溶液的离子强 度等，使内部药物的过饱和溶液或凝胶沉淀进一步转化为稳定的药物结晶，可以大大延缓 药物的释放，最终达到缓释的效果。
[0021] 本发明所制备的脂质体大部分为单室，药物在其内部为球状或针束状，电镜图如 图1。平均粒径~180nm，能够更好地利用肿瘤的EPR效应，实现对肿瘤的被动靶向，包封率 > 90%，载药量> 9%，zeta电位< -40mV，稳定性良好。
[0022] 经过低温老化的脂质体，通过电镜观察，可见其内部的药物针束状结构增加（图 1)，通过DSC分析，发现新鲜制备的脂质体在药物熔点270°C附近没有熔融峰，说明药物为 无定型，而经过老化后的脂质体出现了明显的吸热峰，表明所包裹的药物发生了晶型转变 (图 2)。
[0023] 稳定性试验表明，脂质体混悬液在5%葡萄糖溶液中储存80天，其粒径，zeta电 位，包封率未发生显著性变化，表明稳定性良好。
[0024] 采用pH7. 4的PBS溶液为释放介质，以透析法考察脂质体的释放行为，结果（如图 3)表明未经老化的脂质体在Ih后药物发生泄漏，累积释放达90%以上，而经过老化的脂质 体释放缓慢，24h的累积释放量小于30%，该结果与DSC结果一致，表明脂质体经过老化后， 药物形成结晶，从而增加了在脂质体内部的滞留，且不影响药物的释放。
【附图说明】
[0025] 图1为脂质体的冷冻透射电镜图。图中显示新鲜制备的脂质体具有双层膜结构， 内部阴影部分为包裹药物，其大部分呈圆形，少量为针束状沉淀（A)，而经过老化后的脂质 体内部药物大部分呈针束状，甚至具有多个针束排列（B)。
[0026] 图2为药物及含药脂质体的差示扫描量热量分析图，从图中看出，药物（D)的熔点 在270°C附近，新鲜制备的脂质体（B)以及以超速离心后的凝胶状态储存的脂质体（A)在加 热以后，并未出现药物的熔融峰，而在溶液中老化的脂质体（C)出现了药物的熔融峰。
[0027] 图3为新鲜制备的和等渗溶液中老化的脂质体在pH7. 4的PBS溶液中的释放行 为。
【具体实施方式】
[0028] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，他 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0029] 实施例1 :
[0030]
[0031] 将处方量的二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬质酰磷脂酸胆碱，胆固醇溶于甲醇和氯仿 (体积比为1 : 3)的混合溶剂中，完全溶解后，在旋转蒸发仪上减压蒸发得到均匀的磷脂 膜，采用Iml的250mM磷酸铵水溶液水合，超声，得到脂质体混悬液后，过IOOnm滤膜挤出后 得到空白脂质体，透析法除去外部的磷酸铵。将Asulacrine与羟丙基-P-环糊精混合配 成Iml溶液后，与空白脂质体在37°C水溶下孵育1. 5小时，超高速离心除去未包封药物，得 到载药脂质体沉淀，用〇. 9%氯化钠溶液混悬，于4°C储存10天进行老化。所制备的脂质体 的平均粒径为153. 3nm，包封率为95 %，24h累计释放量为35 %。
[0032] 实施例2 :
[0033]
[0034] 制备工艺及脂质体老化条件同实施例1，所制备的脂质体的平均粒径为183. 3nm， 包封率为94 %，24h累计释放量为33 %。
[0035] 实施例3:
[0036]
[0037] 制备工艺同实施例1，得到载药脂质体沉淀，用0. 12MpH7. 4的磷酸盐溶液混悬， 于4°C储存20天进行老化。所制备的脂质体的平均粒径为170. 5nm，包封率为91 %，24h累 计释放量为29 %。
[0038] 实施例4 :
[0039]
[0041] 制备工艺同实施例1，得到载药脂质体沉淀，用0. 12MpH7. 4的磷酸盐溶液混悬， 于4°C储存30天进行老化。所制备的脂质体的平均粒径为165. 6nm，包封率为97%，24h累 计释放量为32%。
[0042] 实施例5 :
[0043]
[0044] 制备工艺同实施例1，得到载药脂质体沉淀，用5%葡萄糖溶液混悬，于4°C储存40 天进行老化。所制备的脂质体的平均粒径为185. 6nm，包封率为93%，24h累计释放量为 27%。
[0045] 实施例6:
[0046]
[0047] 制备工艺同实施例1，得到载药脂质体沉淀，用5%葡萄糖溶液混悬，于4°C储存50 天进行老化。所制备的脂质体的平均粒径为185. 6nm，包封率为92%，24h累计释放量为 29%〇
【主权项】
1. 一种Asulacrine脂质体，其特征是：由药物，磷脂，胆固醇，为原料制备而成，药物在 核心可形成沉淀，防止药物泄露。2. 权利要求1的药物制剂，各组分以摩尔比计算，所占的比重为：药物5%~26%，磷 脂占25%~60%，胆固醇占5%~40%。3. 权利要求1的药物制剂的特征在于所用磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂、二棕榈酰磷脂 酰胆碱，二硬质酰磷脂酸胆碱，或二棕榈酰磷脂酰甘油，二硬质酰磷脂酰甘油中的一种或几 种任意比混合物。4. 根据权利要求1所述的制剂，其平均粒径大小在80~200nm之间。5. 权利要求1-4所述的任一种脂质体的制备方法，其特征在于采用铵盐梯度载药法， 其药物溶液采用环糊精增溶的过饱和溶液，通过控制载药溶液的pH和温度得到高载药量 的脂质体，制备后于低温的等渗溶液中储存使内核药物老化沉淀。6. 权利要求5所述的制备方法其特征在于，所使用的铵盐可以是硫酸铵，磷酸铵，碳酸 铵中的任一种。7. 权利要求5所述的制备方法其特征在于，增溶药物溶液的环糊精为低浓度的羟丙 基-P -环糊精，磺丁基醚-P -环糊精溶液。8. 权利要求5所述的制备方法其特征在于，低温储存所使用的等渗溶液可以是葡萄糖 溶液，蔗糖溶液，生理盐水，磷酸盐溶液。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及一种新的抗癌药物脂质体的制备方法。Asulacrine是一种水难溶性及亲脂性较强的抗癌药物，将其制备成脂质体，很容易发生泄漏，本发明将采用改良的主动载药和老化内核药物沉淀的方法，增加药物的包载量以及脂质体的稳定性，此方法工艺简单，操作方便，能够达到临床所需剂量，并能有效地预防脂质体中药物的泄露。
【IPC分类】A61K9/127, A61P35/00, A61K47/40, A61K47/24, A61K31/473
【公开号】CN105030673
【申请号】CN201510292099
【发明人】王广基, 吴子梅, 张文丽, 臧筱洁, 刘建平, 孙建国, 周芳, 张经纬
【申请人】中国药科大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年5月28日