%、豆粉1-2 %、琼脂2-4%、硫酸儀0. 05-0. 08 %、 憐酸二氨钟0. 2-0. 3%、氯化钢0. 1-0. 3%。作为优选，所述摇瓶培养的培养基包括葡萄 糖2-3 %，蛋白腺1-4 %，豆粉0. 5-2 %，教皮0. 5-2 %，硫酸儀0. 01-0. 1 %，憐酸二氨钟 0. 1-0. 4%、憐酸氨二钟0. 1-0. 2%。作为优选，所述摇瓶的转速为200转/min。作为优选， 所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.5% -1.5%、蛋白腺1% -2%、玉米浆0.5% -1.0%、 憐酸二氨钟0.03% -0.05%、硫酸锋0.02% -0.07%、氯化儀0.04% -0.08%，其余为水。
[0036] 作为优选，当选择厌氧菌种时，在厌氧条件下于25-40°C密封静置培养15-40天， 或发酵溫度为28-35°C、30-32°C或3rC，发酵时间为21-35天、25-28天或27天。
[0037] 进一步优选，当选择好氧菌种时，在通气条件下于22-35°C发酵7-30天，或发酵溫 度为25-30°C或28°C，发酵时间为14-25天或18-22天或20天。所通气体为无菌空气，通 气量为 2. 5-5.OL/min。
[0038] 更进一步优选，所述发酵分阶段进行，第一阶段为好氧发酵，选择好氧菌种，发酵 溫度为22-35°C，无菌空气通气量为2. 5-5.化/min,好氧发酵时间为7-30天；第二阶段转为 厌氧发酵，选择厌氧菌种，关闭通气，控制发酵溫度为25-40°C，厌氧发酵时间为15-40天。 [003引 妨抽取发酵后的液体，经过滤后得到肉巧蓉酵素。
[0040] 固体发酵方法：
[0041] 将发酵菌种接种于含有固体培养基的发酵基质后在一定条件下发酵。
[0042] 用于本发明的固体发酵菌种包括但不限于酵母菌、乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、植物乳杆菌、芽抱杆菌、双岐杆菌、米曲霉、蜜环菌、虫草菌、灵芝菌、朱红菌等一 种或多种能够用于食物或药物发酵的菌种。
[0043] 用于本发明固体发酵的培养基是用于食物或药物常见的培养基如包括但不限于 麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基等。所述培养基中可W加入糖类、氮源和无机 盐。所述糖类包括但不限于白糖、红糖、低聚糖类、糖醇类、冰糖、蜂蜜等。作为优选，所述糖 类的加入量为原料总重量的0-8%。所述氮源包括但不限于酵母粉、蛋白腺、黄豆饼粉、玉米 浆、鱼粉、蚕蛹粉、教皮等。作为优选，所述氮源的加入量为原料总重量的0-10%。所述无机 盐包括但不限于硫酸锭、氯化儘、硫酸儀、憐酸二氨钟、憐酸氨二钟等。作为优选，所述无机 盐的加入量为原料总重量的0-3%。优选地，在发酵过程中，根据菌种的不同分阶段植入培 养基。
[0044] 用于本发明固体发酵的方法包括如下步骤：
[0045] (1)对原材料进行杀菌处理，此处的杀菌处理包括低溫杀菌、射线杀菌、化学杀菌 等不破坏原材料品质的杀菌处理方法；
[0046] (2)制备培养基：采用本领域常规方法制备各种液体发酵培养基，包括但不限于 麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基。
[0047] 作为优选，所述麦芽汁固体培养基是将麦芽经过筛选、清洗、干燥，制得的干麦芽 经糖化、糊化、过滤等工序，最后加入琼脂制成。作为优选，所述麦芽为大麦麦芽或小麦麦 芽。作为优选，所述干燥为晒干或烘干。作为优选，所述糖化采用酸法、酶法或酸酶结合 法糖化。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5% (g/lOOmL)，或2-4% (g/lOOmL)、或3% (邑/100血）。
[0048]作为优选，所述水果培养基是取水果可食用部分，经清洗、打浆（加水或不加水）、过滤、浓缩，最后加入琼脂制得。作为优选，所述浓缩至浆液中固含量为3-15% (g/lOOmL)、 或5-10% (g/100血)、或8% (g/100血）。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5% (g/100血)， 或 2-4% (g/100血）、或 3% (g/100血）。
[0049] 作为优选，所述谷物培养基是将谷物去杂、清洗、研磨后，加水煮沸、过滤，加入琼 脂而得。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5% (g/lOOmL)，或2-4% (g/lOOmL)、或3% (邑/100血）。
