本发明属于水产品保鲜领域，涉及一种鱿鱼的复合生物保鲜剂及其保鲜方法。
背景技术：
鱿鱼，海生软体动物，头足纲，肉质细嫩。鱿鱼含脂量低，主要是磷脂，为高度不饱和脂肪。鱿鱼中蛋白质含量高，含有丰富的氨基酸，并且必需氨基酸比重非常大。同时还含有大量牛磺酸、钙、磷、铁等元素，以及十分丰富的硒、碘、锰、铜等微量元素。鱿鱼具有调节血脂，降低血压，抗炎症、抗氧化和保护神经细胞等作用。
由于鱿鱼组织结构和理化特点决定其容易腐败变质，使产品品质受到影响，降低商品价值。因此，如何延长鱿鱼鱼肉的保藏期，提高其卫生安全性，成为整个鱿鱼产业链中非常重要的一个环节，鱿鱼的保鲜方法一直是水产界专家和水产加工企业探讨的热门课题。
长期以来，人们多采用冷冻法来延长鱿鱼肉的保藏期，虽然鱿鱼能保存很长的时间，但在冻结、储藏、解冻的过程中，由于冰晶形成和肌肉组织中水分的重结晶，蛋白发生冷冻变性，鱿鱼肉的品质和营养与鲜鱿鱼肉相比都发生了较大的变化，而且能耗很高；除了冷冻法外，添加化学防腐剂也能够大大延长鲜鱿鱼的货价期，但是过量使用防腐剂，对人体健康危害较大。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决鱿鱼肉化学防腐剂保鲜安全性低的问题，提供了一种具有较好的保水、抑菌、杀菌、抗氧化效果的一种鱿鱼的复合生物保鲜剂及其保鲜方法，可提高鱿鱼的食用和商品价值。
本发明的技术解决方案是：
一种鱿鱼的复合生物保鲜剂，所述复合生物保鲜剂包括鱿鱼保鲜剂一和鱿鱼保鲜剂二，鱿鱼保鲜剂一和鱿鱼保鲜剂二配合使用对鱿鱼进行保鲜，所述鱿鱼保鲜剂一的有效成分为鲽鱼下脚料酶解物；所述鱿鱼保鲜剂二的有效成分为海带多糖、松树皮多酚提取物和白藜芦醇。
进一步的，所述鱿鱼保鲜剂一中的鲽鱼下脚料酶解物质量浓度为7.5％～15％；所述鱿鱼保鲜剂二中的海带多糖质量浓度为0.1％～1.0％，松树皮多酚提取物质量浓度为0.01％～0.2％，白藜芦醇质量浓度为0.01％～0.2％，余量为水。
一种鱿鱼的保鲜方法，其具体步骤如下：
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料高压蒸煮，干燥，与水混合，所述鲽鱼下脚料与水混合质量体积比为1:5(g/mL)，匀浆，得到鲽鱼下脚料混合浆料，调温度40℃、用氢氧化钠调pH为7.0～8.0，加入胰酶酶解，加入占鲽鱼下脚料总质量0.5％～1.0％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料酶解物；
(2)海带多糖的制备
原料为海带粉末，利用超声波辅助提取海带多糖；
(3)松树皮多酚提取物制备
取红松树皮，用万能捣碎机粉碎，过30目筛，按红松皮与乙醇溶液的料液比1:30(g/mL)加入体积浓度60％乙醇溶液，在50℃超声波辅助提取，超声功率200W条件下提取20min，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，得到浓缩液，用AB-8型大孔树脂富集松树皮多酚，用乙醇进行梯度洗脱，浓缩，真空冻干，获得红松树皮多酚冻干粉末，置于4℃备用；
(4)制备鱿鱼保鲜剂一
将鲽鱼下脚料酶解物加水配制成质量浓度为7.5％～15％的溶液，作为鱿鱼保鲜剂一；
(5)制备鱿鱼保鲜剂二
将白藜芦醇、海带多糖和松树皮多酚提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成海带多糖质量百分比浓度为0.1％～1.0％，松树皮多酚提取物质量百分比浓度为0.01％～0.2％，白藜芦醇质量百分比浓度为0.01％～0.2％，作为鱿鱼保鲜剂二；
(6)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼片在0℃鱿鱼保鲜剂一和鱿鱼保鲜剂二中分别均匀浸泡30min～60min，将鱿鱼捞出沥干1min～2min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
进一步的，高压蒸煮时温度为121℃，时间为15min。
进一步的，高压蒸煮后干燥温度为80℃，干燥时间为2h。
进一步的，所述鲽鱼下脚料为鲽鱼的鱼头、鱼骨和鱼皮。
进一步的，用海带粉末提取海带多糖时，先将海带用去离子水清洗干净，在105℃下烘干30min，将经烘干的海带磨成海带粉末；按照海带粉末与去离子水的料液比为1:30(g/mL)在超声波辅助下提取海带多糖，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，将收集的上清液体积浓缩到原来体积的1/5，然后将浓缩液与无水乙醇按照体积比1:4～1:6混合均匀，4℃过夜；在6000转/min转数下离心15min，收集沉淀物，在55℃烘干至恒重，得到海带多糖。
进一步的，步骤(1)离心时，离心力为5000g，离心时间为15min。
