先兆子痫胎盘间充质干细胞条件培养基用于在肿瘤治疗中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于肿瘤病理的疗法治疗的领域。
【背景技术】
[0002] 在过去几十年间，抗肿瘤疗法取得了重大进展，因此使得越来越多的病例有效地 改善预后，一旦预兆不好，从而使它们可以治疗或有时可以治愈。然而，如果肿瘤部位和疾 病阶段确实允许外科手术的话，常规的肿瘤治疗仍然是基于外科手术。外科手术通常伴随 化疗和/或放射疗法治疗，不幸的是伴有严重的副作用。化疗是全身给药的，因此它的细胞 毒性作用可不加区别地以癌症和健康细胞为作用目标，特别是那些表征为高增殖速率的组 织。实际上，化疗可能导致另外的病理状态的发作，如骨髓抑制和粘膜炎。放射治疗也会诱 导实际上由肿瘤区域辐射过程中的健康细胞DNA的损伤引起的严重的副作用。这种现象甚 至可以导致继发性肿瘤的形成。
[0003] 因此，临床肿瘤研宄集中在评估能够在肿瘤细胞上施加更强的靶向作用的替代性 治疗方法，例如通过使用治疗剂在癌细胞的生长和肿瘤细胞的转移性侵袭期间以及在肿瘤 新血管生成期间选择性地干扰这些特别活化的细胞机制。
[0004] 在更创新的解决方案中，基于干细胞的疗法，包括使用干细胞和在生理条件下由 干细胞产生的因子的那些方法起着重要的作用。
[0005] 特别地，最近的实验证据表明人胚胎干细胞能够分泌可以选择性抑制癌细胞的体 外增殖和肿瘤发生的营养因子。在分离自骨髓和脂肪组织的成人间充质干细胞（MSC)中也 报道了抗肿瘤活性。例如，在体内小鼠模型中观察到，静脉给药的人MSC能够选择性地迀移 向恶性组织，以在肿瘤基质中结合并且抑制癌细胞增殖。基于这种特殊的MSC朝着活性肿 瘤发生部位的定向运动，近来已经研发了针对MSC的另外的治疗应用。这些方法包括直接 在肿瘤区域利用间充质细胞作为载体来选择性地运载具有抗肿瘤活性的生物分子。
[0006] 尽管上面描述的很有前景的结果，但人干细胞在临床实践中的应用仍然是一个挑 战。人胚胎干细胞伴随着重要的伦理和生物安全问题，因为它们有限的特性使得难以预测 潜在的副作用，如继发性肿瘤的发生。另一方面，MSC的治疗性应用意味着通过高度侵袭性 的方法从骨髓或脂肪组织收获它们，以及由于其天然的低浓度（骨髓中〇. 001 %的单核细 胞），需要将这些细胞暴露于困难的和昂贵的体外扩增方法。
[0007] 最近的研宄报道了间充质中存在的胎盘绒毛膜绒毛和羊膜中存在的特定细胞群， 命名为胎盘间充质干细胞（PDMSC) (Huang YC，Yang ZM，Chen XH，Tan MY，Wang J，Li XQ，et al. Isolation of mesenchymal stem cells from human placental decidua basalis and resistance to hypoxia and serum deprivation. Stem Cell Rev. 2009 ;5 (3):247-55)〇 由于胎盘组织的独特的特征，这些细胞具有干细胞-间充质细胞表型，这赋予它们连同增 高的增殖和分化潜能，以及具有良好限定的寿命和受控的增殖速率的基本特征，从而降低 了与其体内使用相关的继发性肿瘤潜在形成的风险。此外，PDMSC能够发挥免疫抑制和抗 炎活性。
[0008] 基于上述独特的可塑性和分化性能，以及易于恢复和使用，胎盘组织、胎盘间充 质干细胞已经成为深入研宄的主题，主要在再生医学领域。RUster B.和他的同事报道了 MSC具备能力以便自发地迀移至损伤的器官和组织，以参与修复过程（RUster B，G0ttig SjLudwig RJjBistrian RjMliller SjSeifried Ej et al. Mesenchymal stem cells display coordinated rolling and adhesion behavior on endothelial cells. Blood. 2006 ； 108(12) :3938-44)。间充质干细胞的特有的缺乏免疫原性进一步支持其在再生医学中的 应用，免疫原型的缺乏是由于HLA-II和共刺激分子（⑶80、⑶86、⑶40)缺乏表达，需要这 种表达直接刺激T淋巴细胞并且赋予针对细胞毒性T淋巴细胞的抗裂解性。其它研宄表 明来源于生理性胎盘的羊膜上的PDMSC可以对肿瘤细胞系增殖施加抑制性作用（Magatti M, De Munari S, Vertua E, Parolini 0. Amniotic Membrane-Derived Cells Inhibit Proliferation of Cancer Cell Lines by Inducing Cell Cycle Arrest. J Cell Mol Med. 2012Jan 19. doi :10. 1111/j. 1582-4934. 2012. 01531. x.) 〇
[0009] 国际专利申请第WO 2013/093878号公开了使用由分离自足月的生理性人胎盘的 绒毛膜绒毛的PDMSC细胞调节的培养基用于治疗先兆子痫综合征。先兆子痫是一种严重的 人怀孕相关的综合征，表征为加剧的母体-胎盘炎症反应，普遍的内皮损伤和缺陷的胎盘 发育。
【发明内容】
[0010] 如在以下实验部分进行进一步的详细说明，本发明人观察到，通过在液体培养基 中培养由分离自患先兆子痫的人胎盘的胎盘间充质干细胞产生的条件培养基（CM)，对肿瘤 增殖和血管生成产生了令人惊讶的抑制效果。特别地，如图1所示，相比于对照组，通过上 述条件培养基治疗原发性和转移性肿瘤乳腺组织外植体诱导显著的和令人惊讶的VEGF表 达水平的下降（"血管内皮生长因子"），已知作为主要的血管生长因子参与肿瘤新血管发 生过程，以及转录因子JunB (激活蛋白-I (AP-I)家族的癌基因成员，其表达与差的乳腺癌 预后直接相关。这些细胞的治疗功效确实令人惊讶，因为通过培养生理胎盘间充质干细胞 获得的条件培养基通过刺激血管发生对肿瘤外植体施加相反的作用。
[0011] 施加于血管发生过程和肿瘤细胞增殖的实验证实的抑制作用（其证明对于晚期 癌症组织是特别有效的）强烈地表明条件培养基（通过在液体培养基中培养来自人先兆子 痫胎盘的胎盘间充质干细胞可获得）的临床抗肿瘤效果。
[0012] 本发明人遵循的以鉴定由先兆子痫PDMSC分泌的有助于协调上述CM抗肿瘤作用 的蛋白质的实验方法，是基于通过使用能够特异性地和同时地识别多种不同细胞因子、趋 化因子和生长因子的可商购的抗体芯片（antibody array)的培养基的蛋白质组学分析。蛋 白质组分析的结果允许鉴定以下提及的多个因子，其中，IP_l〇(干扰素 γ诱导的蛋白10) 和TARC(胸腺和活化调节的趋化因子）是关键的。
[0013] 因此，本发明的主题是通过在不含血清的液体基