一种长链非编码RNA lncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种长链非编码RNA?lncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用。lncRNA-BcrAR在Bcr-Abl阳性的人类慢性髓性白血病细胞系K562中表现为低水平表达。构建过表达lncRNA-BcrAR的K562细胞系，观察lncRNA-BcrAR在Bcr-Abl诱导的细胞恶性转化过程中的作用，表明lncRNA-BcrAR的过表达能够明显促进K562细胞走向Imatinib（Abl阳性白血病患者治疗药物）诱导的细胞凋亡，并且能够显著抑制K562细胞在裸鼠体内诱导的肿瘤生长。另外，lncRNA-BcrAR的过表达能够明显促进A-MuLV转化的小鼠白血病细胞BC44走向Imatinib诱导的细胞凋亡。本发明揭示lncRNA-BcrAR在抗Bcr-Abl和v-Abl介导的细胞癌变过程中发挥重要的作用，为Abl诱导的白血病的诊疗提供新的分子标记和药物靶点。
【专利说明】—种长链非编码RNA I ncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种非编码RNA及其应用，具体涉及一种长链非编码RNAIncRNA-BcrAR及其在抗细胞癌变中的应用。
【背景技术】
[0002]Abl是一类可诱导包括淋巴细胞在内的多种细胞恶性转化的重要癌基因，包括v-Abl、Bcr_Abl 和 Tel-Abl 等。v-Abl 是 Abelson 鼠白血病病毒(Abelson murine leukemiavirus，简称A-MuLV)的致癌基因。A-MuLV主要诱导鼠淋巴细胞恶性转化，从而引发小鼠急性淋巴瘤的产生。Bcr-Abl是由于人类细胞染色体易位使Bcr与c-Abl的C端接合而形成的融合基因，其表达产物为融合癌蛋白。Bcr-Abl是诱发人类慢性髓性白血病(ChronicMyelogenous Leukemia, CML)最关键的癌基因，也可引起人淋巴细胞恶性转化。尽管进行了多年研究，但是关于Abl诱导细胞癌变的分子机制仍不完全清楚。
[0003]长链非编码RNA(long noncoding RNA, IncRNA)是转录组的一个重要组成部分,在细胞生命活动中发挥着重要而广泛的作用，近年来受到高度重视。随着对长链非编码RNA研究的深入，发现越来越多的长链非编码RNA与肿瘤的发生、发展密切相关。但是，对于Abl的作用机理，当前大多集中在研究Abl癌基因与诸多蛋白编码基因的相互调控上。关于长链非编码RNA在Abl介导的细胞癌变过程中的作用，以及长链非编码RNA在抗Abl诱导的白血病中的应用，目前尚未 见报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种长链非编码RNA IncRNA-BcrAR,以及IncRNA-BcrAR在抗细胞癌变中的应用。本发明所述长链非编码RNA IncRNA-BcrAR，其转录本序列如SEQ IDN0:3所示的核苷酸序列，是与人类慢性髓性白血病发生相关的长链非编码RNA。
[0005]实现本发明目的的技术方案如下:使用长链非编码RNA (long noncoding RNA,IncRNA)芯片检测K562细胞中IncRNA的表达情况，人为干扰K562细胞中的Bcr-Abl基因后，IncRNA-BcrAR的表达明显上调，提示IncRNA-BcrAR可能参与到Bcr-Abl诱导的细胞恶性转化过程。提取K562细胞总RNA，反转录合成cDNA，设计IncRNA-BcrAR PCR扩增用引物，进行PCR扩增，首次克隆得到IncRNA-BcrAR基因。构建IncRNA-BcrAR过表达的Bcr-Abl或者v-Abl转化的白血病细胞系(分别为K562和BC44细胞)，研究IncRNA-BcrAR在Abl介导的细胞癌变中的作用，以及IncRNA-BcrAR在抗Abl诱导的白血病中的应用。
[0006]本发明的一种长链非编码RNA IncRNA-BcrAR，其转录本序列为序列表中SEQ IDNO: 3所示的核苷酸序列；重组质粒pMSCV-lncRNA-BcrAR，含有所述IncRNA-BcrAR的核苷酸序列；质粒pSIH-Bcr-Abl shRNA含有核苷酸序列I和核苷酸序列2 ；
所述核苷酸序列1:
