病毒唑在制备治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用图
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及病毒唑在制备治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 急性淋巴细胞白血病（ALL)是一种起源于淋巴细胞的B系或T系细胞在骨髓内异 常增生的恶性肿瘤性疾病。异常增生的原始细胞可在骨髓聚集并抑制正常造血功能，同时 也可侵及骨髓外的组织，如脑膜、淋巴结、性腺、肝等。我国曾进行过白血病发病情况调查， ALL发病率约为0.67/10万。在油田、污染区发病率明显高于全国发病率。ALL儿童期（0~ 9岁）为发病高峰，可占儿童白血病的70%以上。ALL在成人中占成人白血病的20%左右。 [0003] Ph染色体是由第9号和第22号染色体易位t(9 ;22) (q34 ;qll)，导致bcr-abl融 合基因的形成，编码具有高酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白，通过激活下游多条生长 信号通路，使造血细胞不依赖于造血刺激因子而生长、增殖，并且抵抗凋亡，最终发生恶性 转化而发生白血病。Ph +急性淋巴细胞白血病（Ph+ALL)见于2%~5%儿童和20%~30% 成人急性淋巴细胞白血病，年龄超过50岁者甚至高达50%。
[0004] BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂（TKI)是Ph+白血病治疗的里程牌，伊马替尼是首个获 准上市的选择性BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂。TKI问世以前，Ph+ALL预后极差，尽管诱导化 疗的完全缓解率CR达60 %~90 %，但CR持续时间仅为9~16个月，单纯化疗5年生存率 仅10 - 20 %。异基因造血干细胞移植是根治Ph+ALL的手段，但却明显受限于供体的获得及 移植相关的高死亡率。虽然TKI显著改善了 Ph+ALL的预后，TKI与化疗联合使初治Ph+ALL 的完全缓解率达90%以上，但缓解持续时间短，复发率很高。而在复发、难治的Ph+ALL，伊 马替尼仅能使19%的患者获得完全血液学缓解，疗效持续时间2-3月，中位生存时间4. 9-9 个月。耐药是伊马替尼在Ph+ALL中疗效不持久的最重要因素。第二代酪氨酸激酶抑制剂 达沙替尼、尼罗替尼等虽然可以在一定程度上克服伊马替尼耐药，迅速改善患者的血液学、 遗传学指标，完全缓解率达90%以上，但还是因为耐药出现使得缓解期也很短暂。
[0005] 病毒唑，病毒唑又名利巴韦林、三氮唑核苷、尼斯可等，是广谱强效的抗病毒药物， 目前广泛应用于病毒性疾病的防治，未见将其用于治疗急性淋巴细胞白血病的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供病毒唑在制备治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用途。
[0007] 本发明提供了病毒唑在制备治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用途。
[0008] 其中，所述药物是以病毒唑为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制 剂。
[0009] 其中，所述制剂为口服制剂。
[0010] 其中，所述口服制剂是胶囊剂、片剂。
[0011] 其中，所述治疗急性淋巴细胞白血病的药物是治疗Ph+急性淋巴细胞白血病的药 物。
[0012] 本发明还提供了一种治疗急性淋巴细胞白血病的药物，它是以病毒唑为活性成 分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
[0013] 其中，所述制剂为口服制剂。
[0014] 其中，所述口服制剂是胶囊剂、片剂。
[0015] 本研究发现病毒唑能够有效治疗急性淋巴细胞白血病，特别是对Ph+急性淋巴细 胞白血病的疗效确切，可以制备成为治疗急性淋巴细胞白血病的药物，为临床治疗急性淋 巴细胞白血病提供了一种新的选择。
