：正下醇=4 : 1)反复脱蛋白，萃取后水层离屯、，上清液水浴浓缩后缓慢加 入95%乙醇（终体积分数为75% )，放4°C冰箱中醇沉过夜，然后W4800r/min离屯、lOmin， 滤渣依次用无水乙醇、丙酬、乙酸各洗两次，通风楓干燥，得褐色粉末，即五子衍宗方总多糖 提取物。计算提取率为1. 95%。
[0031] 一付五子衍宗方总重115g，成年人平均体重60kg，人给生药量为1. 92g/kg，小 鼠用量约为人的10倍，所W小鼠给生药量为19. 2g/kg，按提取率算，总多糖低剂量应为 375mg/kg，高剂量为 750mg/kg。
[0032] 五子衍宗方总多糖对小鼠肝脏指数的影响
[0033] 与正常对照组相比，模型对照组的小鼠肝脏指数明显增加（P< 0.01)，与模型对 照组相比，五子衍宗方总多糖给药组肝脏指数均有所降低但仍高于正常对照组的水平，其 中总多糖高剂量组降低肝脏指数的运种作用极其显著（P< 0. 01)，而总多糖低剂量组的作 用较轻微（P< 0.05)。（结果见图1)
[0034] 五子衍宗方总多糖对小鼠肝组织形态学的影响
[0035] 正常对照组小鼠肝小叶结构完整、清晰可辨，肝细胞W中央静脉为中屯、，呈放射状 排列，且形态无异常；中央静脉及肝血窦未见出血、充血和水肿；肝汇管区没有见到纤维组 织增生及炎性细胞浸润，未见明显肝细胞变性（如图2A)。模型对照组小鼠肝小叶和肝索排 列混乱，难W分辨；肝细胞肿胀明显、胞浆很疏松、细胞结构辨识不清，有肝细胞坏死（如图 2B)。总多糖低剂量组小鼠的肝小叶观察到有损伤，但仍有一部分肝小叶排列整齐，肝细胞 有炎性细胞浸润，肝细胞肿胀和胞浆疏松（如图2C)。总多糖高剂量组肝小叶排列较整齐， 肝细胞肿胀和胞浆疏松程度较模型对照组明显减轻，肝细胞形态均匀，排列规整，与正常对 照组相比无明显差异（如图2D)。
[0036] 五子衍宗方总多糖对血清总ALT、AST水平的影响
[0037] 与正常对照组小鼠相比，其余各组小鼠血清AST、ALT活性均显著地升高，说明肝 损伤模型建立成功；与模型对照组相比，总多糖低、高剂量组的小鼠血清ALT、AST活力均显 著下降，结果说明五子衍宗方总多糖能抑制CTX所致的小鼠血清ALT、AST活力的增加。（结 果见表1)
[0038]
[0040] 表1五子衍宗方总多糖对血清总ALT、AST水平的影响（X+S)
[0041] 注：冲<0. 05 ;*冲<0. 01 (与对照组比较）；#P<0. 05, ><0. 01 (与模型对照组比 较）。
[0042] 五子衍宗方总多糖对小鼠肝组织中SOD活力、MDA含量的影响
[0043] 与正常对照组比较，模型对照组小鼠肝脏SOD活力显著降低，MDA水平明显升高。 给予总多糖后，与模型对照组相比，总多糖低、高剂量组SOD活力明显升高，MDA含量降低， 说明五子衍宗方总多糖可显著改善运种肝脏损伤。（结果见表2)
[0044]
W45] 表2五子衍宗方总多糖对小鼠肝组织中SOD活力、MDA含量的影响（X±S)
[0046] 注：冲<0. 05 ;*冲<0. 01 (与对照组比较）；#P<0. 05, ##P<0. 01 (与模型对照组比 较）。
[0047] CTX是一种广谱的抗肿瘤药物，除杀伤肿瘤细胞外，还对正常的组织细胞有损伤作 用。研究报道，CTX可导致肝损伤，导致血清AST和ALT活性升高，肝组织MDA含量增加，SOD 活力降低，肝脏HE染色镜下观肝细胞广泛性的中度~重度水变性，肝窦受到挤压，结构不 清，肝组织灶状坏死，大量炎性细胞浸润。有研究报道，五子衍宗丸可改善或保护肝脏，但有 效成分和作用机制不明。本研究结果显示五子衍宗丸总多糖可显著减轻CTX所致的肝细胞 的损伤程度。
