甲氰咪胍在制备自身免疫性结膜炎治疗药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，进一步涉及物质的新的医药用途，具体涉及甲氰咪胍 在制备自身免疫性结膜炎治疗药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 甲氰咪胍又名西咪替丁、泰胃美，作为可选择性H2受体拮抗剂，在现有技术中主 要用于消化性溃疡的治疗，其药理作用主要包括抑制胃酸分泌、抑制基础和夜间胃酸分泌， 也能抑制由组胺、分肽胃泌素、胰岛素和食物等刺激引起的胃酸分泌，并使其酸度降低，对 因化学刺激引起的腐蚀性胃炎有预防和保护作用，对应激性胃溃疡和上消化道出血也有明 显疗效。西咪替丁为白色或类白色结晶性粉末；几乎无臭，味苦；在甲醇中易溶，在乙醇中 溶解，在异丙醇中略溶，在水中微溶，在稀盐酸中易溶。
[0003] 结膜炎是眼科常见的致盲眼病之一。按照病因可分为感染性结膜炎和非感染性结 膜炎。其中，非感染性结膜炎被认为是一类自身免疫性眼病。现有技术中对结膜炎的治疗 方法主要为散瞳、抗炎和免疫治疗，其中散瞳和抗炎主要是针对症状所采取的治疗手段，而 免疫治疗更侧重于去除病因。现有技术中针对结膜炎的免疫治疗药物主要为免疫抑制剂， 例如硫唑嘌呤通过竞争性的抑制腺嘌呤和鸟嘌呤，从而抑制DNA合成及RNA转录，减少外周 T淋巴细胞、B淋巴细胞数量，抑制免疫淋巴反应，而环磷酰胺对于静止期和分裂期的淋巴 细胞均具有细胞毒性作用，从而抑制免疫反应。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供甲氰咪胍在制备自身免疫性结膜炎治 疗药物中的新用途，从而为自身免疫性结膜炎的治疗提供一种新的药物选择。
[0005] 本发明要解决的另一技术问题是扩展了甲氰咪胍作为药物的适应症范围；
[0006] 本发明要解决的再一技术问题是提升自身免疫性结膜炎的治疗效果。
[0007] 为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
[0008] 式⑴化合物用于制备自身免疫性结膜炎治疗药物的应用，
[0009]
[0010] 优选地，所述药物是以降低Thl淋巴细胞含量为药理作用的药物。
[0011] 优选地，所述药物是以降低Thl7淋巴细胞含量为药理作用的药物。
[0012] 优选地，所述药物是以抑制Thl淋巴细胞分泌IFN-γ为药理作用的药物。
[0013] 优选地，所述药物是以抑制Thl7淋巴细胞分泌IL-17A为药理作用的药物。
[0014] 优选地，所述药物是以抑制眼结膜巨噬细胞浸润为药理作用的药物。
[0015] 在以上技术方案中，所述药物是以口服形式给药的内用药。本发明创新性的发现 甲氰咪胍可调节免疫系统效应，从而用于治疗相关病理损伤。具体而言，可下调Thl细胞亚 群、Thl7细胞亚群比例，维持血眼结膜屏障完整性，抑制巨噬细胞浸润，抑制眼内炎症反应。 同时能够抑制眼结膜STATUSTAT3及其磷酸化蛋白表达量，抑制NF-κBp65的表达量，其抗 炎症作用是通过抑制STAT1、STAT3途径及NF-κB信号转导通路实现的。
[0016] 基于甲氰咪胍的以上新性质，本发明确定了利用其治疗结膜炎的新用途，临床应 用发现，甲氰咪胍对自身免疫性结膜炎的治疗起效快、疗效确切，且未发现副作用，具有突 出的推广前景。
【附图说明】
[0017] 图1是本发明实施例中对照组小鼠和甲氰咪胍治疗组实验动物眼底图像；其中A 部分为对照组实验动物眼底表现，B部分为甲氰咪胍治疗组实验动物眼底表现。
[0018] 图2是本发明实施例中对照组小鼠和甲氰咪胍治疗组实验动物临床评分结果。
[0019] 图3是本发明实施例中对照组小鼠和甲氰咪胍治疗组实验动物组织学评分结果。
[0020] 图4是本发明实施例中对照组小鼠和甲氰咪胍治疗组实验动物眼结膜血管灌注 造影眼结膜铺片；其中A部分为对照组小鼠结果，B部分为甲氰咪胍治疗组小鼠结果。
[0021] 图5是本发明实施例中对照组小鼠和甲氰咪胍治疗组实验动物辅助T淋巴细胞亚 群分布情况图。
【具体实施方式】
[0022] 以下将对本发明的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在 以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
