含有非活的药用物质的乳剂的制作方法
【专利说明】含有非活的药用物质的乳剂
[0001] 发明背景
[0002] 本发明涉及一种包含水相和油相的乳剂，所述水相含有非活的（non-live)药用 物质。本发明还涉及一种防止（shield)用油相乳化的水相中存在的药用物质与油相相互 作用的方法，以及涉及包含作为抗原的杀灭的微生物或微生物亚单位的疫苗，所述抗原存 在于所述乳剂的水相中。
[0003] 含有非活的药用物质的水性组合物是药物领域中通常已知的。它们可以原样使 用，例如呈喷雾剂或口服给药制剂。当与活的药用物质比如活的微生物相比时，该药用物质 的稳定性在大多数情况下不是问题。一般而言，对于大多数非活的物质而言在水中的化学 腐解作用易于控制，例如通过将组合物贮存在低温（2_8°C)下和遮盖以避免UV辐射的影响 (通常通过将组合物贮存在普通的（regular)冰箱中）。而且，一般而言，水性制剂不具有 与载体流体有关的安全问题，因为在局部（例如经由口）或系统（例如肌内或经由局部施 用）给药后水不会引起任何不良反应。然而，对于某些应用，油相的存在是优选的，例如为 了刺激药用物质的功效（例如，在药用物质是抗原的情形下使用佐剂油）或为了产生更好 的生物利用度（例如使用油以产生更有效的局部施用）。因此，本领域通常制备含有药用物 质的水相和油相的乳剂。
[0004] 发明简述
[0005]申请人认识到使用这样的乳剂对于水相中存在的药用物质的功效可能是不利的。 在这样的乳剂中，即，存在其中水相和油相或其组分可以相互作用的巨大表面，这可能降低 药用物质的功效。特别地，当使用可能与非惰性油比如可代谢的油一起的非惰性药用物质 比如生物分子或灭活的（杀灭的）微生物时，油的存在的不利影响可能是显著的。而且当 使用惰性油时，油的存在可能是不利的，例如因为药用药物可倾向于集中在两相之间的表 面处，或者漏入油相中，或者与油相中的添加剂相互作用等。
[0006] 本发明的一个目的是提供一种改善的乳剂，其至少减轻由于药用物质与油相的相 互作用可引起的问题。为此目的，已经发明了根据前文的乳剂，其中水相包含至少30% w/ w的糖。令人惊奇地，已经表明通过加入大量的糖，可以减少或者甚至防止药用物质和油相 组分之间的可能的相互作用。先前预期通过向水相中加入糖（该过程固有地降低水相的极 性），水相和油相之间的相互作用应当增加。然而，与预期相反，似乎可以防止由药用物质 与油相（中存在的组分）相互作用导致的不利影响。此外，令人惊奇地观察到用该新乳剂 不存在安全问题（甚至是在肌内给药后），尽管存在非常高浓度的潜在的免疫原性糖。本 发明在非活的疫苗（典型地含有灭活的微生物或微生物亚单位作为抗原）的领域中是高度 有利的，其中疫苗的功效通常依赖于作为佐剂的油相的存在。典型的佐剂油是脂肪酸乙酯 (FAEE)、Drakeol6(可得自 Calumet Penreco, USA)、棉籽油、ISA763A 和 ISA50(都可得自 Seppic，France)、角藍烧、角藍稀、Marc〇l?52(可得自 Exxon Chemicals，USA)、a 生育酷 醋酸醋、Miglyol 840(Huls，Germany)。本发明可以通过防止抗原与油相相互作用来改善疫 苗的稳定性。一般而言，可以通过使用本领域已知的方法制备疫苗，所述方法基本上包括混 合抗原（或含有抗原的组合物）与可药用载体例如液体载体比如（任选地缓冲的）水。根 据疫苗的预期用途或所需性质，加入任选的其它物质比如保护剂、粘度调节剂或其它组分。
[0007] 注意到对于活的药用物质比如活的减毒的细菌或病毒，糖通常被称为产生其中微 生物具有比不存在稳定剂下更高存活率的环境的稳定剂。然而，活的微生物的稳定化是一 种与防止非活的物质与油相相互作用相比完全不同的方法。当非活的药用物质与所述物质 的水性载体和油相的乳剂中的油相相互作用时可能出现的问题，甚至与产生其中活的微生 物存活的环境的问题无关。