5’ -GATCCGCAGAGTTCAAAAGCCCTTcttcctgtcagaAAGGGCTTTTGAACTCTGCtttttg-3’ ；所述核苷酸序列2:
5’ -AATTCAAAAAGCAGAGTTCAAAAGCCCTTTCTGACAGGAAGAAGGGCTTTTGAACTCTGCG-3' 本发明还保护所述长链非编码RNA IncRNA-BcrAR在抗细胞癌变中的应用。
[0007]本发明的优点:
本发明的IncRNA-BcrAR在人类慢性髓性白血病细胞系K562中呈现低水平表达，在Bcr-Abl介导的细胞恶性转化及肿瘤形成过程中发挥重要作用。人为过表达K562细胞中的IncRNA-BcrAR，能够明显促进细胞走向Imatinib (Abl阳性白血病患者治疗药物)诱导的细胞凋亡，并且显著抑制K562白血病细胞在裸鼠体内诱导的肿瘤生长。另外，IncRNA-BcrAR在v-Abl介导的细胞转化中也发挥重要作用。在A-MuLV转化的小鼠白血病细胞BC44中，IncRNA-BcrAR的过表达，能够明显促进细胞走向Imatinib诱导的细胞凋亡，表明IncRNA-BcrAR在抗Abl诱导的细胞癌变中发挥重要作用，为Abl阳性白血病的诊疗提供新的分子标记和药物靶点。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1为K562细胞(人类慢性髓性白血病细胞系)中IncRNA-BcrAR的表达示意图。图中0、24、48、96分别表示pSIH-Bcr-Abl shRNA包装病毒感染K562细胞的时间(小时)。
[0009]图2为Nortehern blot检测K562细胞中IncRNA-BcrAR的表达不意图。
[0010]图3为过表达IncRNA-BcrAR的K562细胞系中IncRNA-BcrAR的表达示意图。
[0011]图4为过表达IncRNA-BcrAR的K562细胞系的细胞凋亡检测结果示意图。
[0012]图5为过表达IncRNA-BcrAR的K562细胞系的裸鼠肿瘤生长曲线。
[0013]图6为过表达IncRNA-BcrAR的BC44细胞系(A-MuLV转化的小鼠白血病细胞系)中IncRNA-BcrAR的表达示意图。
[0014]图7为过表达IncRNA-BcrAR的BC44细胞系的细胞凋亡检测结果示意图。
【具体实施方式】
[0015]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0016]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0017]K562细胞(人类慢性髓性白血病细胞系):美国标准生物品收藏中心(AmericanType Culture Collection, ATCC)，编号为 CCL-243。
[0018]293T细胞(人胚肾细胞系):美国标准生物品收藏中心(American Type CultureCollection, ATCC)，编号为 CRL-3216。
[0019]BC44细胞(A-MuLV转化的小鼠白血病细胞系):中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC),编号 CGMCC N0.4910。
[0020]实施例1、IncRNA-BcrAR在人类慢性髓性白血病细胞系中的表达 一、人类慢性髓性白血病细胞系K562中IncRNA-BcrAR的表达
使用IncRNA芯片检测K562细胞中IncRNA的表达情况，人为干扰K562细胞中的Bcr-Abl基因后，IncRNA-BcrAR的表达明显上调，提示IncRNA-BcrAR可能参与到Bcr-Abl诱导的细胞恶性转化过程。SEQ ID NO: 3所示核苷酸序列编码IncRNA-BcrAR基因，基因位置为 Chromosome 11; 5265784-5269453。
[0021]二、干扰Bcr-Abl基因的K562细胞系构建