[0050] 作为优选，所述培养基在使用前需经灭菌处理。
[0051] 作为优选，所述麦芽汁固体培养基适于仅W中药材为发酵基质；当发酵基质中含 有水果时可W选择水果培养基；如果发酵基质中含有谷物类物质时可W选择谷物培养基。 运种原则仅做一般性指导，当发酵基质中碳水化合物和水含量足够用于发酵菌生长时，贝U 可W使用发酵基质作为培养基。
[0052] (3)制备发酵基质：在灭菌培养基中，加入肉巧蓉原料，优选加入切成适宜大小的 片状、条状或粒状的肉巧蓉原料。作为优选，所述肉巧蓉原料的加入量为培养基的0. 5-8% (w/w)、或1-5% (w/w)、或2.5% (w/w)。进一步优选加入其他中药材粉末，更进一步优选加 入谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物等其中的一种或多种。其他中药材或谷物、蔬菜、食 用菌、坚果、海底植物可W粉末形式依据常规用量加入，一般为0-10% (w/w)。
[0053] (4)菌种植入并发酵：将选择的菌种进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行 发酵。作为优选，所述菌种为厌氧菌种、好氧菌种或厌氧与好氧菌种兼用。所述厌氧、好氧 菌种的植入量为发酵基质5-16% (w/w)，或8-12% (w/w)、或10% (w/w)。作为优选，所述 扩大培养包括固体斜面培养、摇瓶培养和/或种子罐培养。作为优选，所述固体斜面培养的 培养基组成包括葡萄糖2-4%、蛋白腺1-3 %、豆粉1-2 %、琼脂2-4%、硫酸儀0. 05-0. 08 %、 憐酸二氨钟0. 2-0. 3%、氯化钢0. 1-0. 3%。作为优选，所述摇瓶培养的培养基包括葡萄 糖2-3 %，蛋白腺1-4 %，豆粉0. 5-2 %，教皮0. 5-2 %，硫酸儀0. 01-0. 1 %，憐酸二氨钟 0. 1-0. 4%、憐酸氨二钟0. 1-0. 2%。作为优选，所述摇瓶的转速为200转/min。作为优选， 所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.5% -1.5%、蛋白腺1% -2%、玉米浆0.5% -1.0%、 憐酸二氨钟0.03% -0.05%、硫酸锋0.02% -0.07%、氯化儀0.04% -0.08%，其余为水。
[0054] 作为优选，当选择厌氧菌种时，在厌氧条件下于25-40°C密封静置培养15-40天， 或发酵溫度为28-35°C、30-32°C或3rC，发酵时间为21-35天、25-28天或27天。
[00巧]进一步优选，当选择好氧菌种时，在通气条件下于22-35°C发酵7-30天，或发酵溫 度为25-30°C或28°C，发酵时间为14-25天或18-22天或20天。所通气体为无菌空气，通 气量为 2. 5-5.OL/min。
[0056] 更进一步优选，所述发酵分阶段进行，第一阶段为好氧发酵，选择好氧菌种，发酵 溫度为22-35°C，无菌空气通气量为2. 5-5.化/min,好氧发酵时间为7-30天；第二阶段转为 厌氧发酵，选择厌氧菌种，关闭通气，控制发酵溫度为25-40°C，厌氧发酵时间为15-40天。
[0057] 妨收集培养基，制备本发明肉巧蓉酵素。
[0058] 肉巧蓉和/或肉巧蓉提取物和/或肉巧蓉生物酵素在化妆品组合物中使用，所述 组合物局部应用，在皮肤上产生抗衰老效果，例如弹性蛋白酶的抑制和刺激胶原，同时可用 于提供抗氧化效果。本发明的肉巧蓉和/或肉巧蓉提取物和/或肉巧蓉生物酵素可用于任 何形式的化妆品组合物，其含量于要实现的想要的益处W及组合物的类型（例如：乳膏、霜 剂、凝胶、洗剂、喷雾制剂、乳液、混悬液或液体制剂），应该是安全的和有效量的，而优选的 含量的使用范围是在基于肉巧蓉为0. 01%和30%之间，进一步优选0. 01-15%，更进一步 优选 0.01-5%。
[0059] 在一个优选的实施方案中，在用于增加胶原合成和弹性蛋白酶抑制的化妆品配方 中，使用的肉巧蓉生物酵素在0. 01 %至约15%之间。
[0060] 在一个特别优选的实施方案中，肉巧蓉的提取物与肉巧蓉的生物酵素混合，并保 存形成用作为化妆品活性成分的混合物，其甚至产生更有效的抗衰老效果。在一个优选的 实施方案中，肉巧蓉生物酵素和肉巧蓉取物W20 : 80的比例混合。在另一个实施方案中， 肉巧蓉提取物和肉巧蓉生物酵素不混合成一种活性成分，而在最终的化妆品化合物的配制 中组合使用，提供增强的抗衰老效果。
[0061] 如前所述，本发明的提取物和生物酵素作为化妆品组合物中的活性成分是特别有 效的。运些化妆品组合物可w由本领域技术人员w常规方法处理，并适合化妆品用途。特 别地，组合物优选适合用于有