl)-lH-pyrazole-3-carboxamide)的帝U备
除了最后步骤的氯化酰粗产物(88.5111& 0.20mmol)是于0°C， 二氯甲垸中， 以环己胺(49.4(11， 0.44mmol)以及三乙胺(70.4^11， 0.49mmol)处理外，制备化合 物3的其余歩骤都与上述实施例1的方法相似，如此便可得到白色固态化合 物3(78.4mg， 77%)。
,H-NMR(CDCl3， ppm):7.49(s， 1H)， 7.34(m， 2H)， 6.79(d， 1H)， 6.72(d， 1H)， 6.64(d， 1H)， 6.39(dt， 1H)， 2.49(t， 3H)， 2.10(m， 2H)， 2.12隱1.72(m， 2H)， 1.66-1.14(m， 12H)， 0.95(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 502.1。实施例《化合物4:问-(1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-111-吡唑-3-基)(哌啶-l-基)甲酮
((E)-( 1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5 -(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyrazo l-3-yl)(piperidin-1隱yl)methanone)的制备
除了最后步骤的氯化酰粗产物(93.2111& 0.21mmol)是于0。C， 二氯甲垸中， 以哌啶(piperidine， 45.3|il， 0.40mmol)以及三乙胺(63.2ial， 0.44mmol)处理外， 制备化合物4的其余步骤都与上述实施例1的方法相似，如此便可得到白色 固态化合物4(80.3mg， 78%)。
!H-NMR(CDCl3， ppm):7.49(s， 1H)， 7.30(m， 2H)， 6.72(d， 1H)， 6.64(d， 1H)， 6.41(d， 1H)， 6.03(dt， 1H)， 3.75(m， 2H)， 3.64(m， 2H)， 2.29(t， 3H)， 2.14(m， 2H)， 1.74隱1.60(m， 6H)， 1.54-1.42(m， 2H)， 0.94(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 488.1。
实施例5、化合物5: (￡)-(1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-111-吡唑-3-基)(l-吡咯烷)甲酮
((E)-(l -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyrazo 1-3 -yl)(pyrrolidin-1 -yl)methanone)的审'J备
除了最后步骤的氯化酰粗产物(101.4mg， 0.23mmol)是于0"C， 二氯甲烷 中，以吡咯垸(pyrrolidine， 43.8^1， 0.39mmol)以及三乙胺(63.6^， 0.44mmo1) 处理外，制备化合物5的其余步骤都与上述实施例1的方法相似，如此便可 得到白色固态化合物5(84.2mg， 77%)。
^-NMR(CDCl3， ppm):7.49(m， 1H)， 7.30(m， 2H)， 6.72(d， 1H)， 6.64(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.02(dt， 1H)， 3.80(m， 2H)， 3.66(m， 2H)， 2.38(t， 3H)， 2.12(m， 2H)， 1.92(m， 4H)， 1.46(m， 2H)， 0.93(t， 3H)。
ES画MS(M+1): 474.1。
实施例6、化合物6: (E)-5-(5-(2-环己基乙烯基)2-噻吩基)-l-(2,4-二氯苯 基)-N-(六氢环戊[c]吡咯-2(lH)-基)-4-甲基-lH-吡唑-3-甲酰胺 ((E)-5-(5-(2-cyclohexylvinyl)thiophen-2-yl)-l-(2,4-dichlorophenyl)-N-(hexahydro cyclopenta[c]pyrrol-2( 1 H)-yl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3 -carboxamide)的制备除了以(E)-2-环己基-乙烯基硼酸取代戊-l-烯硼酸须以外，中间产物IV(b)，即5-[5-((E)-2-环己基-乙烯基)-2-噻吩基]-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯(5-[5-((E)-2-cyclohexyl-vinyl)-thiophen-2-yl]_ 1 -(2，4-dichloro-phenyl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)制备步骤都与上述实施例1的中间产物 IV(a)制备方法相似，其产率为80%。中间产物V(b)，即5-[5-((E)-2-环己基-乙烯基)-2-噻吩基]-l-(2,4-二氯-苯 基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸(5陽[5-((E)画2-cyclohexyl-vinyl)-thiophen-2-yl]-1誦(2,4-dichloro-phenyl)-4陽methyl國1 H-pyrazole-3-carboxylic acid)是由中间产物IV(b)(269.4mg， 0.55mmol)(而非中 间产物IV(a))开始制备，其制备方法与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法 相似，为白色固体，其产率为90%。除了最后步骤由中间产物V(b)得到的氯化酰粗产物(96mg， 0.20mmol)是 于0oC， 二氯甲烷中，以六氢环戊-[c]吡咯-2(lH)-胺盐酸盐 (hexahydrocyclopenta-[c]pyrrol-2(lH)画amine hydrochloride, 62.8mg， 0.39mmol) 及三乙胺(63.6(il， 0.44mmol)处理外，制备化合物6的其余步骤都与上述实施 例l制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物6(79mg， 72%)。iH隱NMR(CDCl3， ppm):7.47(m， 1H)， 7.32(m， 2H)， 6.72(d， 1H)， 6.63(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.00(dt， 1H)， 3.25(m， 2H)， 2.63(brs， 2H)， 2.47(m， 2H)， 2.48(s， 3H)1.81陽1.12(m，醒)。ES腸MS(M+1): 569.2。实施例7、化合物7: 5-(5-(环丙乙炔)2-噻吩基)-l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-N-(哌 啶-l-基)-lH-吡唑-3-甲酰胺(5-(5-(cyclopropylethynyl)thiophen-2-yl)-l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-N-(pipe ridin-l -yl)-1 H-pyrazole-3-carboxamide)的制备将乙炔基-环丙烷(40111& 0.6mmol)以及0.5M的2-乙醇胺水溶液(3ml)加入 溶于THF(3ml)的实施例1所制备的悬浮状中间产物Ul(230mg， 0.5mmo1)、 PdC12(PPh3)2(llmg， 0.015mmo1)、以及Cul(2mg， 0.02mmo1)。将混合物加热 至60。C维持6小时。接着冷却至室温，将其倒入一水(20ml)以及二乙醚(20ml)的混合溶剂中。将水层萃取出来并将有机层浓縮而得到粗残余物，将其以正己烷/乙酸乙酯(5:l)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到无色油状的中间产物 IV(c)即5-(5-环丙乙炔-2-噻吩基)-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙 酉旨(5隱(5-Cyclopropylethynyl隱thiophen-2-yl)隱1 -(2,4-dichloro-phenyl)-4-md:hyl-1 H-pyrazolG隱3-carboxylk aGid ethyl ester)(202.4mg， 91 */o)。除了以中间产物IV(c)(366.2mg， 0.88mmol)取代中间产物IV(a)外，制备 中间产物V(c)，即5-(5-环丙乙炔-2-噻吩基)-l-(2，4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑 -3-@^(5-(5-cyGlopropyld;hynyl—thiophen-2隱y1)— 1 —(2，4-diGhloro-phenyl)-4-methyl-lH-pyrazole-3-carboxylic acid)的其余步骤都与上述实施例1 的中间产物V(a)制备方法相似，其为白色固体且产率为88%。除了最后步骤中，由中间产物V(c)制得的氯化酰粗产物(110.3mg， 0.25mmol)是于0。C， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(50.2mg， 0.50mmol)以及三 乙胺(84.1pl， 0.60mmol)处理外，其余的制备步骤都与上述实施例1的制备方 法相似，如此便可得到白色固态化合物7(94.3mg， 75%)。)H-NMR(CDC13， ppm):7.48(d， 1H)， 7.33(d， 2H)， 6.95(d， 1H)， 6.68(d， 1H)， 3.26(t， 4H)， 2.46(s， 3H)， 1.80-1.65(m， 4H),1.50画1.38(m， 2H)。ES-MS(M+1): 499.2。实施例8、化合物8: 5-(5-(环戊乙炔)2-噻吩基)-l-(2,4-二氯苯基)-N-(六氢环戊 [c]吡咯-2( 1 H)-基M-甲基-1 H-吡唑-3 -甲酰胺(5-(5-(cyclopentylethynyl)thiophen-2-yl)-l-(2，4-dichlorophenyl)-N-(hexahydrocyc 1openta[c]pyrrol-2( 1 H)-yl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3 -carboxamide)的制备除了以乙炔基-环戊烷取代乙炔基-环丙烷外，制备中间产物IV(d)即5-(5-环戊乙炔-2-噻吩基)-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯 (5-(5-cyclopentylethynyl-thiophen-2-yl)-l-(2,4-dichloro-phenyl)-4-methyl-lH-pyrazole隱3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤者P与上述 实施例7的中间产物IV(c)制备方法相似，其为白色固体且产率为88%。