秦皮甲素在制备防治骨质疏松药物中的应用
【技术领域】
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[0001]本发明属于医药领域，具体涉及秦皮有效成分在防治骨质疏松中的应用。
【背景技术】
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[0002]骨质疏松是一种以骨量减少，骨微结构破坏，导致骨脆性增加，容易发生骨折为特征的全身代谢性骨病。骨质疏松可发生于任何人群和任何年龄，在绝经后妇女和老年人中极为常见，是威胁老年人健康和降低生活质量的重要因素。
[0003]骨质疏松已成为当今全球仅次于心血管疾病、受害人群最多、最具危害性且尚未能治愈的慢性疾病。据世界卫生组织估计，全球患者可达到2亿例，其发病率已经跃居世界各种常见病的第7位，严重威胁着人类的身心健康，带来了沉重的家庭、社会与经济负担。
[0004]骨代谢平衡是由成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收两个动态过程精妙地调控的。当骨吸收超过骨形成时，会出现骨量减少，可发生骨丢失，和骨质疏松。因此，任何能够直接或间接作用于成骨细胞和/或破骨细胞，有助于保持其代谢动态平衡的物质，均有可能具有防治骨质疏松的作用。
[0005]破骨细胞是来源于单核-巨噬细胞系具有吸收能力的多核细胞[TeitelbaumSL.Science, 2000, 289:1504 - 8.]。成熟的破骨细胞有多种分子标记物，包括抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K (Cath印sin K)、空破质子v-ATP (v_ATPased2)等。由于破骨细胞能分泌抗酒石酸酸性磷酸酶，TRAP染色呈阳性，所以TRAP染色阳性可作为体外培养破骨细胞最具特异性的指标。
[0006]RANKL是由成骨细胞/基质细胞合成的一种具有刺激集落刺激因子群分化成破骨细胞作用的细胞因子。RANKL与下游的TRAP集合后，可以活化NF- κ B，从而导致破骨相关基因的表达。NF-K B是参与破骨细胞分化和成熟的关键性转录因子[Chaisson ML et al.JB1l Chem, 2004，279:54841-48]。
[0007]基质金属蛋白酶(MMP)，属于锌结合蛋白肽链内切酶家族，为包括组织在内的多种组织细胞外机制降解所必须。MMP，尤其是MMP9在破骨细胞中高表达，是降解细胞外基质，参与骨重建的重要蛋白酶，在破骨活性增加的骨吸收中起重要作用。
[0008]骨质疏松的药物治疗已经成为世界性课题。目前临床治疗骨质疏松的药物主要分为:促进骨形成药、抑制骨吸收药和改善骨组织药等3种类型。
[0009]促进骨形成药主要有:氟化物、甲状旁腺激素及类似化合物、维生素D及其衍生物、生长因子、他汀类药物、前列腺素E2类药物、锶盐等；
[0010]抑制骨吸收药主要有:雌激素类、降钙素、双膦酸盐类等；
[0011]改善骨组织药药主要有:钙剂、蛋白质、维生素C等。
[0012]此外，由于中药具有整体调治、疗效好、毒副作用小等优点，如何利用中药现代化技术从传统中药里寻找新的高效低毒的骨质疏松治疗药物，已成为目前治疗骨质疏松症药物研发的重要方向。常用的中药主要有淫羊藿、熟地、杜仲、黄芪、补骨脂、当归、骨碎补、龟甲、山药、丹参、茯苓、菟丝子、鹿角胶、山茱萸、肉苁蓉、枸杞子等。动物实验及临床实验均显示，从传统中药中通过药理实验(包括高通量筛选)筛选治疗骨质疏松的有效成分，具有巨大的开发潜力。
[0013]秦皮是木犀科植物白錯树Fraxinus chinensis Roxb等五种植物的干燥枝皮或树干皮，是我国一味常用中药，始载于汉代的药学专著《神农本草经》，历代本草均有记载。秦皮具有清热燥湿、收涩、明目之功效，常用于治疗热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等症。现代药理研究表明，秦皮具有抗炎镇痛、降低尿血酸、抗凝、止咳祛痰平喘以及抗肿瘤作用，主要用于治疗肠炎、痢疾、白带、慢性气管炎、结膜炎，用于治疗痛风效果甚佳。正品秦皮中主要成分为香豆素类(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、宿柱白蜡苷、6，7_ 二甲氧基香豆素等，此外还有酚类、皂苷和鞣质等，其中秦皮甲素、秦皮乙素是治疗气管炎和菌痢疾患的有效成份。然而，涉及本发明所述秦皮甲素在防治骨质疏松中应用，迄今为止，尚未见有国内外的相关报道。
[0014]本发明的目的是，提供秦皮甲素在制备防治骨质疏松药物中的应用。
【发明内容】
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[0015]为了提供秦皮甲素在防治骨质疏松中的应用，本发明采取以下技术方案:
[0016]采用研究破骨细胞体外生物学行为的常用细胞模型单核巨噬细胞RAW264.7细胞，该细胞在核因子受体活化因子配体(RANKL)刺激诱导下可以向破骨细胞分化。
[0017]I，检测秦皮甲素抑制RANKL诱导NF- κ B的转录活化效应；
[0018]2，检测秦皮甲素抑制多核成熟破骨细胞的形成作用；
[0019]3，检测秦皮甲素抑制破骨细胞分化基因TRAP、ΜΜΡ9、Cath印sin K、v_ATPased2的基因表达。
[0020]发明效果:
[0021]本发明的有益效果在于，公开了秦皮甲素在制备防治骨质疏松的药物中的应用，在有效剂量内对RAW264.7细胞没有明显的细胞毒作用，能够抑制RANKL诱导的NF- κ B转录活化效应，抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的形成。与此同时，可以降低TRAP、MMP9、Cathepsin K、v-ATPased2等破骨细胞分化特异基因的表达，抑制骨吸收，最终起到防治骨质疏松的作用。由于秦皮甲素为纯天然物质，用药安全，毒副作用小，可用于骨质疏松的防治。
【附图说明】
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[0022]图1:秦皮甲素对RAW264.7细胞的细胞毒作用
[0023]图2:秦皮甲素对RANKL诱导的NF- κ B转录活性效应的影响。
[0024]其中:横坐标-不同浓度的秦皮甲素的给药剂量；纵坐标-各组荧光值与空白对照组荧光值相比较百分数表述的NF- κ B转录活性
[0025]图3:秦皮甲素对RANKL抑制破骨细胞形成
[0026]图4:秦皮甲素抑制破骨细胞内分化TRAPXatkpsin K、MMP9、v_ATPased2的mRNA表达
[0027]实施方式:
[0028]以下实施例仅为帮助本领域技术人员更好地了解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例中未标明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0029]《实施例1》秦皮甲素对RAW264.7细胞的细胞毒作用
[0030]将RAW264.7细胞(购自中国医学科学院基础医学研究所细胞培