1、携带 Bcr-Abl 特异性 shRNA 的质粒 pSIH-Bcr-Abl shRNA 构建采用慢病毒载体pSIH-Hl表达shRNA的方法来干扰K562细胞中的Bcr-Abl基因。合成如下序列I (SEQ ID NO:1)所示的单链DNA和序列2 (SEQ ID NO:2)所示的单链DNA (在两个单链DNA的5’端直接引入酶切位点的粘性末端，序列I和序列2分别引入BamHI和EcoRI )，退火得到双链DNA ;用限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切慢病毒表达载体pSIH_Hl(System Biosciences),回收载体骨架；将退火的双链DNA和回收的载体骨架连接,转化大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒，送交上海生物工程技术服务有限公司，进行DNA序列测定，鉴定正确的质粒名称是pSIH-Bcr-Abl shRNA。
[0022]序列 1:
5’ -GATCCGCAGAGTTCAAAAGCCCTTcttcctgtcagaAAGGGCTTTTGAACTCTGCtttttg-3’ ；
序列2:
5’ -AATTCAAAAAGCAGAGTTCAAAAGCCCTTTCTGACAGGAAGAAGGGCTTTTGAACTCTGCG-3>。
[0023]2、病毒包装
应用293T细胞系包装病毒。293T细胞培养于DMEM (Gibco)培养基，完全培养基中添加终浓度100 units/mL青霉素、100 units/mL链霉素和10%胎牛血清(Gibco)，置于37°C，饱和湿度，5% CO2浓度的细胞培养箱中培养。于10 cm培养皿中培养至70-80%汇合时，按照Lipofectamine (Invitrogen)转染试剂说明书，将pSIH-Bcr-Abl shRNA与慢病毒载体包装质粒PLP1、PLP2和PLP/VSVG (Invitrogen)共转染293T细胞，48-96 h后收集细胞上清，上清中含有编码Bcr-Abl shRNA的假病毒颗粒。
[0024]3、细胞感染
收集，过滤病毒液，加至含有K562细胞的15 ml离心管中,加Polybrene (Sigma)至终浓度为8 μ g/ml,分装至6孔板,悬浮离心感染(spin infection), 2000 rpm, 32 V，离心感染 120 min(Thermo centrifuge 400R,Rotor 8177)。离心结束后，加入含有 10% FBS 的RPMI 1640完全培养基I ml/孔，于37 °C，5% C02细胞培养箱中培养，24 h后，传代细胞，
常规培养。
[0025]三、干扰Bcr-Abl基因的K562细胞中IncRNA-BcrAR的表达
收集pSIH-Bcr-Abl shRNA病毒感染不同时间点的K562细胞，提取总RNA (Trizol,Invitrogen),利用 M-MLV 反转录酶(Promega)和 oligo (dT)引物(Takara)合成 cDNA。PCR(rTaq DNA聚合酶，Takara)分析Bcr-Abl和IncRNA-BcrAR的表达情况，同时以Actin基因的表达水平作为内参。
[0026]Bcr-Abl-F:5，-GTTTCAGAAGCTTCTCCCTGACATCCGTGGA-3，；
Bcr-Abl-R: 5’ -CAGACTGTTGACTGGCGTGATGTAGTTGC-3’。
[0027]IncRNA-BcrAR-RT-F:5’ -TCTAAgTATgAggACAgTAAgC-3’ ；
IncRNA-BcrAR-RT-R: 5， -gTTCAAgCAAgAggATAggA-3，。
[0028]如图1所示，Bcr-Abl基因的干扰能够明显上调K562细胞中IncRNA-BcrAR的表达。IncRNA-BcrAR在人慢性髓性白血病细胞系中因为受到Bcr-Abl癌基因的抑制而呈现低水平表达，Bcr-Abl表达减少(pSIH-Bcr-Abl shRNA包装病毒感染)能够明显上调其中IncRNA-BcrAR的表达,提示IncNRA-BcrAR可能在Bcr-Abl诱导的细胞恶性转化过程中发挥
重要作用。
[0029]实施例2、IncRNA-BcrAR在抗慢性髓性白血病中的应用
一、Northern blot确定IncRNA-BcrAR在K562细胞中的存在形式提取K562细胞总RNA,反转录合成cDNA,设计Northern blot探针扩增引物，以cDNA为模板，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
[0030]IncRNA-BcrAR-NB-F:5’ -TTAGCAGTAACTGCTGAATTCCTGG-3，；
