具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其制备方法

专利名称：具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种由下式(Ⅰ)表示的具有酪氨酸酶抑制活性的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示双键或单键，R1表示氢或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元杂环，且该杂环包含氧作为杂原子，R3表示氢或C1-C7烷基，R4表示氢、羟基、或氧代，和R5和R6彼此独立地表示氢或C1-C5烷基。
本发明还涉及制备如上定义的式(Ⅰ)化合物的新方法。
背景技术：
黑素是通过位于色素细胞中的酪氨酸酶的作用将酪氨酸转化成多巴(氨基二氧环己二烯丙酸)，然后通过非酶氧化而形成。黑素分布在整个皮肤中，并具有保护身体不受各种刺激的重要功能。然而，据报导黑素瘤与黑素的过量产生有密切关系，并且还可能导致黑化皮肤、雀斑等等。因此，近些年防止黑素过量形成的各种化妆品和药物得到广泛的开发。
氢醌是迄今主要使用的用于黑素过量形成的防止剂。但是这种化合物还表现出诸如使黑素退化或致死突变、细胞功能破坏等副作用，因此目前在韩国、日本等国氢醌被禁止在化妆品中使用(参见J.Soc.CosmetChem.,42,361,1991)。此外，一种氢醌的糖衍生物，熊果苷已被开发成为商品，但被认为具有很小的增白效果，而抗坏血酸、曲酸等具有较差的产品稳定性以致使用范围受到限制。自古以来，众所周知，甘草根、桑白皮等等的提取物具有皮肤增白的效果。但是，这些提取物根据产地会非经常性地表示出较差的效果，以致难于保持产品质量的稳定(参见Fragrance J.,6,59,1990)。从构树中提取的Carzinol F(参见Chem.Parm,Bull.,34(5),1968,1986；Cosmetics & Toiletries,101,51,1995)由于对酪氨酸酶具有良好的抑制活性而被商品化。但该物质也具有难以保持产品质量稳定的问题，因为Carzinol F也是一种提取物。具体说，无法获得足够的Carzinol F的刺激性和稳定性数据，并且它属于异戊二烯基儿茶酚族的化合物而具有不易合成的缺点。
发明公开因此，本发明者作了深入的研究，以便开发出一种具有通过少量便能产生卓越酪氨酸酶抑制活性的新化合物。而且所希望的化合物应当由起始原料容易合成并且稳定。在研究过程中，本发明者分析了已知具有增白作用的各种天然物质的效果和结构。结果，我们开发出式(Ⅰ)的新1,3-二苯基丙烷衍生物，它能够满足上述目的，由此完成本发明。
本发明的目的是提供一种由下式(Ⅰ)表示的新1,3-二苯基丙烷衍生物

其中=表示双键或单键；R1表示氢或C1-C10烷基；R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元杂环，且该杂环包含氧作为杂原子，R3表示氢或C1-C7烷基；R4表示氢、羟基、或氧代，并且R5和R6彼此独立地表示氢或C1-C5烷基。
在对上式(Ⅰ)化合物取代基的定义中，单独使用的或以复合形式如“烷氧基”或“烷氧基烷基”中使用的术语“烷基”是指直链或支链的饱和烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基或几种丁基异构体。
本发明的另一个目的是提供一种制备式(Ⅰ)化合物的新方法。发明的最佳实施方式在如上定义的式(Ⅰ)的新化合物中，优选的化合物包括其中R1表示氢、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示

，R3表示氢或甲基，R4表示氢或羟基，R5和R6彼此独立地表示甲基的化合物。
在式(Ⅰ)的化合物中，由下式(Ⅰa)表示的化合物，其中R4是氢，可以按下面的反应式1来方便地制得，该反应式为将下式(Ⅳ)表示的化合物在溶剂中还原成下式(Ⅴ)表示的化合物，然后去除保护基。
反应式1

