一种长链非编码rna hnf1a-as1在制备治疗人体恶性实体瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因治疗和医学诊断领域，具体地，本发明涉及一种长链非编码RNA HNF1A-AS1 (Hepatocyte Nuclear Factor-laAntisense 1)在制备治疗人体恶性实体瘤药 物中的应用，提供了 一种治疗恶性实体肿瘤的新靶点。
【背景技术】
[0002] 恶性实体瘤的治疗是目前临床的难点之一，尤其对于手术无法切除的恶性实体 瘤，临床尚缺乏有效的治疗手段。选择与肿瘤细胞发生发展密切相关的关键分子和基因进 行特异性靶向调控是恶性实体瘤治疗的核心问题之一。
[0003] 长链非编码RNA(long noncoding RNA, IncRNA)系一类转录本长度超过200nt (核 苷酸单位）的RNA分子，由于这类RNA分子缺少特异完整的开放阅读框，因而不编码蛋白 质。目前的研究认为仅有2 %的人类基因组序列是编码蛋白的基因，而约60%以上的人类 基因组序列可转录为长链非编码RNA。既往的研究显示长链非编码RNA可广泛参与基因表 达和功能的调节，具有丰富多样的生物学功能，在基因表达调控和信号转导过程中具有重 要功能。在肿瘤细胞中，长链非编码RNA也发挥重要的调控作用，与编码基因（mRNA) -样 可以作为肿瘤诊断和预后判段的分子标志物，同时也是潜在分子靶向治疗的靶点，具有良 好的临床应用价值。
[0004] 长链非编码RNA数量极大、基因组定位形式多种多样，分类复杂。其中一类位 于两个基因之间的长链非编码RNA(Large Intergenic Noncoding RNA，IincRNA)，由 于其基因位置不与其他基因存在重合，是目前研究领域中较常见及功能较为重要的一 类长链非编码RNA。此外，某些长链非编码RNA仅在特定的发育阶段出现，或特异性地 表达于某些组织或细胞，具有精确的亚细胞定位，提示这些长链非编码RNA可能具有重 要的生理功能。也有研究表明，LncRNA的特异性表达和/或表达变化与恶性肿瘤的发 生发展密切相关（Lee, J. T. ? Epigenetic regulation by long noncoding RNAs. Scien ce. 2012. 338 (6113) : 1435-1439.)。尽管长链非编码RNA数量庞大，但目前功能明确的长链 非编码RNA数量还是极少。
[0005] 长链非编码 RNA HNF1A-AS1 (Hepatocyte Nuclear Factor-1aAntisense 1)为 一仅在消化系统器官如肝、胃肠道等特异表达的长链非编码RNA，其基因位于编码基因肝 细胞核因子Ia (Hepatocyte Nuclear Factorla)上游的反义链上，属于基因间长链非 编码RNA(IincRNA)。尽管有研究认为HNF1A-AS1可能在食道癌、肺癌中表达升高（Yang X, Song JH, Cheng Y, et al. Long non-coding RNA HNFIA-ASI regulates proliferation and migration in oesophageal adenocarcinoma cells. Gut, 2014, 63(6):881-90.)(ffu Y, Liu H, Shi X, Yao Y, Yang ff, Song Y. The long non-coding RNA HNFlA-ASlregulates proliferation and metastasis in lung adenocarcinoma. Oncotarget.2015 ； 6:9160-72.)，但其在其他恶性肿瘤中的作用及其完整的基因信息均未见报道。
[0006] 目前HNF1A-AS1无论文献还是数据库所公布的序列均不完整。
[0007] 目前尚无文献报道HNF1A-AS1可用于治疗恶性肿瘤。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于寻找到能够有效用于人体恶性实体瘤治疗的一种长链非编码 RNA0
[0009] 本发明的另一目的在于提供一种长链非编码RNA HNF1A-AS1的新的医药用途，具 体是在制备治疗人体恶性实体瘤药物中的应用。
