补骨脂提取物或其单体成分作为人羧酸酯酶抑制剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种补骨脂提取物或其单体成分作为人羧酸酯 酶抑制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 羧酸酯酶（CEs)属于B族酯酶，人体内参与酯类药物代谢的CEs主要为羧酸酯酶 l(hCE-l)和羧酸酯酶2(hCE-2)。hCE-Ι在肝脏中高表达，并在巨噬细胞、肺上皮细胞、心 脏、睾丸等组织中存在，但在胃肠道表达甚微。hCE-2在小肠、结肠、肾、肝脏、心脏和脑组织 中存在。CEs参与机体多种内源性和外源性化合物的水解代谢，并与其他代谢酶或运载体 共同作用，在酯类药物的体内代谢与清除过程发挥着重要作用。CEs可水解多种含酯键的药 物或酯类前药，例如血管紧张肽转化酶抑制药（替莫普利、西拉普利、喹那普利），抗肿瘤药 (伊立替康和卡培他滨）以及麻醉药（可卡因、海洛因和哌替啶）等。hCE-Ι与hCE-2拥有 48%的氨基酸同源序列，但两者的底物特征有较大差异。由于伊立替康和海洛因表现出小 酰基端和大羟基端，是hCE-2的良好底物，有报道称，人体十二指肠、空肠、回肠、肾组织中 约99%的伊立替康的生物转换由hCE-2负责。
[0003] 伊立替康（CPT-Il)是喜树碱类衍生物SN38的前体药物。目前CPT-Il由于其广 谱的抗癌活性而广泛用于各种癌症的化疗。但是，由于其严重且不可预测的腹泻反应，使 它的临床应用受到了一定限制。CPT-Il所致的腹泻包括急性腹泻（给药后24h内发生） 和迟发性腹泻（给药后24 h后发生）两种[Mol Pharmacol, 2004, 65 (6): 1336-13431]。 CPT-Il临床用药所导致的3级和4级迟发性腹泻发生率高达40%，严重限制了 CPT-Il的 临床使用。国内外大量研究发现CPT-Il所致迟发型腹泻发生的原因是由于活性代谢产 物SN-38在肠道中过多积聚而导致的。人肠道羧酸酯酶在此发病机制中起了重要作用。 羧酸酯酶抑制剂可明显降低CPT-Il向SN-38的转化，从而降低肠道的毒副反应[J Med Chem, 2009, 52(12):3742-37521]。
[0004] 国内外许多学者致力于研究伊立替康不良反应的发生与缓解机制，以求提高伊立 替康使用的安全性和疗效。目前，对伊立替康所导致的腹泻主要采取的是给予洛哌丁胺来 进行治疗。洛哌丁胺通过抑制肠道平滑肌的收缩，减少肠蠕动，减少肠壁神经末梢释放乙酰 胆碱，直接抑制蠕动反射而发挥减轻腹泻的作用。但需要特别指出的是，腹泻作为机体的一 种防御措施，是在将毒性较大的SN-38排出体外，减少腹泻次数，对于降低其对机体的毒性 并没有根本性的益处。而伊立替康作为SN-38的前药，由于其活性/活性基团被封闭，其毒 性仅为SN-38的1/1000,因此，如果能在局部减少伊立替康的水解，对于降低对机体的损害 程度是十分有益的。因此，开发出一种安全有效的羧酸酯酶抑制剂，用来减少肠道局部伊立 替康过多地被水解成毒性成分SN-38,显得尤为必要。
[0005] 近年来，从药食同源的中草药中寻找安全高效的羧酸酯酶抑制剂有望缓解临床 CPT-Il所致的迟发型腹泻。为此，发明人开展了百余种中草药提取物及其主要化学成分对 人羧酸酯酶的抑制研究。研究发现，中草药补骨脂及其化学成分可强效抑制人羧酸酯酶。中 草药补骨脂是豆科植物补骨脂Psoralea Coyrlioflia L.的干燥成熟果实。补骨脂为我国 药典收录的传统中药，为常用补益中药，味辛，苦，归肾、脾经。具有温肾补阳、纳气、止泻之 功。到目前为止国内外共从中分离出相关化合物40余种，主要包括香豆素、黄酮、异黄酮、 查耳酮和萜酚类等化合物，其主要活性成分为香豆素及黄酮类化合物。补骨脂对颈椎骨质 增生、高血脂、放化疗后白细胞降低、无症状性蛋白尿、出血、痛经、小儿脱肛及复发性口疮 等具有良好改善和治疗效果。然而，补骨脂及其化学成分对人羧酸酯酶的抑制作用一直未 见报道，也没有利用补骨脂及其化学成分缓解CPT-Il所致迟发型腹泻的报道。此外，许多 含有羧酸酯键的口服药物常会被胃肠道中分布的羧酸酯酶代谢，易在吸收入血之前就被水 解成水溶性较大的活性药物，从而降低了其吸收入血的药物量，影响了生物利用度。若同时 共服安全的人羧酸酯酶抑制剂，可减少前药在吸收过程中的水解，从而提高其口服生物利 用度。
【发明内容】
[0006] 针对上述问题，本发明提供一种补骨脂提取物及其成分作为人羧酸酯酶抑制剂的 医药应用，本发明一种补骨脂提取物及其成分作为人羧酸酯酶抑制剂的医药应用，具体内 容为：
[0007] 补骨脂提取物或其单体化学成分作为人羧酸酯酶抑制剂，用于缓解临床多种化疗 药物导致的迟发型腹泻或提高酯类药物的生物利用度并延长其代谢半衰期。