其中P1、P2和P3是羟基保护基，即P1表示苄基、甲基、乙基、四氢吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或对甲氧基苄基，
P2表示苄基、甲基或乙基，P3表示苄基、四氢吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或对甲氧基苄基，R1-R3、R5和R6如前述定义。
下面将较具体解释上述反应式1的过程。
在将化合物(Ⅳ)还原制备成化合物(Ⅴ)的反应步骤中，可以优选使用醚如乙醚、四氢呋喃(THF)作为溶剂，并且可以优选使用氢化铝锂作为还原剂。最好在-30至30℃的温度范围下进行反应。反应完成之后，将化合物(Ⅴ)中包含的保护基去除，得到化合物(Ⅰa)。根据所要去除的保护基，通过常规已知的方法可方便地将保护基去除。本领域的普通技术人员可以选择出合适的保护条件。具体说，当保护基是苄基时，可以通过在乙酸乙酯中进行氢化反应或通过在盐酸和乙酸的溶剂混合物中回流制备化合物(Ⅰa)。
化合物(Ⅳ)至化合物(Ⅴ)的还原反应通常可以根据前述过程进行。然而，化合物(Ⅴ)还可以通过预先将化合物(Ⅳ)的双键经过氢化(H2,Pd-C)还原得到下式(Ⅴ′)表示的酮化合物，然后将化合物(Ⅴ′)的酮基转化成化合物(Ⅴ)的醇基而制备。
另一方面，由下式(Ⅰb)表示的化合物(其中R4是氧代)可以通过将化合物(Ⅴ′)包含的保护基去除而不是将其还原而制得。化合物(Ⅰb)还可以在氢硼化钠或氢化铝锂存在下还原成化合物(Ⅰa)。
上述解释的过程可以总结成下面的反应式2。
反应式2

其中P1、P2、P3、R1-R3、R5和R6如前述所定义。
在上述反应式2中，化合物(Ⅳ)还原成化合物(Ⅴ′)可以通过在常温常压下将化合物(Ⅳ)包含的双键在如乙酸乙酯的溶剂中氢化2小时而实现。通过氢硼化钠或氢化铝锂处理，将酮化合物(Ⅴ′)还原成醇化合物(Ⅴ)。通过在化合物(Ⅴ′)上实行脱保护而获得化合物(Ⅰb)的过程和上述反应式1的过程一样。具体说，当保护基是苄基时，化合物(Ⅰb)可以通过(ⅰ)在常温和2-4大气压下将化合物(Ⅴ′)在乙酸乙酯溶剂中氢化10-15小时，或者通过(ⅱ)在35-55℃和常压下于盐酸和低级醇(甲醇、乙醇、异丙醇等)的溶剂混合物中氢化20分钟-1小时而制备，或者还可以通过在条件(ⅰ)和(ⅱ)条件下将化合物(Ⅳ)氢化而直接获得化合物(Ⅰb)。
在反应式1中作为起始原料使用的化合物(Ⅳ)可以按照下面描述的反应式3制备，该反应式是通过将式(Ⅱ)化合物和式(Ⅲ)化合物在碱的存在下在溶剂中缩合。
反应式3

其中P1、P2、P3、R2、R5和R6如前述所定义。
在该反应中，优选使用选自乙醇、四氢呋喃和二甲基甲酰胺的一种或几种作为溶剂，并且使用选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢化钠中的一种或几种作为碱。通过搅拌反应物约5-24小时获得所需产物。当P1和P2各自不同时，化合物(Ⅱ)可由现有的化合物容易制得(参见Chem.Ber.,95.1413,1962；J.Med.Chem.,34,2152,1991)。
在式(Ⅰa)的化合物中，其中R1和R2一起形成杂环的化合物可以通过使用下式(Ⅱa)表示的化合物代替使用式(Ⅱ)的化合物，按照上述相同的过程制备(参见J.Chem.Soc.Perkin Trans I,1437,1981)。

最后，由下式(Ⅰc)表示的化合物，其中R4是氢，可以按照下面描述的反应式4进行制备，该反应式是通过将化合物(Ⅴ)在酸的存在下于溶剂中脱水，形成由下式(Ⅵ)表示的化合物，然后将这样制成的化合物(Ⅵ)还原和脱保护。
反应式4

其中P1-P3、R1-R3、R5和R6如前述所定义。
下面将较具体解释反应式4描述的过程。
在选自硫酸、磷酸和对甲苯磺酸的一种或几种酸的存在下，将化合物(Ⅴ)在选自苯、甲苯和二甲苯的一种或几种溶剂中脱水，得到化合物(Ⅵ)。这个脱水过程优选在80-100℃下进行。将化合物(Ⅵ)通过氢化反应，然后通过去除保护基，获得所需化合物(Ⅰc)。去除保护基的过程按照反应式1的相同过程进行。
根据上述过程制备的化合物(Ⅰ)的典型实例在下表中列出。
表1