[0048] 正常情况下，AST主要存在于组织细胞中，在肝脏含量较多，血清中较少，当肝脏发 生严重坏死或破坏时，会引起AST在血清中浓度偏高。ALT主要存在于肝细胞浆内，血清 中含量较低，若肝细胞坏死或损伤会使血清中ALT含量大量增加，因此可W通过测定血清 中AST和ALT含量判断肝脏的损伤程度。本实验研究结果显示，五子衍宗方总多糖可W明 显降低血清AST和ALT活性。说明五子衍宗方总多糖能减轻肝细胞的损伤程度。提示五子 衍宗方总多糖对肝损伤有保护作用。
[0049] SOD是一种重要的抗氧化剂，能清除氧自由基，测定SOD活性能判断肝脏过氧化损 伤，而MDA为自由基作用于脂质发生氧化反应的产物，因此测定MDA的量常常可反映机体内 脂质过氧化的程度，间接反映出细胞损伤的程度。本实验通过在CTX对小鼠形成肝损伤的 实验条件下，结果显示五子衍宗方总多糖可W明显提高肝脏SOD活力，降低肝组织MDA含 量，说明五子衍宗方总多糖能减轻肝细胞的损伤程度。提示五子衍宗方总多糖对肝损伤有 保护作用。
[0050] 综上所述，化疗药物CTX能损伤肝脏组织，引起肝细胞的病理损伤，升高血清AST 和ALT活性，增加MDA含量，降低SOD活力，本研究发现五子衍宗丸总多糖可改善CTX导致 的肝损伤，机制可能与提高了体内抗氧化酶的活性和自由基清除剂水平，保护机体免受氧 自由基的攻击有关。
【主权项】
1. 一种五子衍宗方总多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：称取干燥粉碎的 枸杞子，菟丝子，五味子，覆盆子，车前子，加入75%乙醇，浸泡过夜，用双层滤布过滤，将过 滤后的滤渣置于60°C烘箱中挥干乙醇；干燥后，加蒸馏水，沸水浴回流提取I. 5h，双层滤布 过滤，滤渣重复提取一次，过滤后合并两次滤液，于80°C水浴浓缩，将浓缩液在氯仿与正丁 醇以体积比4:1的混合液中反复脱蛋白，萃取后水层离心，上清液水浴浓缩后加入95%乙 醇，终体积分数为75%，再放入4°C冰箱中醇沉过夜，然后以4800 r/min离心10min，滤渣 依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗两次，通风橱干燥，得褐色粉末，即五子衍宗方总多糖提取 物。2. 权利要求1所述的五子衍宗方总多糖在制备预防和治疗肝细胞损伤的药中的应用。3. 权利要求2所述的肝细胞损伤是指环磷酰胺致肝细胞损伤。
【专利摘要】本发明提供一种提取五子衍宗方总多糖的提取方法及其在治疗肝损伤等疾病上的应用。取干燥药材，75%乙醇浸泡过夜，水回流提取2次，合并滤液减压浓缩后加入95%乙醇至终浓度60%，静置过夜，过滤，沉淀用丙酮洗涤，得五子衍宗方总多糖粗提物。与正常对照组相比，模型对照组肝损伤严重，而五子衍宗方总多糖可以减轻CTX所致的肝损伤程度。与正常对照组比较，模型对照组小鼠ALT、AST水平和MDA含量明显增高，SOD活力显著下降（P<0.05）；五子衍宗方总多糖可改善肝损伤程度，显著降低ALT、AST水平和MDA含量，增加SOD活力（P<0.05）。
【IPC分类】A61K36/815, A61P1/16
【公开号】CN105147863
【申请号】CN201510502667
【发明人】袁丁, 张长城, 王婷, 刘朝奇, 赵海霞, 周志勇, 顿耀艳, 黄威峰
【申请人】三峡大学
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月17日