一种脾多肽注射液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂领域，具体地说，设及一种脾多肤注射液的制备方法。
【背景技术】
[0002] 众所周知，哺乳动物体内有不少人体所需的各种营养成分及活性成分，进而有不 少针对从哺乳动物的屯、脏、肝脏及肌肉组织中提取活性多肤的报道。
[0003] 而脾脏是哺乳动物的外周免疫器官，也是动物体内代谢最为旺盛的器官之一，由 于其中含有丰富的细胞基本营养成分及细胞因子，特别是促进细胞代谢的活性成分如多肤 类物质和核酸W及免疫调节因子一-寡核巧肤等，因而受到研究者的广泛关注。国外对脾 提取物的研究工作较早，目前已有用于化妆品的商品，如crydermine及增强免疫功能的保 健品，如spleenP.M.G、IM-Encap、Gold-speen500 等。
[0004] 《肉类工艺》2002年2期的"猪脾多肤的制备工艺研究"公开了猪脾脏的制备工 艺，工艺流程为脾脏一一去脂肪一一匀浆一一脱脂一一酶解一一终止反应一一过滤一一吸 附脱色一一凝胶层析一一真空干燥一一成品。具体工艺为：取一定量的新鲜猪脾脏，取掉大 块的外表脂肪、表皮及皮下筋膜，加1 :1的10°c蒸馈水，用组织捣碎机匀浆，按4:1的比例 加正己烧或乙酸在常溫下密闭抽提化脱脂，分离得到脱脂的脾脏匀浆；将400ml脾匀浆液， 置于恒溫水浴锅中，调节溫度至（50±2)°C，W化(OH)2乳液调节溶液至酶最适抑值，加入 30g酶，反应一段时间后，W1:1肥1调抑至中性，同时升溫至80°C保持15min，使酶纯化中 止反应，纱布过滤，滤液加5%的活性炭吸附脱色，抽滤，过G-15葡聚糖凝胶柱，收集范围的 溶液，50°C真空浓缩干燥，得脾脏多肤成品。该工艺采用的是酶解法，通过酶解脾脏中蛋白 质来获得多肤，所得多肤成分组成易变动且并非原来天然存在的多肤。 阳0化]CN1634987A公开了一种从除人W外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肤提 取物，将哺乳动物组织经去脂肪、匀浆、调酸、冻融破碎、调节抑值沉淀、加热、离屯、过滤、超 滤等步骤制得脾多肤提取物；该药为免疫调节药，能够提高和改善机体免疫功能，可用于原 发性和继发性细胞免疫缺陷病（如湿疹、血小板减少、多次感染综合症等）、呼吸道及肺部 感染、习惯性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、复发性口疮等疾病治疗，可在治疗放化疗 引起的白细胞减少症、白血病、再生性障碍贫血、淋己瘤及其他恶性肿瘤、改善肿瘤患者恶 变质、改善术后或重症患者身体虚弱时辅助使用。
[0006] 然而，采用现有技术的方法提取率低，使得脾多肤提取物中多肤的含量低，从而影 响其制剂的疗效。
[0007] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种脾多肤注射液的制备方法，该方法脾多肤提取率高， 得到的提取物中多肤的含量高，疗效好。
[0009] 为实现本发明的目的，本发明采用如下方案：
[0010] 一种脾多肤注射液的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0011] 1)取新鲜健康干净的除人W外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；
[0012] 2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；
[0013] 3)提取液调节抑值至3. 8~4. 2,反复冻融2~3次；最后一次融化后的提取液 离屯、，取上清液过滤，得清液I;
[0014] 4)向清液I中加入95%乙醇，揽拌，使清液I中乙醇含量在75~85%，0~10°C 静置12~24小时，滤取上清液，得清液II;
[0015] 5)清液II调节抑值至6. 5~7. 0,加热，冷却至常溫后离屯、，取上清液过滤，得清 液III;
[0016] 6)清液HI冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1~2次，所得超滤液即为脾多肤提 取物；
[0017] 7)上述脾多肤提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节抑值至6. 5~ 7. 0,经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肤注射液。
[0018] CN1634987A公开了一种从除人W外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肤提 取物及制备方法，然而该方法的提取率低，使得脾多肤提取物中多肤的含量低，从而影响其 制剂的疗效。
[0019] 本发明对脾多肤的提取方法进行了改进，试验表明，采用本发明方法脾多肤的提 取率高，得到的脾多肤提取物中多肤的含量高，其临床疗效好。
[0020] 其中，步骤1)中，加水的量为脾脏重量的6~10倍，优选8倍。
[0021] 即加水的质量与脾脏重量的比为6:1~10:1，优选8:1。
