至200mL，混勾配制成浓度为0. 15mg/mL秋水仙碱溶液。微晶尿酸钠（MSU)，参照Coderre 方法，194mL蒸馏水加6mLlmol/LNa0H，煮沸，加 lg尿酸，用lmLlmol/L HC1调pH至7. 2,搅 拌冷却，4°C冰箱保存24h，去上清，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入70°C干燥箱烘2h，取出， 刮下粉末，放入研钵内研成细末，用孔径250 μ m的金属筛过筛，制成MSU粉末备用。
[0046] 1. 2试剂：尿酸（UA)试剂盒，批号：P100121，上海复星长征医学科学有限公司；一 氧化氮（N0)试剂盒，批号：20110119,南京建成生物工程研究所；总蛋白（TP双缩脲法）试 剂盒，批号：110601，北京睿基恒生物科技发展有限公司。
[0047] 1. 3动物：清洁级SD大鼠，雄性，体重200~220g，由浙江省医学科学院提供，合格 证号：SCXK (浙）20080033。
[0048] 1. 4仪器：LP123电子天平，常熟市衡器厂，苏制00000153 ;YLS-7A大鼠足趾容积 测量仪，山东省医学科学院设备站；HEMAVET950动物血液分析仪，ADrew Scientific Group Co ;威图SELECTRA-E全自动生化仪，荷兰威图公司。
[0049] 1. 5实验方法及检测指标
[0050] 1. 5. 1动物分组及给药：将大鼠随机分为18组：正常对照组、模型对照组、阳性对 照组（秋水仙碱0. 〇〇15g · kg ^、一枝黄花提取物①~⑤各设3个剂量组（100mg · kg \ 20〇11^.1^1、30〇11^.1^1)，每组10只。造模前给药5(1，1次/(1，造模后继续给药。受试药 组分别灌胃给予不同剂量的一枝黄花提取物，正常对照组灌胃给予相应体积的水，阳性对 照药灌胃给予相应剂量的秋水仙碱药液。
[0051] 1. 5. 2造模：取lOOOrng MSU加9mL生理盐水，再加 lmL吐温-80,加热搅拌，配制成 10mL MSU混悬液（浓度为100mg .mL ^，给药30min后大鼠右后踝关节屈曲，用手触摸可扣 及两骨突部，75%医用酒精局部消毒后，用6号注射针在左右后侧踝关节背侧从45°方向 插入胫骨肌腿内侧，将0. lmL MSU混悬液注入到踝关节腔，制备急性痛风性关节炎模型，伸 曲、旋转运动2min，正常对照组大鼠用无菌生理盐水代替MSU混悬液。
[0052] 1. 5. 3关节肿胀度：造模前在大鼠右后足踝关节三叉处外部绕踝关节用记号笔画 圈做记号，测量大鼠右足至标记处排水容积两次，取平均值为给药前关节体积；造模后lh、 4h、6h、24h测量大鼠右足至标记处排水容积，按公式计算肿胀度。
[0053] 肿胀度（mL)=致炎后踝关节排水容积（mL)-致炎前踝关节排水容积（mL)。
[0054] 1. 5. 4血液分析：造模24h，末次给药30min后，测完指定部位的排水容积后，从大 鼠眼眶后静脉丛采血5mL，其中4mL室温下自然凝血2h，3500r ·η?η 1离心10min，吸取血清， 参照试剂盒说明书依法测定血清UA、N0含量；另lmL加10 μ L EDTA抗凝，使用动物血液分 析仪依法测定白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量。
[0055] 1. 5. 5生化及组织学指标：在玻璃纸上用锐利的刀片从大鼠右踝关节背侧快速切 断筋膜，切取踝关节三叉处除骨的全部软组织及软骨，称重并加9倍量的冰生理盐水制成 10%组织勾衆，3500r · min 1离心10min，吸取上清，参照试剂盒说明书依法测定总蛋白、N0 含量；处死取脾脏、肾脏，称重，计算脾体系数和肾体系数。
[0056] 1. 6统计分析：计量资料数据结果以x±s表示，组间比较采用t检验。
[0057] 二、结果
[0058] 2. 1 -枝黄花提取物对痛风性关节炎大鼠关节肿胀度的影响
[0059] 与正常对照组相比，模型对照组大鼠踝关节肿胀度在造模后1~6h内均显著升 高（P〈0. 01);造模后lh，与模型对照组相比，秋水仙碱组、一枝黄花提取物①~③各剂量组 大鼠踝关节肿胀度均显著下降（P〈〇. 01);造模后4h，与模型对照组相比，秋水仙碱组、一 枝黄花提取物①~③各剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降（P〈〇. 01);造模后6h，与模型 对照组相比，秋水仙碱组、一枝黄花提取物①~③高剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降 (P〈0. 05);-枝黄花提取物①~③中、低剂量组大鼠踝关节肿胀度亦有降低的趋势；一枝 黄花提取物④~⑤各剂量组在造模24h内与模型组相比均无显著差异。结果见表1(注：与 模型组比较，*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈0· 01)。
[0060] 表1 一枝黄花提取物在造模24h内对痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度的影响 (X土s，η = 10)
[0061]
[0062] 2. 2对痛风性关节炎大鼠脾体指数、肾体指数的影响
[0063] 与正常对照组相比，模型组肾体指数明显降低，脾体指数明显升高（P〈0. 05、 0.01);与模型对照组相比，秋水仙碱组大鼠肾体指数显著升高，脾体指数显著降低 (P〈0. 05); -枝黄花提取物①~③高剂量组肾体指数明显上升（P〈0. 01)，一枝黄花提取物 ①~③各剂量组脾体指数均有不同程度的下降（P〈0.05、0. 01);-枝黄花提取物④~⑤各 剂量组对大鼠脾体指数、肾体指数的影响与模型组无显著差别。见表2(注：与模型对照组 比较，*Ρ〈〇· 05, **Ρ〈0· 01)。
[0064] 表2 -枝黄花提取物对痛风性关节炎大鼠脾指数、肾指数的影响（X土s，η = 10)
