用于组织产物的酶处理的方法
【专利说明】用于组织产物的酶处理的方法
[0001] 本申请是在35U.S.C.§120下于2013年9月5日提交并且通过引用W其全文结合在 此的美国申请号14/019,274的一个部分继续申请。
[0002] 本披露设及组织基质，并且更具体地，设及通过用蛋白水解酶处理基质来控制组 织基质的机械和/或生物学特性的方法。
[0003] 不同组织衍生的产物被用于再生、修复、或另外治疗患病的或受损的组织和器官。 此类产品可W包括完整组织移植物和/或无细胞的或重建的无细胞组织（例如来自皮肤、 肠、或其他组织的无细胞组织基质，用或不用细胞接种）。此类产品一般具有由组织来源（即 组织型及它所来源的动物)和用于生产该组织产物的加工参数所决定的机械特性。因为组 织产物通常用于外科应用和/或组织置换或增强，所W组织产物的机械特性是重要的。例 如，外科医生通常优选感觉像天然组织和/或在手术程序期间容易操作的组织。然而，一些 组织产品不令人希望地是僵硬的和/或具有不自然的感觉。因此，提供了用于处理组织产物 W产生更加令人希望的机械特性的方法。
[0004] 此外，当被植入体内时，衍生自外源性材料(例如，来自其他动物或者患者的组织、 连同任何类型的经处理的组织）的组织产物可W在受者内引发一种炎症或免疫应答。在一 些情况下，过度免疫应答可能是有害的，引起该植入体形成不希望的癒痕组织，或预防组织 于植入部位的适合的再生。因此，提供了用于处理组织产物W减少或控制组织产物在植入 时的免疫应答的方法。 概述
[0005] 根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法可W包括选择一 种含胶原的组织基质，并且使该组织基质与一种蛋白水解酶在足W使该组织基质内产生所 希望的柔软性水平的条件下相接触。
[0006] 在另一个实施例中，提供了用于处理组织基质的方法。该方法可W包括选择一种 含胶原的无细胞组织基质，并且使该组织基质与一种蛋白水解酶在足W使该组织基质内产 生所希望的柔软性水平并且增加该组织基质的多孔性的条件下相接触。
[0007] 在一些实施例中，提供了一种无细胞组织基质。该基质可W通过一种工艺来制备， 该工艺包括选择一种无细胞组织基质，并且使该组织基质与一种蛋白水解酶在足W使该组 织基质内产生所希望的柔软性水平的条件下相接触。
[000引根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法可W包括选择至 少一种含有胶原的组织基质；使该至少一种含有胶原的组织基质与一种蛋白水解酶相接 触;并且进行一种测定来确定使该至少一种含有胶原的组织基质与至少一种蛋白水解酶相 接触是否已经改变了该至少一种含有胶原的组织基质，从而当该组织基质植入人体中时减 少人对该组织基质的免疫应答。
[0009]根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法可W包括选择一 种真皮组织基质;并且使该真皮组织基质与碱性蛋白酶在包括一个解育时间的条件下于具 有碱性蛋白酶活性的一种溶液中相接触，运些条件经选择W产生如通过悬垂性试验测量的 该组织基质柔软性的所希望的增加而不产生显著的胶原降解。
[0010] 根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法可W包括选择一 种真皮组织基质；并且使该真皮组织基质与碱性蛋白酶相接触;并且用福射处理该组织基 质，其中该碱性蛋白酶是在经选择W在用福射处理后产生所希望的组织基质柔软性的条件 下提供的。
【附图说明】
[0011] 图1A-1D显示使用实例1所描述的方法用酶处理之后的无细胞组织基质，W及未处 理的对照。
[0012] 图視根据实例1的方法，处理过的和对照样品拉伸强度现聯数据的盒形图。
[0013] 图3是根据实例1的方法，处理过的和对照样品缝合强度测试数据的盒形图。
[0014] 图4是根据实例1的方法，处理过的和对照样品撕裂强度测试数据的盒形图。
[001引图5是根据实例1的方法，处理过的和对照样品弹性现聯数据的盒形图。
[0016] 图6是根据实例1的方法，处理过的和对照样品抗蠕变性测试数据的盒形图。
[0017] 图7展示根据实例2.2,未处理的组织及使用渡萝蛋白酶和碱性蛋白酶处理的组织 的DSC热谱图。