IncRNA-BcrAR-NB-R:5’ -AAGGGGAAAACTGGGTTTTATTAC-3’。
[0031]回收PCR扩增产物,进行同位素标记,通过Northern blot方法(Invitrogen)检测K562细胞中的IncRNA-BcrAR的长度。如图2所示，K562细胞中IncRNA-BcrAR以长度约为3670 nt的转录本形式存在，并且pSIH-Bcr-Abl shRNA包装病毒的感染能够明显上调K562细胞中IncRNA-BcrAR的表达。
[0032]二、过表达IncRNA-BcrAR K562细胞系的建立
1、携带 IncRNA-BcrAR 的质粒 pMSCV-lncRNA-BcrAR 构建
将IncRNA-BcrAR cDNA构建到反转录病毒载体pMSCV_GFP，以人为过表达K562细胞中的IncRNA-BcrAR。提取K562细胞总RNA，反转录合成cDNA，设计IncRNA-BcrAR PCR扩增用引物，上游和下游引物分 别带有BglII和XhoI的酶切位点。利用BLAST确定序列特异性，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR (PrimeSTAR DNA聚合酶，Takara)扩增得到如序列表中SEQ ID NO: 3所示的IncRNA-BcrAR基因，BglII和XhoI酶切处理，与经过BglII和XhoI双酶切的pMSCV-GFP载体片段(Addgene)进行连接，转化大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒，酶切鉴定后送交上海生物工程技术服务有限公司，进行DNA序列测定，鉴定正确后用于下述实验。结果正确的质粒名称是PMSCV-lncRNA-BcrAR。
[0033]2、病毒包装
应用293T细胞系包装病毒。293T细胞培养于DMEM (Gibco)培养基，完全培养基中添加终浓度100 units/mL青霉素、100 units/mL链霉素和10%胎牛血清(Gibco),置于37°C，饱和湿度，5% CO2浓度的细胞培养箱中培养。于10 cm培养皿中培养至70-80%汇合时，按照Lipofectamine (Invitrogen)转染试剂说明书，将携带IncRNA-BcrAR的质粒pMSCV-lncRNA-BcrAR 和包装质粒 pCL-Eco (IMGENEX), VSVG (Invitrogen)共转染包装细胞系，48-96 h后收集细胞上清，上清中含有编码IncRNA-BcrAR的假病毒颗粒。
[0034]3、细胞感染
收集，过滤病毒液，加至含有K562细胞的15ml管中,加Polybrene (Sigma)至终浓度为8 μ g/ml,分装至6孔板,悬浮离心感染(spin infection), 2000 rpm, 32 °C ,离心感染120 min(Thermo centrifuge 400R,Rotor 8177)。感染结束后，加入含有 10% FBS 的 RPMI1640 (Gibco)完全培养基I ml/孔，于37 °C，5% C02培养箱中培养，24 h后，传代细胞，再过24-48 h后，流式细胞仪(BD Bioscience)分选GFP阳性细胞。
[0035]三、过表达IncRNA-BcrAR K562细胞系的鉴定
常规培养分选的K562细胞，荧光显微镜观察其中GFP表达情况。收集部分细胞，提取总RNA (Trizol, Invitrogen),利用 M-MLV 反转录酶(Promega)和 oligo (dT)引物(Takara)合成 cDNA。通过定量 PCR(SYBR@ Premix Ex Taq? II (Takara)的方法，分析 IncRNA-BcrAR的表达情况，同时以Actin基因的表达情况作为内参。如图3所示，和空载体对照细胞相比(Empty Vector，EV)，pMSCV-lncRNA-BcrAR质粒包装病毒感染的 K562 细胞中 IncRNA-BcrAR的表达量明显上调，说明成功构建稳定过表达IncRNA-BcrAR的K562细胞系。
[0036]过表达IncRNA-BcrAR K562细胞系的构建，为研究IncRNA-BcrAR在Bcr-Abl诱导的慢性髓性白血病中的作用，以及研究IncRNA-BcrAR在抗慢性髓性白血病中的应用提供了一个理想的细胞模型。