除了中间产物IV(a)须以中间产物IV(d)(387.2mg， 0.87mmol)取代外，中 间产物V(d>即5-(5-环戊乙炔-2-噻吩基)-1-(2，4-二氯-苯基)-4-甲基-111-吡唑-3-，^l^(5-(5-cyclopentylethynyl-thiophen-2-yl)-l-(2，4-dichloro-phenyl)-4-methyl-lH-pyrazole-3-carboxylicacid)制备步骤都与上述实施例1的 中间产物V(a)制备方法相似，其为白色固体且产率为87%。除了最后步骤中，由中间产物V(d)制得的氯化酰粗产物(116.3mg， 0.25mmol)是于(TC， 二氯甲烷中，以六氢环戊-[c]吡咯-2(lH)-胺盐酸盐 (hexahydrocyclopenta-[c] pyrrol-2(lH)-amine hydrochloride, 82.4mg， 0.51mmo1) 以及三乙胺(84.1pl， 0.60mmol)处理外，其余的制备步骤都与上述实施例7的 方法相似，如此便可得到白色固态化合物8(102.1mg， 74%)。iH-NMR(CDCl3， ppm):7.48(d， 1H)， 7.35(d， 2H)， 6.95(d， 1H), 6.67(d， 1H)， 3.26(t， 2H)， 2.80(q， 1H)， 2.66(br， 1H)， 2.50(t， 2H)， 2.46(s， 3H)， 2.02陽1.84(m， 2H)， 1.81-1.40(m， 12H)， 1.26(t， 2H)。ES-MS(M+1): 553.2。实施例9、化合物9: 5-(5-(环己基乙炔)2-噻吩基)-l-(2,4-二氯苯基)-N-(六氢环 戊[c]吡咯-2( 1 H)-基M-甲基-1 H-吡唑-3-甲酰胺(5-(5-(cyclohexylethynyl)thiophen-2-yl)-l-(2,4-dichlorophenyl)-N-(hexahydrocycl openta[c]pyrrol隱2( 1 H)-yl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3 -carboxamide)的制备除了以乙炔-环己烷取代乙炔基-环丙烷外，制备中间产物IV(e)，即5-(5-环己基乙炔-2-噻吩基)-1-(2，4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯 (5—(5-cyGlohexylGthyny1—thiophen-2-yl)-1 —(2,4誦didiloro陽phenyl)陽4-methyl-lH誦pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤者卩与上述 实施例7的中间产物IV(c)制备方法相似，其为白色固体且产率为80%。除了以中间产物IV(e)(384.3mg， 0.84mmol)取代中间产物IV(a)外，制备 中间产物V(e)，即5-(5-环己基乙炔-2-噻吩基)-1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-111-吡唑-3-羧酸(5-(5-。乂。101^乂71611^1^141(^1^11-2陽71)-1-(2，4-^(^101"0-phenyl)-4-methyl-lH-pyrazole-3-carboxylic acid)的其余步骤都与上述实施例的 中间产物V(a)制备方法相似，其为白色固体且产率为87%。除了最后步骤中，由中间产物V(c)制得的氯化酰粗产物(118.2mg， 0.25mmol)是于(TC， 二氯甲垸中，以六氢环戊-[c]吡咯-2(lH)-胺盐酸盐 (hexahydrocyclopenta-[c] pyrrol-2(lH)-amine hydrochloride, 82.3mg， 0.51mmo1) 以及三乙胺(84.1fi1， 0.60mmol)处理外，其余的制备步骤都与上述实施例7的方法相似，如此便可得到白色固态化合物9(106.2mg， 77%)。力-NMR(CDCl3， ppm): 7.48(m， 1H)， 7.39(m， 2H)， 7.32(m， 2H)， 6.96(d，1H)， 6.67(d， 1H)， 3.24(t， 2H)， 2.63(brs， 2H)， 2.48(s， 3H)， 2.47(m，2H)1.81-1.12(m， 18H)。 ES隱MS(M+1): 567.2。实施例l(X化合物1Q ^环己基-5-(5-(环戊乙炔)-2-噻吩基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-甲酰胺(N-cyclohexyl-5-(5-(cyclopentylethynyl)-thiophen-2-yl)-l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3 -carboxamide)的制备除了最后步骤中，由中间产物V(c)制得的氯化酰粗产物(116.2mg， 0.25mmol)是于0。C， 二氯甲烷中，以环己胺(50.3mg， 0.51mmol)以及三乙胺 (84.1pl， 0.60mmol)处理外，其余的制备步骤都与上述实施例8的制备方法相 似，如此便可得到白色固态化合物10(97.3mg， 74%)。'H-NMR(CDCl3， ppm): 7.48(brs， 1H)， 7.33(brs， 2H)， 6.95(d， 1H)， 6.79(d， 1H)， 6.67(d， 1H)， 3.93(q， 1H)， 2.80(q， 1H)， 2.47(s， 3H)， 2.10-1.81(m， 4H)， 1.80-1.50(m， IOH)， 1.50-1.20(m， 4H)。ES-MS(M+1): 526.2。实施例11、化合物11: 5-(5-(环戊乙炔)2-噻吩基)-l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-N-(哌 啶-l-基)-lH-吡唑-3-甲酰胺(5-(5隱(cyclopentylethynyl)thiophen-2-yl)-l-(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-N-(pipe ridin-1 -yl)-1 H-pyrazole-3 -carboxamide)的制备除了最后步骤的氯化酰粗产物(90mg， 0.21mmol)是于0。C， 二氯甲垸中， 以l-氨基-哌啶(42mg， 0.42mmol)以及三乙胺(63.8pl， 0.44mmol)处理夕卜，其余 的制备步骤都与上述实施例8的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合 物11(75.3mg， 70%)。'H-NMR(CDC1" ppm): 7.60(br， 1H> 7.49(br& 1H)， 7.34(br& 2H> 6.96(d， 1H> 6.68(d 1H> 2.92-3.76(m 5H> 2.46(& 3H> 2.02陽1.82(m 2H> 1.81-1.50(m IOH)， 1.45-1.25(m， 2H)。ES-MS(M+1): 527.2。实施例12、化合物12: N-((5-(5-氯2-噻吩基)-l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-基)甲基)环丁基甲酰胺(N-((5隱(5-chlorothiophen-2-yl)一l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-lH-pyrazol画3-yl) methyl)cyclobutanecarboxamide)的制备除了以l-(5-氯-2-噻吩)-l-丙酮取代l-(2-噻吩)-l-乙酮外，制备中间产物 I(b)，即乙基3-甲基-2,4-二氧代-4-(5-氯-2-噻吩基)-丁酮的锂盐(a lithium salt of ethyl 3-methyl-2,4誦dioxo-4-(5-Chloro誦thiophen-2-yl)-butanonate)的其余步骤都 与上述实施例1的中间产物I(a)制备方法相似，为白色固体，其产率为42%。中间产物II(b》即5-(5-氯-2-噻吩基)-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯(5-(5隱chloro-thiophen画2-yl)-l画(2,4-dichloro隱phenyl)一4-methyl隱lH-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)是由中间产物I(b)开始制备，其制备方法与中间产物II(a)制备 方法相似，为白色固体，其产率50%。于0。C下，将氢化锂铝(291.9mg， 3.10mmol)加至溶于四氢呋喃(20ml)的中 间产物II(b)(644.4m& 1.55mmol)磁搅拌溶液中。于相同温度下，搅拌30分钟， 再以水终止该反应。将水层分开，接着以乙酸乙酯(2xl0ml)萃取。萃取物以食 盐水洗涤，再以无水硫酸钠干燥，过滤浓縮并以硅胶柱色谱纯化得到白色固 体化合物VI(a>即[5-(5-氯-2-噻吩基)-1-(2，4-二氯-苯基)-4-甲基-11€-吡唑-3-基]-甲醇([5-(5匿chloro-thiophen-2-yl)画1-(2，4-dichloro-phenyl)-4-methyl-1 H-pyrazol-3-yl]-m ethanol， as a colorless liquid, 509.5mg， 88%)。于0卩下，将三乙胺(300(11， 2.1mmol)加至溶于四氢呋喃(10ml)的中间产 物VI(a)(419.2mg， 1.02mmol)磁搅拌溶液中。于相同温度下，搅拌30分钟， 再加入甲基磺酰氯(methanesulfonyl chloride, 200^1， 1.74mmol)。接着于室温 下搅拌8小时。以水终止该反应，将水层分开，接着以乙酸乙酯(2x50ml)萃取。 萃取物接着以食盐水洗涤，并以无水硫酸钠干燥，过滤集浓縮得到一粗产物， 以正己烷/乙酸乙酯(4:l)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到无色液体的中间产物 VII(a)，即甲基磺酸5-(5-氯-2-噻吩基)-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-lH-吡唑-3-基甲基酉旨(methanesulfonic acid
5—(5-chloro—thiophen-2-y1)— 1 —(2,4-didiloro-phenyl)—4-methyl-lH-pyrazol-3-ylmethyl ester)(495mg， 74%)。