以下，本发明者按照下述过程鉴别了本发明的化合物(Ⅰ)对酪氨酸酶的抑制活性。所说过程是，将样品引入微板上，向其中加入磷酸缓冲液(pH6.8)和L-酪氨酸溶液。向上述混合物添加酪氨酸酶溶液开始酶反应，然后在475nm吸光度下测定，计算酪氨酸酶抑制率(％)(参见实验实施例1)。
另外，为测定化合物(Ⅰ)对黑素生物合成的抑制活性，将该化合物添加到包含B-16黑素瘤细胞的培养基中并且培养。然后，将细胞离心提取黑素，并根据吸光度测定黑素的产生量(参见实验实施例2)。
结果，鉴定出本发明的式(Ⅰ)化合物对酪氨酸酶和黑素生物合成具有比现有增白物质更优越或相似的抑制作用。因此，具有这种效果的本发明的化合物可以应用于药品、非药用供给品和化妆品。化合物(Ⅰ)的使用剂量可以随制剂的类型、使用目的等有所不同。
本发明将通过以下制备例、实施例和实验实施例作更具体的解释。但应当指出这些实例旨在举例说明，而没有以任何方式限制本发明范围的目的。制备例1合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

将1.7g(4.54mmol)的1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.9g(9.08mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解于32ml乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中(1/1,v/v))，向其中缓慢滴加6ml的50％氢氧化钠水溶液。添加完毕之后，将反应混合物在常温下搅拌16小时。通过减压蒸馏除去溶剂，并将所得残余物用25ml水稀释，然后用10％盐酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取该反应溶液，然后减压蒸馏除去包含在其中的溶剂。将所得的具有高粘度的混合物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，获得1.8g(2.61mmol，产率58％)标题化合物。实施例1合成4-[3-羟基-3-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚步骤1制备3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇

方法1将0.57g(0.83mmol)制备例1制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml无水四氢呋喃中，并在-30℃下一点一点加入0.1g(2.52mmol)氢化铝锂(LAH)，同时搅拌。将反应溶液搅拌1小时，将0.1ml水、0.1ml的15％氢氧化钠水溶液和0.3ml水依次加入溶液中，然后将整个混合物搅拌另外30分钟。滤掉所得的沉淀物并将滤液蒸馏，获得白色固体，然后通过硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，获得0.56g(产率98％)的标题化合物。方法2将0.15g(0.22mmol)制备例1制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在4ml乙酸乙酯(EtOAc)中。向该溶液缓慢添加5ml的10％钯-碳催化剂，在加压的氢气氛(2大气压)下反应30分钟。用50ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后过滤。将滤液减压蒸馏，得到0.17g的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙酮。将0.17g(0.22mmol)这样获得的化合物溶解在2ml甲醇中，0℃下向其中一点一点加入20mg(0.53mmol)的氢硼化钠(NaBH4)。混合物在0℃下搅拌10分钟，然后通过减压蒸馏除去溶剂。残余物用10ml水稀释，用乙酸乙酯萃取并通过无水硫酸钠干燥。减压蒸馏掉溶剂，并对残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，获得0.1g(产率66％)的标题化合物。
步骤2制备4-[3-羟基-3-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将0.31g(0.45mmol)的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙-1-醇溶解在6ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加10mg的10％钯-碳催化剂，在加压的氢气氛(4大气压)下反应12.5小时。反应溶液用50ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏，获得0.14g(产率100％)标题化合物。实施例2合成4-[3-(2,5-二羟基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将2.39g(3.46mmol)的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)丙-1-醇用100ml无水苯稀释，并加入30mg对甲苯磺酸。在回流下将混合物搅拌4小时，将水除去。将这样制得的溶液冷却至室温，并用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤一次。用二氯甲烷萃取洗液，并将萃取物和原始有机层合并。然后，将合并的混合物干燥，减压蒸馏并进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，得到2.1g(产率90％)4-[3-(2,5-二苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。将2.1g(3.12mmol)这样获得的化合物用30ml乙酸乙酯稀释，向其中缓慢加入45mg的10％钯催化剂。所得溶液在60psi氢气压下搅拌72小时，用50ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。滤液减压蒸馏并进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到0.74g(产率79％)标题化合物。制备例2合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

