物中。这些生长特性为（例如）独特营养培养基的任何要求、微生物菌 株发酵后是否能产生较好的气味、以及该类微生物是否能在此独特的条件下存活。这样做 的目的是减少不同种菌株间的负面作用。不同的微生物菌株群最好在培养前以等比例加入 到大豆属发酵萃取物中，得到的萃取物在40°C下培养45-47小时。该培养过程结束后，再 将异种培养物引入大豆属萃取物中，在36-43°C下培养100-150小时。将最终的发酵萃取 物加热灭菌过滤。在浓缩器中去除95%的水份，得到浓缩或凝聚状态的发酵的大豆属萃取 物。最上层经过瓷器过滤，分放在容器中密封保存。
[0025] 此处所使用的名词"个体"或"对象"包括人类及非人类动物，例如，伴侣动物（如， 狗、猫及类似者）、农场动物（如，牛、羊、猪、马及类似者）或实验动物（如，大鼠、小鼠、天竺 鼠及类似者）。
[0026] 此处所使用的名词"治疗"是指为了治愈、愈合、减轻、舒缓、改变、矫正、改善、改进 或影响该疾病、该疾病之症状、该疾病引起的残疾或该疾病的进展，而将包含一或多种活性 剂之组合物施用或投与至患有该疾病、该疾病之症状或病况或该疾病的进展的个体。
[0027] 此处所使用的名词"有效量"是指各活性成分对个体可产生治疗效应之所需含量， 可以是单独或结合一或多种活性成分。如熟习本项技术者可理解的，有效量将视情形而定， 取决于，例如，给药途径，赋形剂的使用，及与其他活性成份的并用。例如，有效于抑制ID0 活性的量是降低或抑制ID0活性的量，其可使用此领域已知的方法来决定或评估，例如，以 细胞为基础的分析或酵素分析（参见以下实例）。
[0028] 在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于降低周边血单核细胞 (PBMCs)的ID0 活性。
[0029] 在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于增加周边血单核细胞 (PBMCs)的存活率。
[0030] 在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于增加免疫反应，特别是T细胞调节的免疫反应，经由，例如，增加T细胞增生、降低T细胞自戕及降低调节T细胞而达 成。
[0031] 具体而言，本发明的发酵大豆萃取物有效于在有需要的个体治疗ID0调节的免疫 低下。此处所使用的名词"免疫低下"可指免疫系统任一成员的损坏，导致降低的免疫功 能。免疫低下可能由各种因素造成，例如，压力、营养不良、感染疾病、癌症、器官移植的抗排 斥药物、抗发炎药物或癌症的化疗或辐射治疗。
[0032] 在部分具体实施例中，感染疾病是病毒感染，选自人类免疫不全病毒（HIV)、C型 肝炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒及淋巴球性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV)所组成的群组。
[0033] 在部分具体实施例中，化疗是经由投用抗癌化疗药物而进行，选自顺铂 (cisplatin)、多西它赛（docelaxel)、泛艾霉素（epirubicin)、艾日布尔（eribulin)、弗 瑞斯锭（fareston)、吉西它宾（gemcitabine)、太平洋紫杉醇（paclitaxel)、泰莫西芬 (tamoxifen)及长春新碱（vincristine)所组成的群组。
[0034] 在部分具体实例中，辐射治疗包括铯，铱，碘或钴。辐射治疗可以是全身性或针对 位置的局部性，例如，针对肿瘤位置及固体癌组织。幅射治疗可以是传统的外照射和电子放 射疗法，质子放射疗法，近距离放射疗法和分子放射疗法。
[0035] 具体而言，如此领域已知者，ID0的免疫抑制活性已经在不同的生理及病理情况中 予以证实，包括癌症。基于测定色氨酸及犬尿氨酸的血清浓度的研究，ID0显示在患有癌症 的病患中慢性活化，且ID0活化与广泛的疾病状态有关。ID0在许多的人类肿瘤种类及定位 于肿瘤引流淋巴结（TDLNs)的星状细胞（DCs)过度表现。增加的ID0表现已经显示是对于 患有急性髓性白血病（AML)、小细胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌及子宫内膜 癌之病患的降低存活之独立预后可变因素。因此，ID0抑制可被确认为癌症免疫疗法的有 希望的方式。
[0036] 在部分具体实施例中，癌症包括胃癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、子宫颈癌、前列 腺癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌及血癌。
[0037] 本发明的发酵大豆萃取物可通过任何生理上可接受的途径来递送，例如，经口、经 肠外（例如，肌内、静脉内、皮下、腹膜内）、经皮、经直肠、通过吸入等。在一具体实施例中， 本发明的发酵大豆萃取物是经口投与。