将迭氮化钠(135.1mg， 2.22mmol)—次加至溶于DMf(20ml)的中间产物 Vll(a)(272.2mg， 0.61mmol)磁搅拌溶液中。将该反应混合物于8(TC下加热3 小时。接着冷却并以水终止其反应，将水层分开，接着以乙酸乙酯(2x30ml) 萃取。萃取物接着以食盐水洗涤，并以无水硫酸钠干燥，过滤并浓縮。得到 的粗产物以正己烷/乙酸乙酯(3:l)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到无色液体的 中间产物Vin(a)，即3-迭氮甲基-5-(5-氯-2-噻吩基)-l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基 -111-卩比唑(3-321(1011^{1^1誦5隱(5《]1101"041^(^1^11-
2-yl)-1画(2,4画dichloro画phenyl)-4-methyl画1 H-pyrazole)(230.3mg， 83%)。
将三苯基膦(triphenylphosphine， 166.9mg， 0.62mmol)以及水(2ml)加至溶 于四氢呋喃(10ml)的中间产物VlII(a)(230.2mg， 0.57mmol)磁搅拌溶液中。室 温下持续搅拌48小时后，以乙酸乙酯(2xl0ml)萃取。萃取物接着以食盐水洗 涤，并以无水硫酸钠干燥，过滤并浓縮。得到的粗产物再以乙酸乙酯/甲醇(4:l) 进行快速硅胶柱色谱纯化，得到白色固体的中间产物IX(a)，即(5-(5-氯2-噻吩 基)_ i _(2,4-二氯苯基)-4-甲基-1 H-吡唑-3-基)甲胺
((5陽(5-chlorothiophen-2-y1)—1—(2，4-didilorophenyl)-4-mGthyl—1H-pyrazo1—3-yl)md: hanamine， 209.8mg， 97%)。
将三乙胺(20(！1， 0.13mmol)以及环丁基甲酰氯(15pl， 0.09mmol)连续加至 溶于二氯甲垸的中间产物IX(a)(40.1mg， 0.10mmol)磁搅拌溶液中。室温下持 续搅拌8小时后，以水终止该反应，将水层分开，接着以二氯甲烷(2xl0ml) 萃取。萃取物接着以食盐水洗涤，并以无水硫酸钠干燥，过滤及浓縮。得到 的粗产物以正己垸/乙酸乙酯(3:l)进行快速硅胶柱色谱纯化，得到白色固体化 合物12(24.9mg， 51%)。
^-NMR(CDCl3， ppm):7.49(d， 1H)， 7.33(d， 1H)， 7.32(s， 1H)， 6.80(d， 1H)， 6.61(d， 1H)， 6.01(brs， 1H)， 4.51(d， 2H)， 3.05(m， 1H)， 2.38-2.25(m， 2H)， 2.21-2.11(m， 2H)， 2.14(s， 3H)， 1.82-2.05(m， 2H)。
ES-MS(M+1): 454.0。实施例13、化合物13: N-((5-(5-氯2-噻吩基)-l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-lH-吡
唑-3-基)甲基)环戊垸甲酰胺
(N-((5-(5-chlorothiophen-2-yl)-l-(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-lH-pyrazol-3-yl) methyl)cyclopentanecarboxami'ae)的审lj备
除了最后步骤的中间产物IX(a)(51.6mg， 0.11mmol)以三乙胺(2(Hi1， 0.13mmol)及环戊烷甲酰氯(15^d， O.llmmol)处理外，化合物13的制备方法与 实施例12中的制备方法相似，得到的化合物13为一白色固体(32.1mg， 64%)。
'H-NMR(CDCl3， ppm):7.49(d， 1H)， 7.33(d， 1H)， 7.32(s， 1H)， 6.80(d， 1H)， 6.61(d， 1H)， 6.11(brs， 1H)， 4.52(d， 2H)， 2.60隱2.52(m， 1H)， 2.15(s， 3H)， 1.90-1.70(m， 8H)。
ES-MS(M+1): 468。
实施例14、化合物14: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)_ 1H-吡唑-3-基)甲基)环己烷甲酰胺
((E)-N-(( 1 -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol-3 -yl)methyl)cyclohexanecarboxamide)的帝'J备
除了中间产物II(b)是以中间产物IV(a)(886.2mg， 1.97mmol)取代外，中间 产物VI(b)，即0-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-[((E)-5-戊-l-烯)-2-噻吩基]-lH-吡唑 -3-基}-甲醇({1隱(2，4-(^1110^^1^1^1)-4画111611^1-5-[((￡)-5卞€1^-1《1^1)-thiophen-2-yl]-lH-pyrazol-3-yU-methanol)的制备方法与上述实施例12的中间 产物VI(a)制备方法相似，制得的中间产物VI(b)为一无色液体且产率为50%。
中间产物VII(b)，即甲基磺酸1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-[((￡)-5-戊-1-烯)-2-噻吩基]-lH-吡唑-3-基甲基酉旨(methanesulfonic acid l陽(2,4-dichloro-phenyl)-4-methyl-5陽陽lH-pyrazol-3画ylmethyl ester)，是由中间产物 Vl(b)(842mg， 3.27mmol)开始制备，其制备方法与上述实施例12的中间产物 VII(a)制备方法相似，其为无色液体且产率为73%。
中间产物VIII(b)，即3-迭氮甲基-l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-[((E)-5-戊-1-烯)-2-噻吩基]-111-批唑(3力^(1011^1^1-l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-[((E)-5-pent-l-enyl)-thio-phen-2-yl]-lH-pyrazole)，是由中间产物Vll(b)(741.1mg， 1.52mmol)开始制
备，其制备方法与上述实施例12的中间产物VIII(a)制备方法相似，其为无色 液体且产率为60%。
z中间产物IX(b)，艮卩(E)-(l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-lH-吡唑-3-基)甲胺
((E)-( 1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyrazo l-3-yl)methanamine)，是由中间产物VlII(b)(400.2mg， 0.92mmol)开始制备，其
制备方法与上述实施例12的中间产物IX(a)制备方法相f4其为无色液体且产 率为73%。
除了最后步骤的中间产物IX(b)(40.3mg， 0.10mmol)经三乙胺(2(Hd， 0.13mmol)及环己甲酰氯(2(Hi1， 0.14mmol)处理外，化合物14制备方法与上述 实施例12的制备方法相似，得到的化合物14为一白色固体(41.0mg， 78%)。
'H-NMR(CDCl3， ppm):7.45(d， 1H)， 7.27(d， 1H)， 7.25(s， 1H)， 7.12(d， 1H)， 6.70(d， 1H)， 6.65(t， 1H)， 6.60(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.52(d， 2H)， 2.16(s， 3H)， 2.16-2.02(m， 2H)， 1.80-1.65(m， 4H)， 1.53陽1.40(m， 4H)， 1.27画1.15(m， 4H)， 0.92(t， 3H)。
ES匿MS(M+1): 516.2。
实施例15、化合物15: (E)-4-溴-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-1H-吡唑-3-基)甲基)苯酰胺
((E)-4-bromo-N-(( 1 (2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-y l)-1 H-pyrazol画3-yl)methyl)benzamide)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(60.5mg， 0.15mmol)须经三乙胺(50111， 0.33mmol)及4-溴苯甲酰氯(39.2mg， 0.18mmol)处理夕卜，化合物15的制备方法 与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合物15为一白色固体(45.2mg， 51%)。
'H-丽R(CDCl3， ppm):7.70(m， 2H)， 7.57(m， 2H)， 7.48(d， 1H)， 7.32(d， 2H)， 6.93(m， 1H)， 6.72(d， 1H)， 6.62(d, 1H)， 6.40(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.70(d， 2H)， 2.22(s， 3H)， 2.17-2.10(m， 2H)， 1.51-1.41(m， 2H)， 0.92(t， 3H)。
ES陽MS(M+23): 610.1。实施例16、化合物16: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-1H-吡唑-3 -基)甲基)妣啶酰胺
((E)-N-(( 1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol-3 -yl)methyl)picolinamide)的帝!j备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(59.8mg， 0.14mmol)须经三乙胺(5(Vl， 0.33mmol)及吡啶2-甲酰氯(pyridine 2-carbonyl chloride, 32.2mg， 0.17mmo1) 处理外，化合物16制备方法与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合 物16为一白色固体(52.1mg， 74%)。
'H隱画R(CDCl3， ppm): 8.54(nb 1H)， 8.23(m^ 1H)， 7.83(m， 1H)， 7.46(m， 1H)， 7.46-7.27(m， 3H)， 6.71(d， 1H)， 6.61(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.76(d， 2H)， 2.22(s， 3H)， 2.16-2.09(m， 2H)， 1.49-1.39(m， 2H)， 0.93(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 511.2。