[0037]四、IncRNA-BcrAR在抗慢性髓性白血病中的应用 1、过表达IncRNA-BcrAR K562细胞的凋亡检测
离心收集K562细胞，PBS洗涤一次，RPMI 1640培养基悬浮细胞，分装到六孔板，添加凋亡诱导药物(Imatinib，Abl阳性白血病患者治疗药物)，轻轻混匀后置于37 °C，5% C02细胞培养箱中培养；药物处理一定的时间后，收集细胞，PBS洗涤两次，弃上清，加入500 μ Ibinding buffer,重悬细胞转移至流式管,细胞中加入5 μ I Propidium 1dide(PI),吹匀后，室温避光染色10-15 min，流式细胞仪分析细胞凋亡。如图4所示，IncRNA-BcrAR的过表达大大促进了 K562细胞走向Imatinb诱导的细胞凋亡。
[0038]2、过表达IncRNA-BcrAR K562细胞的裸鼠致瘤实验
取裸鼠(Balb/C)，雌性，4-6周龄，SPF级，20只，体重为14-16 g，随机分为2组，10只/组。对照组的10只小鼠每只分别经皮下注射表达空载体对照的K562细胞(EmptyVector, EV),实验组的10只小鼠每只分别经皮下注射过表达IncRNA-BcrAR的K562细胞(IncRNA-BcrAR)。收集K562细胞，用预冷的PBS重悬，转移至1.5 ml EP管，将细胞注射到裸鼠皮下，每隔I周，观 察裸鼠肿瘤的生长情况，游标卡尺测量瘤块的长、宽、高，第4周测量后，采用活体荧光成像仪检测肿瘤生长情况，处死裸鼠，记录结果。如图5所示，IncRNA-BcrAR的过表达显著抑制了 K562细胞在裸鼠体内诱导的肿瘤生长。
[0039]上述表明，IncRNA-BcrAR的高表达能够明显促进K562白血病细胞走向Imatinib诱导的细胞凋亡，并且显著抑制K562细胞诱导的裸鼠体内肿瘤形成过程，说明IncRNA-BcrAR在抗慢性髓性白血病中发挥重要作用，为慢性随性白血病的诊断和治疗提供了新的分子标记和药物靶标。
[0040]实施例3、IncRNA-BcrAR在抗A-MuLV诱导的小鼠白血病中的应用
一、过表达IncRNA-BcrAR BC44细胞系(A-MuLV转化的小鼠白血病细胞)的建立
1、病毒包装
按照Lipofectamine (Invitrogen)转染试剂说明书，将携带IncRNA-BcrAR的质粒pMSCV-lncRNA-BcrAR 和包装质粒 pCL-Eco (IMGENEX),VSVG (Invitrogen)共转染包装细胞系293T包装病毒。293T细胞培养于DMEM (Gibco)培养基，完全培养基中添加终浓度100units/mL青霉素、100 units/mL链霉素和10%胎牛血清(Gibco)，置于37°C，饱和湿度，5%CO2浓度的细胞培养箱中培养。48-96 h后收集细胞上清，上清中含有编码IncRNA-BcrAR的假病毒颗粒。
[0041]2、细胞感染
收集，过滤病毒液，加至含有BC44细胞(A-MuLV转化的小鼠白血病细胞系)的15 ml管中，加Polybrene (Sigma)至终浓度为8 μ g/ml,分装至6孔板,悬浮离心感染(spininfection), 2000 rpm, 32 °C ,离心感染 120 min(Thermo centrifuge 400R, Rotor 8177)。感染结束后，加入含有10% FBS的RPMI 1640 (Gibco)完全培养基I ml/孔，于37 °C，5%C02培养箱中培养，24 h后，传代细胞，再过24-48 h后，流式细胞仪(BD Bioscience)分选GFP阳性细胞。
[0042]3、过表达IncRNA-BcrAR BC44细胞系的鉴定
常规培养分选的BC44细胞，荧光显微镜观察其中GFP表达情况。收集部分细胞，提取总RNA (Trizol, Invitrogen),利用 M-MLV 反转录酶(Promega)和 oligo (dT)引物(Takara)合成 cDNA。通过定量 PCR(SYBR@ Premix Ex Taq? II (Takara)的方法，分析 IncRNA-BcrAR的表达情况，同时以Actin基因的表达情况作为内参。如图6所示，和空载体对照细胞相比(Empty Vector, EV), pMSCV-lncRNA-BcrAR质粒包装病毒感染的 BC44 细胞中 IncRNA-BcrAR的表达量明显上调，说明成功构建稳定过表达IncRNA-BcrAR的BC44细胞系。
