s, 1H), 8. 07 (s, 1H), 7. 34 (s, 1H), 6. 95 (s, 1H), 6 .28 (s, 1H), 5. 93 (s, 1H), 4. 86 (d, J = 12. 0Hz, 2H), 4. 77 (s, 1H), 4. 19 (d, J = 16. 7Hz, 2H), 4. 04 (s, 2H), 2. 81 (s, 1H), 2. 71 (s, 2H), 2. 64 (s, 2H), 2. 14 (s, 1H), 1. 83 (d, J = 12. 0Hz, 5H), 1. 66 (s, 1H), 1. 14 (s, 3H).
[0030] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 202. 12 (s)，176. 12 (s)，149. 34 (s)，148. 38 (s)，139. 9 6(s), 128. 96 (s), 119. 59 (s), 117. 28 (s), 109. 63(s), 82. 08 (s), 67. 99(s), 57. 89 (s), 44. 05 (s), 41. 50 (s), 39. 28 (s), 39. 04 (s), 35. 89 (s), 30. 95 (s), 20. 64 (s), 18. 64 (s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C20H29N204：361. 2127 ；found:361. 2122〇
[0033] 实施例5组合物抗慢性阻塞性肺病实验
[0034] 方法：SPF级雌性BALB/c小鼠，18-20g，随机分为正常对照组、模型对照组、药物处 理组（组合物、化合物III和化合物IV 10mg/kg，灌胃给药），每组10只。将小鼠置于4L容 器内，每日烟熏（南京牌香烟一红壳，焦油含量小于16mg)，一周五次，连续四周，每日烟熏 前1小时灌胃给药，小鼠在末次烟熏后1小时，以苯巴比妥钠麻醉，用〇.6mL预冷的PBS缓 冲液（PH7. 0)肺部灌流，冲洗3次，吸出支气管肺泡灌洗液（BALF)，250 X g离心10min，上清 用于分析TNF a、RANTES的含量。细胞用PBS缓冲液重悬，计数，细胞涂片后用瑞氏-吉姆 萨染色，分析BALF中炎性细胞的变化。
[0035] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的80mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的20mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0036] 实验例1组合物对C(PD小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF)中炎症介质生成抑制作用
[0037] (1)组合物对C0PD小鼠 BALF中TNF α生成抑制作用
[0038] 前炎性细胞因子TNFa是C0PD的发病过程中的启动因子。C(PD患者的TNFa水 平高于正常人，培养的支气管上皮细胞与香烟的烟雾接触可分泌TNF a。TNF a可促使中性 粒细胞脱颗粒，诱导起到粘膜细胞增生和高分泌，增加上皮细胞IL-8生成，增加巨噬细胞 基质金属蛋白酶生成，促进气道高反应性。本实验目的在于考察组合物对C(PD小鼠 BALF 中TNFa生成的影响，结果见表1.
[0039] 表1组合物对C0PD小鼠 BALF中TNF a生成的影响
[0040]
[0041] 注：*P〈0. 05,与模型对照组相比；#P〈0. 05,与正常对照组相比。η = 10。
[0042] 结果：组合物在10mg/kg下对C0PD模型小鼠灌胃给药，可显著降低小鼠 BALF中 TNF α的生成，而化合物III和化合物IV无此作用。
[0043] (2)组合物对C0PD小鼠 BALF中RANTES分泌抑制作用
[0044] 炎症细胞的迀移受到趋化因子的调节，各种结构细胞核炎性细胞均可分泌这些小 分子蛋白，C0PD发病过程中RANTES分泌增加，趋化单核/巨噬细胞，Τ淋巴细胞，嗜酸性细 胞。本实验目的在于考察组合物对C(PD小鼠 BALF中RANTES分泌的影响，结果见表2。
[0045] 表2组合物对C0TO小鼠 BALF中RANTES分泌的影响
[0047] 注：*P〈0. 05,与模型对照组相比；#P〈0. 01，与正常对照组相比。η = 10。
[0048] 结果：组合物在10mg/kg下对C(PD模型小鼠灌胃给药，可降低小鼠 BALF中RANTES 的分泌，而化合物III和化合物IV无此作用。
[0049] 实验例2组合物对C(PD小鼠 BALF中炎性细胞募集的抑制作用
[0050] (1)组合物对C(PD小鼠 BALF中中性粒细胞募集的抑制作用