实施例17、化合物17: l-((5-(5-氯2-噻吩基)-l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-lH-吡唑 -3-基)甲基)-3-环己基脲
(1 -((5-(5-chlorothiophen-2-yl)-1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-1 H-pyrazol-3-yl) methyl)-3-cyclohexylurea)的制备
将异氰酸环己烷(20pl， 0.14mmol)加至实施例12所制备溶于四氢呋喃的 中间产物IX(a)(40.3mg， O.llmmol)磁搅拌溶液中。室温下持续搅拌8小时后， 将溶剂蒸干。得到的粗产物，以正己垸/乙酸乙酯(l:l)进行快速硅胶柱色谱纯 化，得到白色固体的化合物17(33.2mg， 62%)。
力画NMR(CDCl3， ppm):7.48(d， 1H)， 7.35(d， 2H)， 7.30(s， 1H)， 6.80(d， 1H)， 6.60(d， 1H)， 4.85(m， 1H)， 4.46(m， 1H)， 4.41(d， 2H)， 3.55(m， 1H)， 2.17(s， 3H)， 1.91(m， 2H)， 1.67(m， 2H)， 1.40陽L07(m， 5H)。
ES-MS(M+1): 497.1。
实施例18、化合物18: (E)-l-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-lH-吡唑-3-基)甲基)-3-丙基脲((E)-1 -((1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol隱3 -yl)methyl)-3 -propylurea)的审U备
除了中间产物IX(b)(60.2mg， 0.14mmol)经异氰酸正丙酯 (n-propylisocyanate， 50.2^1， 0.33mmol)处理外，化合物18制备方法与上述实 施例14的制备方法相似，得到的化合物18为一白色固体(55.3mg， 70%)。
^-NMR(CDCl3， ppm):7.45(d， 1H)， 7.29(m， 2H)， 6.70(d， 1H)， 6.59(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 5.63(t， 1H)， 5.18(t， 1H)， 4.38(d， 2H)， 3.05(m， 2H)， 2.19画2.09(m， 2H)， 2.17(s， 3H)， 1.52-1.26(m， 4H)， 0.89(t， 3H)， 0.87(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 491.2。
实施例19、化合物19: l-((5-(5-氯2-噻吩基)画l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-lH-吡唑 -3-基)甲基)-3-环己基硫脲
(1 -((5-(5-chlorothiophen-2-yl)-1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-1 H-pyrazol-3國yl) methyl)-3 -cyclohexylthiourea)的制备
除了中间产物IX(a)(40.3mg， O.llmmol)须经异硫氰酸基环己烷 isothiocyanatocyclohexane, 20)il， 0.14mmol)处理外，化合物19制备方法与上 述实施例17的制备方法相j"得到的化合物19为一白色固体(39.8111& 76%)。
!H陽NMR(CDGl3， ppm):7.53(m， 1H)， 7.35(孤1H)， 7.33(m， 1H)， 6.82(m， 1H)， 6.63(m， 1H)， 6.49(brs， 1H)， )， 4.60(brs， 1H)， 2.18(s， 3H)， 1.98(m， 2H)， 1.62(m， 5H)， 1.39-1.07(m， 6H)。
ES-MS(M+1): 513.0。
实施例20、化合物20: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-1H-吡唑-3-基)甲基)环丙烷甲酰胺
((E)-N隱((1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H画pyr azol-3-yl)methyl)cyclopropanecarboxamide)的帝U备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(33mg， 0.08mmol)需经三乙胺(2(Vl， 0.14mmol)及环丙基甲酉先氯(cyclopropanecarbonyl chloride, 15jxl， O.llmmol)处
理外，化合物20制备方法与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合物20为一白色固体(18mg， 47%)。
iH-NMR(CDCl3， ppm):7.48(m， 1H)， 7.32(d， 2H)， 6.71(d， 1H)， 6.60(d， 1H)， 6.46(brs， 1H)， 6.41(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.54(d， 2H)， 2.18(s， 3H)， 2.15(m， 2H)， 1.41(m， 3H)， 0.98(m， 2印，0.94(t， 3H)， 0.74(m， 2H)。
ES匿MS(M+1): 474.1。
实施例21、化合物21: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-lH-吡唑-3-基)甲基)环丁基甲酰胺
((E)陽N-(( 1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol-3-yl)methyl)cyclobutanecarboxamide)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(48mg， 0.12mmol)需经三乙胺(20pl， 0.14mmol)及环丁基甲酰氯(20(11， 0.19mmol)处理外，化合物21制备方法与上 述实施例14的制备方法相似，得到的化合物21为一白色固体(33mg， 57%)。
'H-画R(CDCl3， ppm):7.47(m， 1H)， 7.31(d， 2H)， 6.71(d， 1H)， 6.60(d， 1H), 6.39(d， 1H)， 6.15(brs， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.51(d， 2H)， 3.05(m, 1H)， 2.29(m， 2H)， 2.18(s， 3H)， 2.15(m， 4H)， 1.96(m， 2H)， 1.46(m， 2 H)， 0.93(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 488.1。
实施例22、化合物22: (E)-N-((l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-lH-吡唑-3-基)甲基)环戊垸甲酰胺
((E)-N-(( 1 -(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol-3-yl)methyl)cyclopentanecarboxamide)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(48mg， 0.12mmol)经三乙胺(2(Vl， 0.14mmol)及环戊基甲酰氯(20^d， 0.17mmol)处理外，化合物22制备方法与上 述实施例14的制备方法相似，得到的化合物22为一白色固体(41mg， 69%)。
'H-NMR(CDC13， ppm):7.47(m， 1H)， 7.31(brs， 2H)， 6.71(d， 1H)， 6.60(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.26(brs， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.52(d， 2H)， 2.56(m， 1H)， 2.17(s， 3H)， 2.14(m， 2H)， 1.91-1.64(m， 7H)， 1.54(m， 1H)， 1.45(m， 2H)， 0.91(t， 3H)。ES-MS(M+1): 502.1。
实施例23、化合物23: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4國甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-1 H-吡唑-3-基)甲基)环庚烷甲酰胺
((E)-N隱((1 -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H画pyr azol匿3-yl)methyl)cycloheptanecarboxamide)的帝lJ备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(52mg， 0.13mmol)需经三乙胺(2(Vl， 0.14mmol)及环庚基甲酰氯(cycloheptanecarbonyl chloride, 29|il， 0.20mmol)处 理外，化合物23制备方法与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合物 23为一白色固体(43mg， 62%)。
力誦NMR(CDCl3， ppm):7.18(m， 1H)， 7.01(brs， 2H)， 6.41(d， 1H)， 6.30(d， 1H)， 6.09(d， 1H)， 5.98(m， 1H)， 5.72(dt， 1H)， 4.20(d， 2H)， 1.95(m， 1H)， 1.87(s， 3H)， 1.85(m， 2H)， 1.60(m， 2H)， 1.52-1.29(m， 4H)， 1.32-1.07(m， 8H)， 0.63(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 530.3。
实施例24、化合物24: (E)-N-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-lH-吡唑-3-基)甲基)-2-苯乙酰胺