[0065]
[0066] 2. 3对痛风性关节炎大鼠全血中白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞水平的影响
[0067] 与正常对照组相比，模型对照组的白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量有升高的 趋势；与模型组相比秋水仙碱和一枝黄花提取物①~③高剂量组大鼠的白细胞、中性粒细 胞合淋巴细胞数量明显减少（P〈〇. 05、0. 01)，一枝黄花提取物①~③其余各剂量组均有降 低趋势；一枝黄花提取物④~⑤各剂量组与模型对照组比无显著差异。见表3(注：与模型 对照组比较，*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈(λ 01)。
[0068] 表3 -枝黄花提取物对痛风性关节炎大鼠白细胞、中性粒细胞及淋巴细胞影响 (X土s，η = 10)
[0069]
[0070] 2. 4对痛风性关节炎大鼠血清UA水平的影响
[0071] 各组大鼠血尿酸值结果结果显示，与正常对照组相比，模型组血尿酸值明显升 高（P〈0. 05);与模型组相比，一枝黄花提取物①~③中高剂量组大鼠血尿酸明显下降 (P〈0. 05);-枝黄花提取物④~⑤各剂量组与模型组比均无显著性差异。见表4(注：与模 型对照组比较，*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈0· 01)。
[0072] 表4 一枝黄花提取物对痛风性关节炎大鼠血清UA的影响（X土 s，η = 10)
[0074] 上述试验结果表明，一枝黄花提取物对大鼠痛风性关节炎具有治疗作用。一枝黄 花提取物中薄荷的含量对其发挥治疗作用至关重要。
[0075] 实施例8 :片剂的制备
[0076] 按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制 粒压片。
[0077] 实施例9 : 口服液的制备
[0078] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[0079] 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0080] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制 成胶囊或颗粒剂。
[0081] 实施例11 :注射液的制备
[0082] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0083] 实施例12 :无菌粉针的制备
[0084] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
[0085] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种一枝黄花提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：（a)以重量计，每 100份药材包含干燥的一枝黄花80~90份和干燥的薄荷10~20份，混合粉碎，用75%乙醇溶 液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤（a)所得乙醇 提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用 大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用70%乙醇洗脱 12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩即得。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型大 孔树脂。3. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为： 色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液； 梯度洗脱程序：〇~5min，A 10% - 15% ;5~10min，A 15% - 48% ;10~25min，A 48% - 78% ; 25~30min，A 78% - 10% ; 流动相流速：1. OmL ? min S 检测波长：240nm ; 柱温：35°C ; 进样量：10 yL。4. 一种药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上 可接受的载体。5. 权利要求1所述的提取物在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。6. 权利要求4所述的药物制剂在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一枝黄花提取物，该提取物的制备方法及医药用途，提取物制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的一枝黄花80～90份和干燥的薄荷10～20份，混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10％乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩即得。该提取物可以应用于痛风性关节炎，开发成治疗痛风性关节炎的药物。
【IPC分类】A61P19/06, A61P19/02, A61K36/534, A61P29/00, G01N30/88
【公开号】CN105232627
【申请号】CN201510770953
【发明人】庄立
【申请人】庄立
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月12日