[0018] 图8A-8B展示使用实例2.4中描述的单核细胞活化测定，活化标记CDH(A)和CD163 (B)在与不同组织共培养的单核细胞中的表达模式。
[0019] 图9A-F是未处理的pADM(9A-9C)和酶处理的pADM(9D-9F)在移植后的苏木精和曙 红化&E)切片，如实例2.5中描述。
[0020] 图IOA-D是未处理的pADM(9A-9B)和酶处理pADM(9C-9D)外植体的H&E切片，如实例 2.5中描述。
[0021] 图11是显示针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未 处理对照的悬垂性试验结果的条形图。
[0022] 图12是显示针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未 处理对照的胶原酶消化测定结果的线形图。
[0023] 图13展示DSC结果，包括根据实例3未处理组织和使用碱性蛋白酶处理的组织的变 性起始溫度。
[0024] 图14是针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未处理 对照的最大负载/单位宽度的区间图。
[0025] 图15是针对使用实例3中描述的方法用碱性蛋白酶处理后的组织基质连同未处理 对照的弹性的区间图。 某些示例性实施方式的说明
[0026] 现在将详细地参考根据本披露的某些示例性实施例，运些实施例的某些实例展示 于附图中。在可能的情况下，将贯穿运些附图使用相同的参考号来指示相同或相似的部分。
[0027] 在本申请中，单数的使用包括了复数，除非另外明确说明。在本申请中，"或者"的 使用是指"和/或"，除非另外说明。此外，术语"包括"W及其他形式的使用（例如，"包含"和 "含有"）不是限制性的。在此所述的任何范围应当被理解为包括端点W及在端点之间的所 有值。
[0028] 在此使用的小节标题仅是为了编排的目的并且不应该被解释为对所述主题进行 限制。在本申请中所引用的所有文件或文件的部分，包括但不局限于专利、专利申请、论文、 书籍、和专著，都特此出于任何目的通过引用将其全部内容清楚地结合在此。
[0029] 如在此使用的，"组织产物"应指包含细胞外基质蛋白的任何人类的或动物的组 织。"组织产物"可W包括无细胞的或者部分地脱细胞的组织基质、已经用外源细胞再生的 脱细胞组织基质、和/或细胞组织。
[0030] 如在此使用的，"组织基质"是指细胞外基质，包括给定组织的胶原，其中该基质保 留了来自其所源于的组织的天然细胞外基质的互连结构胶原基质特征。"无细胞组织基质" 是指已经从中去除了天然组织细胞的"组织基质"。
[0031] 可W使用不同的人和动物的组织生产用于治疗患者的产物。例如，已经生产了用 于再生、修复、增强、加强、和/或治疗由于不同疾病和/或结构性损伤(例如来自创伤、外科 手术、萎缩、和/或长期磨损和退化）而已经受损或者损失的人类组织的不同组织产物。例 如，此类产物可W包括无细胞组织基质、组织同种异体移植物或异种移植物、和/或重建的 组织（即已经用细胞接种的至少部分地脱细胞的组织，W生产活材料）。
[0032] 对于外科应用，通常希望生产具有某些机械特性的组织产物。例如，可W包括材料 片的组织产物应拥有足够的强度来承受预期用途的需求。某些组织产物可W被用于修复缺 陷(例如痛气），用来支持周围组织或植入物(例如用于乳房增大和/或重建），或用来置换受 损或损失的组织(例如在创伤或外科切除后）。无论具体的用途，组织产物应具有足够的强 度、弹性和/或其他机械特性，用来发挥功能，直至发生组织再生和/或修复。
[0033] 此外，组织产品应该具有所希望的感觉。例如，外科医生通常优选具有天然组织样 感觉(例如足够柔软、柔初、和/或有弹性的）的材料。此外，移植后希望组织产物感觉是天然 的。例如，用于乳房增大的组织不应该过分僵硬W便其在植入时产生自然感觉的胸部。
[0034] 然而，一些组织产物对于一些应用可能过分坚硬了。例如，一些外科医生注意到衍 生自猪的真皮材料例如STRATTICE?不比人类真皮产物例如ALLODE民Mi殺柔软。然而，改 善此类产物感觉的工艺不应不利地影响运些产物的生物和/或机械特性。确切地说，对运些 产物进行的用来改善运些产物感觉的处理不应产生不希望的其他机械特性例如拉伸强度 上的降低，并且不应W此类方式改变蛋白质基质W至于该材料不支持组织再生和/或修复。
[0035] 本披露提供了用于处理组织W控制从运些组织产生的