((E)画N-((l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl画5-(5-(pent-l-enyl)thiophen-2-yl)-lH画pyr azol-3 -yl)methyl)-2-phenylacetamide)的帝ij备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(60mg， 0.15mmol)经三乙胺(50W， 0.36mmol)及苯乙酰氯(phenylacetyl chloride, 30^1， 0.23mmol)处理外，化合物
24制备方法与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合物24为一白色固 体(42mg， 54%)。
'H陽NMR(CDCl3， ppm):7.45(d， 1H)， 7.34-7.21(m， 7H)， 6.70(d， 1H)， 6.57(d， 1H)， 6.38(d， 1H)， 6.19(brs， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.49(d， 2H)， 3.59(s， 2H)， 2.12(s， 3H)， 2.10(m， 2H)， 1.46(m， 2H)， 0.93(s， 3H)。
ES-MS(M+1): 524.2。
实施例25、化合物25: (￡)-4-叔丁基-!^((1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-基)甲基)苯酰胺
((E)-4-tert-butyl-N-(( 1 -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-lH-pyrazol-3画yl)methyl)benzamide)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(60mg， 0.15mmol)需经三乙胺(50^d， 0.36mmol)及叔丁基苯甲酰氯(4-tert-butylbenzoyl chloride, 35^1， 0.18mmol)处 理外，化合物25制备方法与上述实施例14的制备方法相似，得到的化合物 25为一白色固体(43mg， 51%)。
化NMR(CDCl3， ppm):7.74(d， 2H)， 7.40(s， 1H)， 7.39(d， 2H)， 7.25(m， 2H)， 6.70(d， 1H)， 6.60(d， 1H)， 6.38(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.74(d， 2H), 2.24(s， 3H)， 2.12(m， 2H)， 1.44(m， 2H)， 1.31(s， 9H)， 0.93(s， 3H)。
ES-MS(M+1): 566.2。
实施例26、化合物26: (E)-N-((l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩 基)-1 H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-噻吩基)乙酰胺
((E)-N-(( 1 -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen-2-yl)-1 H-pyr azol-3-yl)methyl)一2-(thiophen-2-yl)acetamide)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(60mg， 0.15mmol)经三乙胺(50W， 0.36mmol)及2-噻吩乙酰氯(2(Vl， 0.16mmol)处理外，化合物26制备方法与上 述实施例14的制备方法相似，得到的化合物26为一白色固体(45mg， 57%)。
iH隱NMR(CDCl3， ppm):7.45(d， 1H)， 7.26(m， 1H)， 7.27(d， 2H)， 7.19(m， 1H)， 6.93(m， 1H)， 6.70(d， 1H)， 6.59(d， 1H)， 6.54(brs， 1H)， 6.38(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 4.51(d， 2H)， 3.79(s， 2H)， 2.20-2.01(m， 2H)， 2.12(s， 3H)， 1.45(m， 2H)， 0.93(s， 3H)。
ES陽MS(M+1): 530.2。
实施例27、化合物27:问-1-环己基-3-((1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-基)甲基)脲
((E)-l-cyclohexyl隱3-((l-(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-l-enyl)thiophen -2-yl)-1 H-pyrazol匿3 -yl)methyl)urea)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(33mg， 0.08mmol)需经环已异氰酸酯(15^1， 0.12mmol)处理外，化合物27制备方法与上述实施例14的制备方法相 似，得到的化合物27为一白色固体(21mg， 49%)。
工H-NMR(CDCl3， ppm):7.46(m， 1H)， 7.29(m， 2H)， 6.71(d， 1H)， 6.59(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.01(dt， 1H)， 5.25(m， 1H)， 4.74(d， 1H)， 4.39(d， 2H)， 3.54(m， 1H)， 2.18(s， 3H)， 2.14(m， 2H)， 1.98-1.80(m， 3H)， 1.69画1.22(m， 7H)， 1.07(m， 2H)， 0.93(t， 3H)。
ES画MS(M+1): 531.1。
实施例28、化合物28: (E)-l-环己基-3-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-基)甲基)硫脲
((E)-1 -cyclohexyl-3-(( 1 -(2，4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -enyl)thiophen -2-yl)-1 H-pyrazol-3 -yl)methyl)thiourea)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(33mg， 0.08mmol)经环已异硫氰酸酯 (cyclohexyl isothiocyanate, 15pl， O.llmmol)处理外，化合物28制备方法与上 述实施例14的制备方法相似，得到的化合物28为一白色固体(29mg， 65%)。
'H-NMR(CDCl3， ppm):7.48(d， 1H)， 7.31(d， 2H)， 6.98(brs， 1H)， 6.73(d， 1H)， 6.61(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.02(dt， 1H)， 4.57(brs， 2H)， 3.98(brs， 1H)， 2.19(s， 3H)， 2.15(m， 2H)， 1.95(m， 2H)， 1.71-1.24(m， 9H)， U6(m， 2H)， 0.93(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 547.1。
实施例29、化合物29: (E)-l-butyl-3-((l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-l-烯)2-噻吩基)-lH-吡唑-3-基)甲基)硫脲
((E)-1 -butyl-3-(( 1隱(2,4-dichlorophenyl)-4-methyl-5-(5-(pent隱1隱enyl)thiophen-2-yl) -1 H画pyrazol隱3陽yl)methyl)thiourea)的制备
除了最后步骤的中间产物IX(b)(60mg， 0.15mmol)经异硫氰酸丁酯(butyl isothiocyanate, 20^1， 0.19mmol)处理夕卜，化合物29制备方法与上述实施例14 的制备方法相似，得到的化合物29为一白色固体(44mg， 57%)。
'H-NMR(CDCl3， ppm):7.48(d， 1H)， 7.30(d， 2H)， 6.81(brs， 1H)， 6.72(d， 1H)， 6.62(d， 1H)， 6.39(d， 1H)， 6.02(dt， 1H)， 4.58(brs， 1H)， 3.42(brs， 2H)，2.19(s， 3H)， 2.14(m， 2H)， 1.61-1.24(m， 8H)， 0.93(t， 3H)， 0.85(t， 3H)。 ES-MS(M+1): 521,3。
实施例30、化合物30: l-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-C5-(戊-l-炔-噻吩-2-基)-m-吡唑-3-羧酸哌啶-l基酰胺
(1 -(2,4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-(5-(pent-1 -ynyl-thiophen-2-yl)- 1H-pyrazol-3 陽carboxylic acid piperidin画l-yl amide)的制备
除了乙炔基-环丙烷(ethynyl-cyclopropane)是以戊-l-炔基取代外，制备中间 产物IV(f)，即l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-(5-戊-l-炔基-噻吩基-2-基)-lH-吡唑 -3-羧酸乙酯
(l-(2,4隱Dichloro画phenyl)-4画methyl匪5-(5-pent-l-ynyl-thiophen-2-yl)-lH-pyrazole-3 -carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤都与上述实施例7的中间产物IV(c)制备 方法相似，其中间产物IV(f)为白色固体，且产率为94%。
除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(f)(900mg， 2.0mmol)取代外，制备中 间产物V(f)，即1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-(5-(戊-1-炔-噻吩-2-基)-111-吡唑-3-羧酸
(1 -(2，4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-(5-pent-1 -ynyl-thiophen-2-yl)-1 H-pyrazole-3