[0008] 所述的补骨脂提取物为25% -95%乙醇提取物；补骨脂提取物主要单体化学成分 为：新补骨脂异黄酮、补骨脂乙素、补骨脂甲素 A、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂酚、补骨脂 二氢黄酮或异补骨脂二氢黄酮。
[0009] 所述羧酸酯酶抑制剂可以上述任一补骨脂化学成分的单体成分使用，或多种单体 的药物组合物形式使用，或以补骨脂提取物的中药制剂形式使用。
[0010] 所述的药物组合物，包含药学可接受的载体，以及新补骨脂异黄酮、补骨脂乙素、 补骨脂甲素 A、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂酚、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂二氢黄酮中的任 意一种或多种组合。
[0011] 所述的补骨脂提取物中药制剂，包含药学可接受的载体，及补骨脂提取物或部分 纯化物，其可制成片剂、胶囊、滴丸等制剂。
[0012] 所述的化疗药物包括但不限于以下药物：盐酸伊立替康、顺钼、5-氟尿嘧啶、紫杉 醇、拓扑替康、甲氨蝶呤、阿霉素、依托泊苷、环磷酰胺、卡莫司汀、吉西他滨、表柔比星或长 春瑞滨。
[0013] 补骨脂提取物或其单体化学成分可作为人羧酸酯酶抑制剂，用于缓解临床抗癌药 物伊立替康导致的迟发型腹泻或提高酯类药物的生物利用度并延长其代谢半衰期时，所用 补骨脂提取物中活性成分总黄酮类化合物与抗癌药物伊立替康的摩尔比为2~100:1。
[0014] 所用补骨脂单体成分或其组合物与抗癌药物伊立替康的摩尔比优选为为2~ 50:1〇
[0015] 本发明提供的补骨脂提取物的羧酸酯酶抑制剂的应用，主要抑制人体肠道高表达 的羧酸酯酶2。
[0016] 本发明还提供了所述的羧酸酯酶抑制剂的应用，该羧酸酯酶抑制剂能提高前药 (羧酸酯酶底物）的口服生物利用度：该抑制剂在与前药（羧酸酯酶底物）共服时，通过抑 制人胃肠及肝脏体系的羧酸酯酶，可减少前药（羧酸酯酶底物）的胃肠水解及首过效应，提 高其生物利用度。
[0017] 本发明还提供了所述的羧酸酯酶抑制剂的另一个应用，该羧酸酯酶抑制剂能减弱 抗肿瘤药伊立替康导致的腹泻：该抑制剂与伊立替康抗肿瘤药物合用，抑制伊立替康在胃 肠道中的水解，进而降低伊立替康活性代谢物SN-38在胃肠体系的局部暴露量，减缓其导 致的迟发型腹泻严重不良反应。
[0018] 本发明提供的羧酸酯酶抑制剂在减弱抗肿瘤药导致腹泻与提高前药口服生物利 用度方面的应用，该类成分可作为单体或复方与常用辅料混合后制成剂型使用，也可与抗 肿瘤药按不同比例混合后作为药物组合物使用。
[0019] 本发明涉及的补骨脂及其化学成分作为强效羧酸酯酶抑制剂的优点如下：
[0020] 1、安全性高，补骨脂作为中国、印度等国的传统民间用药。补骨脂应用广泛，仅药 典中收载的含补骨脂的中成药就有30余种，其他标准和临床医师处方中更多。卫生部公布 的《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中提到补骨脂属于可用于保健食品的物品。
[0021] 2、本发明应用的羧酸酯酶抑制活性高，其在人肝微粒体中对羧酸酯酶2的半数抑 制浓度IC50可达uM级。
[0022] 3、本发明提供的7个补骨脂单体可以单体形式或组合形式给药，具有服用方便， 作用机理明确，给药剂量低等优势。
[0023] 4、补骨脂及其主要化学成分在缓解盐酸伊立替康等化疗药物所导致的迟发型腹 泻方面具有良好的治疗效果，应用前景和经济效益高于目前临床常用药物洛哌丁胺。
【附图说明】
[0024] 图1补骨脂提取物对hCE2抑制效果
[0025] 图2补骨脂HPLC指纹图谱及其hCE2抑制谱对照图
[0026] 图3 H&E染色对肠粘膜损伤程度评估，其中A为正常组，B为腹泻模型组，C为腹泻 模型+补骨脂组（5g/kg)。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例对本发明予以进一步说明，但并不因此而限制本发明。
[0028] 实施例1
[0029] 补骨脂提取物对人羧酸酯酶亚型抑制活性的测定
[0030] 以荧光素二乙酸酯水解代谢为探针反应，借助人肝微粒体体外孵育体系，采用 96-孔板荧光法快速评价酶活性来筛选对人羧酸酯酶（hCE2)有抑制活性的药材。具体实验 流程如下：
[0031] (1) 200微升体外代谢反应体系中，含有pH7. 4的磷酸缓冲液，人肝微粒体蛋白浓 度为2 μ g/ml，补骨脂经研磨后用95%乙醇超声3小时提取，浓度为0. 3g/ml，每种提取物 取2ul于37°C条件下震荡预孵10分钟；
[0032] (2)向反应体系中加入底物（终浓度10 μ M)，起始反应；于37°C条件下反应30分 钟后，加入200 μ 1乙臆，剧烈震汤后，终止反应；
[0033] (3)采用高速冷冻离心机，在20, OOOXg的条件下，高速离心上述体系5分钟后，取 上清，用酶标仪对水解代谢产物进行定量检测。<