具有抗肿瘤功能的益生菌组合物及其制备方法与应用
【专利说明】具有抗肿瘤功能的益生菌组合物及其制备方法与应用 【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有抗肿瘤功能的益生菌组合物及其制 备方法与应用。 【【背景技术】】
[0002] 恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地危害人类的健康，并将成为 新世纪人类的第一杀手。从世界范围来看，2000年全球新发癌症病例1010万，死亡620万，现 患癌症病例2240万，2008年癌症发病人数和死亡人数分别上升到1266万和756万，估计到 2015年将有1500万新发病例。我国作为一个发展中的大国，由于工业化、城镇化和人口老龄 化进程的加快，不良的生活方式以及环境污染等问题的存在，恶性肿瘤而临的形势也愈发 严峻。然而，现有的技术大多是治疗癌症而不是预防癌症，并且伴随着一系列的副作用，对 身体造成极大的伤害。因此，寻求更安全、更有效能抗肿瘤的方法，对人类的健康就显得尤 为重要。
[0003] 近年来研究表明，益生菌能激活机体巨噬细胞、NK细胞等多种免疫细胞，诱导产生 肿瘤坏死因子-a、0(TNF-a、0)、干扰素 -γ (IFN- γ )、白介素-12(IL_12)、一氧化氮(NO)等效 应因子，而发挥抗肿瘤和免疫调节作用。益生菌减少可导致肠道菌群失调，病原菌乘机大量 繁殖，其代谢产物中某些细菌酶能催化致癌前体物质向致癌物质转化，并随血流到达乳腺 等肠外器官而发挥致癌作用。益生菌可恢复肠道菌群平衡，拮抗肠道中病原菌生长，使细菌 酶的产生及活性降低，还可结合致癌物质随粪便排出，减少了其形成、活化及滞留机会。因 此，益生菌制剂可以作为一种抗肿瘤的新方法，并且具有来源安全、效果显著、无任何毒副 作用等优点。 【
【发明内容】
】
[0004] 本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤功能的益生菌组合物，该组合物能够有效 提高机体免疫力，促进人体健康。
[0005] 本发明的另一目的在于提供上述具有抗肿瘤功能的益生菌组合物的制备方法。
[0006] 本发明的再一目的在于提供上述具有抗肿瘤功能的益生菌组合物的应用。
[0007] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0008] -种具有抗肿瘤功能的益生菌组合物，包含如下按质量百分比计的组分:益生菌 干粉60~70 %，黄芪提取物粉20~30 %，芦笋提取物粉10~20 %。
[0009] 优选的，所述的具有抗肿瘤功能的益生菌组合物包含如下按质量百分比计的组 分:益生菌干粉70 %，黄芪提取物粉20 %，芦笋提取物粉10 %。
[0010] 所述的益生菌干粉由鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、长双歧杆菌按质量比为1:1:1的 比例组成。
[0011]所述的益生菌干粉可以通过购买上市的原料或自行摸索制备工艺的方式获得，本 发明对所选的益生菌干粉的制备工艺进行了优化;所述的益生菌干粉制备方法步骤优选如 下：
[0012] 1)分别将鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、长双歧杆菌经培养基活化后，接种于发酵培 养基中，振荡培养，使菌体浓度达到对数生长期〇. 5~1.0 X 109cfu/ml;
[0013] 2)将步骤1)中各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌 泥；
[0014] 3)配制干粉保护剂；
[0015] 4)将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制 成具有包埋层的活性益生菌干粉；
[0016] 黄芪提取物粉为豆科植物蒙古黄芪的根提取物。多年生草本，高50-100厘米。主根 肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50-100厘米。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有 增强免疫力，增强能量，抗疲劳，抗突变，保肝，抑制破骨细胞的作用。黄芪多糖具有降血脂， 即降低胆固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用;能够预防和治疗心脑血管疾病，如动 脉粥样硬化、冠状动脉病变、周围血管病变以及高脂血症等。另有研究表明，12.5%的黄芪 对双歧杆菌有明显的促进生长作用。
[0017] 芦笋提取物粉为百合科植物石刁柏的嫩茎提取物。芦笋中含有丰富的抗癌元素之 王一硒，阻止癌细胞分裂与生长，抑制致癌物的活力并加速解毒，甚至使癌细胞发生逆转， 刺激机体免疫功能，促进抗体的形成，提高对癌的抵抗力;加之所含叶酸、核酸的强化作用， 能有效地控制癌细胞的生长。芦笋对膀胱癌、肺癌、皮肤癌等有特殊疗效，并且几乎对所有 的癌症都有一定的疗效。
[0018] 本发明中使用的黄芪提取物粉、芦笋提取物粉为中药原料经水提后的产物，其均 已在市场上广泛应用，各种提取物的制备是已有的技术，得到的产品只是在物质浓度上有 所差别，其各种产品均可在本发明中实施应用。
[0019] 本发明还提供一种具有抗肿瘤功能的益生菌组合物的制备方法，其步骤包括选 料、过筛、配料、混合；
[0020] 所述的选料步骤为:选取含有鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、长双歧杆菌的益生菌干 粉，优质黄芪提取物粉、芦笋提取物粉；
[0021] 所述的过筛步骤为:将选好的益生菌干粉、黄芪提取物粉、芦笋提取物粉分别过80 ~100目筛；
[0022] 所述的配料步骤为:将过筛后的益生菌干粉、黄芪提取物粉、芦笋提取物粉按所述 质量百分比称量备用；
[0023]所述的混合步骤为:将配好的原料于三维混合机中混合至色泽均匀一致，无色差， 即得到具有抗肿瘤功能的益生菌组合物。
[0024] 本发明还提供一种具有抗肿瘤功能的益生菌组合物在制备抗肿瘤食品/保健品中 的应用，该组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体制成片剂、胶囊、颗粒、口服液等 剂型。