陽carboxylicacid)的其余步骤都与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法相 似，其中间产物V(f)为白色固体，且产率为95%。
除了最后步骤中，由中间产物V①制得的氯化酰粗产物(118.2mg， 0.27mmol)是于(TC， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(l-aminopiperidine， 58^1， 0.54mmol)及三乙胺(95.3pl， 0.68mmol)处理外，化合物30的其余制备步骤都 与上述实施例7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物30(100.6mg， 73%)。
'HNMR(CDCl3, ppm): 7.62(s， 1H)， 7.41(s， 1H)， 7.36-7.26(m， 2H)， 6.90(d， 1H)， 6.63(d， 1H)， 2.90-2.70(m， 4H)， 2.40(s， 3H)， 2.30(t， 2H)， 1.78-1.60(m， 4H)， 1.62-1.48(m， 2H)， 1.41陽1.28(m， 2H)， 0.94(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 501.1。
实施例31、化合物31: 1-(2,4-二氯苯基)-5-(5-(己-l-炔-噻吩-2-基)-4-甲基-N-(哌啶-i-基)-m-吡唑-3-甲酰胺
(1 -(2,4-dichlorophenyl)-5-(5-(hex-1 -ynyl)thiophen-2-yl)-4-methyl-N-(piperidin-1 -yl)-1 H-pyrazole-3匿carboxamide)的帝ij备
除了乙炔基-环丙烷(6thynyl-cyclopropane)是以己-1 -炔基取代外，制备中间 产物IV(g)，即l-(2,4-二氯-苯基)-5-(5-己-l-炔基-噻吩基-2-基)-4-甲基-lH-吡唑 -3-羧酸乙酯
(1 -(2,4-dichlorophenyl)-5-(5-(hex-1 -ynyl)thiophen-2-yl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤都与上述实施例7的中间产物IV(c)制备 方法相似，其中间产物IV(g)为白色固体，且产率为96%。
除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(g)(860mg， 1.92mmol)取代外，其余 中间产物V(g)，即l-(2,4-二氯-苯基)-5-(5-(己-l-炔-噻吩-2-基)-4-甲基-lH-吡唑 -3隱羧酸
(1 -(2，4-dichlorophenyl)-5-(5-(hex-1 -ynyl)thiophen-2-yl)-4-methyl-1 H-pyrazole-3-carboxylicacid)的制备步骤都与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法相似， 其中间产物V(g)为白色固体，且产率为95%。
除了最后步骤中，由中间产物V(f)制得的氯化酰粗产物(108mg，0.24mmol) 是于(TC， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(l-aminopiperidine， 52^1， 0.48mmo1) 及三乙胺(84pl， 0.6mmol)处理外，化合物31的其余制备步骤都与上述实施例 7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物31(90.4mg， 73%)。
^NMR(CDCl3， ppm):7.62(s， 1H)， 7.48(s， 1H)， 7.36-7.26(m， 2H)， 6.97(d， 1H)， 6.69(d， 1H)， 2.90-2.77(m， 4H)， 2.47(s， 3H)， 2.40(t， 2H)， 1.80陽1.70(m， 4H)， 1.60-1.38(m， 6H)， 0.93(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 515.1。
实施例32、化合物32: 1-(2，4-二氯-苯基)-5-[5-(3-异丙氧-丙-1-炔基)-吡唑-2-基]-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸哌啶-l基-酰胺 (1—(2,4-Didiloro-phenyl)-5—[5—(3-isopropoxy—prop-l-ynyD-thiophen-S-yU-A-methyl-lH-pyrazolG-S-carboxyliG acid piperidin-1 —ylamido)
的制备
除了乙炔基-环丙烷(ethynyl-cyclopropane)是以3-异丙氧-丙-l-炔基(3-isopropoxy-prop-l-ynyl)取代外，制备中间产物IV(h)，即l-(2，4-二氯-苯 基)-5-[5-(3-异丙氧-丙-1-炔基)-吡唑-2-基]-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸乙酯 (l一(2,4-Didiloro-pheny1)—5—[5—(3-isopropoxy—prop-l一ynyl)4hiophen-2-y1]—4-methy l-lH-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤都与上述实施例7的中间 产物IV(c)制备方法相似，其中间产物IV(h)为白色固体，且产率为92%。
除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(h)(600mg, 1.26mmol)取代外，制备 中间产物V(h)，即1-(2,4-二氯-苯基)-5-[5-(3-异丙氧-丙-1-炔基)-吡唑-2-基]-4-甲基-1 H隱吡唑-3-羧酸(1 -(2，4-Dichloro-phenyl)-5-[5-(3-isopropoxy-prop-1 -ynyl)-thiophen-2-yl]-4-methyl-lH-pyrazole-3-carboxylic acid)的其余步骤都与上 述实施例1的中间产物V(a)制备方法相似，其中间产物V(f)为白色固体，且 产率为96%。
除了最后步骤中，由中间产物V(h)制得的氯化酰粗产物(300mg， 0.64mmo1) 是于(TC， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(l-aminopiperidine， 128^1， 1.2mmo1) 及三乙胺(21(Hd， 1.5mmol)处理外，化合物32的其余制备步骤都与上述实施 例7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物32(238mg， 70%)。
^NMR(CDCb ppm): 7.60(s， 1H)， 7.49(d， 1H)， 7.38-7.31(m， 2H)， 7.07(d， 1H)， 6.73(d， 1H)， 4.34(s， 2H)， 3.80(q， 1H)， 2.84(t， 4H)， 2.47(s， 3H)， 1.78-1.71(m， 4H)， 1.42-1.25(m， 2H)， 1.20(d， 6H)。
ES-MS(M+1): 531.1。
实施例3i化合物33: 1-(2,4-二氯-苯基)-5-[5-(3-二甲基胺-丙-1-炔基)-吡唑-2-基]-4-甲基-lH-吡唑-3-羧酸哌啶-l基-酰胺 (l-(2,4-Dichloro-phenyl)-5-[5-(3-dimethylamino-prop-l-ynyl)-thiophen-2隱yl]-4-methyl曙lH-pyrazole-3-carboxylic acid piperidin-1 -ylamide)的帝'J备
除了乙炔基-环丙烷(ethynyl-cyclopropane)是以3-二甲基胺-丙-l-炔基 (3-dimethylamino-prop-l-ynyl)取代外，制备中间产物IV(i)，艮卩l-(2,4-二氯-苯 基)_5_[5_(3_二甲基胺_丙_1_炔基)_吡唑-2-蜀4-甲基"H-吡唑-3-羧酸乙酯 (l-(2,4-Dichloro-phenyl)-5-[5-(3-dimethylamino-prop画l-ynyl)-thiophen-2-yl]-4-m ethyl-lH-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤都与上述实施例7的中间产物IV(c)制备方法相似，其中间产物IV(i)为白色固体，且产率为97%。 除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(i)(500mg， 1.15mmol)取代外，制备 中间产物V(i)即1-(2,4-二氯-苯基)-5-[5-(3-二甲基胺-丙-1-炔基)-吡唑-2-基]-4-甲基-111-吡唑-3-羧酸(1-(2,4-01(:1110]"0卞1^1^1)-5-[5-(3-
dimethylamino一prop-l—ynyl)—thiophen隱2-y1]—4隱mGthyl—lH画pyrazolG-3-carboxylic acid)的其余步骤都与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法相似，其中间产 物V(i)为白色固体，且产率为92%。
除了最后步骤中，由中间产物V(i)制得的氯化酰粗产物(230mg，0.50mmo1) 是于0。C， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(l-aminopiperidine， 65(^1， 0.6mmo1) 及三乙胺(100pl， 0.72mmol)处理外，化合物33的其余制备步骤都与上述实施 例7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物33(199mg， 77%)。
^NMR(CDC1， ppm): 7.60(s， 1H)， 7.50(d， 1H)， 7.36隱7.30(m， 2H)， 7.04(d， 1H)， 6.71(d， 1H)， 3.45(s， 2H)， 2.90-2.80(m， 4H)， 2.48(s， 3H)， 2.33(s， 6H)， 1.80匿1.68(m， 4H)， 1.50-1.40(m， 2H)。
ES-MS(M+1): 516.1。
实施例34-36、化合物34: 1-(2，4-二氯-苯基)4-乙基-5-(5-戊-1-炔基-卩比唑-2-基)-lH-吡唑-3-羧酸哌啶-l基-酰胺
(1 -(2,4-Dichloro-phenyl)-4-ethyl-5-(5-pent-1隱ynyl-thiophen-2-yl)一 1 H-pyrazole-3画c
arboxylic acidpiperidin-l-ylamide);化合物35: 1隱(2,4-二氯-苯基)-4-乙基-5匿(5-
