海通叶挥发油作为保鲜剂的应用的制作方法

本发明涉及生物化学技术领域，尤其是一种海通叶挥发油作为保鲜剂的应用。

背景技术：

李子(prunussalicinalindl)，是蔷薇科李属植物，其果实7-8月间成熟，饱满圆润，玲珑剔透，形态美艳，口味甘甜，是人们最喜欢的水果之一。李子味酸，能促进胃酸和胃消化酶的分泌，并能促进胃肠蠕动，因而有改善食欲，促进消化的作用，尤其对胃酸缺乏、食后饱胀、大便秘结者有效。新鲜李肉中的丝氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷酰胺等氨基酸，有利尿消肿的作用，对肝硬化有辅助治疗效果。李子含有多种营养成分，有养颜美容、润滑肌肤的作用，李子中抗氧化剂含量高的惊人，堪称是抗衰老、防疾病的“超级水果”。

由于李子货架期短，采后不耐贮藏和运输，常温条件下极易开裂、腐烂变质。目前李子最常采用的藏方法是低温冷藏，但低温冷藏会导致藏后期出现果皮难剥，果肉质地生硬、粗糙少汁等冷害现象，即木质化败坏，因此，如何防止果实的木质化败坏，是李子贮藏中迫切需要解决的问题。目前虽已有应用壳聚糖、天然涂膜液、香苗等安全的保鲜方法减轻李子果实藏冷害的研究报道，但都未用于实践，出于简便、可操作性等方面的考虑，仍有必要研究更为实用的安全有效的保鲜方法。

植物挥发油不仅能够祛除食品的异味，赋予香气，还有抗菌、抗氧化、抑制呼吸等多方面的生物活性，可作为天然产物防腐剂的重要来源之一，在食品保鲜中具有较好的应用前景，将植物挥发油应用到果蔬釆后保鲜中，能够减轻果蔬腐烂及冷害症状，保持果蔬品质，延长果蔬货架期。研究发现海通叶挥发性成分不仅对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、霉菌等有较好的抑制作用，同时还具有较好的抗氧化活性在开发生物源保鲜剂方面具有巨大的应用潜力。因此本研究拟以李子为试验材料，通过测定李子贮藏期间果实品质及生理指标的变化，研究海通叶叶挥发油对李子的保鲜作用，揭示其保鲜作用机理，为开发新的植物源保鲜剂提供理论基础。

技术实现要素：

本发明的是提供海通叶挥发油作为保鲜剂的应用。

本发明是这样实现的：海通叶挥发油作为保鲜剂的应用。

为了验证本发明的技术效果，进行了如下实验。

1.1实验材料

1.1.1实验药材

海通叶采自贵州大学南区，经贵州大学林学院鉴定为马鞭草科大青属植物clerodendrummandarinorumdiels的叶。

供试材料为李子采购于贵阳市花溪区农贸市场,采购后运回实验室，去除未成熟、病虫害和机械损伤的果实，挑选大小和颜色基本一致的果实。

1.1.2实验仪器及试剂

硬度计(乐清市宝特思仪器有限公司)；手持折光仪(杭州汇尔仪器设备有限公司)；电子天平(上海精天电子仪器有限公司)；循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)；恰菲尔高速离心机(上海恰菲尔分析仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(上海飞越实验仪器有限公司)；旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。碘、碘化钾、维生素c，所有试剂均为分析纯。

1.2前期处理

1.2.1果实预处理

将采集好的李子用洗洁剂溶液清洗浸泡5-10min，用清水清洗干净，自然晾干，备用。

1.2.2海通叶挥发油的提取

称取海通叶干燥粗粉100g，按《中华人民共和国药典》2010版i部附录xd挥发油测定甲法操作。采用水蒸气蒸馏法的最佳提取工艺加12倍量水浸泡12h，蒸馏提取10h，超声80min提取海通叶挥发油，油水先在提取器中粗分离，将蒸出的油水混合物迅速冷却加入过量氯化钠至溶液达到饱和，静置2h，然后用正己烷萃取，无水硫酸钠脱水过夜，低于35℃自然风干，得到淡黄色油状物，精密称重，计算得油率，阴凉避光保存备用。

1.2.3实验设计

对照1：不做任何处理，室温下贮藏，各指标每10d测定一次(因为60天时大部分水果已腐烂)。

挥发油处理：先将海通叶挥发油溶于乙醇中使其溶解后，再用去离子水配置成0.1μl·10ml^-1、0.5μl·10ml^-1、1.0μl·10ml^-1的处理液，然后将水果放入盛有不同浓度处理液的保鲜盒内浸泡，保持1-2min，充分浸润后，在室温下晾干，装入保鲜袋内。每袋内20个果实。置于冰箱5-10℃条件下贮藏60天，分别在果实处理前和处理后藏期间每隔10d取样进行各指标分析测定。