[0023] 以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情 况下可允许数量有一定的变动。因此，用"大约"、"左右"等语言所修正的数值不限于该准 确数值本身。在一些实施例中，"大约"表示允许其修正的数值在正负百分之十（10%)的 范围内变化，比如，"大约1〇〇"表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在"大约第 一数值到第二数值"的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近 似性语言可能与测量仪器的精度有关。
[0024] 除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。
[0025] 1患病模型的建立
[0026] 取6-8周龄小鼠，体重15_20g，饲养于标准化无特定病原体动物（SPF)级动物 房，实验动物用标准颗粒饲料喂养，自由饮水摄食，室温为（22±2)°C，，适应性饲养2-7d 后皮下注射乳化的IRBPi2。于模型组小鼠一侧后足掌垫、双侧尾根及后臀部，共注射抗原 300μg，同时腹腔内注射百日咳菌液1μg破坏小鼠的全身免疫耐受，以增强免疫效果，免 疫当天记作第0天（day0)。
[0027] 2给药方式
[0028]自免疫造模前3天（day-3)开始以25mg/kg·day的剂量每日连续对甲氰咪胍组 小鼠进行灌胃给药，直至免疫造模后第21天（day21)。由于甲氰咪胍为有机化合物，溶于 有机溶剂DMSO而不溶于PBS，故甲氰咪胍以10μ1DMS0+140μ1PBS溶解，对照组采用同样的 方式以空白溶媒10μ1DMS0+140μ1PBS灌胃处理。
[0029] 3治疗效果观察
[0030]于免疫后第12天（day12)起每日连续观察对照组及甲氰咪胍组小鼠眼底损伤情 况，方法为：复方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后，使用双目间接检眼镜，辅助+90D前置镜暗室 检查。
[0031] 于免疫后第21天（day21)对两组小鼠进行小鼠眼底损伤的临床评分，评分标准 见表1。由两位眼科医师共同对所有小鼠双侧眼底损伤情况进行随机双盲打分。
[0032] 表1患病小鼠临床评分标准
[0033]
[0034] 4小鼠眼底图像采集
[0035] 于免疫后第21天（day21)对两组小鼠进行眼底图像采集。用复方托吡卡胺滴眼 液充分散瞳、盐酸奥布卡因滴眼液表面麻醉，角膜表面涂以医用透明质酸钠凝胶，上覆盖玻 片消除角膜曲率的影响。以〇度耳镜窥入眼底，计算机成像系统采集眼底图像。
[0036] 分别取对照组和甲氰咪胍组小鼠眼球的HE染色切片在光学显微镜下观察眼结膜 及玻璃体腔的组织结构、炎性细胞浸润情况，并进行组织病理学评分，评分标准见表2。由两 位眼科病理学医师共同对两组小鼠眼球切片分别进行随机双盲打分。
[0037] 表2患病小鼠组织病理学评分标准
[0038]
[0039] 5伊文思蓝（EB)血管灌注造影眼结膜铺片
[0040] 于免疫后第21天（day21)将对照组和甲氰咪胍组分别取4只小鼠，进行EB血管 灌注造影眼结膜铺片。
[0041] (1)麻醉：称重后10%水合氯醛以30011^/1^腹腔注射麻醉；
[0042] (2)EB注射：29G针头穿刺入尾静脉内注射2%EB100μ1，循环2小时；
[0043] (3)固定：处死小鼠，摘取眼球，置于浓度为4%多聚甲醛溶液中固定3小时；
[0044] (4)剥离眼结膜：在手术显微镜下用角巩膜剪于眼球角巩膜缘后约0. 5mm处剪开， 除去角膜、虹膜，娩出晶状体和玻璃体。将眼结膜以视盘为中心放射状剪开4刀，置于载玻 片上，用显微有齿镊小心将巩膜翻转，完整分离出眼结膜，平铺于载玻片上；
[0045] (5)封片：滴少许封片剂后以盖玻片封片；
[0046] (6)照相：立即置于激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察、照相。
[0047] 6小鼠脾细胞流式细胞术
[0048] 于免疫后第21天（day21)检测治疗组小鼠和PBS对照组脾脏Thl7细胞、Thl细 胞占单个核细胞比例，Treg细胞、ThO细胞分别