将0.23g(0.77mmol)的1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和0.62g(1.94mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解于7ml乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中(1/1,v/v)，然后将1.5ml的50％氢氧化钠水溶液缓慢滴加在其中。添加完毕之后，混合物在常温下搅拌16小时。除去包含在其中的溶剂，用水稀释残余物，并使用10％盐酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取该溶液，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的具有高粘度的残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，获得0.30g(产率65％)标题化合物。实施例3合成4-[3-羟基-3-(5-羟基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-
合成4-[3-羟基-3-(5-羟基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将290mg(0.48mmol)制备例2制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在5ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加15mg的10％钯-碳催化剂，在加压的氢气氛(4大气压)下反应12小时。用100ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得160mg(0.48mmol，产率98％)3-(2,4-二羟基-苯基)-1-(5-羟基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。将160mg(0.48mmol)这样获得的化合物溶解在2ml乙醚中，并在0℃下一点一点加入160mg(4.21mmol)氢化铝锂。搅拌1小时后，依次加入0.1ml水、0.1ml的15％氢氧化钠水溶液和0.3ml水，并且将混合物搅拌另外30分钟。滤掉所得的沉淀物，并将滤液蒸馏获得白色固体，然后进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，获得158mg(产率98％)标题化合物。实施例4合成4-[3-(2-甲氧基-5-羟基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将550mg(0.92mmol)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(5-苄氧基-2-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加15mg的10％钯-碳催化剂，并在常压的氢气氛(1大气压)下反应2小时。反应溶液用15ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得552mg(产率100％)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-甲氧基-5-苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。将225mg(0.37mmol)这样获得的化合物用NaBH4还原成醇化合物，然后用10ml无水苯稀释。加入30mg对甲苯磺酸，并在回流下将混合物搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，然后用饱和的含碳酸氢钠水溶液洗涤一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并将萃取物和原始有机层合并。然后将合并的混合物干燥，减压蒸馏，并进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，获得169mg(0.29mmol,产率78％)4-[3-(2-甲氧基-5-苄氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。将160mg(0.27mmol)这样获得的化合物用30ml乙酸乙酯稀释，向其中缓慢加入45mg的10％的钯催化剂。所得混合物在60psi氢气压下搅拌48小时，用10ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏并将残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到74mg(0.234mmol，产率86％)标题化合物。制备例3合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

将1.22g(4.09mmol)的1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和2.8g(9mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解于40ml乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中(1/1,v/v)，然后将10ml的50％氢氧化钠水溶液缓慢滴加在其中。添加完毕之后，混合物在常温下搅拌16小时。通过减压蒸馏除去包含在其中的溶剂，用40ml水稀释所得的残余物，然后使用10％盐酸水溶液中和至pH 7。用乙酸乙酯萃取该溶液，并减压蒸馏除去萃取物中包含的溶剂。将所得的具有高粘度的混合物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，获得2.37g(产率97％)标题化合物。实施例5合成4-[3-羟基-3-(2-羟基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将1.28g(0.21mmol)制备例3制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加45mg的10％钯-碳催化剂，在加压的氢气氛(4大气压)下蒸馏获得660mg(产率95％)3-(2,4-二羟基-苯基)-1-(2-羟基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。将660mg(2mmol)这样获得的化合物溶解在12ml乙醚中，并在0℃下一点一点加入750mg氢化铝锂，然后将混合物搅拌1小时。之后依次将1ml水、1ml的15％氢氧化钠水溶液和3ml水加入反应溶液中，并且将混合物搅拌另外30分钟。滤掉所得的沉淀物，并将滤液蒸馏获得白色固体，然后进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，获得524mg(1.58mmol，产率79％)标题化合物。实施例6合成4-[3-(2-羟基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将300mg(0.50mmol)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在3ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加15mg的10％钯-碳催化剂，在常压氢气氛(1大气压)下反应3小时。反应溶液用20ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。这样获得的化合物不进行进一步纯化，而用40mg NaBH4的5ml甲醇溶液还原成醇化合物。将包含醇化合物的反应溶液减压蒸馏，除去甲醇，并用二氯甲烷萃取，获得277mg(产率92％)的醇化合物，然后用10ml无水苯进行稀释。加入30mg对甲苯磺酸，并在回流下将混合物搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，并用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并将萃取物和原始有机层合并。然后，将合并的混合物干燥，减压蒸馏，并进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，获得244mg(0.42mmol，产率91％)4-[3-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-烯丙基]-1,3-二苄氧基苯。将这样获得的化合物用30ml乙酸乙酯稀释，向其中缓慢加入45mg的10％钯催化剂。所得混合物在60psi氢气氛下搅拌20小时，用10ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏并将残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，得到118mg(产率88％)标题化合物。制备例4制备例4合成3-(2，4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮

将310mg(1mmol)的l-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-乙酮和650mg(2.1mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解于15ml乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中(1/1,v/v)，然后将5ml的50％氢氧化钠水溶液缓慢滴加在其中。添加完毕之后，混合物在常温下搅拌24小时。通过减压蒸馏除去包含在反应溶液中的溶剂，用10ml水稀释所得的残余物，然后使用10％盐酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取该溶液，并减压蒸馏除去萃取物中包含的溶剂。将所得的残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，获得440mg(产率72％)标题化合物。实施例7合成4-[3-羟基-3-(2-羟基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将440mg(0.72mmol)制备例4制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在6ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加15mg的10％钯-碳催化剂，在加压的氢气氛(4大气压)下反应15小时。用30ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得205mg(产率91％)3-(2,4-二羟基-苯基)-l-(2-羟基-5-乙氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。将205mg(0.66mmol)这样获得的化合物溶解在12ml乙醚中，并在0℃下一点一点加入200mg氢化铝锂，然后将混合物搅拌1小时。之后依次将0.2ml水、0.2ml的15％氢氧化钠水溶液和0 6ml水加入反应溶液中，所得溶液搅拌另外30分钟。滤掉所得的沉淀物，并将滤液蒸馏获得白色固体，然后进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，获得160mg(产率70％)标题化合物。制备例5合成3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙烯酮

将1.69g(5mmol)的1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-乙酮和3.2g(10.5mmol)的2,4-二苄氧基-苯甲醛溶解于50ml乙醇和四氢呋喃的混合溶剂中(1/1,v/v)，将10ml的50％氢氧化钠水溶液缓慢滴加在其中。添加完毕之后，混合物在常温下搅拌16小时。通过减压蒸馏除去包含在反应溶液中的溶剂，用50ml水稀释所得的残余物，然后使用10％盐酸水溶液中和至pH7。用乙酸乙酯萃取该溶液，并减压蒸馏除去萃取物中包含的溶剂。将所得的残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=7/1,v/v)，获得2.13g(产率68％)标题化合物。实施例8合成4-[3-羟基-3-(6-羟基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将2.13g(3.33mmol)制备例5制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在50ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加30ml的10％钯-碳催化剂，然后在加压的氢气氛(4大气压)下反应12小时。用50ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得1.14g(0.31mmol，产率94％)3-(2,4-二羟基-苯基)-1-(6-羟基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙酮。将1.14g这样获得的化合物溶解在10ml乙醚中，并在0℃下一点一点加入1.0g氢化铝锂，然后将混合物搅拌1小时。之后依次将1ml水、1ml的15％氢氧化钠水的沉淀物，并将滤液蒸馏获得白色固体，然后进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=1/1,v/v)，获得1.04g(2.80mmol，产率90％)标题化合物。实施例9合成4-[3-(6-羟基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将550mg(0.86mmol)制备例5制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙烯酮溶解在7ml乙酸乙酯中。向该溶液缓慢添加10mg的10％钯-碳催化剂，然后在常压氢气氛(1大气压)下反应2小时。用50ml乙酸乙酯稀释反应溶液，然后过滤。将滤液减压蒸馏获得478mg(0.75mmol，产率87％)3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(6-苄氧基-2,2,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-5-基)-丙酮。将200mg(0.31mmol)这样获得的化合物用125mgNaBH4还原成醇化合物，然后用无水苯稀释。其中加入30mg对甲苯磺酸，并将混合物搅拌4小时，同时回流。将反应混合物冷却至室温，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤一次。洗液再用二氯甲烷萃取，并将萃取物和原始有机层合并。然后，将合并的混合物干燥，减压蒸馏，并进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=10/1,v/v)，获得169mg(0.271mmol，产率88％)的烯化合物。将160mg(0.26mmol)这样获得的烯化合物用30ml乙酸乙酯稀释，向其中缓慢加入4.5mg的10％钯催化剂。所得混合物在60psi氢气压下搅拌48小时，用10ml乙酸乙酯稀释，然后过滤。将滤液减压蒸馏并将残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=3/1,v/v)，得到74mg(0.21mmol，产率80％)标题化合物。实施例10合成4-[3-羟基-3-(2-羟基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙基]-苯-1,3-二酚