[0022] 液料比即所加的水的质量与脾脏重量的比。液料比不同对提取率有一定的影响。 本发明在提取溫度为55°C、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同液料比对提 取率的影响，如图1所示。由图1可知，开始随着液料比增大，脾多肤提取率增加，当液料比 为6:1~10:1时，脾多肤提取率大于50%;而当液料比大于8 :1W后，则出现降低的趋势。 因此，本发明中选择液料比为6:1~10:1，优选8:1。 阳02引步骤。中，所述的超声提取为在溫度50~60°C、超声功率60~80W的条件下超 声提取8~16min;优选所述的超声提取为在溫度55°C、超声功率70W的条件下超声提取 12min。
[0024] 提取溫度、超声功率和提取时间对提取率有着较大的影响
[0025] 本发明在液料比为8:1、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同提取溫 度对提取率的影响，如图2所示。由图2可知，在一定范围内脾多肤的提取率随溫度升高 而增加，当提取溫度为50~60°C时，脾多肤提取率大于50% ;当提取溫度为55°C时提取率 达到最大，此后，溫度上升提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取溫度为50~ 60°C，优选 55°C。 阳0%] 同时，本发明在液料比为8:1、提取溫度为55 °C、提取时间为12min时，考察了不同 超声功率对提取率的影响，如图3所示。由图3可知，随超声功率的增加，脾多肤提取率随 之提高，当提取功率为60~80W时，脾多肤提取率大于50%;当提取功率为70W时提取率达 到最大，此后，超声功率增加提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取功率为60~ 80W，优选 70W。
[0027] 本发明还在液料比为8:1、超声功率为70W、提取溫度为55°C时，考察了不同提取 时间对提取率的影响，如图4所示。由图4可知，随着提取时间的延长，脾多肤提取率随之 提高，当提取时间为8~16min时，脾多肤提取率大于50% ;当提取时间为12min时提取率 达到最大，超过12min后，提取率呈减少趋势。因此，本发明中选择提取时间为8~16min， 优选12min。
[0028] 步骤3)中，所述的冻融为在-18~-22°C下冷冻，在15~22°C下融化。
[0029] 步骤3)和步骤5)中所述离屯、的条件为3500~4000转/分，离屯、时间15~20 分钟。
[0030] 优选的，步骤5)中，所述的加热为在75~80°C下加热15~20分钟。
[0031] 优选的，步骤6)中，所述的冷冻为在-18~-22°C下冷冻，所述的融化为在10~ 15°C下融化。
[0032] 优选的，步骤6)中，所述的超滤用截留分子量6000道尔顿W下的超滤膜超滤。
[0033] 本发明所述的哺乳动物可为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等。从猪、狗、牛、羊、鹿、马或 兔等新鲜健康脾脏组织中均可提取本发明所述的活性多肤。
[0034] 从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述哺乳动物脾 脏组织优选牛脾脏组织作为脾多肤提取物的生产原料。
[0035] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0036] 采用本发明的方法脾多肤的提取率高，得到的脾多肤提取物中多肤的含量高，其 临床疗效好。
【附图说明】
[0037] 图1为液料比对提取率的影响示意图；
[0038] 图2为提取溫度对提取率的影响示意图；
[0039] 图3为超声功率对提取率的影响示意图；
[0040] 图4为提取时间对提取率的影响不意图。
【具体实施方式】
[0041] W下为本发明的【具体实施方式】，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是 限制本发明。 阳042] 实施例1
[00创 1)取新鲜健康的牛脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加8倍脾脏 重量的水匀浆，得匀浆液；
[0044] 2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在溫度55°C、超声 功率70W的条件下超声提取12min;
[0045] 3)提取液调节抑值至4. 0,在-20°C下冷冻，在18°C下融化，反复冻融2次；最后 一次融化后的提取液离屯、，离屯、条件为3800转/分，离屯、时间18分钟，取上清液过滤，得清 液I;
[0046] 4)向清液I中加入95%乙醇，揽拌，使清液I中乙醇含量在80%，5°C静置18小 时，滤取上清液，得清液II;
[0047] W清液II调节抑值至6.8,在78°C下加热18分钟，冷却至常溫后离心离屯、条件 为3800转/分，离屯、时间18分钟，取上清液过滤，得清液III;
[0048] 6)清液III在-20°C下冷冻，冻实后在12°C下融化，过滤，清液用截留分子量6000 道尔顿W下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肤提取