戊-l-炔基-吡唑-2-基)-lH-吡唑-3-羧酸氮杂环庚垸-l基-酰胺
(1陽(2,4-Dichloro-phenyl)-4-ethyl-5-(5-pent陽1 -ynyl-thiophen-2-yl)-1 H-pyrazole-3-c
arboxylic acid azepan-1 -ylamide);及化合物36: 1 -(2,4-二氯-苯基)-4-乙基
_5-[5-(4-甲基-戊-1-炔基-吡唑-2-基)-111-吡唑-3-羧酸哌啶-1基-酰胺
(1 -(2,4-Dichloro-phenyl)-4-ethyl-5-[5-(4-methyl-pent-1 -ynyl)-thiophen-2-yl]- 1H-p
yrazole-3-carboxylic acid piperidin-l- ylamide)的制备
化合物34、 35及36的制备步骤都与上述实施例7的制备方法相似，其 是以l-(吡唑-2-基)丁-l-酮取代l-(吡唑-2-基)丙-l-酮。
化合物34:
H-NMR(CDCl3， ppm):7.63(s， 1H)， 7.47(dd， 1H)， 7.34-7.32(m， 2H)，6.96(d， 1H)， 6.67(d， 1H)， 2.91(q, 2H)， 2.90-2.78(m， 4H)， 2'38(t， 2H)，
1.80-1.70(m， 4H)， 1.60(sextet， 2H)， 1.48誦1.36(m， 2H)， 1.25(t， 3H)， 1.02(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 515.1。
化合物35:
丄H-NMR(CDCb ppm): 8.05(s， 1H)， 7.47(s， 1H)， 7.37-7.27(m， 2H)， 6.96(d， 1H)， 6.67(d， 1H)， 3.13(t， 4H)， 2.88(q， 2H)， 2.38(t， 2H)， 2.72(t， 2H)， 1.79-1.68(m, 4H)， 1.68-1.54(m， 6H)， 1.25(t， 3H)， 1.02(t， 3H)。
ES-MS(M+1): 529.1。
化合物36:
'H-丽R(CDCl3， ppm):7.64(s， 1H)， 7.47(s， 1H)， 7.33(m， 2H)， 6.96(d， 1H)， 6.66(d， 1H)， 2.92-2.83(m， 6H)， 2.29(d， 2H)， 1.94陽1.86(m， 1H)， 1.78國1.72(m， 4H)， 1.46-1.38(m， 2H)， 1.25(t， 3H)， l.Ol(d， 6H)。
ES-MS(M+1): 529.1 。
实施例37、化合物37: l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-[5-(5-(3-吡咯烷-l-基-丙-l-炔 基)—吡唑-2-基]-m-吡唑-3-羧酸哌啶-l基-酰胺 (l-(2,4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-[5-(3-
pyrrolidin-1 -yl-prop-1 -ynyl)隱thiophen-2-y1]—1 H-pyrazole-3-carboxylic aGid piperidin-1 -ylamide)
除了乙炔基-环丙烷(ethynyl-cyclopropane)是以l-丙-2-炔基-吡咯烷 (l-Prop-2-ynyl-pyrrolidine)取代外，制备中间产物IV(j》即l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-[5-(3-吡咯烷-l-基-丙-l-炔基)-吡唑-2-基]-m-吡唑-3-羧酸乙酯 (1 -(2,4-Didiloro-phenyl)-4-mGthyl—5—[5—(3-pyrrolidin-1 -yl-prop-1 -ynyl)-thiophen兩 2陽yl]-lH-pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步骤都与上述实施例7的 中间产物IV(c)制备方法相似，其中间产物IV(j)为白色固体，且产率为94%。
除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(j)(300mg， 0.65mmol)取代外，制备 中间产物V(j)，即l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-[5-(3-吡咯垸-l-基-丙-l-炔基)-吡 唑陽2-基]lH-吡唑-3-羧酸(l-(2,4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-[5—(3-pyrrolidin-l—y1—prop-l-ynyl)-thiophen-2-y1]—lH-pyrazole-3-carboxylic acid)的其余步骤都与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法相4以其中间产物V(j) 为白色固体，且产率为96%。
除了最后步骤中，由中间产物V(j)制得的氯化酰粗产物(180mg 0.38mmo1) 是于0。C， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌啶(l-aminopiperidine， 49^1， 0.46mmo1) 及三乙胺(76pl， 0.55mmol)处理外，化合物37的其余制备步骤都与上述实施 例7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物37(167mg， 81%)。
iHNMR(CDCl》ppm):7.59(& 1H> 7.47(& 1H> 7.38曙7.30(m 2H> 7.01(d， 1H)， 6.69(d， 1H)， 3.59(s， 2H)， 2.90-2.76(m， 4H)， 2.72誦2.56(m， 4H)， 2.46(s， 3H)， 1.84隱1.62(m， 8H)， 1.44-1.34(m， 2H)。
ES画MS(M+1): 542.1。
实施例38>化合物38: 1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-(5-苯乙炔基-吡唑-2-基)-111-吡唑-3-羧酸哌啶-l基-酰胺
(1 -(2，4-Dichloro-phenyl)-4-methyl-5-(5-phenylethynyl-thiophen-2-yl)-1 H-pyrazol e-3-carboxylic acid piperidin-l- ylamide)
除了乙炔基-环丙垸(ethynyl-cyclopropane)是以苯乙炔(Ethynyl-benzene)取 代外，制备中间产物IV(k》即1-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-(5-苯乙炔基-吡唑画2-基)-111-吡唑-3-羧酸乙酯(1-(2,4-01(;11101"0卞1^1^1)-4-11^1^1-5-(5-phenylethynyl一thiophen-2-yl)-lH画pyrazole-3-carboxylic acid ethyl ester)的其余步 骤都与上述实施例7的中间产物IV(c)制备方法相似其中间产物IV(k)为白色 固体，且产率为94%。
除了中间产物IV(a)是以中间产物IV(k)(300mg， 0.63mmol)取代外，制备 中间产物V(k)，即l-(2,4-二氯-苯基)-4-甲基-5-(5-苯乙炔基-口比唑-2-基)-lH-吡 唑-3-羧酸
(1—(2,4-Didiloro-phenyl)-4-mGthyl—5—(5隱phenyld;hynyl—thiophen-2-y1)—lH隱pyrazol
e-3-carboxylicacid)的其余歩骤都与上述实施例1的中间产物V(a)制备方法相 似，其中间产物V(k)为白色固体，且产率为93%。
除了最后步骤中，由中间产物V(k)制得的氯化酰粗产物(200m经0.42mmo1) 是于(TC， 二氯甲烷中，以l-氨基-哌咬(l-aminopiperidine， 55|il， 0.5mmol) 及三乙胺(84pl， 0.6mmol)处理外，化合物38的其余制备步骤都与上述实施例7的制备方法相似，如此便可得到白色固态化合物38(169mg， 75%)。
^NMR(CDCl3，卯m):7.61(s， 1H)， 7.52-7.46(m, 3H)， 7.38-7.32— 5H),
7.14(d， 1H)， 6.78(d， 1H)， 2.90-2.70(m， 4H)， 2.50(s， 3H)， 1.80-1.60(m， 4H)，
1.44陽1.36(m， 2H)。
ES-MS(M+1): 535.1。
实施例39、体外试验
本发明的38个测试化合物对于CB1及CB2受体的亲合力是以体外竞争 性放射配基受体结合分析方法作测试。本方法通过区分各化合物对受体放射 配基的取代力来区别其结合力。具有较放射配基高的受体亲合力的化合物会 取代配基与受体结合，而较放射配基低或是无亲合力的化合物则无法取代配 基。放射线的读数可用作进一步受体结合作用的分析，并协助预测其测试化 合物的药物活性。
此试验分别以雄性Sprague-Dawley大鼠的脑及脾脏萃取物作为CB1及 CB2受体来源。使用净重175 200g的雄性Sprague-Dawley大鼠，并于依标准 状态下自由供给食物及水作饲养。使用头颈脱臼处死法(cervical dislocation)将 动物宰杀。并将含小脑的脑部及脾脏切除下来。将切下来的脑部及脾脏组织 分别以Polytron手握式均质机，于加入10体积份的冰冷缓冲液A (50mM三 羟甲基氨基甲垸缓冲液(Tris), 5mM MgCl2, 2.5mM乙二胺四乙酸(EDTA)， pH 7.4， 10%蔗糖)中，藉由蛋白酶抑制剂进行均质化。以2000xg、 4。C状态离心 该均浆15分钟。再以43000xg、 4。C状态离心悬浮物30分钟。且将最后颗粒 物再次悬浮于缓冲溶液A中，并于-80。C储存。以Bio-Rad Laboratories, Inc.， Hercules, CA手册内提及的Bradford法测定纯化膜的蛋白质浓度。
受体结合试验中，0.2 8)ng膜是以0.75nM [3H]CP55,940及测试化合物于 培养缓冲液(50mM Tris-HCl, 5mM MgCl2, lmM EDTA, 0.3%BSA, pH 7.4)中培 养。非特异性结合值是以1|liM的CP55,940测得。将混合物置于Multiscreen 微孔板(Millipore，Billerica,MA)中，于30。C下培养1.5小时。培养结束后，以 Manifold过滤系统终止作用，并以冰冷洗涤缓冲液(50mM Tris, pH 7.4, 0.25。/。BSA)冲洗四次。以Topcount(PerkinElmerInc.)测定滤纸上的放射值。计 算抑制50%[3H]CP55，940结合所需的化合物浓度，以获得IC50值。以DELFIA GTP-结合试剂盒(Perkin Elmer Inc., Boston, MA)测试每一测试 化合物的功效。DELFIA GTP-结合测定是时间分辨荧光分析法，其藉由激动 剂使G蛋白亚基进行GDP-GTP交换，进而活化G蛋白偶联受体。该方法是 以Eu-GTP观察G蛋白的激动剂依赖性活化现象以CP55，940激活CB1受体 会导致G蛋白的a亚基上的GDP被GTP取代。GTP-Ga复合物代表G蛋白 的活化型态。Eu-GTP(不可水解的GTP类似物)可用来定量活化的G蛋白量 (Peltonen等人，Eur. J. Pharmaco1.(1998) 355:275)。