[0016] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【附图说明】
[0017] 图1病毒唑作用于Ph+淋巴细胞株的抗白血病作用的结果。A.不同浓度（30、60、 90、120 μΜ)的病毒唑分别作用于SUP-B15细胞持续24、48、72、96h，用MTT法检测细胞增 殖，图中显不的是细胞的生存率。
[0018] 图2病毒唑对SUP-B15细胞株的促凋亡作用的结果。A. 60 μ M病毒唑分别作用于 SUP-B15细胞24、48、72h，用流式分析annexinV-FITC和PI双染法检测细胞凋亡率。PBS作 为阴性对照。
[0019] 图3病毒唑可抑制SUP-B15细胞株的mT0R/eIF4E和MEK/ERK/Mnkl/eIF4E信号通 路表达结果。A. SUP-B15细胞被不同浓度（30、60、90μΜ)的病毒唑作用48h后，提取蛋白， western bolt检测mT0R/eIF4E信号通路以及Mcl-I的表达。B.SUP-B15细胞被60 μΜ病 毒唑分别作用24、48、72h后，用western bolt检测mT0R/eIF4E信号通路以及Mcl-I的表 达。
[0020] 图4病毒唑单用可抑制SUP-B15细胞株eIF4F复合物的合成的结果。A. SUP-15 细胞被病毒唑（30 μ M)作用48h。用500 μ I RIPA裂解液裂解I X IO7个细胞，离心所得总 蛋白的一半上清液中加入7m-GTP_Sepharose beads (GE Healthcare)孵育l_2h，离心所得 beads中加入50ul SDS-PAG上样缓冲液，煮沸7分钟，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋 白，用一抗eIF4G、eIF4E和4E-BP1进行免疫印迹。GAPDH作为内参水平。
【具体实施方式】
[0021] 实验例1本发明药物治疗急性淋巴细胞白血病的作用
[0022] 1.实验材料
[0023] I. 1细胞株
[0024] SUP-B15人类Ph+急性淋巴细胞细胞株，表达P190BCR-ABL融合基因 （the American Type Culture Collection, CRL-1929)
[0025] 各类急性白血病及慢性粒细胞白血病原代细胞（Ph+ALL，PhALL，AML，CML):均来 自四川大学华西医院血液科，采集外周血及骨髓标本前得到书面同意并获得医院伦理委员 会的通过和批准。收集分离方法：选取符合纳入标准的急性白血病患者，于无菌条件下抽 取外周血或骨髓3-4ml于肝素抗凝的无菌试管中。取15ml无菌离心管，将所取外周血加入 等体积无菌PBS溶液中，按1:1比例稀释。另取一只15ml无菌离心管，预先加入等体积人 淋巴细胞分离液，将稀释后的外周血沿管壁缓慢加入淋巴细胞分离液试管内，使二者形成 清晰界面，以2000RPM(每秒2000转）离心25min。取出离心管，吸取中间层单个核细胞， 置于另一离心管中，PBS洗涤细胞2次，1000RPM离心5min，弃去上清，用10%胎牛血清的 RPMI-1640培养基重悬细胞。
[0026] 1. 2实验药物
[0027] 病毒唑（RIB) :sigma公司
[0028] 1. 3实验试剂
[0029] 小牛血清、青链霉素 、RPMI 1640、MM培养基为hyclo公司产品；MTT为sigma 公司产品；十二烷基硫酸钠（SDS)为Sigma公司产品，异丁醇、浓盐酸为天津天大化学试 剂厂产品；BCA蛋白定量试剂盒为Thermo公司产品；RIPA buffer为碧云天公司产品；人 淋巴细胞分离液$。〇11液）为天津灏阳公司产品；一抗：？41(1'(5473)、？111'01?(52448)、 P-4EBP1 (T37/46)、p-eIF4E (S209)、p-cRaf (Ser338)、p-MEKl/2 (Ser217/221)，p-ERKl/2 (T hr202/Tyr204)、p-Mnkl (Thr 197/202)、p-Lyn(Tyr396)、Mcl-I、AKT、mT0R、4E-BPl、eIF4E、 MEK、Mnkl、Cyclin Dl (美国 Cell Signaling Technology 公司），GAPDH 和辣根过氧化物酶 标记的二抗购自碧云天公司。
[0030] L 4实验仪器
[0031] 超净工作台：苏州净化设备公司
[0032] CO2恒温培养箱