将5.5g(9.2mmol)制备例3制备的3-(2,4-二苄氧基-苯基)-1-(2-苄氧基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙烯酮溶解在20ml乙醇和乙酸乙酯的混合溶剂(1/3,v/v)中，向该溶液缓慢添加50mg的10％钯-碳催化剂。将混合物温度升至40℃，然后在常压下进行0.5小时的氢化。用60ml乙酸乙酯稀释反应溶液，过滤，然后将滤液减压蒸馏。残余物用乙醚稀释，用碳酸氢钠水溶液洗涤，通过无水硫酸钠干燥，然后过滤。滤液减压蒸馏获得2.88g(8.73mmol，产率95％)3-(2,4-二羟基-苯基)-1-(2-羟基-5-甲氧基-3,4,6-三甲基-苯基)-丙酮。将2.88g(8.73mmol)这样获得的化合物溶解在12ml甲醇中，并在0℃下一点一点加入165mg(4.37mmol)氢化铝锂。混合物在常温下搅拌1小时，减压蒸馏，用10ml乙酸乙酯稀释，然后用10ml水洗涤三次。将分离的有机层通过无水硫酸钠干燥，然后过滤。滤液减压蒸馏并将残余物进行硅胶柱色谱纯化(洗脱液正己烷/乙酸乙酯=5/1,v/v)，获得767mg(2.31mmol，产率80％)标题化合物。
根据上面制备例和实施例，合成表1列出的化合物，且其物化性质在下表2中给出。
表2

根据以下实验实施例1和2测定本发明化合物(Ⅰ)对酪氨酸酶和黑素生物合成的抑制效果。实验实施例1酪氨酸酶抑制活性本实验使用从蘑菇中提取的酪氨酸酶(Sigma生产)。首先，将底物L-酪氨酸溶解在磷酸缓冲液(0.05M,pH6.8)中达到1.5mM浓度，然后将0.01ml的该溶液放入分光光度计的0.3ml比色杯中。将作为辅助因子(cofacter)的多巴制备成浓度0.06mM的溶液，并且将0.01ml的多巴溶液添加到底物溶液中。向所得的混合物添加式(Ⅰ)的抑制剂和磷酸缓冲液，达到总共0.31ml体积。通过添加0.1ml酶溶液开始反应，其中所说的酶溶液是将酪氨酸酶溶解在磷酸缓冲液中达到60U/ml的浓度。用0.1ml磷酸缓冲溶液代替酶溶液添加到空白样品中。反应在37℃下进行10分钟，然后使用分光光度计(Beckman DU-7500)在475nm下测定吸光度。
根据在475nm下的吸光度计算化合物(Ⅰ)对酪氨酸酶的抑制率(％)，并且将酶活性抑制率(％)达到50％时抑制剂的浓度测定为IC50值。抑制率(％)可以根据下式进行计算，结果示于下表3中。
抑制率(％)=(A-B)/A×100上式中，A表示添加抑制剂时475nm下的吸光度，B表示未加抑制剂时475nm下的吸光度。
表3酪氨酸酶的抑制活性

正如从表3结果中看出的，本发明的式(Ⅰ)化合物表现出比现有抑制剂更优越或相似的酪氨酸酶抑制活性。因此，将本发明化合物用于这种用途是有利的。实验实施例2对B-16小鼠黑素瘤细胞中黑素生物合成的抑制效果将本发明的化合物添加到B-16小鼠黑素瘤细胞的培养基中，并进行观察，以便实验其细胞水平的增白效果。
将B-16小鼠黑素瘤细胞在培养基中培养成密度为106细胞/皿，分别加入各种浓度的化合物，并且培养3天。用胰蛋白酶处理从培养皿中分离细胞，然后离心以提取黑素(其中小丸用2N高氯酸提取)。将1ml的1N氢氧化钠水溶液添加到提取的黑素中，并将所得混合物加热至将黑素溶解。通过分光光度计在400nm下测定吸光度，并用吸光度/单元细胞数(106细胞)来表示黑素所产生的数量。将酶活性抑制率(％)达到50％时的抑制剂浓度测定作为IC50值，结果示于下表4中。
表4