[0038] 在部分具体实施例中，根据本发明的发酵大豆萃取物可以有效量投用达一段足够 时间，以在有需要的病患活化或恢复T细胞活性。
[0039] 为帮助递送，可用生理上可接受的载剂将本发明发酵大豆萃取物调配为组合物。 可将本发明组合物调配成药物、食品添加剂或保健产品。
[0040] 本文所使用的"生理上可接受的"乙词指载剂与组合物中所含的活性成份兼容，较 佳地能稳定该活性成份，并且对治疗个体无害。载剂可用作活性成份的稀释剂、媒剂、赋形 剂或介质。适宜赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶 (gumacacia)、磷酸妈、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸妈、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维 素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。医药组合物可另外包括润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸镁和 矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，例如，羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；增甜 齐；和矫味剂。
[0041] 可根据说明书中所提供教示内容使用常规技术视需要以任何形式来制备本发明 的组合物。在某些实例中，可将本发明组合物制成以下形式：锭剂、丸剂、粉剂、锭剂、香囊、 扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液及包装的粉 末。
[0042] 本发明组合物可通过任何生理上可接受的途径来递送，例如经口、经肠外（例如 肌内、静脉内、皮下、腹膜内）、经皮、经直肠、通过吸入和诸如此类。在一具体实施例中，本发 明的组合物是经口投与。
[0043] 现将参照以下实施例更具体地阐述本发明，提供所述实施例用于说明性而非限制 性目的。
[0044] 实施例
[0045]在本研究中，我们使用IFNγ刺激的人类周边血单核细胞（PBMCs)，以研究本发明 的发酵大豆萃取物（下称MS-20)对于色氨酸降解的效应。以IFNy刺激PBMC诱发显著的 色氨酸分解代谢，其可反应于色氨酸浓度降低及犬尿氨酸浓度的平行增加，相较于未经刺 激的细胞而言。并行地，也观察到细胞存活的增加。以增加剂量〇. 5-4mg/mL(0. 125% -1% ) MS-20处理经IFNy刺激的PBMC显著地抑制IFNy诱发的色氨酸降解。MS-20的该等效应 是剂量依赖的。此一基于细胞的ID0分析也在具有较高内生ID0表现的海拉人类子宫颈癌 细胞中进行，结果也在海拉细胞中观察到相同的经由MS-20的抑制现象，IC5。为1. 8mg/mL。 由MS-20抑制IDO也经由酵素分析确认，获得与基于细胞分析类似的结果（IC5。为1. 86mg/ mL)。这些结果证实MS-20对于IFNγ诱发的IDO有抑制作用。
[0046] 1.材料方法
[0047] 1. 1.试剂
[0048] 细胞株购自美国典型组织培养物中心（ATCC)及依据建议的培养条件例行维护。 L-1MT(ID0抑制剂）、L-色氨酸、L-犬尿氨酸购自Sigma-Aldrich。人类IFNy购自R&D Systems，根据制造商的建议储存和使用。
[0049] 1.2ID0酵素活性分析
[0050] ID0活性测定采用比色法。简言之，将2X106细胞通过冷冻和解冻破坏，溶解物 (250 μL)通过离心澄清化，加入等量2倍ID0缓冲液（100mM磷酸盐缓冲盐水（PBS)，pH 为6. 5,含40mM抗坏血酸、20μπι的亚甲基蓝、200mg/ml过氧化氢酶和800μπι的L-色氨酸 (Sigma-Aldrich,St.Louis,Μ0))。在 37°C培育 30 分钟后，加入 100μL的 30%三氯乙酸以 终止反应，在52°C再另外培育30分钟，并离心。将上清液用Ehrlich试剂（100mg对-二 甲基苯甲醛，5mL冰醋酸）于微量滴定板孔（96孔格式）等量混合，使颜色发展10分钟，然 后以分光量度计在490nm读取吸亮度。样本相对于空白试剂以490nm滤镜在微量盘分析仪 (BioTekSystems)读取。犬尿氨酸的浓度对应于犬尿氨酸标准曲线予以计算。
[0051] 1. 3以细胞为基础的ID0分析
[0052] 在人类PBMC测定抑制剂活性
[0053] 人类周边血单核细胞（PBMCs)是通过Ficoll-Hypaque密度梯度分离自健康志愿 者的白血球细胞浓缩物（从血库得到）。该测定如下进行：人类PBMCs以每