将表达人类CB1的HEK293细胞膜再次悬浮于测定缓冲液。0mMHEPES, pH 7.4, lOOmM NaCl, 100g/ml皂素，5 mM MgCl2， 2M GDP, 0.5。/oBSA)中。于 AcroPlate(Pall Life Sciences, Ann Arbor, MI)的每一孔中加入等量样本(4吗蛋白 质/孔> 加入测试化合物(于0.1%DMSO中不同浓度)及CP55,940(20nM于测定 缓冲液中)后，将测定板置于暗处，并于3(TC下轻摇60分钟进行培养。接着， 于每一孔中加入Eu-GTP，且将测定板置于暗处，并于3(TC培养35分钟。最 后，以测定试剂盒所提供的洗涤液，洗涤测定板四次，以终止作用。利用多 功能微量盘分析仪(Victor 2 multi-label reader)测得荧光信号，进而鉴定Eu-GTP 的结合量。藉由非线性回归(Prism; GraphPad， San Diego， CA)的浓度变化曲线 获得每一化合物的IC50值(即，抑制50%的CP55,940-激活Eu-GTP结合)。
在CB1受体结合试验和/或CB2受体结合试验中发1E所有测试化合物的 IC50值都介于0.1nM与20(iM之间。Eu-GTP结合试验也可作为指标，其测试 结果与上述放射配基受体结合分析的测试结果相符。
其它实施例
本说明书中所揭示的全部特征可以任何方式组合。本说明书中所公开的 特征可被相同、等效、或类似目的的另一种特征所取代。因此，除非另有指 明，否则所公开的各特征仅为一般性的等效或类似特征的实例。
通过上述说明，本领域熟练技术人员可以容易地了解本发明必要的特 征，且在不悖离本发明范畴下，能够对本发明做多种改变及修饰，以适用于 种种用途与情况。因此其它具体实施例也在本权利要求范围内。
权利要求
1、一种式(I)的化合物其中，R1是氢、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、芳基、或杂芳基；R2为氢、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基芳基杂芳基、卤素、ORa、COORa、OC(O)Ra、C(O)Ra、C(O)NRaRb、或NRaRb，其中每一Ra及Rb分别独立为氢、C1-C10烷基、C3-C20环烷基、C1-C20杂环烷基、芳基、或杂芳基；每一R3、R4、及R5分别独立为氢、卤素、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、芳基、或杂芳基；或R5连同R6及两者所接至的碳原子为C3-C20环烯基或C3-C20杂环烯基；和R6为C2-C10烯基或C2-C10炔基；或R6连同R5及两者所接至的碳原子为C3-C20环烯基或C3-C20杂环烯基。
2、 如权利要求1所述的化合物，其中Ri为经卤素取代的芳基。
3、 如权利要求2所述的化合物，其中R,为2,4-二氯苯基。
4、 如权利要求1所述的化合物，其中R6为戊-l-烯基或2-环己基乙-l-烯基。
5、 如权利要求1所述的化合物，其中116为经烷氧基、胺基、环垸基、杂 环烷基、芳基或杂芳基取代的炔基。
6、 如权利要求1所述的化合物，其中R2为C(0)Ra，其Ra为哌啶基或吡 咯垸基；或C(O)NRJlb，其Ra及Rb各自独立为氢、环己基、哌啶基、或八氢 环五吡咯。
7、 如权利要求4所述的化合物，其中R2为C(0)Ra，其Ra为哌啶基或吡咯烷基；或C(O)NRJlb，其Ra及Rb各自独立为氢、环己基、哌啶基、或八氢 环五吡咯。
8、 如权利要求7所述的化合物，其中该化合物为化合物l-ll及化合物 30-38中之一。
9、 一种式(I)的化合物Ri为氧、C广C]o院基、C2-Cio稀基、C2-C!o块基、C3-C20环院基、C3-C2o 环烯基、CVC2o杂环垸基、d-C2o杂环烯基、芳基、或杂芳基；R2为C2-do烯基、C2-Q。炔基、Q-C20环垸基、C3-C2Q环烯基、C广C20杂环垸基、d-C2o杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、ORa、 OC(0)Ra、 NRaRb、或 经NRa-C(O)-Rb、 NRa画C(S)画Rb、 NRa-C(0)-NRbRc、 NRa-C(S)-NRbRc、或 NRa-C—N-CN)-NRbRc取代的d-d。垸基，其每一 Ra、 Rb、及R。各自独立为 氢、Q-d。垸基、C3-C2。环烷基、d-C2。杂环垸基、芳基、或杂芳基；且每一R3、 R4、 R5、及R6分别独立为氢、卤素、C广Q。垸基、C2-do烯基、 C2-Q。炔基、C3-C2。环烷基、C3-C2。环烯基、d-C2Q杂环烷基、d-C2。杂环烯 基、芳基、或杂芳基，或R5及R6连同两者所接至的碳原子为C3-C20环烯基或 C3-C2。杂环烯基。
10、 如权利要求9所述的化合物，其中&为经卤素取代的芳基。
11、 如权利要求10所述的化合物，其中&为2,4-二氯苯基。
12、 如权利要求9所述的化合物，其中R6为氯或戊-l-烯基。
13、 如权利要求9所述的化合物，其中R2为经NRa-C(0)-Rb、 NRa-C(0)-NRbRc、或NRa-C(S)-NRbRc取代的d-do烷基，其每一 Ra、 Rb、及 Rc各自独立为氢、Crd。垸基、CVC2。环烷基、芳基、或杂芳基。
14、 如权利要求13所述的化合物，其中R2为经NRa-C(0)-Rb、 NRa-C(0)-NRbRc、或NRa-C(S)-NRbRc取代的甲基，其Ra为氢，R。为氢，且 Rb为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、吡啶基、经卤素或CVCu) 烷基选择性地取代的苯基、或可选择地经芳基或杂芳基取代的d-do烷基。
15、 如权利要求14所述的化合物，其中该化合物为化合物12-29之一。
16、 一种治疗大麻素受体介导的疾病的方法，包括给予需要的受试者有 效量的式①的化合物<formula>formula see original document page 4</formula>Ri为fi、 C广C]o院基、C2-Ck)稀基、C2誦Ck)快基、C3漏C2o环焼基、C3-C20环烯基、d-C2。杂环烷基、d-C20杂环烯基、芳基、或杂芳基；R2为氢、C广Cio烷基、C2-C!o烯基、C2-C!o炔基、C3陽C20环烷基、C3-C2o环烯蟇Q-C2o杂环垸基CrC2。杂环烯基芳基杂芳基卤素、ORa、 COORa、 OC(0)Ra、 C(0)Ra、 C(0)NRaRb、或NRaRb，其每一 Ra及Rb各自独立为氢、 Q-do烷基、CrC2o环垸基、d-C2o杂环烷基、芳基、或杂芳基；每一R3、 R4、及Rs各自独立为氢、卤素、d-do烷基、C2-do烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、CrC2。杂环烷基、d-C2。杂环烯基、芳 基、或杂芳基，或R5连同R6及两者所接至的碳原子为C3-C20环烯基或C3-C20杂环烯基；且R6为C2-Cu)烯基或C2-do炔基，或R6连同Rs及两者所接至的碳原子为 C3-C20环烯基或C3-C20杂环烯基。
17、 如权利要求16所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为肝脏纤维化、肥胖症、新陈代谢症候群、高血脂症、二型糖尿病、动脉粥状硬化 症、物质成瘾疾、忧郁症、动机缺乏症候群、学习或记忆官能障碍、痛觉缺 失、失血性休克、局部缺血、肝硬化、神经痛、止吐、高眼压、支气管舒张、 骨质疏松、癌症、神经退化性疾病、或发炎性疾病。
18、 如权利要求17所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为肥胖症、新陈代谢症候群、物质成瘾疾、神经痛、或发炎性疾病。
19、 如权利要求17所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为前列腺癌、肺癌、乳癌、或头颈部癌。
20、 如权利要求16所述的方法，其中所述化合物选自化合物l-ll及化合 物30-38。
21、 一种治疗大麻素受体介导的疾病的方法，包括给予需要的受试者有效量的式(I)的化合物Rl为氧、C广C!o院基、C2-Cio》希基、C2画C川'块基、C3-C20环院基、C3-C2o环烯基、d-C2o杂环烷基、d-C2o杂环烯基、芳基、或杂芳基；R2是C2-Q。烯基、C2-Qo炔基、C3-C2。环烷基、C3-C2。环烯基、d-C2。杂环垸基、d-C2。杂环烯基、芳基、杂芳基、卤素、0Ra、 OC(0)Ra、 NRaRb、或 经NRa-C(0)-Rb、 NRa-C(S)-Rb、 NRa-C(0)-NRbRc、 NRa-C(S)-NRbRe、或 NRa-C^N-CN)-NRbRe取代的C广d。垸基，其每一 Ra、 Rb、及K各自独立为 氢、Cpd。烷基、C3-C20环烷基、d-C2o杂环垸基、芳基、或杂芳基；且 每一R3、 R4、 R5、及R6分别独立为氢、卤素、CVdo垸基、C2-d。烯基、C2-d。炔基、C3-C2。环烷基、CVC2。环烯基、Q-C20杂环垸基、d-C2。杂环烯 基、芳基、或杂芳基，或R5及R6连同两者所接至的碳原子为CVC2()环烯基或 C3-C2。杂环烯基。
22、 如权利要求21所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为肝脏纤维化、肥胖症、新陈代谢症候群、高血脂症、二型糖尿病、动脉粥状硬化 症、物质成瘾疾、忧郁症、动机缺乏症候群、学习或记忆官能障碍、痛觉缺 失、失血性休克、局部缺血、肝硬化、神经痛、止吐、高眼压、支气管舒张、 骨质疏松、癌症、神经退化性疾病、或发炎性疾病。
23、 如权利要求22所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为肥胖 症、新陈代谢症候群、物质成瘾疾、神经痛、或发炎性疾病。
24、 如权利要求22所述的方法，其中所述大麻素受体介导的疾病为前列 腺癌、肺癌、乳癌、或头部和颈部癌。
25、 如权利要求21所述的方法，其中所述化合物选自化合物12-29。
全文摘要
本发明是有关于一种如下式(I)的噻吩化合物。该式(I)中的每一官能基分别定义于说明书中。该些化合物可用于治疗大麻素受体介导的疾病。
文档编号C07D211/90GK101535260SQ200780036897
公开日2009年9月16日 申请日期2007年10月2日 优先权日2006年10月2日
发明者夏克山, 廖志雄, 戴嘉良, 洪明秀, 赵宇生 申请人:财团法人国家卫生研究院