[0051] 中性粒细胞在C0PD发病中具有重要作用，它可以释放两种丝氨酸蛋白酶，弹性蛋 白酶和半胱氨酰蛋白酶-3,诱导动物产生人类肺气肿样的病理变化。中性粒细胞生命短暂， 它循环招募到气道以及穿越间隙腔的过程十分迅速。病理研究证明有些coro患者支气管 组织内中性粒细胞数目增加与气流阻塞的程度有关。吸烟的coro患者气道内中性粒细胞 数目增加，特别是那些伴有慢性支气管炎的患者。影响coro患者肺内中性粒细胞募集的主 要因素为IL-8趋化活性增强。本实验目的在于考察组合物对C0PD小鼠 BALF中中性粒细 胞募集的影响，结果见表3。
[0052] 表3组合物对C0PD小鼠 BALF中中性粒细胞募集的影响
[0054] 注：*Ρ〈0· 05 ;#Ρ〈0· 01，与正常对照组相比。η = 10。
[0055] 结果：组合物在10mg/kg下对C0PD模型小鼠灌胃给药，可降低小鼠 BALF中中性粒 细胞的募集，而化合物III和化合物IV无此作用。
[0056] (2)组合物对C0PD小鼠 BALF中巨噬细胞募集的抑制作用
[0057] 吸烟者和coro患者肺内巨噬细胞较正常人群水平增加，多聚集在肺泡、细支气管 和小气道。肺泡壁巨噬细胞数目和轻中度肺气肿以及coro患者的小气道疾病程度呈正相 关。组织病变和损伤部位可见到coro缓慢进展和慢性病变与巨噬细胞长期增加平行。巨噬 细胞可能通过释放基质金属蛋白酶导致弹性组织降解能力异常增高，诱发肺气肿的发生。 本实验目的在于考察组合物对coro小鼠 BALF中巨噬细胞募集的影响，结果见表4。
[0058] 表4组合物对C0PD小鼠 BALF中巨噬细胞募集的影响
[0060] 注：*P〈0. 05,与模型对照组相比；#P〈0. 01，与正常对照组相比。η = 10。
[0061] 结果：组合物在10mg/kg下对C0PD模型小鼠灌胃给药，可显著降低小鼠 BALF中巨 噬细胞的募集，而化合物III和化合物IV无此显著作用。
[0062] 结论：组合物在10mg/kg下灌胃给药，对香烟诱导的小鼠慢性阻塞性肺病过程中 的炎性介质的生成和趋化因子的分泌有显著抑制作用，对炎性细胞的浸润有显著的抑制， 对慢性阻塞性肺病有显著的治疗作用。而化合物III和化合物IV在10mg/kg下灌胃给药， 对香烟诱导的小鼠慢性阻塞性肺病过程中的炎性介质的生成和趋化因子的分泌无显著抑 制作用，对炎性细胞的浸润无显著抑制，对慢性阻塞性肺病无任何治疗作用。
[0063] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0064] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0065] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0066] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为80%和20%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为80%和20%充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 慢性阻塞性肺病是由吸烟引起的。5. 如权利要求3所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 组合物抑制慢性阻塞性肺病过程中炎性介质的释放。6. 如权利要求5所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 炎性介质为TNFa。7. 如权利要求3所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 组合物抑制慢性阻塞性肺病过程中趋化因子的分泌。8. 如权利要求7所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 趋化因子为RANTES。9. 如权利要求3所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 组合物抑制炎性细胞的募集。10.如权利要求9所述的组合物在治疗慢性阻塞性肺病药物中的应用，其特征为：所述 炎性细胞为中性粒细胞或者巨噬细胞。
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备抗慢性阻塞性肺病药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有抗慢性阻塞性肺病的作用，具有开发抗慢性阻塞性肺病药物的价值。
【IPC分类】C07D233/60, A61P11/00, C07D295/088, A61K31/495, A61K31/4164
【公开号】CN105287574
【申请号】CN201510890029
【发明人】丁秋菊
【申请人】南京海澳斯生物医药科技有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年12月7日