进一步的，步骤(2)超声波提取时，超声波发出时间为2s，超声波的间隙时间为2s，提取全程时间为50min，超声功率为600W，提取温度60℃。
本发明的有益效果：
(1)鲽鱼下脚料易得，价格低廉，蛋白质含量高，将其水解成短链的小分子多肽，可以释放出更多的氨基，清除鱿鱼中的甲醛；胰酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的混合物，多种酶作用于鲽鱼下脚料的不同反应位点，释放更多的氨基捕获甲醛。同时鲽鱼下脚料酶解液还有一定保水作用。
(2)白藜芦醇能够抑制TMAOase活性，降低鱿鱼中甲醛形成，保持鱿鱼蛋白质的品质；海带和鱿鱼都生长在化学组分复杂的海水中，具有相同的生理环境，以海带多糖、松树皮多酚提取物与白藜芦醇复合使用，具有更好的抑菌和抗氧化效果，能延长鱿鱼的保藏时间。
(3)此复合生物保鲜剂，既抑制了鱿鱼中甲醛的产生，又消除了鱿鱼中产生的甲醛，此保鲜剂还具有抑菌和抗氧化作用，同时复合生物保鲜剂对鱿鱼品质的保持具有增效作用，且均对鱿鱼制品的色泽没有显著影响。
(4)鱿鱼保鲜剂制备方法简单，工序步骤少，使用方便，只需用鱿鱼保鲜剂在低温下浸泡鱿鱼肉片即可达到保鲜目的。
具体实施方式
实施例1
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.0，加入占鲽鱼下脚料总质量0.5％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)海带多糖的制备
将海带用去离子水清洗干净，在105℃下烘干30min，将经烘干的海带磨成海带粉末，超声波辅助提取海带多糖，超声波发出时间为2.0s，超声波的间隙时间为2s，提取全程时间为50min，超声功率为600W，提取温度60℃，料液比为1:30(g/mL)，过滤，在55℃采用旋转蒸发仪蒸发，将收集的上清液体积浓缩到原来体积的1/5，将浓缩液与无水乙醇按照体积比1:5混合均匀，4℃过夜；在6000转/min转数下离心15min，收集沉淀物，55℃烘干至恒重，得到海带多糖；
(3)松树皮多酚提取物制备
取50g红松树皮，用万能捣碎机粉碎，过30目筛置于2000mL烧杯中，按料液比1:30(g/mL)加入体积浓度60％乙醇，超声波辅助提取，在50℃，超声功率200W条件下提取20min，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，得到浓缩液，用AB-8型大孔树脂富集松树皮多酚，用乙醇进行梯度洗脱，浓缩，真空冷冻干燥机冻干，获得红松树皮多酚冻干粉末，置于4℃冰箱中备用；
(4)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为7.5％的溶液，作为保鲜剂一；
(5)制备保鲜剂二
将白藜芦醇、海带多糖和松树皮多酚提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成海带多糖质量百分比浓度为0.1％，松树皮多酚提取物百分比浓度为0.01％，白藜芦醇百分比浓度为0.01％；(6)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一中和保鲜剂二中分别均匀浸泡30min，将鱿鱼捞出沥干1min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
实施例2
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.5，加入占鲽鱼下脚料总质量0.7％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)海带多糖的制备
将海带用去离子水清洗干净，在105℃下烘干30min，将经烘干的海带磨成海带粉末，超声波辅助提取海带多糖，超声波发出时间为2.0s，超声波的间隙时间为2s，提取全程时间为50min，超声功率为600W，提取温度60℃，料液比为1:30(g/mL)，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，将收集的上清液体积浓缩到原来体积的1/5，将浓缩液与无水乙醇按照体积比1:4混合均匀，4℃过夜；在6000转/min转数下离心15min，收集沉淀物，在55℃烘干至恒重，得到海带多糖；
(3)松树皮多酚提取物制备
取50g红松树皮，用万能捣碎机粉碎，过30目筛，置于2000mL烧杯中，按料液比1:30(g/mL)加入体积浓度60％乙醇，超声波辅助提取，在50℃，超声功率200W条件下提取20min，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，得到浓缩液，用AB-8型大孔树脂富集松树皮多酚，用乙醇进行梯度洗脱，浓缩，真空冷冻干燥机真空冻干，获得红松树皮多酚冻干粉末，置于4℃冰箱中备用；