从表4结果中可以看出本发明的化合物对小鼠黑素瘤细胞中的黑素生物合成表现出卓越的抑制活性。因此，可以认为本发明的化合物通过防止黑素的合成表现出突出的增白活性，这主要是由于对酪氨酸酶的抑制活性。
权利要求
1．一种由下式(Ⅰ)表示的1,3-二苯基丙烷衍生物
其中=表示双键或单键，R1表示氢或C1-C10烷基，R2表示C1-C5烷基或C1-C5烷氧基烷基，或R1和R2一起表示可以被C1-C5烷基取代的5-6元杂环，且该杂环包含氧作为杂原子，R3表示氢或C1-C7烷基，R4表示氢、羟基、或氧代，并且R5和R6彼此独立地表示氢或C1-C5烷基。
2．权利要求1的化合物，其中R1表示氢、甲基或乙基，R2表示甲基，或R1和R2一起表示
，R3表示氢或甲基，R4表示氢或羟基，以及R5和R6彼此独立地表示甲基。
3．一种下式(Ⅰa)所示化合物的制备方法，
其中R1-R3、R5和R6如权利要求1所定义，该方法包括，在溶剂中将下式(Ⅳ)表示的化合物还原，
其中P1表示苄基、甲基、乙基、四氢吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或对甲氧基苄基，P2表示苄基、甲基或乙基，P3表示苄基、四氢吡喃基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基或对甲氧基苄基，R2、R5和R6如权利要求1所定义，得到下式(Ⅴ)表示的化合物，
其中P1-P3如上所定义，R2、R5和R6如权利要求1所定义，然后除去式(Ⅴ)化合物中的保护基。
4．权利要求3的方法，其中还原是在选自乙醚和四氢呋喃(THF)的溶剂中在氢化铝锂(LAH)的存在下进行。
5．权利要求4的方法，其中还原是在-30至30℃下进行。
6．一种下式(Ⅰb)所示化合物的制备方法，
其中R1-R3、R5和R6如权利要求1所定义，该方法包括，在溶剂中将下式(Ⅳ)所示化合物的双键氢化
其中P1-P3如权利要求3所定义，R2、R5和R6如权利要求1所定义，以便得到下式(Ⅴ′)表示的化合物，
其中P1-P3如权利要求3所定义，R2、R5和R6如权利要求1所定义，然后除去式(Ⅴ′)化合物中的保护基。
7．权利要求6的方法，其中溶剂是乙酸乙酯。
8．权利要求6的方法，其中保护基是苄基，且式(Ⅰb)的化合物从式(Ⅴ′)化合物中获得，或者通过在乙酸乙酯或者乙酸乙酯和低级醇的混合溶剂中进行氢化由化合物(Ⅳ)直接获得。
9．权利要求8的方法，其中溶剂是乙酸乙酯，且氢化在常温和2-4大气压下进行10-15小时。
10．权利要求8的方法，其中溶剂是乙酸乙酯和低级醇的混合物，且氢化在35-55℃和常压下进行20分钟-1小时。
11．一种下式(Ⅰc)所示化合物的制备方法，
其中R1-R3、R5和R6如权利要求1所定义，该方法包括，在酸的存在下于溶剂中将下式(Ⅴ)表示的化合物脱水，
其中P1-P3如权利要求3所定义，R2、R5和R6如权利要求1所定义，得到下式(Ⅵ)表示的化合物，
其中P1-P3如权利要求3所定义，R2、R5和R6如权利要求1所定义，然后将所得式(Ⅵ)的化合物还原和脱保护。
12．权利要求11的方法，其中脱水在选自苯、甲苯和二甲苯的溶剂中，在选自硫酸、磷酸和对甲苯磺酸的酸的存在下进行。
13．权利要求12的方法，其中脱水在80-100℃下进行。
全文摘要
本发明涉及一种具有酪氨酸酶抑制活性的由式(Ⅰ)表示的新1,3－二苯基丙烷衍生物及其制备方法:其中－表示双键或单键;R
文档编号A61K8/00GK1217709SQ98800210
公开日1999年5月26日 申请日期1998年3月2日 优先权日1997年3月6日
发明者李映昊, 金京爱, 李贤浩, 崔锺权, 李相和 申请人:Lg化学株式会社