对照2在处理液中不添加挥发油，其它操作和各处理完全相同法。

1.3实验方法

1.3.1质量损失率的测定

采用称重法测定，通过电子天平称出水果的质量，质量损失率按如下公式计算：质量损失率(％)＝(w0-wt)/w0×100％

质量损失率式中：w0——水果的新釆购时的初始质量；

wt——水果存放时间为时的质量。

1.3.2硬度的测定

釆用gy-1硬度计选取水果中段进行检测，测定3次，取平均值，单位为kg·mm^-2。

1.3.3腐烂率的测定

观察水果外观是否有腐烂病变，每10天观察一次，记录结果，腐烂率按如下公式计算：腐败率(％)＝腐烂个数/初始个数×100％

1.3.4糖类含量测定

用手持折光仪测定果实可溶性物糖，三组每组重复3次，取平均值，单位为每100g果实中所含糖的百分含量(％)。

1.3.5有机酸的含量测定

(1)将新鲜李子组织用匀浆机匀浆，称取匀浆5g于50ml离心管中，将35ml左右蒸馏水加入50ml离心管，于80℃恒温水浴中浸提30min，其间不断摇匀。

(2)冷却后6000r·min^–1离心10～15min，上清液用蒸馏水定容到100ml(如材料为匀浆处理，且溶液色泽不影响滴定终点判断，亦可不离心冷却后直接定容到100ml)。

(3)取试液3份，每份25ml，分别置250ml三角瓶中，各滴入酚酞指示剂2～3滴。用naoh标准溶液滴定至溶液呈微红色，30秒不褪色，即为终点。记录naoh的用量。

(4)结果计算：

式中v1——样品提取液总体积(ml)；

v2——滴定时所取滤液体积(ml)；

v——滴定时所消耗naoh标准溶液的体积(ml)；

n——naoh标准溶液的浓度(mol·l^–1)；

k——将总酸换算为特定有机酸的系数：苹果酸0.067、柠檬酸0.064、酒石酸0.075、乳酸0.090、草酸0.045

a——样品滴定前的稀释倍数；

w——样品鲜重(g)

1.3.6维生素c的含量测定

(1)制备果蔬组织提取液

将李子洗净，用纱布拭干其外着水分，分别称取20g可食用部分，置于研钵中，在研钵内研碎，加50ml蒸馏水过滤。滤液定容至中，向瓶中加人2ml淀粉溶液,再滴加盐酸，将ph值调至3左右。

(2)滴定vc溶液

将配制好的vc溶液倒人洁净的锥形瓶中，加2ml淀粉溶液，用碘液滴定，滴定过程中,边滴边晃动锥形瓶，直到vc溶液呈现蓝色。

(3)滴定果蔬组织提取液

用碘液滴定果蔬组织提取液，在滴定过程中，边滴边晃动锥形瓶，直到提取液呈现蓝色，且在0.5分钟内不褪色，重复滴定。记录每次滴定所用去的碘溶液量，并算出平均值。

(4)计算：某种果蔬组织中vc含量：

vc含量(mg·100g^-1)＝滴定组织提取液所用碘溶液量×100×4/滴定标准vc药片溶液所用碘溶液量。

1.4结果与分析

1.4.1海通叶挥发油对李子保鲜期间失重率的影响

果实质量损失率是判断保鲜效果的一个重要指标，因为果实在贮藏期间的失重主要是由失水及自身呼吸代谢引起的。

由图1可知，20d前李子各组的质量变化不明显，20d后室温贮藏李子质量损失急剧上升；60d后，5-10℃条件下贮藏的用不同浓度挥发油0.1、0.6、1.0μl·10ml^-1处理的果实在藏期间质量损失率均比两对照组低，质量损失率分别为：1.09％、0.12％、0.79％。

室温贮藏质量损失率与贮藏时间呈正相关，5-10℃条件下贮藏空白组与各处理组之间李子之间差异显著，各处理之间差异不显著，因此，表明低浓度海通叶挥发油处理能减轻果实质量损失。

1.4.2海通叶挥发油对李子保鲜期间硬度的影响

果实硬度也是判断保鲜效果的一个重要指标。由图2可知，李子果实的硬度在贮藏期间呈下降趋势，在整个贮藏过程中，挥发油处理过的李子硬度均高于同期的空白组。10天后，室温贮藏组李子硬度明显下降较明显，40天后，全部的李子完全软化。置于冰箱5-10℃条件下贮藏，挥发油处理的李子与未处理李子硬度结果比较显示，30天后，未处理的李子硬度开始下降得明显；60天后硬度变为3.12kg·mm^-2；0.1μl·10ml^-1处理的李子的硬度为4.42kg·mm^-2，0.5μl·10ml^-1处理的李子的硬度为11.07kg·mm^-2，1.0μl·10ml^-1处理的李子的硬度为9.32kg·mm^-2；因此，海通叶挥发油对李子的。