(4)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为10.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(5)制备保鲜剂二
将白藜芦醇、海带多糖和松树皮多酚提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成海带多糖质量百分比浓度为0.5％，松树皮多酚提取物质量百分比浓度为0.1％，白藜芦醇质量百分比浓度为0.1％；
(6)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一和保鲜剂二中均匀浸泡45min，将鱿鱼捞出沥干1.5min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
实施例3
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为8.0，加入占鲽鱼下脚料总质量1.0％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)海带多糖的制备
将海带用去离子水清洗干净，在105℃下烘干30min，将经烘干的海带磨成海带粉末，超声波辅助提取海带多糖，超声波发出时间为2.0s，超声波的间隙时间为2s，提取全程时间为50min，超声功率为600W，提取温度60℃，料液比为1:30(g/mL)，过滤，在55℃采用旋转蒸发将收集的上清液体积浓缩到原来体积的1/5，将浓缩液与无水乙醇按照体积比1:6混合均匀，4℃过夜；6000转/min离心15min，收集沉淀物，在55℃烘干至恒重，得到海带多糖；(3)松树皮多酚提取物制备
取50g红松树皮，用万能捣碎机粉碎，过30目筛置于2000mL烧杯中，按料液比1:30(g/mL)加入体积浓度60％乙醇，超声波辅助提取，在50℃，超声功率200W条件下提取20min，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，得到浓缩液，用AB-8型大孔树脂富集松树皮多酚，用乙醇进行梯度洗脱，浓缩，真空冷冻干燥机冻干，获得红松树皮多酚冻干粉末，置于4℃冰箱中备用；
(4)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为15.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(5)制备保鲜剂二
将白藜芦醇、海带多糖和松树皮多酚提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成海带多糖质量百分比浓度为1.0％，松树皮多酚提取物质量百分比浓度为0.2％，白藜芦醇质量百分比浓度为0.2％；
(6)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一和保鲜剂二中均匀浸泡60min，将鱿鱼捞出沥干2min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
对比例1
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(鲽鱼下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.5，加入占鲽鱼下脚料总质量0.7％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)制备保鲜剂
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为10.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(3)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼片在温度为0℃鱿鱼保鲜剂中均匀浸泡45min，将鱿鱼捞出沥干1.5min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
对比例2
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.5，加入占鲽鱼下脚料总质量0.7％的胰酶，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为10.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(3)制备保鲜剂二