[0008] 定义
[0009] 乳剂：两种不溶混液体相的分散系统，其中存在稳定液-液界面的乳化剂。典型 地，分散相包含在0.05至IOOym之间的微滴。乳化剂典型地为表面活性试剂（通常是洗 涤剂或表面活性剂），但是也可以是包含胶体微粒的化合物。而且，微型气泡已经被描述为 乳化剂。
[0010] 非活的药用物质：不能通过基本的生物学过程（自我）复制，且可用于预防、治疗 或治愈活体动物（特别是人类或非人类动物）的疾病或病症的物质。典型的非活的药用物 质为小分子、生物分子比如抗体、蛋白质、多糖和灭活的微生物（典型地为杀灭的细菌或病 毒）。
[0011] 水性：在室温下能与水自由地混溶，即可混溶，从而可以形成稳定的均相。
[0012] 油：在室温和大气压下为液体的物质，该液体不能与水自由地混溶。
[0013] 水相：基本上基于水（作为载体介质）或另外的水性溶剂、或水和一种或多种水性 溶剂的混合物的相。
[0014] 油相：基本上基于油或油的混合物作为载体介质的相。
[0015] 糖：相对低分子量且典型地具有甜味的水溶性碳水化合物的组中的任一种。术语 "糖"包括还原糖（比如果糖和麦芽糖）、非还原糖（比如蔗糖和海藻糖）、糖醇（比如木糖 醇和山梨醇）、糖酸（比如葡糖酸和酒石酸）及其混合物。
[0016] 惰性的：在常规条件（即正常压力和室温）下基本上没有化学反应性，从而不会任 何实质性地参与化学反应。典型地，需要大量（活化）能量来驱动这样的反应，通常为热、 压力、辐射等形式，经常由催化剂来辅助反应。
[0017] 非聚合糖：单糖、二糖、三糖和寡聚糖分子，包含至多六个单体糖分子。
[0018] 生物学活性蛋白质：具有三维结构的任何蛋白质，使得所述蛋白质能够在活生物 体中诱导或干扰生理过程（比如代谢过程或免疫过程）。术语生物学活性蛋白质可以表示 全长蛋白质或其片段。生物学活性蛋白质的实例为酶、毒素、类毒素、任何（其它）免疫蛋 白质（例如微生物的表面蛋白或其片段）、抗体或其片段等。疫苗典型地含有一种或多种生 物学活性蛋白质，其呈活的或杀灭的微生物的一部分、或呈这种微生物的分离的或重组表 达的亚单位。
[0019] 可代谢的：是在给药至动物之后可被动物降解的（实质上利用一种或多种其代谢 过程）。
[0020] % w/w :相对于总质量的质量百分比。
[0021] 疫苗：适于应用于动物的组成物（constitution)，其包含免疫有效量的（即，能够 刺激目标动物的免疫系统，足以至少降低野生型微生物的攻击的不利作用）一种或多种抗 原，其在给药至动物后诱发免疫应答以治疗疾病或病症，即有助于预防、改善或治愈疾病或 病症。
[0022] 本发明的实施方案
[0023] 在第一个实施方案中，药用物质包含生物学活性蛋白质。尽管由于生物学活性蛋 白质是非活的，本领域通常推测其是相当稳定的，但是申请人认识到当存在于与油相构成 乳剂的一部分的水相中时，可能出现对蛋白质功效的不利影响。本发明似乎特别适于防止 生物学活性蛋白质受到这样的不利影响，因而改善了这些药用物质的使用的自由度。例如， 它们可以长时期贮存，或者储存在较高温度下，或者带到其中存在对其功效的可能影响的 任何其它环境中，而不会显著地损失其功效，或者在与其中水相不包含至少30% w/w的糖 的制剂相比时至少实质上更好地保持功效。
[0024] 在另一个实施方案中，药用物质包括杀灭的微生物。因为杀灭的微生物实际上是 包含多种生物学活性蛋白质的组成物，申请人认识到本发明可以有利地用于这类药用物 质。特别地，申请人发现本发明可以实质上影响其中杀灭的微生物是灭活的包膜病毒（特 别是有传染性的支气管炎（bronchitus)病毒或新城疫病毒）的组成物的功效。
[0025] 在仍然另一个实施方案中，水相分散在油相中。例如，乳剂具有W/0( "油包水"） 型。油包水型乳剂有能够具有低粘度的优点