1.4.3海通叶挥发油对李子保鲜期间腐烂率影响

贮藏环境及微生物的影响是导致果蔬腐烂的重要因素。由图3可知，10d，后室温贮藏李子开始出现腐烂；20d后各组均出现腐烂，但室温贮藏李子腐烂速度加快；60天后，室温贮藏李子腐烂率为50.64％，5-10℃贮藏的空白组及不同挥发油浓度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1依次为20.91％、10.78％、0.025％、0.46％。

1.4.4海通叶挥发油对李子保鲜期间含糖量影响

由图4可知，李子初始样含糖量为2.42％。随着时间的延长，含糖量略有上升趋势；但10d后，室温贮藏组含糖量开始呈下降趋势，60d后含糖量变为1.13％；5-10℃贮藏的李子20d时含糖量达到最大值2.87％，随后含糖量开始缓慢下降，60d后，5-10℃贮藏的空白组含糖量为2.01％，不同挥发油浓度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1处理的样品含糖量依次为2.28％、2.43％、2.36％；实验结果表明，在适宜的温度贮藏的李子，同时使用合理浓度的海通叶挥发油处理对维持李子的含糖量有较好的效果。

1.4.5海通叶挥发油对李子保鲜期间有机酸的含量影响

由图5可知，李子初始样有机酸含量为0.27％，随着时间的推移有机酸含量均有升高，60d后，室温贮藏组有机酸含量为0.45％，5-10℃贮藏的空白组有机酸含量为0.36％。5-10℃贮藏的不同挥发油浓度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1处理的样品有机酸含量为依次为0.42％、0.4％、0.38％。实验结果表明，海通叶挥发油对李子有机酸影响不明显。

1.4.6海通叶挥发油对果蔬保鲜期间维生素c的含量影响

由图6可知，李子初始样vc含量0.787％。不同处理组在贮藏30d时，李子的vc含量均有下降，室温贮藏的李子vc含量下降较为明显，其他组下降较为平缓，室温贮藏组维生素c含量为0.331％，5-10℃组贮藏的空白组维生素c含量为0.503％，0.1、0.5、1.0ul·10ml^-1维生素c含量依次为0.522％、0.639％、0.704％。60d后，五个处理组维生素c含量均出现下降，室温处理组维生素c含量相对其它组的下降更为明显。

可见，在不同环境贮藏的李子，其维生素c的含量随着时间的延长均呈下降趋势，室温贮藏组维生素c的含量下降相对明显；在5-10℃贮藏李子中，海通叶挥发油处理组维生素c的含量下降相对缓慢，所有组数相对比较可知，贮藏温度在5-10℃条件下，使用挥发油浓度为0.5ul·10ml^-1处理维生素c损失最少，其含量为0.562％。

1.5结论

(1)植物精油对果蔬品质的保持具有显著功效。在适宜温度贮藏条件下，较低浓度海通叶挥发油能有效的降低李子果实质量损失率，同时对减慢李子软化也有较好的效果，实验结果表明：挥发油浓度为0.5μl·10ml^-1时对减慢李子果实质量损失率和对其硬度影响最佳浓度。

(2)有些植物果蔬大多呈酸性，极易滋生灰霉、匍枝根霉等腐败菌，导致果蔬腐败变质。将植物精油应用到果蔬采后保鲜中，能够减轻采后果蔬腐烂，延长果蔬货架期，前面的抑菌试验结果表明，海通叶挥发油对8种细菌均有较好的抑菌作用，对霉菌较为敏感。因此，海通叶挥发油能有效降低李子腐烂率可能与其抑菌作用有较密切的关联。

(3)海通叶挥发油对李子有机酸变化影响不明显，其对可溶性糖和维生素c含量有一定影响，在适宜温度下，较低浓度海通叶挥发油能有效减慢可溶性糖和维生素c的分解。

(4)在适宜温度的条件下，海通叶挥发油处理在较长的时间里可以有效延缓李子后熟衰老，保持果实的品质和风味，维持果实中可溶性固形物含量，综合考虑，以0.5ul·10ml^-1的浓度处理效果最优。

与现有的技术相比，本发明发现了海通叶挥发对果蔬品质的保持具有显著功效，能够减轻采后果蔬腐烂，延长果蔬货架期，保持果实的品质和风味，维持果实中可溶性固形物含量。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果好。

附图说明

图1为海通叶挥发油处理后李子果实质量损失率的变化；

图2为海通叶挥发油处理后李子果实硬度的变化；

图3为海通叶挥发油对李子保鲜期间腐烂率变化；

图4为海通叶挥发油对李子保鲜期间糖类含量变化；

图5为海通叶挥发油对李子鲜期间有机酸的含量变化；

图6为海通叶挥发油对李子保鲜期间维生素c的含量影响。

具体实施方式

本发明的实施例：将海通叶挥发油作为保鲜剂直接进行包装，使用时，将海通叶挥发油溶解在水中，使其形成浓度为0.1-1.0ul/10ml的浓度。