将白藜芦醇加入去离子水中，搅拌均匀，配制成白藜芦醇百分比浓度为0.1％；
(4)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一和保鲜剂二中分别均匀浸泡45min，将鱿鱼捞出沥干1.5min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
对比例3
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.5，加入占鲽鱼下脚料总质量0.7％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)松树皮多酚提取物制备
取50g红松树皮，用万能捣碎机粉碎，过30目筛置于2000mL烧杯中，按料液比1:30(g/mL)加入体积浓度60％乙醇，超声波辅助提取，在50℃，超声功率200W条件下提取20min，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，得到浓缩液，用AB-8型大孔树脂富集松树皮多酚，用乙醇进行梯度洗脱，浓缩，真空冷冻干燥机冻干，获得红松树皮多酚冻干粉末，置于4℃冰箱中备用；
(3)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为10.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(4)制备保鲜剂二
将白藜芦醇和松树皮多酚提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成松树皮多酚提取物百分比浓度为0.1％，白藜芦醇百分比浓度为0.1％；
(5)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一和保鲜剂二中分别均匀浸泡45min，将鱿鱼捞出沥干1.5min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
对比例4
(1)鲽鱼下脚料酶解物的制备
将鲽鱼下脚料(鱼头、骨、皮)高压蒸煮(121℃、15min)，干燥(80℃、2h)，与水混合(下脚料与水混合质量比1:5(g/mL))，匀浆，调温度40℃，用氢氧化钠调pH为7.5，加入占鲽鱼下脚料总质量0.7％的胰酶，水解时间为4h，灭酶，离心(5000×g、15min)，取上清液，浓缩、冷冻干燥，得到鲽鱼下脚料蛋白酶解产物；
(2)海带多糖的制备
将海带用去离子水清洗干净，在105℃下烘干30min，将经烘干的海带磨成海带粉末，超声波辅助提取海带多糖，超声波发出时间为2.0s，超声波的间隙时间为2s，提取全程时间为50min，超声功率为600W，提取温度60℃，料液比为1:30(g/mL)，过滤，55℃采用旋转蒸发仪蒸发，将收集的上清液体积浓缩到原来体积的1/5，将浓缩液与无水乙醇按照体积比1:4混合均匀，4℃过夜；6000转/min离心15min，收集沉淀物，55℃烘干至恒重，得到海带多糖；
(3)制备保鲜剂一
取鲽鱼下脚料酶解物与水混合均匀，配制成质量浓度为10.0％的溶液，作为保鲜剂一；
(4)制备保鲜剂二
将白藜芦醇、海带多糖提取物加入去离子水中，搅拌均匀，配制成海带多糖质量百分比浓度为0.5％，白藜芦醇百分比浓度为0.1％；
(5)鱿鱼保鲜处理
将新鲜鱿鱼洗净，切囊，然后切割成片状，将鱿鱼在温度为0℃鱿鱼保鲜剂一中和保鲜剂二中分别均匀浸泡45min，将鱿鱼捞出沥干1.5min，并置于4℃条件下自然风干，将风干后的鱿鱼肉片放入保鲜袋中，封口，放置在0℃的环境中保藏。
保鲜效果
对照组采用无菌水代替保鲜剂，将处理好的鱿鱼放入PE保鲜袋内，贮藏于0℃冰箱中，通过TVB-N、菌落总数和甲醛含量的测定来确定保鲜效果，如表1、表2和表3所示。
表1鱿鱼贮藏期间挥发性盐基氮(TVB-N)含量的变化单位(mg/100g)
表2鱿鱼贮藏期间菌落总数的变化单位(lgCFU/g)
表3鱿鱼贮藏期间甲醛含量的变化单位(mg/kg)
利用本发明的保鲜剂处理的鱿鱼，在TVB-N、菌落总数和甲醛含量均低于对照组，延长鱿鱼货架期，海带多糖、红松树皮多酚提取物和白藜芦醇混合使用对鱿鱼的保鲜效果好于单独使用效果，他们存在协同增效作用，其中实施例2和实施例3对鱿鱼保鲜效果最好。对比例1和对比例2的甲醛含量显著低于对照，说明鲽鱼下脚料酶解物和白藜芦醇具有清除鱿鱼中甲醛作用，对比例3、对比例4以及实施例1-3甲醛含量显著低于对比例1和对比例2，说明海带多糖、红松树皮多酚提取物与鲽鱼下脚料酶解物、白藜芦醇存在交互作用，清除甲醛效果好于鲽鱼下脚料酶解物和白藜芦醇单独使用的效果。
以上仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。