[0025] 本发明还提供一种抗肿瘤食品/保健品，包含上述具有抗肿瘤功能的益生菌组合 物。
[0026] 芪能增强和调节机体免疫功能，对干扰素系统有促进作用，可提高机体的抗病力； 对流感病毒等多种病毒所致细胞病变有轻度抑制作用，对流感病毒感染小鼠有保护作用； 有较广泛的抗菌作用。芦笋活性成分之一的槲皮素有较强的抗肿瘤活性，可以诱导多种肿 瘤细胞凋亡。大量研究表明，其可在基因水平上通过下调变异的P53蛋白、上调16基因的表 达、下调bcl-2基因及bcl-2mRNA的表达、抑制ras基因活性以及下调c-myc的基因扩增和表 达等来诱导人乳腺癌细胞、人肺癌细胞、人结肠癌细胞、白血病细胞、食管癌细胞等多种肿 瘤细胞的凋亡。两者均具有毒副作用小、材料容易获得且可长期服用等优势。
[0027] 传统上中药的使用，绝大多数以方剂的形式通过口服吸收而发挥作用，中药中的 有效成分在进入肠道之后不可避免地与肠道菌群发生关联，某些成分经相应细菌的作用发 生生物转化后被吸收，因此，体内环境中肠道菌群是完成中药有效成分生物转化的重要因 素之一。有益菌和中药是两类国际公认的益生物质，两者在基本理论观点上极为相似、一脉 相通;在作用机理上显示极大的统一性;在具体使用过程中也能完美互补，共同发挥优势。 因而中药对于有益菌而言，是绝佳的益生元。本发明将益生菌与中药完美结合，找出了具有 明显抗肿瘤效果的益生菌组合物配方。
[0028] 本发明的有益效果在于:本发明的益生菌组合物以益生菌干粉、黄芪提取物粉、芦 笋提取物粉为原料直接投料，按重量科学配比而成。其含有维生素 K，维生素 B12、吡哆醇、生 物素、叶酸、烟酸和硫胺素等营养成分，制备工艺简单，避免了提取时造成的药物损失和由 于原药材质量差异造成的不同产品质量差异较大的缺点，使产品纯度更高，杂质少，安全性 更高，且不同批次间质量差异小，质量更均匀稳定。通过传统中药与益生菌合理配伍用药， 经药学实验证明，药效优于单独使用任何一种原料，各有效成分呈协同作用，具有抗肿瘤、 促进机体健康等功效。 【【具体实施方式】】
[0029] 下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0030] 实施例1
[0031] 1)选料制备益生菌干粉：
[0032] 1)分别将鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、长双歧杆菌经培养基活化后，接种于发酵培 养基中，振荡培养，使菌体浓度达到对数生长期〇. 5~1.0 X 109cfu/ml;
[0033] 双歧杆菌种子液的制备:取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复 苏，37度厌氧培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱 中37度厌氧培养48小时。种子采用5 %的接种量，接种至IOL大三角瓶中（装液量为9.5L)，37 度厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿/毫升，即可作为双歧杆菌液体菌 种接种。其中所述的双歧杆菌培养基:蛋白胨5. Og/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏5. Og/L，胰蛋 白胨10.0 g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5. Og/L，柠檬酸二铵2. Og/L，吐温-801.0ml/L，硫酸镁 〇. lg/L，硫酸锌0.25g/L，磷酸氢二钾2g/L，固体培养基中加入琼脂2 %。培养基灭菌的条件 为:0 · 10-0.15MPa，121°C 灭菌 30 分钟。
[0034] 乳杆菌种子液的制备:取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37度 厌氧培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37度厌氧 培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至10L大三角瓶中（装液量为9L)，37度厌氧培养 20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过100亿/毫升，即可作为乳杆菌液体菌种接种。其中 所述的MRS培养基：蛋白胨lOg/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏lOg/L，葡萄糖20g/L，醋酸钠5g/ U柠檬酸二铵2g/L，吐温-801ml/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.05g/L，磷酸氢二钾2g/L，琼脂 20g/L，碳酸钙20g/L，固体培养基中加入琼脂2%。其中所述的乳酸菌种子培养基：葡萄糖 5%，蛋白胨1.5%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠 0.05 %，碳酸钙1 %，pH6.0。各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa，121°C灭菌30分钟。 [0035] 2)将各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌泥；
[0036] 3)配制干粉保护剂;其中干粉保护剂的配方组成为:β-环状糊精10g、乳糖2_5g、海 藻糖0·5-2g、酵母膏0·5-2g、维生素 E0.05-0.1g、蒸馏水IOOmL。
[0037] 4)将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制 成具有包埋层的活性益生菌干粉;黄芪提取物粉、芦笋提取物粉均购自西安天一生物技术 有限公司。
[0038] (2)过筛
[0039]将步骤(1)中的益生菌干粉、黄芪提取物粉、芦笋提取物粉分别过80~100目筛。 [0040] 3)配料:称量过筛后的原料，按益