[0043]4、过表达IncRNA-BcrAR BC44细胞的凋亡检测
离心收集BC44细胞，PBS洗涤一次，RPMI 1640培养基悬浮细胞，分装到六孔板，添加凋亡诱导药物(Imatinib，Abl阳性白血病患者治疗药物)，轻轻混匀后置于37 °C，5% C02细胞培养箱中培养；药物处理一定的时间后，收集细胞，PBS洗涤两次，弃上清，加入500 μ Ibinding buffer,重悬细胞转移至流式管,细胞中加入5 μ I Propidium 1dide(PI),吹匀后，室温避光染色10-15 min，流式细胞仪分析细胞凋亡。如图7所示，IncRNA-BcrAR的过表达大大促进了 BC44细胞走向Imatinb诱导的细胞凋亡。
[0044]上述表明，IncRNA-BcrAR的高表达能够明显促进小鼠白血病细胞BC44走向Imatinib诱导的细胞凋亡，说明IncRNA-BcrAR在抗v-Abl介导的细胞癌变及A-MuLV诱导的小鼠白血病发生过程中发挥重要作用。
[0045]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【权利要求】
1.一种长链非编码RNA IncRNA-BcrAR，其转录本核苷酸序列如下:CCACAAAGGGTTTATATTGAGGGAAGTGTGTATGTGTATTTCTGCATGCCTGTTTGTGTTTGTGGTGTGTGCATGCTCCTCATTTATTTTTATATGAGATGTGCATTTTGATGAGCAAATAAAAGCAGTAAAGACACTTGTACACGGGAGTTCTGCAAGTGGGAGTAAATGGTGTAGGAGAAATCCGGTGGGAAGAAAGACCTCTATAGGACAGGACTTCTCAGAAACAGATGTTTTGGAAGAGATGGGAAAAGGTTCAGTGAAGACCTGGGGGCTGGATTGATTGCAGCTGAGTAGCAAGGATGGTTCTTAAGGAAGGGAAAGTGTTCCAAGCTTTAGGAATTCAAGGTTTAGTCAGGTGTAGCAATTCTATTTTATTAGGAGGAATACTATTTCTAATGGCACTTAGCTTTTCACAGCCCTTGTGGATGCCTAAGAAAGTGAAATTAATCCCATGCCCTCAAGTGTGCAGATTGGTCACAGCATTTCAAGGGAGAGACCTCATTGTAAGACTCTGGGGGAGGTGGGGACTTAGGTGTAAGAAATGAATCAGCAGAGGCTCACAAGTCAGCATGAGCATGTTATGTCTGAGAAACAGACCAGCACTGTGAGATCAAAATGTAGTGGGAAGAATTTGTACAACATTAATTGGAAGGCTTACTTAATGGAATTTTTGTATAGTTGGATGTTAGTGCATCTCTATAAGTAAGAGTTTAATATGATGGTGTTACGGACCTAATGTTTGTGTCTCCTCAAAATTCACATGCTGAATCCCCAACTCCCAACTGACCTTATCTGTGGGGGAGGCTTTTGAAAAGTAATTAGGTTTAGATGAGCTCATAAGAGCAGATCCCCATCATAAAATTATTTTCCTTATCAGAAGCAGAGAGACAAGCCATTTCTCTTTCCTCCCGGTGAGGACACAGTGAGAAGTCCGCCATCTGCAATCCAGGAAGAGAACCCTGACCACGAGTCAGCCTTCAGAAATGTGAGAAAAAACTCTGTTGTTGAAGCCACCCAGTCTTTTGTATTTTGTTATAGCACCTTGCACTGAGTAAGGCAGATGAAGAAGGAGAAAAAAATAAGCTTGGGTTTTGAGTGGACTACAGACCATGTTTATCTCAGGTTTGCAAAGCTCCCCTCGTCCCCTATGTTTCAGTATAAAATACCTACTCTACTACTCTCATCTATAAGACCCAAATAATAAGCCTGCGCCCTTCTCTCTAACTTTGATTTCTCCTATTTTTACTTCAACATGCTTTACTCTAGCCTTGTAATGTCTTTACATACAGTGAAATGTAAAGTTCTTTATTCTTTTTTTCTTTCTTTCTTTTTTCTCCTCAGCCTCAGAATTTGGCACATGCCCTTCCTTCTTTCAGGAACTTCTCCAACATCTCTGCCTGGCTCCATCATATCATAAAGGTCCCACTTCAAATGCAGTCACTACCGTTTCAGAATATGCACTTTCTTTCTTTTTTGTTTTTTGTTTTTTTTAAGTCAAAGCAAATTTCTTGAGAGAGTAAAGAAATAAACGAATGACTACTGCATAGGCAGAGCAGCCCCGAGGGCCGCTGGTTGTTCCTTTTATGGTTATTTCTTGATGATATGTTAAACAAGTTTTGGATTATTTATGCCTTCTCTTTTTAGGCCATATAGGGTAACTTTCTGACATTGCCATGGCATTTTTCTTTTAATTTAATTTACTGTTACCTTAAATTCAGGGGTACACGTACAGGATATGC AGGTTTGTTTTATAGGTAAAAGTGTGCCATGGTTTTAATGGGTTTTTTTTTTCTTGTAAAGTTGTTTAAGTTTCTTGTTTACTCTGGATATTAGGCCTTTGTCAGAAGAATAGATTGGAAAATCTTTTTCCCATTCTGTAGATTGTCTTTCGCTCTGATGGTAGTTTCTTTTGCTGAGCAGGAGCTCTTTAGTTTAATTAGATTCCATTGGTCAATTTTTGCTTTTGCTGCAATTGCTTTTCACGCTTTCATCATGAAATCTGTGCCCGTGTTTATATCATGAATAGTATTGCCTTGATTTTTTTCTAGGCTTTTTATAGTTTGGGGTTTTTCATTTAAGTCTCTAATCCATCTGGAGTTAATTTTGGATAAGGTATAAGGAAGGAGTCCAGTTTCATTTTTCAGCATATGGCTAGCCAGTTCTCCCCCATCATTTATTAAATTGAAAATCCTTTCCCCATTGCTTGCTTTTGTCAGGTTTCTAAAAGACCAGATGGTTGTAGGTACAATATGCAGTTTCTTCAAGTCATATAATACCATCTGAAATCTCTTATTAATTCATTTCTTTTAGTATGTATGCTGGTCTCCTCTGCTCACTATAGTGAGGGCACCATTAGCCAGAGAATCTGTCTGTCTAGTTCATGTAAGATTCTCAGAATTAAGAAAAATGGATGGCATATGAATGAAACTTCATGGATGACATATGGAATCTAATATGTATTTGTTGAATTAATGCATAAGATGCAACAGAGAGAAGTTGACAACTGCAATGATAACCTGGTATTGATGATATAAGAGTCTATAGATCACAGTAGAAGCAATAATCATGGAAAACAATTGGAAATGGGGAACAGCCACAAACAAGAAAGAATCAATACTTCCAGGAAAGTGACTGCAGGTCACTTTTCCTGGAGCGGGTGAGAGAAAAGTGGAAGTTAGCAGTAACTGCTGAATTCCTGGTTGGCTGATGGAAAGATGGGGCAGCTGTTCACTGGTACGCAGGGTTTTAGATGTATGTACCTAAGGATATGAGGTATGGCAATGAACAGAAATTCTTTTGGGAATGAGTTTTAGGGCCATTAAAGGACATGACCTGAAGTTTCCTCTGAGGCCAGTCCCCACAACTCAATATAAATGTGTTTCCTGCATATAGTCAAAGTTGCCACTTCTTTTTCTTCATATCATCGATCTCTGCTCTT
2.含有权利要求1所述核苷酸序列的重组质粒pMSCV-lncRNA-BcrAR。
3.含有核苷酸序列I和核苷酸序列2的质粒pSIH-Bcr-AblshRNA ； 所述核苷酸序列1:
4.一种长链非编码RNA IncRNA-BcrAR在抗细胞癌变中的应用。
【文档编号】C12N15/63GK103789309SQ201410050006
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年2月13日 优先权日:2014年2月13日
【发明者】陈吉龙, 郭桂杰, 池晓娟, 陈志龙 申请人:福建农林大学