[0010] 本发明在研究HNF1A-AS1过程中发现其在肝癌中表达下降；利用分子生物学手段 克隆HNF1A-AS1的全长，发现本发明得到的全长HNF1A-AS1对肝癌细胞的恶性表型具有显 著抑制作用，是恶性肿瘤潜在的治疗靶点。
[0011] 本发明的主要技术方案是：本发明首次发现了 HNF1A-AS1基因/RNA可有效地在 体内抑制恶性实体瘤的恶性表型。实验表明，HNFla不仅对肿瘤细胞增殖有影响，更可抑 制实体瘤细胞的迀移和侵袭、降低肿瘤细胞的成瘤性。因此HNF1A-AS1作为首次被证实的 可有效地在抑制恶性实体瘤恶性表型的关键基因/RNA，具有潜在的应用前景。本发明人 在此基础上完成了本发明，提供一种抑制恶性实体瘤细胞恶性表型的长链非编码RNA基因 HNF1A-AS1基因及其转录产物HNF1A-AS1RNA，以及HNF1A-AS1基因/RNA在治疗实体瘤中的 用途。
[0012] 本发明的第一方面，提供了一种长链非编码RNA HNF1A-AS1 (Hepatocyte Nuclear Factor-IaAntisense 1)在制备治疗人体恶性实体瘤药物中的应用。
[0013] 本发明所述的长链非编码RNAHNF1A-AS1的基因cDNA序列如SEQIDNO: 1所示。
[0014] 本发明所述的长链非编码RNA HNF1A-AS1的基因序列与NCBI数据库提供的 HNF1A-AS1基因序列（基因ID:NR_024345. 1)相比较，5'末端有330bp的延伸（如图4中 方框所标序列），全长为2785bp，是一连续序列无其他剪切形式的长链非编码RNA。
[0015] 本发明所述的治疗人体恶性实体瘤药物，可以提高长链非编码RNA基因 HNF1A-AS1基因或其转录产物HNF1A-AS1 RNA的表达量。
[0016] 所述的提高长链非编码RNA基因HNF1A-AS1基因或其转录产物HNF1A-AS1 RNA的 表达量的药物，包括但不限于：
[0017] I) HNFIA-ASl RNA ;
[0018] 2)HNFIA-ASl 基因；
[0019] 3)含有HNF1A-AS1基因的表达载体。
[0020] 本发明所述的治疗人体恶性实体瘤药物，也可以是药物组合物，所述的药物组合 物包含以上1)至3)任一活性成份以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0021 ] 所述的表达载体，包括重组质粒、重组病毒、重组病毒载体、非病毒载体等。
[0022] 重组病毒，优选腺病毒、慢病毒等。
[0023] 非病毒载体，优选脂质体或其他靶向介质。
[0024] 在本发明的一个优选例中，所述的人体恶性实体瘤选自：肝癌、胃癌、肠癌、胰腺 癌、前列腺癌或生殖腺肿瘤等。
[0025]在本发明的另一个优选例中，所述的药物组合物还用于体内抑制实体瘤的形成。
[0026] 在本发明的另一个优选例中，所述的人体恶性实体瘤为肝癌，包括但不限于肝肿 瘤细胞株 Huh7、Ifep3B、MHCC 等。
[0027] 在本发明的另一个优选例中，所述的HNF1A-AS1是人的HNF1A-AS1。
[0028] 在本发明的另一个优选例中，所述的药物为慢病毒重组质粒p⑶H-HNF1A-AS1。
[0029] 在本发明的另一个优选例中，所述的药物组合物的剂型为注射剂。
[0030] 在本发明的另一个优选例中，所述的药物组合物还含有化疗剂。
[0031] 在本发明的第二方面，提供了一种在哺乳动物中抑制恶性实体瘤的方法，它包括 步骤：给需要治疗的哺乳动物对象施用HNF1A-AS1RNA或含所述基因序列的表达载体。
[0032] 在本发明的另一个优选例中，所述的哺乳动物是人。
[0033] 术语解释
[0034] 如本文所用，术语"基因/RNA"指基因和/或RNA。
[0035] 如本文所用，术语"HNFIA-ASl基因"、"HNFIA-ASl RNA"可互换使用，都指 HNF1A-AS1 RNA。狭义上，所述术语指人的HNF1A-AS1;广义上，所述术语不仅包括人的 HNF1A-AS1，还包括其他哺乳动物的HNF1A-AS1，尤其是灵长类动物的HNF1A-AS1，如猿或猴 的HNF1A-AS1。该术语还包括HNF1A-AS1 RNA的活性片段、活性衍生物和类似物。
[0036] 本发明RNA可以是天然RNA、合成RNA。本发明的RNA可以是天然纯化的产物，或 是化学合成的产物，或体外转录产生。
[0037] 如本文所用，术语"片段"、"衍生物"和"类似物"是指基本上保持本发明的天然 HNF1A-AS1RNA相同的生物学功能或活性的RNA片段。根据本文